UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE

FACULDADE DE VETERINRIA
PS-GRADUAO EM MEDICINA VETERINRIA
REA DE CONCENTRAO: CLNICA E REPRODUO ANIMAL

CAMILA BARBOSA AMARAL

AVALIAO CLNICA, RADIOGRFICA, HISTOPATOLGICA E IMUNOHISTOQUMICA DE NEOPLASIAS SSEAS EM CES (Canis familiaris,
LINNAEUS, 1758)

NITERI
2013

CAMILA BARBOSA AMARAL

AVALIAO CLNICA, RADIOGRFICA, HISTOPATOLGICA E IMUNOHISTOQUMICA DE NEOPLASIAS SSEAS EM CES (Canis familiaris,
LINNAEUS, 1758)

Tese apresentada ao Curso de PsGraduao em Medicina Veterinria

Clnica e Reproduo Animal da
Universidade Federal Fluminense,
como requisito parcial para obteno
do Grau de Doutor. rea de
Concentrao:
Patologia
e
Diagnstico por Imagem.

Orientadora: Prof.Dra. ANA MARIA REIS FERREIRA

Co-Orientador: Prof. Dr. MRIO ANTNIO PINTO ROMO

Niteri
2013

CAMILA BARBOSA AMARAL

AVALIAO CLNICA, RADIOGRFICA, HISTOPATOLGICA E IMUNOHISTOQUMICA DE NEOPLASIAS SSEAS EM CES (Canis familiaris,
LINNAEUS, 1758)

Tese apresentada ao Curso de PsGraduao em Medicina Veterinria

Clnica e Reproduo Animal da
Universidade Federal Fluminense,
como requisito final para obteno do
Grau
de
Doutor.
rea
de
Concentrao:
Patologia
e
Diagnstico por Imagem.
Aprovada em maio de 2013.
BANCA EXAMINADORA

Prof.Dra. ANA MARIA REIS FERREIRA Orientadora

Universidade Federal Fluminense

Prof Dr. JLIO LOPES SEQUEIRA Membro Externo

Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho

Prof.Dr. RICARDO SIQUEIRA DA SILVA Membro Externo

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro

Prof. PhD. LOUISIANE DE CARVALHO NUNES Membro Externo

Universidade Federal do Esprito Santo

Prof Dra. JULIANA DA SILVA LEITE Membro Interno

Universidade Federal Fluminense
Niteri - 2013

A todos os ces;
Os meus, os seus, os nossos;
E a todos aqueles que se importam.

AGRADECIMENTOS

minha orientadora Ana Maria Reis Ferreira, pelo auxlio mais uma vez
nessa empreitada mesmo frente distncia e s dificuldades encontradas.
Ao meu co-orientador, Mrio A. P. Romo, pelo suporte e dedicao.
sempre bom ter voc por perto.
A todos os mdicos veterinrios e proprietrios que confiaram seus ces a
mim estivessem eles vivos, mortos e, porque no dizer, em partes. Espero que este
trabalho ajude outros ces a no passarem pelo que eles passaram. Do contrrio,
esse projeto no teria razo de existir. Muitssimo obrigada.
Aos colegas do Setor de Anatomia Patolgica, pela ajuda nesse vai e vem e
por muitas vezes otimizarem meu tempo na UFF. Fabiane C. Lopes, voc demais
tambm na Patologia!
A minha querida amiga Juliana da S. Leite, que sempre esteve ao meu lado
nessas aventuras desde a graduao e foi incansvel na realizao da imunohistoqumica. No tenho palavras para expressar minha gratido. Esse trabalho
tambm seu!
Prof Ana Beatriz Monteiro, responsvel pela anlise estatstica dos dados.
Muito obrigada pela ajuda e pacincia e mais uma vez desculpe-me pela correria.
s amigas Emanuele A. Alves, Lyvia C. R. Carvalho e Gabriela P. Passoss
pelo companheirismo e cumplicidade durante esse perodo ouvindo meus desabafos
e muitas vezes passando por coisa parecida.
A minha querida amiga e companheira no dia-a-dia alegrense, Andria Weiss,
por ouvir meus resmusgos, meus gritos e at mesmo meu silncio. Aprendo cada dia
mais contigo e no sei o que seria de mim em Alegre sem voc. Tenho muito
orgulho de ti, loira!

Aos colegas de trabalho, de departamento ou no, pela acolhida em Alegre.

s minhas pestes, tambm chamados de alunos, por me ensinarem cada
vez mais e me surpreenderem sempre, s me dando certeza da deciso que tomei.
Em especial aos meus criminals, pela ajuda no nosso Setor, por entenderem
minhas crises e por se mostrarem to unidos a ponto de quase se detestarem!
Amo vocs demais!
s minhas cadelas, as que j partiram e as que seguem comigo hoje, vocs
sempre foram a razo de tudo isso. Muito obrigada por esse amor incondicional.
Aos ces do CCA-UFES, pelo carinho (ou seria carncia?), pela companhia,
pela baguna nossa de todo dia. Vocs alegram a faculdade e nos divertem todo
dia. Afinal, apesar de alguns discordarem, CACHORRO TUDO DE BOM!!!
Amarelo, sinto sua falta e conviverei para o resto da minha vida com o meu
arrependimento. Te amo, onde quer que voc esteja.
Ao meu pai, Jorge Amaral, por ter se disponibilizado desde o incio a me
acompanhar durante o perodo de coleta de material, mesmo quando eu achava que
no era preciso.
minha me, Rosane B. Amaral, por todas as vezes em que, to
altruistamente, deixou seus compromissos de lado para me disponibilizar o carro
falicitando e muito o translado Rio-Niteri-Rio.
Ao meu irmo, Bernardo B. Amaral, por manter a sanidade mental do meu
computador, pea de trabalho fundamental.
A Deus e aos meus anjos, pois como diria Julie Andrews em A Novia
Rebelde: nada vem do nada, e nem poderia, mas em algum momento da minha
infncia ou juventude, eu devo ter feito algo de bom. Alis, de muito bom para
merecer tudo isso. No tenho do que reclamar (mesmo que, de vezes em quando, o
faa).

Words are, in my not so humble opinion, our most

inexhaustible source of magic.

Professor Albus Percival Wulfric Brian Dumbledore

SUMRIO

CAPA ____________________________________________________________________1
FOLHA DE ROSTO ________________________________________________________2
FOLHA DE APROVAO ___________________________________________________3
DEDICATRIA ____________________________________________________________4
AGRADECIMENTOS _______________________________________________________ 5
EPGRAFE_______________________________________________________________ 7
SUMRIO ________________________________________________________________ 8
LISTA DE ILUSTRAES _________________________________________________ 10
RESUMO ________________________________________________________________ 15
ABSTRACT ______________________________________________________________ 16
1 INTRODUO __________________________________________________________ 17
2 FUNDAMENTAO TERICA ___________________________________________ 19
2.1 NEOPLASIAS SSEAS PRIMRIAS MALIGNAS EM CES: ASPECTOS EPIDEMIOLGICOS E
CLNICOS. ___________________________________________________________________________ 20
2.1.1. Osteossarcoma _________________________________________________________________ 20
2.1.2. Condrossarcoma ________________________________________________________________ 22
2.1.3. Fibrossarcoma _________________________________________________________________ 23
2.1.4. Hemangiossarcoma _____________________________________________________________ 24
2.1.5. Tumor sseo multilobular ________________________________________________________ 25
2.1.6. Outras consideraes ____________________________________________________________ 26
2.2 NEOPLASIAS SSEAS PRIMRIAS MALIGNAS EM CES: ASPECTOS RADIOGRFICOS,
MACROSCPICOS E MICROSCPICOS _________________________________________________
2.2.1. Osteossarcoma _________________________________________________________________
2.2.2. Condrossarcoma ________________________________________________________________
2.2.3. Fibrossarcoma _________________________________________________________________
2.2.4. Hemangiossarcoma _____________________________________________________________
2.2.5. Tumor sseo Multilobular ________________________________________________________

26
26
29
30
31
32

2.3 MTODOS DIAGNSTICOS _________________________________________________________ 32

2.4 IMUNO-HISTOQUMICA ___________________________________________________________
2.4.1. Introduo ____________________________________________________________________
2.4.2. Histrico e Aplicaes Gerais _____________________________________________________
2.4.3. Anticorpos Utilizados____________________________________________________________

34
34
34
36

2.4.4. Alvos antignicos em Oncologia ___________________________________________________

2.4.5. Limitaes ____________________________________________________________________
2.4.6. Vantagens_____________________________________________________________________
2.4.7. Desvantagens __________________________________________________________________
2.4.8. Interpretao de resultados _______________________________________________________
2.4.9. Marcadores de interesse em Neoplasias sseas _______________________________________
2.4.9.1.Marcadores de Linhagem Celular____________________________________________
2.4.9.2. Marcadores sseos proteicos ______________________________________________
2.4.10. A imuno-histoqumica na Oncologia Veterinria _____________________________________

37
38
39
40
40
41
41
45
50

3 OBJETIVOS ____________________________________________________________ 52
3.1 OBJETIVO GERAL _________________________________________________________________ 52
3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS __________________________________________________________ 52

4 MATERIAIS E MTODOS ________________________________________________ 54

4.1 ANIMAIS _________________________________________________________________________ 54
4.2. METODOLOGIA __________________________________________________________________
4.2.1. Avaliao clinica _______________________________________________________________
4.2.2. Exames Radiogrficos ___________________________________________________________
4.2.3. Obteno de Amostra ____________________________________________________________
4.2.3.1. Bipsias _________________________________________________________________
4.2.3.2. Peas cirrgicas e necrpsias ______________________________________________
4.2.4. Processamento histolgico _______________________________________________________
4.2.5. Processamento imuno-histoqumico ________________________________________________
4.2.6. Avaliao Histopatolgica e Imuno-Histoqumica _____________________________________
4.2.7. Anlise Estatstica ______________________________________________________________

54
54
55
56
56
57
58
58
59
60

5 RESULTADOS __________________________________________________________ 61
5.1 ANIMAIS _________________________________________________________________________
5.1.1 Avaliao clnica _______________________________________________________________
5.1.2 Exame radiogrfico _____________________________________________________________
5.1.3 Avaliao Anatomo-Histopatolgica ________________________________________________
5.1.5 Avaliao Imuno-Histoqumica ____________________________________________________

61
61
62
65
72

6 DISCUSSO ____________________________________________________________ 77
7 CONCLUSO ___________________________________________________________ 89
8 OBRAS CITADAS _______________________________________________________ 91
9 ANEXOS _______________________________________________________________ 99
9.1 Autorizao para posse de cadver canino. ______________________________________________ 100
9.2 Autorizao para realizao de procedimento em canino. ___________________________________ 101
9.3 Certificado do Comit de tica no Uso de Animais da UFF. _________________________________ 102

LISTA DE ILUSTRAES

Quadro 1: Protocolo imuno-histoqumico utilizado para os anticorpos vimentina,

osteonectina (SPARC) e osteocalcina em neoplasias sseas caninas, f. 59.

Tabela 1: Distribuio de valores relativos a idade e peso dos 22 ces avaliados, f.

61.

Figura 1: Frequencia de distribuio das leses sugestivas de neoplasia ssea

primria ao exame radiogrfico dos ces avaliados (n=22), f. 62.

Figura 2A: Radiografia: Caso n. 20, canino, fibrossarcoma. Radiografia simples,

lateral oblqua esquerda, mandbula: lise e perda de opacidade ssea em corpo
mandibular esquerdo na altura do segundo pr-molar (seta), f. 64.

Figura 2B: Radiografia: Caso n. 6, canino, osteossarcoma. Radiografia simples,

latero-lateral, membro plvico esquerdo: proliferao ssea acentuada em metfise
e difise proximal de fmur esquerdo, f. 64.

Figura 2C: Radiografia: Caso n. 13, canino, osteossarcoma. Radiografia simples,

mdio-lateral, membro torcico direito: proliferao ssea discreta em difise
mdia e distal e metfise distal radial direita, f. 64.

11

Figura 2D: Radiografia: Caso n. 14, canino, fmea, osteossarcoma. Radiografia

simples, mdio-lateral, membro torcico direito: lise ssea em metfise proximal de
mero direito, alterando o padro trabecular, f. 64.

Figura 2E: Radiografia: Caso n. 10, canino, osteossarcoma. Radiografia simples,

mdio-lateral, membro torcico direito: reas de lise e proliferao ssea com
destruio de cortical em metfise proximal de mero direito, f. 64.

Quadro 2: Avaliao das neoplasias sseas nos ces analisados segundo sexo,
idade, raa, local biopsiado e resultado histopatolgico (n=22), f. 66.

Figura 3: Frequencia de distribuio dos tipos histolgicos diagnosticados em ces

avaliados com neoplasia ssea (n=22)., f. 67.
Figura 4: Frequencia de rgos acometidos por metstase nos animais portadores
de osteossarcoma avaliados por meio de necropsia, f. 69.
Figura 5A: Fotomacrografia: Caso n 2, canino, osteossarcoma. Membro plvico
direito: aumento de volume em regio distal de membro torcico direito (regio
crpica), com vasculatura evidente e colorao avermelhada, f. 70.

Figura 5B: Fotomacrografia: Caso n 8, canino, osteossarcoma. Necropsia: cavidade

torcica revelando lquido sanguinolento e corao (asterisco), pulmes (p) e pleura
(pl) com focos metastticos, f. 70.

Figura 5C: Fotomacrografia: Caso n 10, canino, osteossarcoma. Pea cirrgica,

membro torcico direito (corte transversal): formao tumoral envolvendo difise
umeral (asterisco) com extensa rea de componente extra-sseo proliferativo e
necrose (arco), f. 70.

Figura 5D: Fotomacrografia: Caso n 8, canino, osteossarcoma. Pea cirrgica,

membro plvico esquerdo (corte transversal): formao tumoral envolvendo difise
umeral (asterisco) com extensa rea de componente extra-sseo proliferativo e
atrofia de musculatura (seta), f. 70.

12

Figura 6A: Fotomicrografia Hematoxilina e Eosina. Caso n. 10, canino,

osteossarcoma osteoblstico produtivo. Pea cirrgica, membro torcico direito:
material osteide mineralizado formando trabculas desorganizadas entremeadas
por clulas neoplsicas. (A-F HE; A,C 40x original; barra: 200 m; B,D 400x
original; barra: 50 m), f. 71.
Figura 6B: Fotomicrografia Hematoxilina e Eosina. Caso n. 10, canino,
osteossarcoma osteoblstico produtivo. Pea cirrgica, membro torcico direito:
trabculas desorganizadas entremeadas por clulas neoplsicas, revelando
anisocitose e nuclolos evidentes. (A-F HE; A,C 40x original; barra: 200 m; B,D
400x original; barra: 50 m), f. 71.
Figura 6C: Fotomicrografia Hematoxilina e Eosina. Caso n. 7, canino,
condrossarcoma. Pea cirrgica, membro plvico esquerdo: ilhas de cartilagem
neoplsica com tecido conjuntivo ao redor. Observa-se processo de ossificao
central da ilha. (A-F HE; A,C 40x original; barra: 200 m; B,D 400x original;
barra: 50 m), f. 71.
Figura 6D: Fotomicrografia Hematoxilina e Eosina. Caso n 20, canino,
fibrossarcoma. Pea cirrgica, mandbula esquerda: clulas fusiformes dispostas em
feixe, com moderado pleomorfismo e nucleolao evidente. (A-F HE; A,C 40x
original; barra: 200 m; B,D 400x original; barra: 50 m), f. 71.

Tabela 2: Distribuio de valores relativos ao percentual de marcao para

vimentina, SPARC e osteocalcina nos gupos de ces avaliados, f. 73.
Figura 7A: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-vimentina. Caso n.
18, canino, osteossarcoma osteoblstico minimamente produtivo. Pea cirrgica,
membro torcico direito: intensa marcao citoplasmtica (+++) em osteoblastos
malignos. (A,B,C,D,F 400x original; barra: 50 m; E 40x original; barra: 200 m.
Contra-colorao: hematoxilina de Meyer), f. 75.

13

Figura 7B: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-vimentina. Caso n.

8, canino, osteossarcoma osteoblstico produtivo. Pea de necropsia, membro
plvico esquerdo: moderada marcao citoplasmtica (+++) em osteoblastos
malignos. (A,B,C,D,F 400x original; barra: 50 m; E 40x original; barra: 200 m.
Contra-colorao: hematoxilina de Meyer), f. 75.
Figura 7C: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-vimentina. Caso n
7, canino, condrossarcoma. Pea cirrgica, membro plvico esquerdo: condrcitos
malignos marcados (asterisco) (+++) em transio para formao de cartilagem
madura (jogo da velha). (A,B,C,D,F 400x original; barra: 50 m; E 40x original;
barra: 200 m. Contra-colorao: hematoxilina de Meyer), f. 75.
Figura 7D: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-vimentina. Caso n
7, canino, condrossarcoma. Pea cirrgica, membro plvico esquerdo: marcao de
condrcitos em cartilagem madura (+++). (A,B,C,D,F 400x original; barra: 50 m; E
40x original; barra: 200 m. Contra-colorao: hematoxilina de Meyer), f. 75.
Figura 7E: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-vimentina. Caso n
7, canino, condrossarcoma. Pea cirrgica, membro plvico esquerdo: marcao em
nicho cartilaginoso e em vasculatura perifrica intensa (+++). (A,B,C,D,F 400x
original; barra: 50 m; E 40x original; barra: 200 m. Contra-colorao:
hematoxilina de Meyer), f. 75.
Figura 7F: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-vimentina. Caso n.
9, canino, osteossarcoma osteoblstico minimamente produtivo. Pea cirrgica,
membro plvico direito: osteoblasto maligno em diviso celular atpica (detalhe).
Observa-se marcao exclusivamente citoplasmtica e de menor intensidade nas
demais (++) clulas. (A,B,C,D,F 400x original; barra: 50 m; E 40x original; barra:
200 m. Contra-colorao: hematoxilina de Meyer), f. 75.

14

Figura 8A: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-SPARC e antiosteocalcina. Caso n. 18, canino, osteossarcoma osteoblstico minimamente
produtivo. Pea cirrgica, membro torcico direito: marcao discreta (+) antiSPARC citoplasmtica em osteoblastos malignos. (A-F 400x original; barra: 50 m.
Contra-colorao: hematoxilina de Meyer), f. 76.
Figura 8B: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-SPARC e antiosteocalcina. Caso n 20, canino, fibrossarcoma. Pea cirrgica, mandbula
esquerda: marcao acentuada (++) anti-SPARC citoplasmtica em clulas
fusiformes. (A-F 400x original; barra: 50 m. Contra-colorao: hematoxilina de
Meyer), f. 76.
Figura 8C: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-SPARC e antiosteocalcina. Caso n 7, canino, condrossarcoma. Pea cirrgica, membro plvico
esquerdo: marcao discreta (+) anti-SPARC em condrcitos malignos. (A-F 400x
original; barra: 50 m. Contra-colorao: hematoxilina de Meyer), f. 76.
Figura 8D: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-SPARC e antiosteocalcina. Caso n. 4, canino, osteossarcoma osteoblstico produtivo. Pea de
necropsia, membro torcico direito: moderada marcao (++) anti-osteocalcina
citoplasmtica em osteoblastos malignos. Observa-se clula gigante central. (A-F
400x original; barra: 50 m. Contra-colorao: hematoxilina de Meyer), f. 76.
Figura 8E: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-SPARC e antiosteocalcina. Caso n 7, canino, condrossarcoma. Pea cirrgica, membro plvico
esquerdo: marcao discreta (+) anti-osteocalcina em condrcitos malignos. (A-F
400x original; barra: 50 m. Contra-colorao: hematoxilina de Meyer), f. 76.
Figura 8F: Fotomicrografia Marcao imuno-histoqumica anti-SPARC e antiosteocalcina. Caso n 20, canino, fibrossarcoma. Pea cirrgica, mandbula
esquerda: ausncia de marcao (-) anti-osteocalcina em clulas fusiformes. (A-F
400x original; barra: 50 m. Contra-colorao: hematoxilina de Meyer), f. 76.

RESUMO

Os tumores sseos primrios em ces apresentam caractersticas radiogrficas e

histopatolgicas marcantes. Em alguns casos, o diagnstico pode ser complicado
pela ausncia dessas caractersticas. A utilizao de anticorpos contra protenas que
caracterizam essas neoplasias pode auxiliar na elucidao destes casos. O presente
trabalho teve por objetivo avaliar neoplasias sseas primrias por meio da
istopatologia e da imuno-histoqumica associada anlise clnica e radiogrfica,
auxiliando na classificao dos tipos neoplsicos e determinao de subtipos. Foram
coletadas amostras de em 22 ces da cidade do Rio de Janeiro e Niteri, sendo sete
machos e 15 fmeas. O diagnstico histopatolgico foi realizado a partir de amostras
coletadas com agulha Jamshidi calibre 11 ou de fragmentos de peas de amputao
ou cadveres com at seis horas ps-bito. As amostras coletadas foram fixadas em
formol. Aps descalcificao foram processadas, includas em parafina, coradas por
HE e realizada a imuno-histoqumica com anticorpos anti-vimentina, anti-SPARC e
anti-osteocalcina. Foi realizada anlise estatstica descritiva dos parmetros clnicos
e histopatolgicos. Os ces pertenciam s raas Rottweiler, Dobermann Pinscher,
Husky Siberiano, Bulldog Ingls, Pastor Alemo, Boxer, Akita, Golden Retriever alm
de ces sem raa definida (SRD); tinham peso variando de 15 a 58kg (mdia:
36,59kg) e idade de 3 a 18 anos (mdia: 8,59 anos). Os principais sinais clnicos
apresentados foram claudicao, dor e aumento de volume local. Noventa e um por
cento das leses acometeram esqueleto apendicular. Os ossos mero e rdio foram
os mais acometidos. Todas as leses foram monostticas. Os membros torcicos
foram mais afetados que os plvicos e a metfise foi a rea mais atingida. O
osteossarcoma foi o tumor mais frequente, com quase oitenta e dois por cento dos
casos. Houve ainda dois casos de condrossarcoma, um hemangiossarcoma e um
fibrossarcoma. Os percentuais de marcao nas amostras positivas dos anticorpos
anti-vimentina, anti-SPARC e anti-osteocalcina foram: 87,9%, 98,0% e 99,9%. Um
osteossarcoma no apresentou marcao positiva para vimentina e das amostras
submetidas a marcao com osteocalcina, trs casos de osteossarcoma e um de
fibrossarcoma no marcaram positivamente. A avaliao imuno-histoqumica
mostrou resultados relevantes no auxlio diagnstico e prognstico nas neoplasias
sseas em ces.

Palavras-chave: neoplasias sseas, ces, radiografia, histopatologia, imunohistoqumica.

ABSTRACT

Primary bone tumors in dogs have remarkable radiographic and histopathological

features. In some cases, diagnosis can be complicated by the absence of these
features. The use of antibodies against proteins that characterize these neoplasms
can help elucidating such cases. This experiment objective was to evaluate canine
primary bone neoplasms histopathologically and with immunohistochemically to
diagnose neoplasms types and to help determining their subtypes, associating its
results with clinical and radiological findings. Samples from radiographically detected
neoplastic bone lesions were collected from 23 dogs from Rio de Janeiro and Niteroi
being eight males and fifteen females. Histopathological diagnosis were establish
from Jamshidi needle collected samples, fragments of amputated pieces or six-hour
post mortem corpses.
Samples were collected and formalin-fixed. After
descalcification, they were routinately processed, paraffin-embbebed, stained with
HE and imunohistochemistry was performed using antibodies anti-vimetin, antiSPARC and anti-osteocalcin. Descriptive statistic analyses of clinical and
histopathological parameters were performed. Dogs belonged to Rottweiler,
Dobermann Pinscher, Siberian Husky, English Bulldog, German Shepard, Boxer,
Golden Retriever breeds and no-specific-breed dogs with weight average of 33,61 kg
and age average of 8,35 years. The main symptoms were lameness, pain and local
swelling. Ninety one percent of the lesions occurred in the apendicular skeleton.
Umerus and femur were the most affected bones followed by the radium. Only one
dog had two simultaneous lesions. Thoracic limbs were more affected than pelvic
limbs and the metaphysis area the main location. Osteosarcoma was the most
frequent primary bone tumor with almost eighty two percent of the cases. There were
also two chondrosarcomas, one haemangiosarcoma and one fibrosarcoma.
Antibodies used for immunohistochemistry evaluation were anti-vimentin, antiSPARC and anti-osteocalcin. Respective percentuals for positive immunostaining
were 87,9%, 98,0% and 99,9%. One osteosarcoma showned negative immunostain
for vimentin and of samples submitted to anti-osteocalcin immunostaining, three
osteosarcomas and one fibrosarcoma had negative staining. Immunohistochemistry
evaluation showed relevant results concerning diagnosis and prognosis of bone
neoplasms in dogs.

Keywords:
bone
immunohistochemistry.

neoplasms,

dogs,

radiography,

histopathology,

1 INTRODUO

O sistema esqueltico, seja dos ces ou dos seres humanos,

frequentemente acometido por doenas metablicas, infecciosas e neoplsicas. Em
muitos casos, h uma leso radiogrfica visvel, mas no conclusiva. Nestes casos,
para se obter o diagnstico, a bipsia o nico mtodo (PRAMESH et al., 2001;
JELINEK et al., 2002; AMARAL, 2008; AMARAL; ROMO; FERREIRA, 2013).
Toda e qualquer leso ssea que apresente uma imagem radiogrfica
agressiva, supostamente maligna que gere margem para diversos diagnsticos
diferenciais ou que no se possa correlacionar com alguma doena frequentemente
conhecida deve ser submetida confirmao histopatolgica (PRAMESH et al.,
2001; AMARAL, 2008; AMARAL; ROMO; FERREIRA, 2013).
Apesar de o diagnstico de tumor sseo primrio maligno em ces ser
frequentemente sugerido apenas radiograficamente, a bipsia necessria para
confirmao diagnstica, alm de permitir uma classificao especfica do tipo
tumoral. Com o desenvolvimento de tcnicas de preservao do membro e a
utilizao de drogas quimioterpicas, crucial o conhecimento do tipo tumoral sseo
para que seja adotado o protocolo teraputico adequado. Com relao a outros tipos
de leses sseas, necessrio diferenci-los entre tumores primrios malignos,
tumores primrios benignos, tumores originados da medula ssea, tumores
metastticos, osteomielite, fraturas e leses degenerativas (POWERS et al., 1988;
MEHL et al., 2001; CHUN, 2005; DONATO et al., 2005; AMARAL, 2008; BOSTON;
BARRY; OSULLIVAN, 2011; AMARAL; ROMO; FERREIRA, 2013).
Os tumores sseos primrios em ces, na maioria das vezes, so
caracterizados histopatologicamente pelo tipo celular envolvido e tipo de matriz

18

extracelular produzida. Entretanto, nem sempre este material facilmente

identificado nos subtipos tumorais e em diversas ocasies uma nica leso
apresentar

heterogeneicidade

tanto

celular

como

de

matriz,

devido

diferenciaes mesenquimais que podem ocorrer. Isto particularmente verdadeiro

em casos de neoplasias atpicas tanto clnica quanto radiograficamente, tumores
anaplsicos ou em casos de anlise de fragmentos pequenos, como os oriundos de
bipsia ssea (POWERS et al., 1988; SLAYTER et al., 1994; FLETCHER; UNNI;
MERTENS, 2002; AMARAL, 2008).
Para elucidar tais casos, em Medicina Humana, tem-se utilizado marcadores
de linhagem celular com o objetivo de identificar a origem da clula neoplsica em
questo e ainda marcadores de matriz extracelular, que identificam componentes
presentes na matriz produzida pelas clulas, relacionando-as a determinado tipo
celular. Outra utilizao destes marcadores est na identificao de produtos de
genes de proliferao celular e apoptose alterados. Muitos desses produtos j foram
identificados e relacionados ao prognstico e sucesso do tratamento em diversos
tipos tumorais, sseos ou no-sseos em pacientes humanos (HAINES; WEST,
2005; WERNER et al., 2005; DE MATOS et al., 2010).
A utilizao de marcadores para determinadas protenas de matriz assim
como linhagens celulares no utilizada com frequncia na Medicina Veterinria, ao
contrrio do que acontece na Medicina Humana. A literatura descreve apenas casos
isolados de neoplasias sseas no-caractersticas em que estes marcadores foram
utilizados

com

inteno

de

auxiliar

no

esclarecimento

do

diagnstico

(HOENERHOFF et al., 2004, BARGER et al., 2005; AMORIM, 2009). possvel que
a identificao de determinados marcadores celulares permita no s a reavaliao
do tipo histopatolgico mas principalmente das opes de tratamento e prognstico
do paciente.
Assim sendo, este projeto visa realizar estudos imuno-histoqumicos de
potenciais marcadores das neoplasias sseas em ces aps sua caracterizao
radiogrfica e sua possvel implicao no prognstico dos pacientes desta rea da
Oncologia Ortopdica Veterinria de Pequenos Animais.

2 FUNDAMENTAO TERICA

As neoplasias sseas malignas representam menos de 2% do total das

neoplasias em ces. Apesar disso, so sempre um dilema clnico. Muitas vezes, os
sinais clnicos no so especficos e, alm de no serem reconhecidos pelo
proprietrio no incio da doena, na maioria dos casos, geram uma suspeita clnica
equivocada, sendo confundido com outras afeces ortopdicas (DONATO et al.,
2005; DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008).
Em contraste com os tumores humanos, onde as metstases sseas de
carcinomas, em particular, so comuns, os tumores sseos caninos so primrios
(LOUKOPOULOS; THORNTON; ROBINSON, 2003). O principal deles o
osteosssarcoma, seguido do condrossarcoma, fibrossarcoma, hemangiossarcoma e
o tumor sseo multilobular (LOUKOPOULOS; THORNTON; ROBINSON, 2003;
CHUN, 2005; DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008; KEALY; MCALLISTER, 2012).
Outras neoplasias sseas primrias incluem o tumor de clulas gigantes e os
tumores metastticos como linfoma e mieloma mltiplo. No entanto, sua frequencia
em Medicina Veterinria muito baixa, sendo as informaes pertinentes a cada um
deles oriundas de relatos de casos (ERDEM; PEAD, 2000; DHALIWAL; REED;
KITCHELL, 2001; THOMAS; PRESSLER; ROBERTSON, 2001; CHUN, 2005;
HIDAKA et al., 2006; PAKHRIN et al., 2006).

20

2.1 NEOPLASIAS SSEAS PRIMRIAS MALIGNAS EM CES: ASPECTOS

EPIDEMIOLGICOS E CLNICOS.

2.1.1. Osteossarcoma
Em Medicina Veterinria, o osteossarcoma o tumor sseo primrio mais
frequente, representando 85% de todos os tumores sseos (SLAYTER et al., 1994;
ERDEM; PEAD, 2000; THOMPSON; POOL, 2002; CHUN, 2005; DERNELL et al.,
2007; AMARAL, 2008; THRALL, 2010; BHANDAL; BOSTON, 2011; KEALY;
MCALLISTER, 2012). uma neoplasia progressiva e rpida com alta mortalidade.
mais frequente em ces de meia idade a idosos com pico aos sete anos
(THOMPSON; POOL, 2002; DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008; BHANDAL;
BOSTON, 2011). As raas mais afetadas so o So Bernardo, Setter Irlands,
Dobermann Pinscher, Pastor Alemo, Rottweiler, Golden Retriever e Dog Alemo
(DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008; BHANDAL; BOSTON, 2011; KEALY;
MCALLISTER, 2012). Os machos parecem ser pouco mais afetados que as fmeas
com relao ao osteossarcoma apendicular, com exceo da raa Rottweiler, So
Bernardo e Dog Alemo (DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008). Segundo estudo
realizado, o aumento do peso e principalmente da altura predispem o aparecimento
do tumor (RU; TERRACINI; GLICKMAN, 1998). De modo semelhante, ces de raas
gigantes tendem a apresentar a leso mais cedo que ces de raas menores
(THOMPSON; POOL, 2002).
Os sinais clnicos demonstrados pelos ces no diferem muito dos pacientes
humanos. Considerando que 75% dos casos de osteossarcoma atingem
principalmente o esqueleto apendicular, no surpreendente que a claudicao
associada a dor seja o sinal clnico principal e na maioria das vezes, o primeiro a ser
notado pelo proprietrio (PHILLIPS et al., 1986; ERDEM; PEAD, 2000; LUCROY;
PECK; BERRY, 2001; MEHL et al., 2001; THOMPSON; POOL, 2002; HIDAKA et al.,
2006; DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008; BHANDAL; BOSTON, 2011). A
durao da claudicao pode variar de duas semanas at trs meses para que o
proprietrio encaminhe o animal ao veterinrio e pode ainda ser complicado por uma
fratura patolgica embora esta esteja presente em menos de 3% dos casos
(PHILLIPS et al., 1986; THOMPSON; POOL, 2002; BHANDAL; BOSTON, 2011). O
grau de dor pode variar de leve a torturante, dependendo do avano e grau de

21

destruio ssea da leso. Os membros torcicos costumam ser duas vezes mais
afetados que os plvicos e o esqueleto apendicular de trs a quatro vezes mais
afetado que o axial (THOMPSON; POOL, 2002; DONATO et al., 2005; DERNELL et
al., 2007; AMARAL, 2008; BHANDAL; BOSTON, 2011). Dernell et al. (2007),
Bhandal e Boston (2011) e Kealy e McAllister (2012) afirmam que comum o relato
de um trauma prvio, o que pode levar a uma suspeita ortopdica equivocada,
entretanto, Phillips et al. (1986) no relataram este achado.
O desenvolvimento de osteossarcoma apendicular pode estar associado a
casos de osteomielite crnica, utilizao de implantes metlicos, locais de fratura
prvia e possivelmente infartos sseos (MARCELLIN-LITTLE et al., 1999;
THOMPSON; POOL, 2002; DERNELL et al., 2007; THRALL, 2010). Outros sinais
associados a neoplasias sseas so: aumento de volume local por edema,
proliferao de tecido sseo ou por invaso de tecidos adjacentes pela massa
tumoral, relutncia e dor manipulao (ERDEM; PEAD, 2000; LUCROY; PECK;
BERRY, 2001; MEHL et al., 2001), atrofia muscular local e linfonodo satlite
aumentado de tamanho e firme (ERDEM; PEAD, 2000; THOMPSON; POOL, 2002).
Raramente h mais de um local acometido. O osteossarcoma multicntrico
representa menos de 15% dos casos no diagnstico inicial (LARUE; WITHROW;
WRIGLEY, 1986, DERNELL et al., 2007).
Sinais como reteno urinria e fecal, paraparesia e alteraes neurolgicas
tendem a estar relacionadas com casos de osteossarcoma e outras neoplasias em
esqueleto axial e so local-dependente j tendo sido descritos em mandbula,
maxila, vrtebras lombares e torcicas, crnio, costela, cavidade nasal e pelve
(THOMPSON; POOL, 2002; CHUN, 2005; DERNELL et al., 2007; KEALY;
MCALLISTER, 2012). Cerca de 50% dos osteossarcomas axiais acometem os ossos
da cabea e o Boxer a raa mais afetada por ele. Pode-se observar disfagia,
exoftalmia, dor ao abrir a boca, deformidade facial e descarga nasal (THOMPSON;
POOL, 2002; DERNELL et al., 2007).
Sinais respiratrios so a primeira evidncia clnica de metstase pulmonar
que pode se desenvolver rapidamente podendo estar associada a anorexia e
osteoartropatia hipertrfica pulmonar j descrita em alguns casos (DERNELL et al.,
2007). A maioria dos ces morre ou so eutanasiados, em mdia, seis meses aps
o diagnstico devido s leses metastticas principalmente para os pulmes, sendo
que a maioria deles no apresentam leses radiograficamente visveis no momento

22

do diagnstico (THOMPSON; POOL, 2002, LOUKOPOULOS; THORNTON;

ROBINSON, 2003; DONATO et al., 2005; DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008;
KIRPENSTEIJN et al, 2008; BHANDAL; BOSTON, 2011; EBERLE et al., 2011).
Metstases para outros ossos e linfonodo regional so descritas embora sejam
incomuns. O tempo de sobre-vida costuma ser maior nos animais com leses axiais
que apendiculares devido a velocidade de metstase (THOMPSON; POOL, 2002).

2.1.2. Condrossarcoma
Alm do osteossarcoma, outros tumores sseos primrios tm sido relatados
na literatura porm abrangem cerca de 5 a 12% do total dos tumores sseos. O
condrossarcoma o segundo tumor sseo primrio mais comum em ces com at
10% de prevalncia e pode surgir a partir de leses exostosas cartilaginosas ou
osteocondromas, mas no h relatos de seu surgimento a partir de osteomas. As
raas grandes como Golden Retriever, Boxer e Pastor Alemo so as mais afetadas,
sendo raro em raas gigantes e pequenas, com pico de idade por volta dos oito
anos. No h predileo por sexo (HAMERSLAG; EVANS; DUBIELZIG, 1980;
SLAYTER et al., 1994; MADARAME et al., 1998; CHUN, 2005; DERNELL et al.,
2007; KIM et al., 2007; AMARAL, 2008; FARESE et al., 2009; AEFFNER et al., 2012;
KEALY; MCALLISTER, 2012).
A maioria dos tumores (61%) surge em ossos chatos como costela, escpula,
pelve, ossos do crnio e cavidade nasal (HAMERSLAG; EVANS; DUBIELZIG, 1980,
SLAYTER et al., 1994; MADARAME et al., 1998; CHUN, 2005; DERNELL et al.,
2007; KIM et al., 2007; AMARAL, 2008; FARESE et al., 2009; KEALY;
MCALLISTER, 2012). O condrossarcoma apendicular frequentemente citado na
literatura sendo a tbia o osso mais acometido, na metfise proximal, seguida do
fmur e mero, diferentemente do que ocorre no osteossarcoma (CHUN, 2005; KIM
et al., 2007; FARESE et al., 2009). H ainda relatos de ocorrncia em locais menos
comuns como dgitos, osso peniano e stios extra-esquelticos como glndula
mamria. Os sinais clnicos sero derivados da sua localizao (MADARAME et al.,
1998; THOMPSON; POOL, 2002; CHUN, 2005; DERNELL et al., 2007; KIM et al.,
2007; AMARAL, 2008; FARESE et al., 2009; KEALY; MCALLISTER, 2012).

23

Os animais podem apresentar sobrevida de at dois anos e meio. As leses

costumam apresentar crescimento mais lento que os osteossarcomas assim como
taxa de metstase menor, porm podem formar grandes massas. Normalmente uma
resseco cirrgica agressiva, como a amputao, resulta em controle satisfatrio
por longo perodo ou mesmo cura. Caso isso no seja possvel, como no caso dos
seios nasais, a recorrncia frequente. H relatos de metstases porm em menor
nmero (variao entre 0% e 60%, com mdia em torno de 25%) e mais tardiamente
quando

comparados

aos

osteossarcomas.

Os

rgos

mais

comumente

comprometidos so: pulmes, rins, fgado, corao, linfonodos, pleura e outros

ossos, porm, na maioria das vezes as metstases localizam-se somente no pulmo
(HAMERSLAG; EVANS; DUBIELZIG, 1980; THOMPSON; POOL, 2002; CHUN,
2005; DERNELL et al., 2007; KIM et al., 2007; WALTMAN et al., 2007; AMARAL,
2008; FARESE et al., 2009; KEALY; MCALLISTER, 2012).

2.1.3. Fibrossarcoma
O fibrossarcoma um tumor frequentemente relatado ocorrendo em tecidos
moles de ces e gatos, no entanto, como tumor sseo primrio considerado
menos frequente. Nestes casos, produz uma matriz colagenosa e muitas vezes
confundido com o osteossarcoma fibroblstico pouco produtivo em amostras
pequenas e exames citolgicos (SLAYTER et al., 1994; THOMPSON; POOL, 2002;
CHUN, 2005; DERNELL et al., 2007). Essa neoplasia observada em ces adultos
machos de raas de mdio e grande porte, embora haja relatos da ocorrncia em
fmeas, no sendo possvel determinar a real predileo racial (CHAUVET et al.,
1999; SCHERRER et al., 2005). O principal sinal clnico a claudicao
especialmente em casos de rpido desenvolvimento (CHUN, 2005).
Quando localizados em maxila apresentam distoro da face, perda de
dentes, eroso do osso maxilar e em casos mais avanados invaso da cavidade
nasal, palato duro e rbita, apesar de serem histologicamente considerados como de
baixo grau. Foi relatado por Chauvet et al. (1999) um fibrossarcoma vertebral de
grau intermedirio. Muitos ces so eutanasiados devido a possibilidade de sarcoma
anaplsico porm, na necropsia nem sempre se observa metstases (CHAUVET et
al., 1999). Chauvet et al. (1999) no relataram recorrncia local ou ocorrncia de

24

metstase dois anos aps realizao de vertebrectomia e vacinao antitumoral em

uma cadela. Essa informao contrasta com o observado em fibrossarcomas de
tecidos moles, principalmente subcutneo, relacionados a locais de injeo, em ces
e gatos (VASCELLARI et al., 2003; CHUN, 2005). Nesses, a exrese tumoral
completa um desafio devido caracterstica infiltrativa do tumor e as recidivas so
frequentes (GOLDSCHMIDT; HENDRICK, 2002; VASCELLARI et al., 2003; CHUN,
2005; LIPTAK; FORREST, 2007). No caso do fibrossarcoma sseo, a obteno de
margem cirrgica limpa dada pela amputao alta e a exrese cirrgica agressiva
deve ser considerada independente do caso j que no se tem dados estatsticos
suficientes a respeito da sobrevida aps a cirurgia (THOMPSON; POOL, 2002;
CHUN, 2005; SCHERRER et al., 2005).
Em relao s metstases, Chauvet et al. (1999) no as relataram em seu
trabalho. Nos fibrossarcomas subcutneos, o potencial metasttico baixo
inicialmente porm este aumenta de acordo com a sobrevida do paciente
(GOLDSCHMIDT; HENDRICK, 2002), com taxa em torno de 20% no momento do
diagnstico (CHUN, 2005; LIPTAK; FORREST, 2007). Ainda, relatada por Speltz
et al. (2007) a presena de metstase pulmonar derivada de um fibrossarcoma
primrio cardaco em um Retriever de Labrador.

2.1.4. Hemangiossarcoma
O hemangiossarcoma sseo primrio raro e surge a partir do endotlio
vascular do osso. Pode ocorrer em ces de qualquer tamanho porm alguns estudos
ressaltam ces de mdio e grande porte como Boxer, Dog Alemo e Pastor Alemo.
No parece haver predileo sexual. um tumor bastante agressivo causando dor,
claudicao, aumento de volume de tecidos moles e destruio ssea. Entretanto,
tende a ficar confinado na cavidade medular e pode abranger uma grande rea do
osso antes mesmo dos sinais clnicos surgirem, normalmente aps uma fratura
patolgica (THOMPSON; POOL, 2002; CHUN, 2005; NORTON; DRENEN; EMMS,
2006). Erdem e Pead (2000), Hidaka et al. (2006) e Norton, Drenen e Emms (2006)
relataram casos de ces que apresentaram claudicao e dor decorrentes de leses
em escpula e mero devido ao hemangiossarcoma sseo primrio, entre outros
tumores. J Reed, Payne e Aronson (1994) e Mackenzie, Bellah e Threatte (2003)
relataram casos de hemangiossarcoma vertebral. Este tipo de neoplasia altamente

25

metasttica podendo atingir diversos rgos como pulmo, fgado, bao, corao,
crebro e outros ossos (CHUN, 2005; NORTON; DRENEN; EMMS, 2006; DERNELL
et al., 2007). Alteraes no especficas podem ocorrer e at mesmo morte sbita
por hemorragia devido a ruptura do tumor (ERDEM; PEAD, 2000). O tempo de
sobrevida varia de 2 a 3 e de 7 a 8 meses nos casos de micro e macrometstases
respectivamente (CHUN, 2005).

2.1.5. Tumor sseo multilobular

O tumor sseo multilobular um tumor de crescimento lento, progressivo e
invasivo localmente porm potencialmente maligno. Outras denominaes como
osteocondrossarcoma multilobular, condroma rodens ou osteoma no se aplicam
mais. Atinge ossos chatos, principalmente no crnio, mandbula e maxila, a rea
temporo-ocipital podendo envolver rbita, bulha timpnica e arco zigomtico
(FORREST, 2010; CHUN, 2005; DERNELL et al., 2007; PSYCHAS et al., 2009).
Acomete ces de meia idade a idosos e raas mdias e grandes sendo raras em
raas gigantes (THOMPSON; POOL, 2002; CHUN, 2005; DERNELL et al., 2007;
PSYCHAS et al., 2009). H relatos em caninos da raa Husky Siberiano, Rodhesian
Ridgeback, Golden Retriever e ces sem raa definida (STOLL; ROUSH; MOISAN,
2001; BANKS; STRAW, 2004; PSYCHAS et al., 2009; EUBANKS et al., 2010).
Os ces apresentam massas palpveis, ssseis e firmes surgindo a partir de
ossos da cabea. O crescimento simtrico e excntrico, exceto no caso relatado
por Psychas et al. (2009) onde o crescimento foi internalizado e levou a compresso
cerebral e cerebelar acompanhada de sinais clnicos graves. Alteraes de
comportamento podem estar includas devido a compresso de estruturas
adjacentes. Outros sinais incluem: exoftalmia, obstruo nasal, perda de dente ou
dificuldade de mastigao. A recorrncia ps-cirrgica pode chegar a 50% se a
resseco cirrgica no for agressiva (FORREST, 2010; CHUN, 2005), no entanto
demora at dois anos devido a baixa taxa de crescimento. Metstases pulmonares
ocorrem em menos de 60% dos casos e o animal pode permanecer bem
clinicamente por vrios meses (THOMPSON; POOL, 2002; CHUN, 2005). Banks e
Straw (2004) e Eubanks et al. (2010) relatam sobrevida de 14 meses em casos onde
houve resseco cirrgica da leso em palato duro e mandbula. J em casos de

26

remoo mais complexa com localizao vertebral ou cranial a eutansia

considerada (STOLL; ROUSH; MOISAN, 2001; PSYCHAS et al., 2009).
2.1.6. Outras consideraes
Sinais menos especficos relacionados s neoplasias sseas incluem apatia,
anorexia, perda de peso e caquexia podendo esta ser devido a sndrome
paraneoplsica. As sndromes paraneoplsicas so alteraes associadas a
neoplasia mas que ocorrem em estruturas do corpo distantes ao tumor e muitas
vezes podem ser o primeiro sinal da malignidade ou at caracterstica de um
determinado tumor (DERNELL et al., 2007). A caquexia paraneoplsica fator
prognstico negativo para muitas neoplasias, principalmente o linfoma e pode
ocorrer mesmo nos casos onde h envolvimento sseo. A febre no est presente
na maioria dos casos. As alteraes laboratoriais so mnimas e na maioria das
vezes inespecficas, podendo-se ressaltar em alguns casos o aumento srico dos
valores de fosfatase alcalina (THOMPSON; POOL, 2002, HIDAKA et al., 2006;
DERNELL et al., 2007) e do clcio srico em ces com neoplasias sseas. Os sinais
de hipercalcemia so: constipao, uremia, hipertenso, fraqueza, depresso,
bradicardia, estupor, coma e morte (DERNELL et al., 2007).
2.2 NEOPLASIAS SSEAS PRIMRIAS MALIGNAS EM CES: ASPECTOS
RADIOGRFICOS, MACROSCPICOS E MICROSCPICOS

2.2.1. Osteossarcoma
As trs principais neoplasias sseas raramente so passveis de serem
diferenciadas entre si somente atravs da imagem radiogrfica tanto em humanos
(JELINEK et al., 2002; ROZEMAN; CLETON-JANSEN; HOGENDOORN, 2006) como
em animais (CHUN, 2005; AMARAL, 2008; KEALY; MCALLISTER, 2012).
A avaliao inicial deve ser feita sempre em duas projees ortogonais
(DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008; THRALL, 2010; KEALY; MCALLISTER,
2012). Os locais mais frequentemente acometidos pela forma medular ou central do
osteossarcoma so a regio metafisria de ossos longos principalmente a regio
distal de rdio e proximal de mero em membros torcicos e distal de fmur e tbia e
proximal de tbia em membros plvicos (THOMPSON; POOL, 2002; HOENERHOFF

27

et al., 2004; BARGER et al., 2005; CHUN, 2005; DERNELL et al., 2007; THRALL,
2010; BHANDAL; BOSTON, 2011; KEALY; MCALLISTER, 2012). Observa-se
inicialmente perda do padro trabecular metafisrio, alterao de radiopacidade da
cavidade medular e pequenas reas pontuais de lise ssea que progridem para
destruio da cortical ssea, neoformao periosteal irregular e que quando se
desenvolve sob o peristeo elevado forma uma massa ssea triangular
caracterstica denominada tringulo de Codman na periferia do tumor (PHILLIPS et
al., 1986; LUCROY; PECK; BERRY, 2001; MEHL et al., 2001 THOMPSON; POOL,
2002; DONATO et al., 2005; DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008; BHANDAL;
BOSTON, 2011; KEALY; MCALLISTER, 2012).

Pode haver fratura patolgica

associada (PHILLIPS et al., 1986; THOMPSON; POOL, 2002; DERNELL et al.,

2007; AMARAL, 2008; BHANDAL; BOSTON, 2011; KEALY; MCALLISTER, 2012).
Nota-se aumento de volume de tecidos moles perifricos (DERNELL et al., 2007;
KEALY; MCALLISTER, 2012) e no h indcios de invaso do osso subcondral
adjacente ou da cartilagem articular (LUCROY; PECK; BERRY, 2001; THOMPSON;
POOL, 2002; DONATO et al., 2005; DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008). Na
maioria das vezes a leso monosttica (THOMPSON; POOL, 2002; DERNELL et
al., 2007; AMARAL, 2008). Os osteossarcomas do esqueleto axial apresentam
alteraes radiogrficas semelhantes ao apendicular.
Os osteossarcomas so leses dinmicas e pode-se observar alteraes
significativas na imagem em sete a 10 dias que serviro de base para o radiologista
durante uma avaliao seriada do paciente. O diagnstico final dado atravs da
histopatologia

que

que

no

padres

radiogrficos patognomnicos

(THOMPSON; POOL, 2002, CHUN, 2005; AMARAL, 2008). Alguns autores relatam
que a alterao da arquitetura trabecular pode ser uma das primeiras alteraes que
indiquem o surgimento de uma leso ssea (KEALY; MCALLISTER, 2012).
Em

ces,

imagem

radiogrfica

pode

apresentar

certo

grau

de

heterogeneicidade, podendo variar desde predominantemente ltica passando por

mista at predominantemente esclertica (AMARAL, 2008; THRALL, 2010; KEALY;
MCALLISTER, 2012) sendo o padro misto mais freqente nos casos de
osteossarcoma (AMARAL, 2008). Tal fato pode estar relacionado ao percentual de
material osteide produzido ou do grau de mineralizao deste. Isto tem relao
direta

com

os

subtipos

que

osteossarcoma

apresenta

ou

ainda

28

heterogeneicidade das leses j que o osteossarcoma no um tipo de tumor

considerado homogneo.
O osteossarcoma pode ser classificado nos seus subtipos histolgicos, com
base na quantidade e qualidade da matriz extracelular produzida e predominante
nas sees observadas segundo a Classificao Histolgica dos Tumores sseos e
Articulares dos Animais Domsticos, da Organizao Mundial de Sade (SCHULZ et
al., 1988; SLAYTER et al., 1994; LOUKOPOULOS; THORNTON; ROBINSON, 2003;
HOENERHOFF et al., 2004), tendo-se:

Osteossarcoma pouco diferenciado ou anaplsico: com clulas malignas

que podem apresentar variado pleomorfismo, se assemelhando a clulas
mesenquimais primitivas e que produzem pequenas quantidades de
matriz osteide.

Osteossarcoma osteoblstico: apresenta osteoblastos anaplsicos e pode

ainda, de acordo com a quantidade de material osteide produzido, ser
subclassificado em osteossarcoma osteoblstico produtivo e minimamente
produtivo. Em humanos este subtipo representa 50% dos casos
(HOENERHOFF et al., 2004) e em ces pode chegar a quase 90%
(BARGER et al., 2005; AMARAL, 2008).

Osteossarcoma condroblstico: produz matriz osteide e condride que

na maioria das vezes encontram-se entremeadas. Quando separadas, a
coleta de uma amostra da rea condride pode levar ao falso diagnstico
de condrossarcoma.

Osteossarcoma fibroblstico: a formao de material osteide acontece

conforme as clulas aumentam a sua capacidade de formar a matriz
mineral. Inicialmente uma populao de clulas alongadas ir predominar.
Apresenta melhor prognstico que os demais.

Osteossarcoma telangectsico: apresenta leses csticas dominantes

contendo sangue circundadas por clulas neoplsicas podendo ser difcil
a visualizao do material osteide. Apresenta pior prognstico que os
demais com taxa metasttica de 100%.

Osteossarcoma de clulas gigantes: apresenta reas onde clulas

gigantes predominam em meio ao material osteide. Deve ser
diferenciado do tumor sseo de clulas gigantes.

29

Podem ainda ser classificados como simples, quando o material osteide o

nico encontrado, ou composto se h mais de um tipo de material de matriz
extracelular produzidas pelas clulas cancergenas (SCHULZ et al., 1988;
LOUKOPOULOS; THORNTON; ROBINSON, 2003; HOENERHOFF et al., 2004).
Essa caracterstica multipotencial do ostessarcoma pode ser explicada pelo fato de o
tecido mesenquimal possuir alto potencial de diferenciao (HOENERHOFF et al.,
2004). O critrio decisivo para seu diagnstico a observao do material osteide
tumoral mesmo que em um pequeno foco (SCHULZ et al., 1988; GRUNDMANN et
al. 1995; FANBURG et al., 1997; BARGER et al., 2005).
Hoje sabe-se que os subtipos histolgicos do osteossarcoma representam
entidades clnico-patolgicas diferentes tanto para ces quanto para humanos
(GRUNDMANN et al, 1995; LOUKOPOULOS; THORNTON; ROBINSON, 2003;
HOENERHOFF et al., 2004). Se determinados subtipos esto associados a maior ou
menor tempo de sobrevida ainda no est claro. No entanto, a familiaridade com
estes subtipos auxilia no diagnstico acurado e consequentemente uma melhor
abordagem teraputica o que se reflete indiretamente no tempo de sobrevida
(HAUBEN et al., 2002; LOUKOPOULOS; THORNTON; ROBINSON, 2003;
HOENERHOFF et al., 2004).

2.2.2. Condrossarcoma
Radiograficamente

impossvel

distino

entre

osteossarcoma

condrossarcoma. Os condrossarcomas podem ser radiopacos com reas mais

intensas correspondendo aos locais de ossificao. Nas costelas tendem a se
localizar prximo a juno costo-condral e formar massas grandes. Na cavidade
nasal deslocam o septo nasal e substituem o padro turbinado normal por padro
radiogrfico amorfo com densidade de tecidos moles. Tumores vertebrais tendem a
ser menores e osteolticos. Os condrossarcomas escapulares tendem a ser
volumosos e pouco mais radiodensos que os tecidos moles perifricos.
Condrossarcomas de ossos longos so menores e menos produtivos que os
osteossarcomas e podem ser muito osteolticos destruindo a arquitetura ssea
esponjosa e cortical sem produzir uma matriz radiodensa ou resposta periosteal
marcante. Apresentam crescimento consideravelmente lento a partir da superfcie de

30

ossos chatos preferencialmente com mnimo poder de invaso (THOMPSON; POOL,

2002).
Os condrossarcomas produzem abundante matriz condride e nunca
osteide, o que lhe d um aspecto cinza-azulado macroscopia. A cartilagem
neoplsica forma lobulos irregulares entremeados por tecido fibroso ou ainda
invadindo a trabcula ssea. Ossificaes centrais s ilhas de cartilagem neoplsica
podem ser observadas. Tal achado pode ser derivado de processos metaplsicos
(SLAYTER et al., 1994; FLETCHER; UNNI; MERTENS, 2002, AMARAL, 2008).
Os condrossarcomas so hipercelulares. Os condrcitos atpicos variam em
tamanho e formato e possuem ncleo grande e hipercromtico. A binucleao
frequentemente observada assim como necrose e mitose em leses de alto grau. A
classificao pelo grau importante no prognstico do condrossarcoma. A escala
varia de 1 a 3 e abrange fatores como: ndice de mitose, ndice de celularidade, grau
de pleomorfismo e hipercromasia nuclear e grau de necrose tumoral (SLAYTER et
al., 1994; FLETCHER; UNNI; MERTENS, 2002; LOUKOPOULOS; THORNTON;
ROBINSON, 2003).

2.2.3. Fibrossarcoma
O fibrossarcoma pode apresentar basicamente dois tipos de comportamento:
comumente provoca destruio ssea por um perodo de meses at um ano e
mais lento em gerar metstase que o osteossarcoma ou tem comportamento
agressivo, anaplsico, mais ltico (KEALY; MCALLISTER, 2012) causando rpida e
macia destruio do osso, podendo causar metstases.
Os casos em Medicina Veterinria de fibrossarcoma sseo de origem medular
sugerem uma predileo pelas metfises dos ossos longos, mas pode acontecer em
mandbula e vrtebra. Quando originado a partir do peristeo, tende a ocorrer nos
ossos da cabea. Dependendo do tempo de curso da leso, muitas vezes no
possvel distinguir o fibrossarcoma sseo periosteal das formas gengival, labial ou
da mucosa oral. O material fibroso pode se infiltrar nos espaos trabeculares da
metfise mantendo as trabculas intactas. Em leses mais agressivas, o osso
destrudo e substitudo por tecido neoplsico. A destruio do osso subcondral
permite a extenso para a cavidade articular atravs das fraturas na cartilagem. O

31

tecido tumoral pode invadir a camada fibrosa da cpsula articular e atingir o prximo
osso. A invaso dos tecidos perifricos parcialmente contida pelo peristeo.
Quando h resposta peristica, esta tende a ser moderada embora o aumento de
volume seja notvel (THOMPSON; POOL, 2002).
O fibrossarcoma tende a formar uma leso radiogrfica ltica, sendo difcil de
diferenci-lo de outros tumores sseos que tambm assumem este padro.
Radiografias seqenciais podem ter valor diagnstico uma vez que a progresso
mais lenta que nos osteossarcomas e outros tumores sseos altamente malignos
(SLAYTER et al., 1994; FLETCHER; UNNI; MERTENS, 2002; THOMPSON; POOL,
2002).
O tumor surge a partir de elementos do estroma da cavidade medular e
produz clulas fusiformes tpicas dos fibrossarcomas de tecidos moles com varivel
quantidade de matriz colgena. No h produo de cartilagem ou osso. reas de
necrose e mitoses atpicas podem estar presentes (SLAYTER et al., 1994;
FLETCHER; UNNI; MERTENS, 2002).

2.2.4. Hemangiossarcoma
O hemangiossarcoma tem predileo pelo tero distal e proximal dos ossos
longos podendo acometer pelve, esterno, costela, maxila e coluna vertebral. O
hemangiossarcoma de tecidos moles pode metastatizar para os ossos produzindo
leses semelhantes. O hemangiossarcoma sseo primrio destri grande rea de
osso normal incluindo a esponjosa e a cortical sendo comum fratura patolgica
porm, normalmente a reao periosteal no acontece ou mnima. Tal observao
pode ser decorrente da isquemia local provocada pela hemorragia do tumor que
evita a osteognese. No costumam invadir os tecidos perifricos como outros
sarcomas (SLAYTER et al., 1994; FLETCHER; UNNI; MERTENS, 2002;
THOMPSON; POOL, 2002).
Pode-se observar leses mltiplas, o que torna impossvel distingui-las como
primria ou secundria (THOMPSON; POOL, 2002; DERNELL et al., 2007). Hidaka
et al. (2006) relatam que no hemangiossarcoma sseo primrio descrito por eles, a
leso radiogrfica em mero se caracterizava por reas semelhantes a rodo de
traa havendo crescimento expansivo em forma de bolhas associado a destruio

32

ssea macia (ERDEM; PEAD, 2000; DERNELL et al., 2007) e fratura patolgica.
Nos casos de hemangiossarcoma sseo primrio em escpula, o posicionamento
crnio-caudal da escpula permite melhor investigao diagnstica deste tipo de
tumor (ERDEM; PEAD, 2000). Independente disso, os autores relatam ser difcil a
diferenciao radiogrfica entre este tumor e o osteossarcoma sendo o diagnstico
definitivo dado pela histopatologia.
O estroma do hemangiossarcoma no forma matriz calcificada o que torna a
diferenciao entre ele e um osteossarcoma telangectsico com baixo potencial
osteoblstico difcil em alguns casos mesmo para a histopatologia (DERNELL et al.,
2007).
O hemangiossarcoma se assemelha ao seu equivalente de tecidos moles.
Apresenta canais vasculares sustentados por um estroma varivel de colgeno.
Pode ser consideravelmente anaplsico com atipia nuclear proeminente e alto
nmero de figuras de mitose atpicas (SLAYTER et al., 1994; FLETCHER; UNNI;
MERTENS, 2002; THOMPSON; POOL, 2002).
2.2.5. Tumor sseo Multilobular
O tumor sseo multilobular comumente uma leso solitria, apresenta como
caracterstica bordas bem demarcadas com lise limitada do osso adjacente e
observa-se uma densidade mineral granular grosseira. Sinais como reao ssea
marcante nas bordas tumorais e grandes reas de lise podem sugerir alterao
maligna (THOMPSON; POOL, 2002).
caracterizado por ilhas de diferenciao varivel, podendo ser cartilagem
e/ou osso separadas por septos de clulas fusiformes. A malignidade dada pela
superexpresso de um dos elementos, atividade mittica aumentada, perda da
arquitetura e diferenciao e invaso de tecidos adjacentes (SLAYTER et al., 1994;
FLETCHER; UNNI; MERTENS, 2002; THOMPSON; POOL, 2002).

2.3 MTODOS DIAGNSTICOS

A confirmao por outros meios que no apenas a imagem, seja ela

radiogrfica ou tomogrfica, mandatria para o estabelecimento do diagnstico
das neoplasias sseas primrias j que informaes especficas so necessrias

33

antes da instituio da terapia mais adequada. Alm disso, o diagnstico final dado
pela histopatologia j que o osteossarcoma e outros tumores sseos como
condrossarcoma

fibrossarcoma

no

produzem

padres

radiogrficos

patognomnicos. No necessariamente os tumores sseos sero a suspeita

principal, sendo igualmente importante identificar histologicamente leses benignas,
inflamatrias e infecciosas, at mesmo para se fazer o diagnstico diferencial
(HAUBEN et al., 2002; JELINEK et al., 2002; AMARAL et al., 2006; AMARAL, 2008;
AMARAL; ROMO; FERREIRA, 2013).
A determinao histopatolgica pode ser obtida atravs de bipsia incisional,
obtida por agulhas especficas, ou excisional, realizada aps a exrese da leso
como nos casos de amputao de membro. Neste ltimo caso, a quantidade de
material obtida comumente maior mas nem sempre implica em maior pencentual
de acerto (AMARAL et al., 2006; AMARAL, 2008; AMARAL; ROMO; FERREIRA,
2013).
Em todos os casos de obteno de material, o patologista deve estar
familiarizado com os tipos de leses observadas em sistema locomotor e a
integrao entre as reas envolvidas aumenta as chances de se obter um
diagnstico final acurado (PRAMESH et al., 2001; AMARAL et al., 2006; AMARAL,
2008; AMARAL; ROMO; FERREIRA, 2013). A bipsia incisional permite a
obteno de quantidade ideal de tecido e maior preciso do resultado quando
comparado com as tcnicas citolgicas, porm essa tcnica apresenta como
desvantagens o envolvimento de procedimento cirrgico, risco de complicaes pscirrgicas como formao de hematoma, infeco, disseminao do tumor e fratura
patolgica (BARGER et al., 2005; DALECK et al., 2006) principalmente quando a
tcnica realizada com o bisturi, sendo mais invasiva. A incidncia dessas
complicaes so consideravelmente reduzidas quando se realiza a bipsia ssea
percutnea por agulha (AMARAL et al., 2006; AMARAL, 2008; AMARAL; ROMO;
FERREIRA, 2013).
Em Medicina Veterinria as principais indicaes para a realizao da bipsia
ssea por agulha atualmente so a confirmao do tipo de neoplasia em questo, as
leses suspeitas de serem infecciosas, mas apresentando caractersticas agressivas
de

malignidade

leses

primrias

radiograficamente

tpicas,

no

entanto

apresentando-se em faixas etrias e locais pouco comuns (POWERS et al., 1988;

34

BREUR; SLOCOMBE; BRADEN, 1988; AMARAL, 2008; AMARAL; ROMO;

FERREIRA, 2013).
Mehl et al. (2001), Dernell et al. (2007) e Amaral (2008) enfatizam que o
diagnstico de tumores sseos, principalmente o osteossarcoma devido a sua
heterogeneicidade, tem seu percentual de acerto aumentado com bipsias
adicionais, ou seja, a coleta de mltiplas amostras aumenta a chance de fechar o
diagnstico corretamente.
O diagnstico histopatolgico das leses sseas em ces no apresenta a
mesma diversidade dos casos humanos, sendo o osteossarcoma e suas
subclassificaes a principal neoplasia causadora de leses sseas primrias,
seguido do condrossarcoma (ERDEM; PEAD, 2000; DERNELL et al., 2007;
AMARAL, 2008).
Em alguns casos, a identificao do osteossarcoma pode ser dificultada pelo
fato de suas variantes histolgicas mimetizarem outros tumores sseos primrios ou
metastticos, o osso neoplsico pode no estar presente em espcimes de bipsia e
que o tecido conjuntivo denso hialino pode parecer com o osso neoplsico quando
examinado na microscopia tica (FANBURG et al., 1997; AMARAL; ROMO;
FERREIRA, 2013).

2.4 IMUNO-HISTOQUMICA

2.4.1. Introduo
Imuno-histoqumica uma tcnica que permite a observao da quantidade,
distribuio tecidual e localizao celular de antgenos in situ, isto , em cortes
histolgicos. Baseia-se no uso de anticorpos primrios direcionados contra o
antgeno a ser pesquisado e, posteriomente, a aplicao de um anticorpo secundrio
acoplado a um sistema de revelao (HAINES; WEST, 2005; AMORIM, 2009; DE
MATOS et al., 2010; CATALDO; FICARRA; MACII, 2012).
2.4.2. Histrico e Aplicaes Gerais
A tcnica surgiu na dcada de 40, quando o mdico Albert Coons demonstrou
ser possvel localizar microrganismos em cortes histolgicos de tecidos usando

35

anticorpos especficos contra Streptococcus pneumoniae corado com fluorescena e

visualizado sob luz ultra-violeta (HAINES; WEST, 2005; DE MATOS et al., 2010;
LEONG; COOPER; LEONG, 2010). Na dcada de 60, Nakane desenvolveu
anticorpos marcados com enzimas, tornando possvel a visualizao da reao sob
microscopia tica. Isso aumentou o nmero de laboratrios capazes de realizar a
tcnica (HAINES; WEST, 2005; DE MATOS et al., 2010). As descobertas seguintes
dos sistemas da peroxidase e da fosfatase alcalina expandiram a aplicao da
tcnica. No mesmo perodo, passou-se a utilizar a molcula de diaminobenzidina
(DAB) como agente cromgeno para a peroxidase que produz um precipitado
eletrodenso passvel de ser utilizado na microscopia eletrnica (DE MATOS et al.,
2010; LEONG; COOPER; LEONG, 2010).
No entanto, a tcnica s foi aceita como mtodo diagnstico de rotina na
anatomia patolgica a partir de 1974. Isso s ocorreu aps a descoberta dos
mtodos de recuperao antignica e da aplicao dos sistemas de anticorpos
secundrios que permitiu a utilizao da imuno-histoqumica no s em espcimes
frescas mas tambm em formolizadas (HAINES; WEST, 2005; WERNER et al.,
2005; DE MATOS et al., 2010; LEONG; COOPER; LEONG, 2010; CATALDO;
FICARRA; MACII, 2012).
Os primeiros tecidos-alvo foram as leses auto-imunes que, a partir de uma
mesma pea, tiveram sua aparncia histolgica determinada e a demonstrao da
presena e do padro da deposio das imunoglobulinas usadas. Em muitos casos,
dependendo da molcula em questo, tornou-se possvel inferir consideraes a
respeito da patognese dessas alm da confirmao diagnstica. Outra aplicao
est nos casos onde a leso histolgica gerada pelo patgeno no patognomnica
e na ligao de

agentes j conhecidos a novas manifestaes da doena em

hospedeiros j conhecidos ou no (HAINES; WEST, 2005).

Atualmente, em medicina, a aplicao primria da tcnica de imunohistoqumica, alm das doenas auto-imunes, a demonstrao de antgenos
associados a neoplasias para melhor diagnosticar e determinar o prognstico de
pacientes com cncer. O objetivo determinar a origem celular da populao
tumoral (HAINES; WEST, 2005; WERNER et al., 2005). Os principais alvos so
protenas filamentares intermedirias especialmente em casos de tumores
anaplsicos onde no se pode determinar a origem mesenquimal ou epitelial das
clulas. Os anticorpos utilizados contra essas protenas podem ser utilizados em

36

medicina veterinria pois as mesmas so altamente conservadas entre as espcies.

(HAINES; WEST, 2005).
Nos ltimos dez anos, observou-se um crescimento logartmo do nmero de
publicaes envolvendo tcnicas imuno-histoqumicas tanto na medicina quanto na
veterinria, o que reflete a posio ocupada pela tcnica nos laboratrios de
patologia como complementar na elucidao de diagnstico diferencial que no
obtido por anlises convencionais coradas com hematoxilina-eosina (HE) (WERNER
et al., 2005; DE MATOS et al., 2010).

2.4.3. Anticorpos Utilizados

Os anticorpos primrios podem ser monoclonais ou policlonais. Os anticorpos
monoclonais so aqueles capazes de identificar um nico eptopo antignico e so
produzidos normalmente em camundongos pela tcnica do hibridoma. Os anticorpos
policlonais reagem contra diferentes eptopos antignicos num mesmo antgeno e
so produzidos em imunizaes em coelhos ou outro animal. Os anticorpos
policlonais possuem maior sensibilidade. Os anticorpos monoclonais so mais
especficos que os policlonais e a chance de reao cruzada entre as espcies
bem menor. Isso pode prejudicar a utilizao de anticorpos monoclonais,
comumente humanos, em medicina veterinria, salvo casos onde h homologia
entre os eptopos humano e da espcie estudada (regies conservadas) (AMORIM,
2009; DE MATOS et al., 2010; LEONG; COOPER; LEONG, 2010).
Os anticorpos secundrios devem se direcionados contra a espcie para qual
foi feito o anticorpo primrio e deve ser produzido em outra espcie animal. Esses
anticorpos costumam apresentar molculas acopladas a eles que servem de
substrato para uma enzima e o produto gerado apresenta colorao especfica,
sendo ento observado nos tecidos. Exemplos destas molculas so o complexo
estreptavidina-biotina e substratos da peroxidase (AMORIM, 2009).
Atualmente, devido ao processo de recuperao antignica, um grande
nmero de anticorpos passou a ser utilizado em tecidos processados rotineiramente.
Isto s foi possvel pois a recuperao antignica libera os antgenos ligados s
molculas de formol, permitindo a sua identificao pelo anticorpo. Anteriormente a
isso, somente eram utilizados cortes de tecidos congelados, o que na maioria das
vezes tinha seu uso limitado (AMORIM, 2009; LEONG; COOPER; LEONG, 2010).

37

2.4.4. Alvos antignicos em Oncologia

Nos casos de neoplasias indiferenciadas, utiliza-se um painel de anticorpos
primrios que tem por funo identificar antgenos caractersticos de determinado
tipo celular (AMORIM, 2009; LEONG; COOPER; LEONG, 2010). Neste caso, a
experincia do patologista fundamental para que o nmero de anticorpos usados
seja o menor possvel devido ao custo (AMORIM, 2009).
Muitas neoplasias e suas metstases preservam a expresso de filamentos
intermedirios, as protenas da rede de sustentao celular. Existem quatro tipos: a
vimentina, presente na maioria das clulas mesenquimais; a desmina, presente nas
clulas musculares; a protena cida fibrilar glial (GFAP glial fibrillary acidic protein)
dos astrcitos e as citoqueratinas das clulas epiteliais. Elas auxiliam na
identificao da origem das clulas avaliadas (AMORIM, 2009).
Marcadores de protenas envolvidas na gnese tumoral, como marcadores do
ciclo celular, da apoptose, da adeso celular, da angiognese, da expresso de
proto-oncogenes e genes supressores de tumor podem ser identificados no tecido
neoplsico para avaliao de prognstico e resposta a terapia. So exemplos, a p53,
o antgeno nuclear de proliferao celular (PCNA) e Ki-67 (MIB-1) (AMORIM, 2009;
LEONG; COOPER; LEONG, 2010).
A cintica do crescimento tumoral envolve a taxa de proliferao celular e a
proporo de clulas que sofrero morte celular. A apoptose importante no
controle populacional celular e a perda desse mecanismo confere pior prognstico
s neoplasias, que se tornam resistentes morte celular programada. Pela imunohistoqumica, pode-se avaliar o percentual de clulas em apoptose com o uso de
marcadores especficos com a caspase-3 e o bcl-2 (WERNER et al., 2005; LEONG;
COOPER; LEONG, 2010; CATALDO; FICARRA; MACII, 2012).
So alvos ainda da imunistoqumica molculas envolvidas na formao de
vasos como o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF vascular endothelial
growth factor) e enzimas de importantes rotas metablicas celulares como a tirosina
quinase e a cicloxigenase-2 (WERNER et al., 2005; LEONG; COOPER; LEONG,
2010).
O nmero de marcadores utilizados varia de acordo com o estudo em
questo. Casos mais simples requerem menor nmero de anticorpos enquanto que
diagnsticos diferenciais mais complexos como no caso de neoplasias malignas

38

indiferenciadas solicitam um maior nmero de anticorpos. Este nmero pode variar

de um a 15, sendo a mdia de anticorpos utilizados em torno de 4-5 tipos (WERNER
et al., 2005). O uso de um nico anticorpo para a prtica diagnstica deve ser
desencorajado (LEONG; COOPER; LEONG, 2010).
importante ressaltar que, apesar de o nmero de casos avaliados
rotineiramente ser pequeno, a imuno-histoqumica contribui positivamente na
balana custo/benefcio nesta pequena parcela de casos, e consolida a sua posio
de ferramenta complementar e no essencial para o exerccio da patologia cirrgica
de um modo geral (WERNER et al., 2005; LEONG; COOPER; LEONG, 2010).

2.4.5. Limitaes
A imuno-histoqumica pode no contribuir para o diagnstico das neoplasias
principalmente em casos de exiguidade de amostras onde o tecido obtido no
quantitativamente suficente para a realizao das reaes necessrias, presena de
necrose extensa provocando colorao inespecfica alm de o pouco tecido vivel
ser insuficiente para a interpretao das reaes e indiferenciao extrema de
algumas neoplasias quando todos os marcadores so negativos. Alm disso, a
fixao inadequada, utilizando formol um fator complicador (WERNER et al., 2005;
LEONG; COOPER; LEONG, 2010).
Apesar destas consideraes, a quantidade de material utilizado tem sido
questionada pois cada vez mais os patologistas so impelidos a realizar um
diagnstico preciso em pequenas amostras. Na maioria das vezes um bloco
suficiente mas este deve conter um fragmento representativo da leso e com parte
do parnquima da interface da leso, devendo-se excluir reas de necrose e
hemorragia j na anlise macroscpica (DE MATOS et al., 2010, LEONG; COOPER;
LEONG, 2010).
A aquisio, manuseio, fixao e chegada do material no laboratrio e a
recuperao

antignica

so

fatores

crticos.

Espcimes

frescas

fixadas

inadvertidamente por perodos longos podem levar a perda de antigenicidade. A

fixao em formaldedo e a consequente incluso em parafina so os procedimentos
de processamento histolgico mais usados internacionalmente. Alguns especialistas
propem que este mtodo deve ser padro para comparao diagnstica frente a

39

imuno-histoqumica. No entanto, a fixao em formol resulta em perda variavelmente

reversvel de imunorreatividade seja mascarando ou danificando locais de ligao do
anticorpo (DE MATOS et al., 2010; LEONG; COOPER; LEONG, 2010).
Apesar de muitos eptopos serem desmascarados atravs de mtodos de
recuperao antignica, o sistema de deteco imuno-histoqumico ainda deve ser
sensvel o suficiente para produzir um sinal forte. Para alguns eptopos, o tempo de
durao da fixao em formol pode ser crucial. J em outros casos, dependendo da
resistncia do eptopo-alvo s alteraes autolticas, a demora na fixao pode levar
a perda da imunorreatividade (DE MATOS et al., 2010; LEONG; COOPER; LEONG,
2010).
importante enfatizar que a utilizao de temperaturas altas (acima de 60 C)
durante o processo de incluso em parafina pode comprometer a antigenicidade
atravs da desnaturao dos eptopos. A preparao dos cortes deve ser realizada
entre 3 e 7 m e estes devem ser depositados em lminas previamente preparadas
com algum sistema adesivo. Entre eles pode-se citar o silane e a polilisina. Cortes
abaixo de 3 m resultam em fraca colorao enquanto que acima de 7 m pode
levar a perda de tecido na lmina (DE MATOS et al., 2010; LEONG; COOPER;
LEONG, 2010).

2.4.6. Vantagens
A vantagem da imuno-histoqumica est no s na identificao do antgeno
mas tambm na associao com a sua localizao no tecido, permitindo relacionar
sua expresso com determinado tipo celular (AMORIM, 2009; LEONG; COOPER;
LEONG, 2010; CATALDO; FICARRA; MACII, 2012).
Apresenta ampla viabilidade, facilidade de execuo e manuteno das
lminas coradas por longos perodos (CATALDO; FICARRA; MACII, 2012).
Em 95% dos casos nos quais o patologista humano est diante de um caso
de diagnstico difcil nas lminas coradas com HE, a imuno-histoqumica pode
ajud-lo a firmar se no o diagnstico correto pelo menos um diagnstico apropriado
(WERNER et al., 2005).
Diversos relatos de neoplasias so encontrados na literatura onde o
diagnstico e determinao da origem do tumor se deu graas a utilizao da imunohistoqumica (HOENERHOFF et al., 2004, WERNER et al., 2005). Em medicina,

40

vastos so os trabalhos que pesquisam molculas especficas em determinados

tipos de neoplasias para estabelecimento de prognstico (LEONG; COOPER;
LEONG, 2010).
A princpio, o custo de aquisio dos anticorpos constituiria uma desvantagem
(AMORIM, 2009). Apesar disso, alguns trabalhos citam-na como de baixo custo, e
que, mesmo que o custo da tcnica aumentasse cinco vezes, ainda assim seria
vantajosa (WERNER et al., 2005; CATALDO; FICARRA; MACII, 2012).
2.4.7. Desvantagens
A experincia do patologista que escolhe os anticorpos e interpreta os
resultados imuno-histoqumicos o fator mais importante para a eficincia da imunohistoqumica no diagnstico de tumores, devendo-se integrar os resultados obtidos
na imuno-histoqumica com o diagnstico suspeitado nas lminas coradas com HE
(WERNER et al., 2005; DE MATOS et al., 2010; LEONG; COOPER; LEONG, 2010).
relatado que a m seleo do painel de anticorpos pode ser responsvel em at
40% pelas discrepncias diagnsticas. Outro ponto a ser considerado a
caracterstica dos anticorpos utilizados incluindo a titulao e os controles positivo e
negativo (DE MATOS et al., 2010; LEONG; COOPER; LEONG, 2010).
Tecidos submetidos a anlise por congelao devem ser evitados (DE
MATOS et al., 2010) embora, segundo Hosoya et al. (2005), a utilizao de cortes
frescos congelados indicada para tecidos calcificados, onde a imunorreatividade
das protenas preservada assim como sua localizao.

2.4.8. Interpretao de resultados

A interpretao dos dados imuno-histoqumicos em muitos casos qualitativa
sendo a quantificao colocada como de menor importncia uma vez que sua
reprodutibilidade baixa (DE MATOS et al., 2010; LEONG; COOPER; LEONG,
2010).
Ainda assim, alguns autores discordam sobre o que considerar como um
resultado positivo. Para muitos, a simples colorao castanha j suficiente
enquanto que para outros, a localizao desta marcao tem importncia no
julgamento. fundamental ento conhecer as funes e os fenmenos biolgicos

41

nos quais a molcula estudada est envolvida (DE MATOS et al., 2010; LEONG;
COOPER; LEONG, 2010; CATALDO; FICARRA; MACII, 2012).
Ateno deve ser dada em casos onde a colorao do anticorpo, de funo
documentada e conhecida, no se manifesta conforme esperado e o pesquisador
pode considerar este um resultado falso positivo. No entanto, importante
considerar que pode-se estar diante de outra funo biolgica daquela molcula,
ainda no descrita na literatura. Nos casos onde a natureza do antgeno ou sua
funo no foi completamente elucidada, tal determinao pode ser mais trabalhosa
(DE MATOS et al., 2010).
Algumas questes devem ser consideradas na interpretao dos resultados.
Sabe-se que

a quantificao da marcao imuno-histoqumica est diretamente

relacionada a concentrao tissular daquele antgeno. As coloraes biolgicas,

entretanto, so difceis de controlar em termos de intensidade o que pode dificultar o
estudo comparativo. Essa dificuldade tende a diminuir com a utilizao de tcnicas
de automao e microscopia digital (DE MATOS et al., 2010; LEONG; COOPER;
LEONG, 2010; CATALDO; FICARRA; MACII, 2012).
As anlises semi-quantitativas, baseadas em categorias (ou scores) variam
de acordo com a experincia do analisador sendo dependentes do mesmo e
portanto so inadequadas. As tcnicas de anlise quantitativa assistida por
computador tem sido superior, representando uma soluo frente a reproducibilidade
e aplicabilidade dos mtodos semi-quantitativos (DE MATOS et al., 2010;
CATALDO; FICARRA; MACII, 2012).

2.4.9. Marcadores de interesse em Neoplasias sseas

2.4.9.1.Marcadores de Linhagem Celular

2.4.9.1.1. Vimentina
A vimentina uma protena de 57 kDa pertencente ao grande grupo de
filamentos intermedirios. Os filamentos intermedirios, juntamente com os
microfilamentos e microtbulos, compreendem os trs grandes grupos das principais
protenas do citoesqueleto de cluas eucariticas no-musculares. A famlia dos
filamentos intermedirios possui seis grandes classes, estando a vimentina
classificada como tipo III. a mais expressada e conservada protena do grupo,

42

ainda composto pela desmina, periferina e protena cida de filamento glial (MININ;
MOLDAVER, 2008; PAN et al., 2010; SATELLI; LI, 2011).
A vimentina possui 466 aminocidos, com uma estrutra central de -hlice
altamente conservada de duas extremidades N- e C-terminais. codificada por um
gene nico localizado no cromossomo 10p13 (MININ; MOLDAVER, 2008; SATELLI;
LI, 2011).
Em indivduos adultos, a expresso da vimentina est limitada s clulas do
tecido conjuntivo mesenquimal, do sistema nervoso central e do msculo.
expressa numa variedade de clulas incluindo precursores celulares pancreticos e
neurais, clulas de Sertoli, clulas gigantes trofoblsticas, fibroblastos, clulas
endoteliais que delimitam vasos, clulas tubulares renais, macrfagos, neutrfilos,
clulas mesangiais e do estroma renal (MININ; MOLDAVER, 2008; SATELLI; LI,
2011).
Sendo uma protena estrutural de citoesqueleto, esperado que sua
localizao seja restrita ao citossol, no entanto, sua presena j foi demonstrada no
ncleo assim como extracelularmente. Em ambos os casos, ainda no se definiu seu
papel exatamente (SATELLI; LI, 2011).
A principal funo da vimentina est relacionada a manuteno da arquitetura
celular e integridade tecidual. Ela interage com vrias protenas e participa de
diversos processos celulares (MININ; MOLDAVER, 2008; MENDEZ; KOJIMA;
GOLDMAN, 2010; PAN et al., 2010; SATELLI; LI, 2011). Sua interao com as
mitocndrias, atravs do grupamento N-terminal j foi comprovada (NEKRASOVA et
al., 2011). Ela ainda est implicada diretamente na distribuio intracelular das
organelas e protenas, influenciando suas funes. Os filamentos polimerizados de
vimentina apresentam considervel mobilidade celular, ligadas a potenas motoras
como a cinesina e dinena. Os filamentos ainda se ligam a protenas acopladoras de
filamentos como a plectina previnindo a mobilidade do citoesqueleto, necessrio
para estabilizar regies especiais do citoplasma que sofra por stress mecnico ou
deformao (MININ; MOLDAVER, 2008; PAN et al., 2010; MENDEZ; KOJIMA;
GOLDMAN, 2010).
Algum grau de regulao da vimentina dado atravs de reaes de
fosforilao da molcula (MININ & MOLDAVER, 2008; PAN et al., 2010; MENDEZ;
KOJIMA; GOLDMAN, 2010).

43

A vimentina utilizada na identificao de linhagem de origem mesenquimal,

tendo importante valor diagnstico principalmente em casos de neoplasias
anaplsicas tanto em humanos quanto em animais (THOMAS; PRESSLER;
ROBERTSON, 2001; HOENERHOFF et al., 2004; BARGER et al., 2005; MININ &
MOLDAVER, 2008; WIERSMA et al., 2010; PALMIERI et al., 2011; SATELLI; LI,
2011).

Segundo

Hoenerhoff

et

al.

(2004),

comumente

expressa

em

osteossarcomas caninos.
A vimentina tem ganho destaque recentemente devido ao seu envolvimento
com a transformao epitelial-mesenquimal, um processo de reprogramao celular
onde clulas epiteliais adquirem fentipo mesenquimal, o que altera drasticamente
seu formato e aumenta sua motilidade (LI et al, 2010; MENDEZ; KOJIMA;
GOLDMAN, 2010; PAN et al., 2010; SATELLI; LI, 2011). Essa transformao
caracterizada pela expresso de vimentina nas clulas epiteliais, que normalmente
expressam apenas citoqueratinas, filamentos intermedirios pretencentes ao tipo I e
II (AMORIM, 2009; LI et al, 2010; MENDEZ; KOJIMA; GOLDMAN, 2010; PAN et al.,
2010; SATELLI; LI, 2011). O processo inverso, transformao mesenquimal-epitelial
tambm acontece, e neste, as clulas mesenquimais adquirem fentipo epitelial,
reduzem a expresso de vimentina e apresentam menores taxas de motilidade
(MENDEZ; KOJIMA; GOLDMAN, 2010; SATELLI; LI, 2011).
Aumento na expresso de vimentina j foi observado em vrias linhagens
tumorais em seres humanos (LI et al, 2010; MENDEZ; KOJIMA; GOLDMAN, 2010;
SATELLI; LI, 2011).
No cncer de prstata, a expresso da vimentina detectada principalmente
nos casos pouco diferenciados e nas metstases sseas mas praticamente
indetectvel nos casos mais diferenciados. Especula-se que a expresso da
vimentina contribua para o desenvolvimento do fentipo invasivo em conjuno com
outros elementos (MENDEZ; KOJIMA; GOLDMAN, 2010; SATELLI; LI, 2011).
Em seres humanos, a expresso da vimentina nos cnceres gstricos est
associada a carcinoma de fentipo invasivo e parece ter papel nas metstases do
mesmo, servindo como fator prognstico (SATELLI; LI, 2011). Observao
semelhante ocorre em linhagens agressivas de neoplasias mamrias (MENDEZ;
KOJIMA; GOLDMAN, 2010; SATELLI; LI, 2011). No carcinoma de clulas
escamosas esofgico, clulas que expressam vimentina exibem maior incidncia de
metstases em linfonodos. J nos tumores colon-retais, a vimentia est restrita aos

44

fibroblastos do estroma, clulas endoteliais permeando vasose linfcitos infiltrativos

(SATELLI; LI, 2011).
A superexpresso de vimentina em melanomas primrios no apenas serve
como marcador diagnstico mas tambm como prognosticador de metstases
hematognicas o que se reflete no resultado clnico, conduzindo estratgias de
tratamento de forma individual (LI et al, 2010).
Em meningiomas, a forma fosforilada da vimentina est associada a tumores
no-infiltrativos quando comparado com os invasivos (SATELLI; LI, 2011).
A quinase AKT se liga a vimentina fosforilada e a protege da protelise
induzida pela caspase o que leva a um aumento da motilidade celular e da invaso
nas clulas de sarcomas de tecidos moles (SATELLI; LI, 2011). Scrib, uma protena
envolvida na migrao celular, protegida da degradao proteossomal atravs de
interao com a vimentina sugerindo a possibilidade de a regulao positiva da
vimentina na transformao epitelial-mesenquimal leva a estabilizao da Scrib,
promovendo diretamente a migrao celular para aumentar a capacidade invasiva
das clulas. A vimentina ainda atua como um freio na diferenciao de osteoblastos
imaturos. (MENDEZ; KOJIMA; GOLDMAN, 2010; SATELLI; LI, 2011).
Em relao s metstases, Schoumacher et al. (2010) relatam sua
participao na formao da invadopodia, o prolongamento celular das clulas
tumorais responsveis pela degradao da membrana basal e consequente invaso
tecidual. A formao do invadopodia primariamente dependente dos filamentos de
actina porm, seu alongamento, uma vez rompida a membrana basal, requer a
formao da rede de microtbulos e filamentos intermedirios, incluindo a vimentina.
Assim sendo, a vimentina atua no s como ferramenta diagnstica mas
tambm tem papel no desenvolvimento e progresso do cncer. Apesar de sua
maior nfase ser na transformao epitelial-mesenquimal, parece estar envolvida em
outros eventos da gnese tumoral uma vez que diversos estudos demonstram
relao positiva entre sua expresso e a migrao e invaso celular (LI et al, 2010;
PAN et al., 2010; SATELLI, LI, 2011).
Sendo isso verdade, a vimentina torna-se alvo da terapia anticancergena
(PAN et al., 2010; SATELLI; LI, 2011). A silibinina, um flavonolignano, e principal
constituinte da silimarina isolada do cardo leiteiro (Silybum marianum), demonstrou
atividades anticancergenas e quimioprotetoras fortes por inibir a invaso, motilidade
e migrao de clulas prostticas via regulao negativa da vimentina. De forma

45

semelhante, o antibitico salinomicina diminui drasticamente os nveis de vimentina

em clulas de cncer colon-retal. Os mecanismos pelos quais isso acontece ainda
no forma elucidados (SATELLI; LI, 2011).

2.4.9.2. Marcadores sseos proteicos

2.4.9.2.1. Osteocalcina
a principal protena no-colgena da matriz ssea, abrangendo entre 10 e
20% do material orgnico no-colgeno. A molcula precursora possui 100
aminocidos enquanto que o peptdeo maduro consiste de 47-50 resduos de
aminocidos, com peso molecular variando entre 5,2 e 5,9 kDa, dependendo da
espcie (VERMEULEN; VERMEER; BOSMAN, 1989; CHEN et al., 2012).
codificada pelo gene BGLAP em humanos (CHEN et al., 2011; CHEN et al., 2012).
Produzida por osteoblastos, odontoblastos e condrcitos hipertrficos, possui trs
resduos de cido -carboxiglutmico cuja formao ocorre ps-transicionalmente
num processo dependente de vitamina K e estimulado pela vitamina D3. Estes
resduos se ligam ao clcio e promovem uma mudana na conformao da protena
que parece ento funcionar como um stio de localizao para os cristais de
hidroxiapatita durante a sntese da matriz ssea (VERMEULEN; VERMEER;
BOSMAN, 1989; INGRAM et al., 1994; PARK et al., 1995; FANBURG et al., 1997;
PULLIG et al., 2000; HOENERHOFF et al., 2004; KIM et al., 2010; CHEN et al.,
2011; CHEN et al., 2012). Os ndices de osteocalcina aumentam no osso conforme a
mineralizao ocorre (PARK et al., 1995; CHEN et al., 2011) e a distribuio da
molcula no osso em humanos varia conforme sexo e idade (INGRAM et al., 1994).
Tanto a ostelise quanto a osteognese liberam osteocalcina no sangue, que
eliminada pelo clearence renal e degradao. Por isso, os nveis de osteocalcina
refletem o metabolismo sseo em geral e no apenas a osteognese. Somado a
isso, a deteco de osteocalcina plasmtica ou srica pode ser comprometida pelo
nvel de lipdeos no sangue devido a capacidade da osteocalcina se ligar a eles. H
mltiplas isoformas na circulao e os exames tem capacidade limitada de identificar
todas elas. (HOENERHOFF et al., 2004; KIM et al., 2010).
A fixao do tecido tem pouca influncia sobre a imunorreatividade da
osteocalcina mas agentes descalcificadores como o EDTA podem reduzir

46

consideravelmente o percentual de imunorreatividade da mesma atravs da

extrao da protena durante o processo de calcificao. Quanto mais rpido for
este, como o que ocorre com o uso de cidos, maior a imunorreatividade
encontrada, desde que no haja desnaturao da protena (VERMEULEN;
VERMEER; BOSMAN, 1989; INGRAM et al., 1994; PULLIG et al., 2000). Para evitar
tais alteraes, pode-se utilizar espcimes no-descalcificados embebidos em glicolmetilmetacrilato (INGRAM et al., 1994).
A presena da osteocalcina j foi demonstrada em linhagens celulares de
osteossarcoma. Em tecido sseo normal, foi detectada em ostecitos, sendo
proporcional ao tamanho dessas clulas: quanto maior a clula, mais intensa a
marcao. A imunorreatividade da osteocalcina tambm foi detectada nas margens
das lacunas sseas e junto ao colgeno lamelar da matriz ssea sob a forma de
depsitos granulares. Em reas de deposio ssea, o material osteide
praticamente no se cora, diferente das trabculas sseas pr-existentes mas j se
observa marcaes de osteocalcina em focos recm-mineralizados. A partir dessas
observaes conclue-se que a deposio da osteocalcina na matriz ssea uma
caracterstica de tecido sseo maduro, metabolicamente inativo (VERMEULEN;
VERMEER; BOSMAN, 1989; INGRAM et al., 1994; PARK et al., 1995; CHEN et al.,
2011; CHEN et al., 2012).
A osteocalcina regulada positivamente pela protena p53, estando este
envolvido na diferenciao dos osteoblastos e remodelamento sseo (CHEN et al.,
2011). Sugere-se ainda o envolvimento do gene Mdm2 e do receptor de vitamina D
que se liga ao elemento VDR no promotor da osteocalcina (CHEN et al., 2012).
O anticorpo monoclonal bovino tipo IgG anti-osteocalcina tem a capacidade
de reconhecer tanto a osteocalcina bovina quanto a humana (VERMEULEN;
VERMEER; BOSMAN, 1989; INGRAM et al., 1994; PARK et al., 1995).
A osteocalcina parece ser exclusiva de osteossarcomas (GRUNDMANN et al.,
1995; CHEN et al., 2011). Observa-se marcao positiva para osteocalcina no
citoplasma dos osteoblastos independente do subtipo de osteossarcoma em
humanos. A marcao tambm observada nas clulas gigantes dos diversos tipos
de osteossarcoma mas no no tumor sseo de clulas gigantes. Condrcitos
normais no se coram para osteocalcina (PARK et al., 1995). Nos osteossarcomas,
o ndice de marcao varia entre 70-80% (sensibilidade), havendo ausncia de
marcao em alguns casos de osteossarcomas de clulas pequenas. ainda

47

relatado que, em osteossarcomas que sofrem rearranjos do gene p53 e perdem a

sua expresso, a expresso de osteocalcina tambm perdida (CHEN et al., 2012).
Tumores que no formam osso (condrossarcoma, lipossarcoma, tumor de clulas
gigantes, carcinomas, linfomas, etc) no reagem com a osteocalcina. Portanto, sua
especificidade para neoplasias formadoras de tecido sseo de 100%, mesmo em
amostras sem evidncias de tecido sseo (FANBURG et al., 1997; HOENERHOFF
et al., 2004; CHEN et al., 2012).

2.4.9.2.2. SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine)

uma glicoprotena fosforilada de 32 kDa e representa aproximadamente um

quarto das protenas no-colgenas do osso (SCHULZ et al., 1988; GRUNDMANN
et al., 1995; PORTER et al., 1995; DELANY et al., 2003; McKNIGHT et al., 2006;
TAI; TANG, 2008). Quando relacionada a membrana basal, denominada BM-40 e
se liga ao colgeno tipo IV (YAN; SAGE, 1999; DELANY et al., 2003; McKNIGHT et
al., 2006; TAI; TANG, 2008). uma protena secretada e uma marcao granular,
perinuclear evidencia sua localizao no complexo de Golgi intracelularmente. H
vrios questionamentos relacionados s suas potenciais funes no citoplasma e no
ncleo (YAN; SAGE, 1999).
uma protena de matriz extracelular codificada por um nico gene e
altamente preservada entre as espcies, havendo mais de 70% de aminocidos
idnticos entre mamferos e aves (PORTER et al., 1995; FANBURG et al., 1997;
YAN; SAGE, 1999; TAI; TANG, 2008; CHLENSKI; COHN, 2010).
Inicialmente apresenta 303 resduos de aminocidos, os primeiros 17 sendo
uma sequncia sinalizadora, posteriormente clivada. A protena humana madura
apresenta 286 resduos de aminocidos divididos em trs domnios distintos e est
localizada no gene 5q31-q33. O domnio I se liga a ons clcio com baixa afinidade e
interage com a hidroxiapatita. Parece estar implicado na mineralizao de cartilagem
e osso e possui os principais eptopos imunolgicos da SPARC. Devido a presena
de cistina, pode formar pontes dissulfeto entre molculas e com outras protenas.
Essa modificao ps-traduo contribuiria para a sua diversidade de funes. O
domnio II rico em cistina e semelhante a folistatina. Possui dois stios de ligao
com o cobre e um deles, a sequncia KGHK (resduos 119-122) estimula a

48

proliferao celular e a angiognese. O domnio III tem estrutura helicoidal e stios

de ligao de alta afinidade com o clcio (YAN; SAGE, 1999; TAI; TANG, 2008;
CHLENSKI; COHN, 2010).
Inicialmente denominada osteonectina, foi primeiramente isolada como o
principal componente no-colgeno do osso. Sua funo e estrutura modulada por
ons clcio e a ligao entre eles aumenta a afinidade pelo colgeno. Sua ligao
com diversos tipos de colgeno (I, II, III, IV, V e VIII) j foi demonstrada e parece
influenciar o remodelamento da matriz extracelular (YAN; SAGE, 1999; McKNIGHT
et al., 2006; TAI; TANG, 2008; CHLENSKI; COHN, 2010).
Porm, sua potente habilidade em retardar a formao dos cristais de
hidroxiapatita sugere seu papel na preveno da mineralizao da matriz ssea.
encontrada em osteoblastos ativos e ostecitos jovens e est envolvida nas
primeiras etapas da mineralizao do tecido sseo, sendo um marcador de
diferenciao de clulas osteognicas normais (YAN; SAGE, 1999; HOENERHOFF
et al., 2004; CHLENSKI; COHN, 2010). Fibroblastos e macrfagos comeam a
expressar SPARC em feridas em cicatrizao, onde esta tambm liberada pela
degranulao plaquetria. Sua expresso tambm aumenta em clula sob stress.
No foi identificada em ostecitos quiescentes nem em clulas inativas da superfcie
endosteal (SCHULZ et al., 1988; YAN; SAGE, 1999; TAI; TANG, 2008; CHLENSKI;
COHN, 2010).
Fisiologicamente,

tem

propriedades

anti-adesivas

promovendo

arredondamento celular, inibindo o espalhamento celular, estimulando a sntese de

enzimas (metaloproteinases) que degradam a membrana basal e o interstcio e
retardando o ciclo celular de diversas clulas em G1. Tal caracterstica pode estar
implicada na invaso tecidual por clulas neoplsicas (PORTER et al., 1995;
FANBURG et al., 1997; YAN; SAGE, 1999; DELANY et al., 2003; HOENERHOFF et
al., 2004; McKNIGHT et al., 2006; TAI; TANG, 2008; CHLENSKI; COHN, 2010).
sabido que sua propriedade anti-adesiva se d em parte pela dissoluo de
complexos focais de adeso e reorganizao das fibras de actina (YAN; SAGE,
1999; TAI; TANG, 2008). Esta ao produz um estado intermedirio de adeso que
favorece a motilidade celular porm mantendo a ligao de integrinas com a matriz
(McKNIGHT et al., 2006).

49

Em relao ao ciclo celular, compe a matriz nuclear na intrfase, forte

marcao imuno-histoqumica detectada na metfase e anfase mas no em
clulas em telfase (YAN; SAGE, 1999).
A SPARC est implicada ainda na formao de novos vasos. Ela capaz de
se ligar a fatores de crescimento como o VEGF (vascular endothelial growth factor
fator de crescimento de endotlio vascular) e PDGF (platelet derived growth factor
fator de crescimento derivado de plaquetas) inibindo a proliferao celular e
modulando a angiognese (YAN; SAGE, 1999; CHLENSKI; COHN, 2010). Isso
relaciona suas funes a processos cicatriciais e ao desenvolvimento de metstases
(PORTER et al., 1995; FANBURG et al., 1997; YAN; SAGE, 1999; HOENERHOFF et
al., 2004; TAI; TANG, 2008).
No considerada especfica para o material osteide produzido por tumores
sseos malgnos como o osteossarcoma uma vez que produzida por diversos tipos
celulares, normais ou neoplsicos. No entanto, a imunorreatividade da SPARC
citoplasmtica e consideravelmente maior em clulas neoplsicas do que em clulas
normais na maioria dos casos (SCHULZ et al., 1988; GRUNDMANN et al., 1995;
PORTER et al., 1995; TAI; TANG, 2008; CHLENSKI; COHN, 2010) como observado
em carcinomas invasivos de mama e clulas de cncer de prstata (McKNIGHT et
al., 2006). Neste ltimo, h regulao positiva com as metstases sseas embora,
no carcinoma de mama, a SPARC no tenha sido identificada como um fator quimioatrativo (McKNIGHT et al., 2006). Tambm j foi observado que clulas neoplsicas
com baixa expresso de SPARC esto relacionadas a fentipos tumorais mais
agressivos (McKNIGHT et al., 2006; TAI; TANG, 2008; CHLENSKI; COHN, 2010).
Seu papel na gnese tumoral parece depender de suas diversas funes num dado
microambiente no sendo absoluta entre os tipos tumorais (CHLENSKI; COHN,
2010).
Assim como os anticorpos bovinos produzidos contra osteocalcina, os
anticorpos bovinos produzidos contra a osteonectina tambm apresentam reao
cruzada entre as protenas bovina e humana. A osteonectina j foi identificada
intracelularmente em osteoblastos ativos normais e em neoplasias formadoras de
tecido sseo mas no em condrossarcomas e neoplasias de tecido mole. A
osteonectina

tambm

foi

identificada

em

osteossarcomas

fibroblsticos

anaplsicos, que apresentam raro material mineral. Tal achado importante pois
demonstra que as clulas formadoras do tumor pertencem a linhagem ssea,

50

aprimorando o diagnstico destes subtipos tumorais (SCHULZ et al., 1988). Nos

osteossarcomas, o ndice de marcao pela osteonectina pode chegar a quase 90%
(sensibilidade),

havendo

ausncia

de

marcao

em

alguns

casos

de

osteossarcomas de clulas pequenas. Em tumores sseos benignos, observa-se

100% de imunorreatividade mas observa-se marcao tambm em tumores
benignos no-formadores de tecido sseo, neoplasias de tecidos moles,
melanomas, carcinomas e linfomas, o que a descarta como marcador celular sseo
especfico, reduzindo sua especificidade em 50%. Quando associada a osteocalcina,
pode auxiliar na identificao da matriz neoplsica ssea em detrimento ao colgeno
denso (FANBURG et al., 1997; HOENERHOFF et al., 2004).
J foi demonstrado em alguns tumores que a SPARC capaz de aumentar a
sensibilidade das clulas aos quimioterpicos ou ainda inibir a taxa de proliferao e
aumentar a de apoptose, conferindo-lhe potencial teraputico embora mais estudos
ainda sejam necessrios (TAI; TANG, 2008; CHLENSKI; COHN, 2010).
2.4.10. A imuno-histoqumica na Oncologia Veterinria
A medicina veterinria inicialmente se beneficiou desse mtodo na distino
acurada de doenas como os diversos tipos de pnfigos e o lupus eritematoso
sistmico. Ainda hoje, a medicina veterinria faz intenso uso da tcnica na deteco
de patgenos de doenas infecto-contagiosas, principalmente nos casos onde o
isolamento clssico do agente em questo difcil, caro ou envolve perodos muito
longos (HAINES; WEST, 2005).
As

aplicaes

da

imuno-histoqumica

na

oncologia

veterinria

so

semelhantes medicina: diagnstico de neoplasias indiferenciadas, determinao

do

imunofentipo

das

clulas

neoplsicas

subtipagem

de

neoplasias,

determinao da origem do tumor primrio e de metstases, avaliao de fator

prognstico e avaliao da terapia instituda e identificao de estruturas, produtos e
organismos produzidos pelas clulas. (HAINES; WEST, 2005; WERNER et al., 2005;
AMORIM, 2009; DE MATOS et al., 2010). Isto se deve a evoluo e sofisticao do
tratamento das neoplasias em animais, o que incentiva a melhor determinao das
caractersticas de uma pupolao tumoral em questo. Tal fato particularmente
verdade nas neoplasias linfides e nos tumores de clulas redondas que ocorrem
como massas na pele dos animais (HAINES; WEST, 2005).

51

O uso frequente da imuno-histoqumica ainda no uma realidade na

medicina veterinria devido ao custo, possibilidade de obteno da pea cirrgica e
principalmente conhecimento acerca destes marcadores nas neoplasias animais
(AMORIM, 2009).

3 OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GERAL

Avaliar neoplasias sseas em ces por meio da histopatologia e da imunohistoqumica associada anlise clnica e radiogrfica, auxiliando na
classificao dos tipos neoplsicos e determinao de subtipos.

3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Descrever os achados clnicos dos ces com neoplasias sseas.

Descrever os achados radiogrficos de caninos com neoplasias sseas.

Identificar e descrever macroscopicamente e microscopicamente os diferentes

processos neoplsicos sseos observados nos caninos analisados.

Avaliar por meio de imuno-histoqumica utilizando marcadores especficos de

linhagem

mesenquimal

(vimentina)

marcadores

sseos

proteicos

(osteocalcina e osteonectina) as neoplasias sseas nos caninos analisados,

visando a diferenciao dos tipos neoplsicos e identificao de subtipos e
variantes tumorais.

53

Relacionar os achados da avaliao clnica, radiogrfica, histopatolgica e

imuno-histoqumica em caninos com neoplasia ssea primria.

4 MATERIAIS E MTODOS

4.1 ANIMAIS

O estudo foi submetido e aprovado pelo Comit de tica no Uso de Animais

(CEUA) da Universidade Federal Fluminense (UFF) sob o nmero 140 (Anexo 9.3).
Foram utilizados vinte e dois ces. Todos os animais apresentavam leso
sugestiva de neoplasia ssea primria radiograficamente detectvel. Foram
utilizados caninos independente de sexo, castrados ou no, raa, com idade acima
de dois anos (adultos) e de porte mdio a gigante.
Os animais eram provenientes do Hospital Universitrio de Medicina
Veterinria Prof Firmino Mrsico Filho e de clnicas e centros diagnsticos privados
da cidade do Rio de Janeiro e de Niteri.

4.2. METODOLOGIA

4.2.1. Avaliao clinica

Todos os pacientes includos neste estudo foram utilizados aps assinatura
de termo de consentimento e esclarecimento pelos responsveis (Anexo 9.1 e 9.2).
Foi analisada a ficha clnica destes animais dando-se nfase aos problemas
ortopdicos prvios concernentes a traumas que resultaram em fraturas, episdios
de claudicao, dificuldade de deambulao, paresia ou paralisia de membros e
possveis doenas infecciosas.

55

Todos os animais foram submetidos ao exame clnico e os sinais relacionados

ao local da leso como aumento de volume, integridade de pele (presena ou no
de fstulas), edema ou atrofia de membro foram registrados. Foi avaliado
subjetivamente a temperatura local da leso.
Em casos de animais que vieram bito, foi considerada a possvel causa
mortis e, naqueles submetidos eutansia, a realizao do procedimento.

4.2.2. Exames Radiogrficos

As imagens radiogrficas foram obtidas a partir do local indicado pelo clnico

como suspeito de leso baseando-se em sinais e sintomas clnicos como aumento
de

volume,

alterao

estrutural

(deformidade)

quando

comparado

contra-

lateralmente e incapacidade de sustentao do peso principalmente em casos de

membros, dor local, indcios de lambedura e alterao de pelagem e pele.
Amostras de leses radiogrficas que aps exame histopatolgico revelaram
no se tratar de neoplasia ssea foram excludas deste estudo.
De cada local suspeito realizaram-se duas incidncias complementares; nos
casos de leses mais extensas foram abrangidas tambm as articulaes proximal e
distal adjacentes e se necessrio, reas mais distais. As tomadas radiogrficas
foram nas posies lateral, crnio-caudal (ou caudo-cranial) e dorso-plantar ou
dorso-palmar se tratando de membros e lateral, oblquas e dorso-ventral ou ventrodorsal em casos do esqueleto axial. Sempre que possvel foram realizadas
incidncias torcicas nas posies lateral e ventro-dorsal para investigao de
metstase pulmonar.
Foram utilizados filmes radiogrficos nos tamanhos compatveis com o porte
do animal alojados em chassis forrados com cran intensificadores de terras raras e
converso verde nos tamanhos correspondentes aos filmes. Utilizou-se tcnica
adequada para cada regio e de acordo com cada aparelho. Os sistemas de
revelao utilizados foram o manual e o automtico, dependendo do local em
questo.

56

4.2.3. Obteno de Amostra

As amostras sseas foram coletadas em animais vivos submetidos

anestesia geral, em cadveres de animais que tiveram morte natural ou que foram
submetidos a eutansia com at seis horas ps-bito e de peas cirrgicas. Sempre
que possvel, foi realizada a necropsia completa para investigao de outras leses
relacionadas ou no leso ssea observada.

4.2.3.1. Bipsias

Os animais submetidos bipsia ssea in vivo foram anestesiados para a

realizao do procedimento, de acordo com o seguinte protocolo: acepromazina
como medicao pr-anestsica (dose 0,1 mg/kg) ou diazepam (dose 0,2 mg/kg),
propofol para induo anestsica (dose 6 mg/kg), e isofluorano em mistura com
oxignio em circuito semi-aberto para manuteno anestsica.
Nestes animais foi utilizada a agulha Jamshidi calibre 11, obtendo-se
espcimes de dois milmetros de largura por comprimentos variando de 0,3 a 2,5 cm.
O nmero de fragmentos obtidos por procedimento variou entre uma a seis amostras
em funo do tamanho da leso e facilidade de obteno das amostras. Em leses
discretas, abrangendo at 3,0 cm de comprimento do osso afetado, obteve-se no
mximo dois espcimes; leses bem desenvolvidas, abrangendo entre 3,0 e 8,0 cm
obteve-se entre dois e quatro espcimes, devendo-se considerar os aspectos
proximal e distal da leso e, leses com mais de 8,0 cm de comprimento, pode-se
coletar at seis amostras das regies proximal, mdia e distal da rea lesionada.
A rea a ser biopsiada foi examinada por meio de projees radiogrficas de
forma a se obter a morfologia e profundidade da leso nos animais acometidos.
Decidido o local da bipsia, o animal era colocado na posio mais vantajosa
para se obter o menor trajeto possvel para a agulha atingir a leso. A trajetria
proposta para a agulha levou em considerao a anatomia subjacente para evitar
estruturas vasculares e neurais principais. Em alguns casos foi possvel contar com
o auxlio da sonda ultrassonogrfica ou radiogrfica. Aps localizar o ponto de
entrada, a regio era tricotomizada e a pele limpa com soluo anti-sptica como
Povidine ou Clorexidine num raio de cinco centmetros partindo do ponto de entrada.

57

Uma pequena inciso (cerca de trs milmetros) foi feita com lmina de bisturi de
Bard-Parker para facilitar a entrada da agulha e evitar contaminao com clulas
epidrmicas. A agulha era introduzida perpendicularmente pele e depois
profundamente a rea da anormalidade com o mandril posicionado.
A entrada na cavidade medular foi comumente detectada como uma queda na
resistncia. O mandril era ento removido e a cnula avanada lenta e
delicadamente com movimentos horrio e anti-horrio. Depois, a agulha era
rotacionada completamente diversas vezes ao longo do seu eixo e lentamente
removida com movimentos de rotao alternada. O espcime obtido era
delicadamente removido com a sonda longa ou o prprio mandril introduzido pelo
orifcio de corte e a amostra foi expelida facilmente pelo orifcio proximal. Em
algumas situaes, a entrada da agulha se deu obliquamente em relao a cortical
ssea, facilitando a aquisio de espcimes de comprimento maior.
Como medicao ps-procedimento foram utilizados cloridrato de tramadol
(dose: 5mg/kg, SID, PO) e cefalexina (dose: 30mg/kg, BID, PO) para controle da dor
e profilaxia antibacteriana.
Os materiais biopsiados foram colocados em soluo de formol a 10% por,
pelo menos, 24 horas visando promover a fixao do mesmo.

4.2.3.2. Peas cirrgicas e necrpsias

Foram recebidas peas cirrgicas contendo tambm os linfonodos satlites.

Em seguida, o osso afetado foi clivado em duas ou trs partes dependendo de seu
tamanho e da extenso da leso e os segmentos acondicionados em formol a 10%
para melhor fixao juntamente com o(s) linfonodo(s) satlite(s).
Nos animais necropsiados realizou-se a inspeo externa e a abertura das
cavidades torcica e abdominal. Num primeiro momento os rgos foram
inspecionados in situ. A retirada destes seguiu o padro tcnico adotado pelo Setor
de Anatomia Patolgica Veterinria da Universidade Federal Fluminense. Os rgos
foram inspecionados individualmente, coletadas amostras de regies significativas
com ou sem leso e estas acondicionadas em formol a 10%. Os principais rgos
avaliados foram: corao, pulmes, linfonodos traqueo-brnquicos, fgado, bao,
rins, estmago, intestinos, pncreas, bexiga e gnadas. Os ossos lesionados e o(s)

58

linfonodo(s) satlite(s) provenientes destes cadveres receberam tratamento

semelhante ao das peas cirrgicas.

4.2.4. Processamento histolgico

Depois de fixadas em soluo de formol a 10%, algumas amostras de bipsia

necessitaram ser transferidas para soluo de formol contendo EDTA a 10% para
descalcificao da poro mineral permitindo assim o corte em micrtomo. O tempo
de descalcificao foi controlado e variou dependendo do tamanho e espessura da
pea em questo. Procedimento semelhante foi realizado nas peas cirrgicas aps
clivagem das reas-alvo. Fragmentos com alta rigidez foram colocados em soluo
de cido ntrico a 5% para acelerao da descalcificao, porm sem danos ao
material.
Aps descalcificao, as peas foram lavadas em gua corrente por pelo
menos duas horas para melhor eliminao das solues descalcificantes e do
formol. Posteriormente foram processadas em seis baterias de lcool sendo imersas
inicialmente em lcool a 80% (duas baterias) e as quatro restantes em lcool
absoluto, permanecendo por pelo menos 40 minutos em cada uma para
desidratao. Na etapa seguinte foram diafanizadas em soluo de xilol em duas
baterias por no mnimo 60 minutos em cada uma e a seguir foram imersas por 90
minutos em parafina a 60C (dois banhos) para posterior emblocamento.
A partir dos blocos, foram realizados cortes de 5 micra de espessura,
dispostos em lmina de vidro e corados pelo mtodo de hematoxilina e eosina (HE).

4.2.5. Processamento imuno-histoqumico

Das amostras processadas, parte dos cortes obtidos foi direcionada a anlise
imuno-histoqumica. Sees de cinco micrmetros de espessura foram dispostas em
lminas cobertas por silano. As seces de tecido foram desparafinizadas em xilol e
re-hidratadas com lcool etlico e tratadas com soluo de perxido de hidrognio a
3% por 30 minutos para bloqueio da peroxidase endgena (fase de inibio I) antes
da recuperao antignica induzida pelo calor (banho-maria a 96-98C, em soluo

59

de recuperao - Target Retrieval Solution 10X concentrated - (DAKO Corporation,

Carpinteria, CA, USA)). Aps a recuperao antignica, as seces foram incubadas
com uma soluo de leite e albumina bovina, para inibio de ligaes inespecficas
(fase de inibio II), seguido por tratamento com os seguintes anticorpos primrios:
anticorpo monoclonal de camundongo anti-vimentina humana DAKO (para
identificao de linhagem mesenquimal), anticorpo monoclonal de camundongo antiosteocalcina humana Abcam e anticorpo policlonal de coelho anti-osteonectina
(SPARC) humana Abcam (para identificao de linhagem osteognica), nas
diluies e tempos especificados pelo fabricante em questo (Quadro 1).
As seces foram lavadas com tampo TBS (tris-buffered saline salina tristamponada), antes do tratamento com seus respectivos sistemas reveladores
temperatura ambiente (anticorpo secundrio fase de revelao). Depois de nova
lavagem com tampo TBS, as seces foram tratadas com soluo de DAB (3,3diaminobenzidina tetrahidroclordrico) (DAKO Corporation, Carpinteria, CA, USA),
cromgeno usado para a marcao castanha das clulas positivas (etapa de
revelao).
Todas as seces foram contra-coradas com hematoxilina. Seces
histolgicas de ossos sadios dos cadveres obtidos foram usados como controles
positivos e para controles negativos, o anticorpo primrio foi omitido.
O protocolo utilizado foi padronizado pelo grupo de pesquisa do Setor de
Anatomia Patolgica da Faculdade de Veterinria da UFF.
Anticorpo
primrio
Vimentina
SPARC
Osteocalcina

Diluio

Inibio I

1:150

30 min

1:1000

1:200

Recuperao
Inibio II

Sistema de revelao

30 min

30 min

LSAB da DAKO.

30 min

30 min

30 min

Envision Anti-rabbit

30 min

45 min

30 min

Envision Anti-mouse

antignica

Quadro 1: Protocolo imuno-histoqumico utilizado para os anticorpos vimentina, osteonectina

(SPARC) e osteocalcina em neoplasias sseas caninas.

4.2.6. Avaliao Histopatolgica e Imuno-Histoqumica

As leses neoplsicas tiveram seu diagnstico firmado seguindo a

Classificao Histolgica dos Tumores sseos e Articulares dos Animais

60

Domsticos, da Organizao Mundial de Sade (SLAYTER et al., 1994) apoiada

pela Classificao dos Tumores sseos, da Organizao Mundial de Sade
(FLETCHER; UNNI; MERTENS, 2002).
Na avaliao imuno-histoqumica, a imunorreatividade foi classificada de
acordo com o percentual de clulas marcadas. Para isso, selecionou-se cinco
campos seguindo o modelo da barra grega e fez-se a contagem diferencial de todas
as clulas de cada campo sob objetiva de 40 vezes. O percentual de clulas
marcadas naquela lmina foi dado pela mdia dos cinco campos contados.
Em relao a intensidade de marcao, independente do percentual de
clulas marcadas, os cortes foram classificados como tendo marcao intensa
(+++), mdia (+) ou fraca(+).
4.2.7. Anlise Estatstica

Para as anlises estatsticas foram utilizadas ferramentas de estatstica

descritiva baseadas em mdia, desvio padro e percentual dos parmetros clnicos,
histolgicos e imuno-histoqumicos considerados, uma vez que tratou-se de um
nico grupo.

5 RESULTADOS

5.1 ANIMAIS

5.1.1 Avaliao clnica

Foram avaliados vinte e dois ces com neoplasias sseas sendo sete machos
(31,8%) e quinze fmeas (68,2%) com idade mdia de 8,59 2,92 anos e peso
mdio de 36,59 11,24 quilos (Tabela 1).

Tabela 1: Distribuio de valores relativos a idade e peso dos 22 ces avaliados.

Parmetros

Mdia

Desvio Padro

Mnimo

Mximo

Idade (anos)

8,59

2,92

18

Peso (quilos)

36,59

11,24

15

58

Dos ces analisados, observou-se a seguinte distribuio racial: seis ces

sem raa definida (SRD) (27,3%), nove Rottweilers (40,9%), alm de Boxer, Husky
Siberiano, Dobermann Pinscher, Bulldog Ingls, Akita, Pastor Alemo e Golden
Retriever com um representante cada (4,5%). Dos seis animais sem raa definida,
quatro deles tinham sabidamente um dos progenitores da raa Labrador, da raa
So Bernardo, da raa Poodle e da raa Rottweiler respectivamente.

62

Todos os ces com leso relacionadas a membro apresentaram claudicao.

Com exceo de dois ces, esta ocorreu sempre associada a aumento de volume
do local afetado (Figura 5A) cuja consistncia variou de firme no caso das
neoplasias mais desenvolvidas a macia por edema ou ambos e dor. Trs animais
apresentaram atrofia muscular cranialmente ao local afetado.
De 18 ces com histrico completo, quatro apresentavam algum grau de
emagrecimento embora nenhum animal apresentasse caquexia nestes casos, a
maioria dos animais tinha um ms ou mais de progresso da leso.
Somente um animal apresentou dispnia no momento da realizao da
bipsia.

5.1.2 Exame radiogrfico

Todos os animais apresentavam algum tipo de leso ssea radiogrfica
sugestiva de neoplasia ssea primria.
Dois ces (9,1%) apresentaram leso em esqueleto axial enquanto os demais
(90,9%) apresentaram em esqueleto apendicular.
Os achados radiogrficos tiveram como localizao os seguintes ossos:
mero, fmur, rdio, tbia, lio, escpula e mandbula. O mero seguido do rdio
foram os locais mais acometidos, com sete e cinco animais respectivamente. (Figura
1).
Figura 1: Frequencia de distribuio das leses sugestivas de neoplasia ssea
primria ao exame radiogrfico dos ces avaliados (n=22).

5%

5%

5%
31%
14%

mero
Fmur
Rdio
Tbia
lio
Escpula
Mandbula

22%

18%

63

Das leses em membros, treze (65%) foram em membros torcicos (Figura

5A) e sete (35%) em membros plvicos.
Dos 22 animais avaliados, obteve-se imagem radiogrfica torcica de onze e
em nenhuma das imagens houve indcio de doena metasttica.
As imagens radiogrficas nas quais se basearam os diagnsticos de
neoplasias apresentaram processos esclerticos e lticos associados. Em seis, lise e
esclerose

apresentaram-se

igualmente

distribudas

(Figura

2E);

em

onze

predominou a lise (Figura 2A e 2D) e em quatro a esclerose (Figura 2B e 2C).

Nos ossos longos, no esqueleto apendicular, as metfises foram as reas
mais atingidas, havendo algumas vezes extenso da leso para a epfise e/ou tero
diafisrio.

64

Figura 2: Radiografias. A: Caso n. 20, canino, fibrossarcoma: radiografia simples, lateral oblqua esquerda,
mandbula: lise e perda de opacidade ssea em corpo mandibular esquerdo na altura do segundo pr-molar
(seta). B: Caso n. 6, canino, osteossarcoma: radiografia simples, latero-lateral, membro plvico esquerdo:
proliferao ssea acentuada em metfise e difise proximal de fmur esquerdo. C: Caso n. 13, canino,
osteossarcoma: radiografia simples, mdio-lateral, membro torcico direito: proliferao ssea discreta em
difise mdia e distal e metfise distal radial direita. D: Caso n. 14, canino, fmea, osteossarcoma: radiografia
simples, mdio-lateral, membro torcico direito: lise ssea em metfise proximal de mero direito, alterando o
padro trabecular. E: Caso n. 10, canino, osteossarcoma: radiografia simples, mdio-lateral, membro torcico
direito: reas de lise e proliferao ssea com destruio de cortical em metfise proximal de mero direito.

65

5.1.3 Avaliao Anatomo-Histopatolgica

Das amostras obtidas, seis foram coletadas com a agulha Jamshidi (27,3%),
nove de peas cirrgicas de amputao (40,9%) e cinco por meio de necropsia
(22,7%). Em dois animais, sendo um da raa Golden Retriever e um da raa Boxer,
a amostra foi obtida por bipsia incisional (9,1%).
As amostras avaliadas a partir de peas cirrgicas ou de necrpsia no
apresentaram heterogeneicidade tumoral significativa exceto com relao s reas
de necrose, cujo percentual nas amostras foi varivel, de acordo com o fragmento
clivado.
O Quadro 2 resume os locais biopsiados e o resultado anatomohistopatolgico.

66

N animal Sexo

Idade

Raa

8 anos

Rottweiler

3 anos

SRD

10 anos

SRD

8 anos

Rottweiler

6 anos

18 anos

6 anos

9 anos

9 anos

10

7 anos

11

7 anos

12

12 anos

13

8 anos

14

8 anos

15

7 anos

16

11 anos

17

7 anos

18

12 anos

19

9 anos

20

9 anos

Bulldog
Ingls
Pastor
Alemo
Husky
Siberiano

Local Biopsiado
Metfise distal de fmur
direito
Metfise distal de rdio
direito
Metfise proximal de tbia
direita
Metfise proximal de
mero direito
Asa ilaca direita

Metfise proximal de fmur

esquerdo
Metfise proximal de tbia
direita
Metfise distal de tbia
SRD
esquerda
Metfise distal de fmur
Dobermann
direito
Metfise proximal de
Rottweiler
mero direito
Metfise proximal de
SRD
mero esquerdo
Metfise proximal de
Rottweiler
mero direito
Metfise distal de rdio
Rottweiler
direito
Metfise proximal de
Rottweiler
mero direito
Metfise proximal de fmur
Boxer
esquerdo
Metfise distal de rdio
Rottweiler
esquerdo
Metfise proximal de
SRD
mero direito
Metfise distal de rdio
SRD
direito
Golden
Escpula
Retriever
Rottweiler

Mandbula esquerda

Resultado AnatomoHistopatolgico
Osteossarcoma osteoblstico
produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
minimamente produtivo
Condrossarcoma
Osteossarcoma osteoblstico
produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
minimamente produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
produtivo
Condrossarcoma
Osteossarcoma osteoblstico
produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
minimamente produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
minimamente produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
minimamente produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
produtivo
Osteossarcoma osteoblstico
minimamente produtivo
Hemangiossarcoma
Fibrossarcoma

Metfise proximal de
Osteossarcoma osteoblstico
mero direito
produtivo
Metfise distal de rdio
Osteossarcoma osteoblstico
22
M
8 anos
Akita
esquerdo
produtivo
Quadro 2: Avaliao das neoplasias sseas nos ces analisados segundo sexo, idade, raa,
21

7 anos

Rottweiler

local biopsiado e resultado histopatolgico (n=22).

67

Todos os casos avaliados tiveram diagnstico estabelecido sendo 18

osteossarcomas (81,8%), dois condrossarcomas (9,1%), um fibrossarcoma e um
hemangiossarcoma (4,5%) (Figura 3).
As mdias de idade dos ces com osteossarcoma foi 8,61 3,16 anos e a
mdia de peso foi de 37,28 11,0 quilos. Dos 18 ces diagnosticados com
osteossarcoma, oito (44,4%) eram da raa Rottweiler, sendo cinco fmeas (62,5%).
Ambos os condrossarcomas, diagnosticados em um co SRD e em uma
cadela da raa Husky Siberiano, tiveram localizao apendicular.
O nico fibrossarcoma teve localizao em esqueleto axial, na mandbula de
uma cadela da raa Rottweiler e o nico hemangiossarcoma acometeu a escpula
de um co da raa Golden Retriever.
Figura 3: Frequencia de distribuio dos tipos histolgicos diagnosticados em ces
avaliados com neoplasia ssea (n=22).

4,5%

4,5%

9,1%

Osteossarcoma
Condrossarcoma
Hemangiossarcoma
Fibrossarcoma

81,8%

As peas de osteossarcomas apresentaram consistncia firme ao corte, de

colorao amarelo-palha,

com notvel proliferao de

tecido

mineralizado

perifericamente a difise e reas de necrose de tamanhos variados (Figuras 5C e

5D). Em trs casos (n 1, 9 e 15) observou-se fratura patolgica do osso afetado,
sendo o fmur em todos os casos. Os casos de osteossarcoma osteoblstico
minimamente produtivo apresentaram mnima quantidade de material mineralizado,
localizado primariamente na cavidade medular, e uma extensa rea de necrose
associada.

68

Na anlise microscpica, os dezoito osteossarcomas foram classificados de

acordo com SLAYTER et al. (1994). O nico subtipo encontrado foi o osteoblstico.
Observou-se desde clulas mesenquimais anaplsicas com escasso material
eosinoflico filiforme entremeando-as at franca produo de material osteide
mineralizado e desorganizado. Os primeiros foram classificados como minimamente
produtivo e os outros produtivos (Figura 6A e 6B). No caso n 9, observou-se
mitoses atpicas em diversos campos.
A pea de condrossarcoma (caso n 7) apresentou macroscopicamente
consistncia amolecida, sendo possvel o corte com faca do componente extrasseo que circundava a difise tibial. Ao corte, este era esbranquiado e brilhante
com uma pequena rea de necrose . Na microscopia observou-se diversas ilhas de
cartilagem composta por condrcitos de moderado pleomorfismo, algumas com
centros de ossificao, e uma delgada matriz extracelular entre elas (Figura 6C).
A pea de fibrossarcoma (caso n 20) apresentou superfcie externa
multinodular castanho-pardacenta, de consistncia firme ao corte e superfcie de
corte compacta ora brancacenta, ora acinzentada ou acastanhada. A microscopia
revelou clulas alongadas, fusiformes, com pleomorfimo acentuado, na maior parte
das vezes dispostas ora em feixes, ora entrelaadas. Notou-se anisocariose,
cromatina dispersa, nucleolao evidente e figuras de mitose tpicas e atpicas
(Figura 6D).
O fragmento de hemangiossarcoma apresentava superfcie externa de
tonalidade ora enegrecida, ora amarelada ou pardacenta. A consistncia ao corte
era de macia frivel com superfcie de corte compacta. microscopia, havia
proliferao de clulas fusiformes com pleomorfismo celular discreto a moderado;
ncleo ovide

fusiforme e hipercromtico. As clulas estavam organizadas

formando vasos sanguneos irregulares e de diferentes tamanhos, contendo no seu

interior hemcias.
Em cinco animais com suspeita de osteossarcoma (casos n 1, 4, 6, 8 e 11),
aps autorizao dos proprietrios, realizou-se a necropsia completa com o objetivo
de identificar outras leses relacionadas ou no a leso ssea avaliada.
Observaram-se leses metastticas em pulmo (100% dos casos) (Figura 5B), rim
(60% dos casos), fgado e pleura (40% dos casos), bao e corao (20% dos casos)
(Figura 4). Em todos os casos, macroscopicamente as leses eram arredondadas,
com tamanhos variando de 0,2 cm a 3,0 cm de dimetro, sendo a menor leso

69

encontrada na pleura parietal e a maior no bao, de aspecto amarelado e

consistncia ptrea, inseridas em meio ao tecido normal, conforme observado em
musculatura atrial esquerda. Na microscopia tica, em todas elas observou-se focos
de notvel produo de material osteide mineralizado e desorganizado entremeado
por clulas neoplsicas em meio ao tecido normal.
Figura 4: Frequncia de rgos acometidos por metstase nos animais portadores
de osteossarcoma avaliados por meio de necropsia.
5
4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
Pulmo

Rim

Fgado

Pleura
Parietal

Bao

Corao

70

pl

*
p

*
C

*
D

Figura 5: Fotomacrografia. A: Caso n 2, canino, osteossarcoma: membro plvico direito: aumento de volume
em regio distal de membro torcico direito (regio crpica) com vasculatura evidente e colorao avermelhada.
B: Caso n 8, canino, osteossarcoma, necropsia: cavidade torcica revelando lquido sanguinolento e corao
(asterisco), pulmes (p) e pleura (pl) com focos metastticos. C: Caso n 10, canino, osteossarcoma: pea
cirrgica, membro torcico direito (corte transversal): formao tumoral envolvendo difise umeral (asterisco)
com extensa rea de componente extra-sseo proliferativo e necrose (arco). D: Caso n 8, canino,
osteossarcoma: pea cirrgica, membro plvico esquerdo (corte transversal): formao tumoral envolvendo
difise umeral (asterisco) com extensa rea de componente extra-sseo proliferativo e atrofia de musculatura
(seta).

71

Figura 6: Fotomicrografia Hematoxilina e Eosina. A: Caso n. 10, canino, osteossarcoma osteoblstico

produtivo: pea cirrgica, membro torcico direito: material osteide mineralizado formando trabculas
desorganizadas entremeadas por clulas neoplsicas. B: Caso n. 10, canino, osteossarcoma osteoblstico
produtivo: pea cirrgica, membro torcico direito: trabculas desorganizadas entremeadas por clulas
neoplsicas, revelando anisocitose e nuclolos evidentes C: Caso n. 7, canino, condrossarcoma: pea cirrgica,
membro plvico esquerdo: ilhas de cartilagem neoplsica com tecido conjuntivo ao redor. Observa-se processo
de ossificao central da ilha. D: Caso n 20, canino, fibrossarcoma: pea cirrgica, mandbula esquerda: clulas
fusiformes dispostas em feixe, com moderado pleomorfismo e nucleolao evidente. (A-F HE; A,C 40x
original; barra: 200 m; B,D 400x original; barra: 50 m)

72

5.1.5 Avaliao Imuno-Histoqumica

As trs protenas avaliadas por meio da imuno-histoqumica nas clulas
neoplsicas apresentaram localizao citoplasmtica, de colorao amarronzada
(Figuras 7A e 7B), embora tenha-se observado marcao perinuclear intensa em
diversas amostras com marcao anti-vimentina e anti-SPARC e em poucos casos
uma aparente marcao nuclear anti-vimentina. Na marcao imuno-histoqumica
contra todas as trs protenas foi possvel verificar nos osteossarcomas,
fibrossarcoma e hemangiossarcoma prolongamentos citoplasmticos marcados. No
se observou tal fato nos condrossarcomas, que eram constitudos basicamente de
clulas arredondadas (Figuras 7B e 7F).
Em todas as neoplasias sseas caninas analisadas, tanto na avaliao da
vimentina quanto da osteocalcina, a marcao foi uniforme (Figuras 7A e 8D),
enquanto que na avaliao de SPARC, observou-se uma marcao granulada
(Figura 8B).
No foi observado marcao em estroma ou matriz osteide em nenhuma
amostra das neoplasias sseas caninas para qualquer um dos anticorpos.
Foram observadas diferenas de intensidade de marcao entre as amostras
das neoplasias sseas caninas analisadas, para todos os anticorpos (Figuras 7A e
7B). Em muitos casos, dentro de uma mesma amostra, algumas reas da neoplasia
ssea tiveram intensa marcao enquanto que em outras, isso no foi observado.
Essa observao foi mais frequente nas amostras marcadas pelos anticorpos antivimentina.
Em algumas neoplasias que apresentavam clulas em mitoses atpicas
(Figura 7F), a intensidade de marcao anti-vimentina nessas clulas era menos
evidente que nas demais clulas adjacentes.
A avaliao anti-osteocalcina foi realizada somente nos casos de neoplasias
sseas n 1, 2, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 20, 21 e 22.
A Tabela 2 demonstra o percentual mdio de marcao de cada um dos
anticorpos utilizados, sua variao e valores mnimo e mximo nas neoplasias
sseas caninas analisadas. O percentual de marcao para osteocalcina inclui
somente os osteossarcomas marcados (10 amostras).

73

Tabela 2: Distribuio de valores relativos ao percentual de marcao para

vimentina, SPARC e osteocalcina nos gupos de ces avaliados.

Parmetros

Mdia (%)

Desvio Padro

Mnimo

Mximo

Vimentina

21

87,93

11,77

64,65

100

SPARC

22

98,03

3,37

84,60

100

Osteocalcina*

10

99,91

0,18

99,44

100

n: nmero de animais.

*:somente osteossarcomas.

Em todos os tipos neoplsicos avaliados, a marcao das clulas avaliados

foi semelhante, no havendo caractersticas especficas relativas a algum tipo
tumoral. No entanto, foi possvel observar uma intensa (+++) marcao de vasos
sanguneos em duas amostras de osteossarcoma osteoblstico sendo um produtivo
e um minimamente produtivo, um condrossarcoma e um fibrossarcoma, avaliados
com anticorpos anti-vimentina mas no com anti-SPARC e anti-osteocalcina.
Foi possvel observar que, em trs casos de osteossarcoma osteoblstico
produtivo, a marcao com anticorpo anti-vimentina apresentou-se mais discreta
(++) quando comparado aos demais, inclusive aos casos de osteossarcoma
minimamente produtivos. Em dois desses casos de osteossarcoma osteoblstico
produtivo, observou-se baixo percentual de marcao positiva com anticorpo antivimentina (65%). Alm desses dois casos, com um dos mais baixos percentuais de
positividade para vimentina, h somente um caso de osteossarcoma osteoblstico
minimamente positivo com percentual semelhante.
Somente em um osteossarcoma osteoblstico produtivo no se observou
marcao para vimentina (caso n 10).
Em todas as amostras de neoplasias sseas caninas foi observado marcao
do anticorpo anti-SPARC. Neste caso, a marcao se apresentou menos intensa
(++) quando comparado com a marcao do anticorpo anti-vimentina porm com
maior uniformidade entre as amostras de neoplasias sseas caninas, no sendo
frequentes a visualizao de reas marcadas e no marcadas dentro de uma
mesma amostra. Os percentuais de positividade de marcao do anticorpo antiSPARC foram altos sendo o mais baixo deles, 85%, pertencente a um
osteossarcoma osteoblstico produtivo.
Na marcao do anticorpo anti-osteocalcina, foram avaliados 14 casos e
destes, somente em 10 observou-se marcao positiva. Dos quatro casos onde no

74

se observou marcao (-), teve-se dois osteossarcomas osteoblsticos minimamente

produtivos, um osteossarcoma osteoblstico produtivo e um fibrossarcoma (Figura
8F). Destes, somente o osteossarcoma osteoblstico produtivo no apresentava
padro radiogrfico ltico. Observou-se que, na marcao anti-osteocalcina, a
colorao amarronzada apresentou-se consideravelmente mais fraca (+) quando
comparada com a marcao anti-SPARC e ainda mais em relao a anti-vimentina.
No foi possvel observar marcao positiva do anticorpo anti-osteocalcina nas
lacunas sseas porm em dois osteossarcomas osteoblsticos produtivos,
observou-se marcao pouco mais intensa nos osteoblastos aprisionados nas
lacunas sseas.
Foi possvel observar a relao entre a avaliao imuno-histoqumica e os
achados histopatolgicos. Em alguns casos, os achados de marcao de anticorpo
anti-osteocalcina justificam o diagnstico histopatolgico assim como os achados
radiogrficos onde observa-se lise ssea, como ocorreu no fibrossarcoma e em
alguns osteossarcoma osteoblstico minimamente produtivo.

75

*
C

Figura 7: Fotomicrografias Marcao imuno-histoqumica anti-vimentina. A: Caso n. 18, canino, osteossarcoma

osteoblstico minimamente produtivo: pea cirrgica, membro torcico direito: intensa marcao citoplasmtica (+++)
em osteoblastos malignos. B: Caso n. 8, canino, osteossarcoma osteoblstico produtivo: pea de necropsia, membro
plvico esquerdo: moderada marcao citoplasmtica (+++) em osteoblastos malignos. C, D e E: Caso n 7, canino,
condrossarcoma: pea cirrgica, membro plvico esquerdo: (C) condrcitos malignos marcados (asterisco) (+++) em
transio para formao de cartilagem madura (jogo da velha); (D) marcao de condrcitos em cartilagem madura
(+++); (E) marcao em nicho cartilaginoso e em vasculatura perifrica intensa (+++). F: Caso n. 9, canino,
osteossarcoma osteoblstico minimamente produtivo: pea cirrgica, membro plvico direito: osteoblasto maligno em
diviso celular atpica (detalhe). Observa-se marcao exclusivamente citoplasmtica e de menor intensidade nas
demais (++) clulas. (A,B,C,D,F 400x original; barra: 50 m; E 40x original; barra: 200 m. Contra-colorao:
hematoxilina de Meyer)

76

Figura 8: Fotomicrografias Marcao imuno-histoqumica anti-SPARC e anti-osteocalcina. A: Caso n. 18,

canino, osteossarcoma osteoblstico minimamente produtivo: pea cirrgica, membro torcico direito: marcao
discreta (+) anti-SPARC citoplasmtica em osteoblastos malignos. B: Caso n 20, canino, fibrossarcoma: pea cirrgica,
mandbula esquerda: marcao acentuada (++) anti-SPARC citoplasmtica em clulas fusiformes. C: Caso n 7, canino,
condrossarcoma: pea cirrgica, membro plvico esquerdo: marcao discreta (+) anti-SPARC em condrcitos
malignos. D: Caso n. 4, canino, osteossarcoma osteoblstico produtivo: pea de necropsia, membro torcico direito:
moderada marcao (++) anti-osteocalcina citoplasmtica em osteoblastos malignos. Observa-se clula gigante central.
E: Caso n 7, canino, condrossarcoma: pea cirrgica, membro plvico esquerdo: marcao discreta (+) antiosteocalcina em condrcitos malignos. F: Caso n 20, canino, fibrossarcoma: pea cirrgica, mandbula esquerda:
ausncia de marcao (-) anti-osteocalcina em clulas fusiformes. (A-F 400x original; barra: 50 m. Contra-colorao:
hematoxilina de Meyer)

6 DISCUSSO

Com relao s neoplasias sseas, na literatura consultada no se tem

relatos quanto a predileo por sexo que possa explicar o nmero duas vezes maior
de fmeas em relao aos machos na presente casustica. No entanto, com relao
ao osteossarcoma, Dernell et al. (2007) relatam que os machos so pouco mais
afetados que as fmeas com exceo das raas Rottweiler, So Bernardo e Dog
Alemo.

Dos

condrossarcoma

sete

machos

(caso

avaliados,

3)

enquanto

somente

um

os

restantes

seis

deles

apresentava
apresentavam

osteossarcoma (casos n 5, 12, 13, 15, 21 e 22). Em contraste, no grupo de fmeas,

dos quinze animais avaliados, somente trs apresentaram diagnstico diferente de
osteossarcoma,

sendo

um

fibrossarcoma,

um

hemangiossarcoma

um

condrossarcoma. Tal observao vai contra os autores previamente citados mas ao

encontro dos achados de Amaral (2008), que relatou um maior nmero de fmeas
do que machos acometidas por leses sseas neoplsicas ou no. Todos os autores
supracitados relatam ser o osteossarcoma a neoplasia ssea primria mais
frequente.
Dos doze casos de osteossarcoma em fmeas, observa-se que cinco delas
eram da raa Rottweiler, uma da raa Pastor Alemo, uma da raa Dobermann e
cinco no tinham raa definida. Destes casos, dois animais apresentavam
progenitores sabidamente das raas Labrador, Rottweiler e So Bernardo
respectivamente, todas raas de grande porte. Estes dados vo ao encontro dos
relatos de Dernell et al. (2007) e Amaral (2008) em que as fmeas da raa Rottweiler
so mais acometidas pelo osteossarcoma do que os machos, fato semelhante
ocorrendo com a raa So Bernardo. Nesta raa, Dernell et al (2007) admitem que a

78

predisposio para desenvolvimento de osteossarcoma pode ter um componente

hereditrio.

Recentemente, Thomas et al. (2009) relataram a presena de

desequilbrios genmicos graves em ces da raa Rottweiler que esto implicados

no desenvolvimento do osteossarcoma nessa raa, independente de sexo ou idade.
Tal achado justifica o elevado nmero de animais acometidos dessa raa na
amostra e presume que o elevado nmero de fmeas da raa Rottweiler acometidas
esteja relacionado a aleatoriedade da amostra, que apresenta quase o dobro de
fmeas em relao aos machos, e no a uma tendncia.
Os animais sem raa definida no formam maioria entre os animais avaliados,
estando a raa Rottweiler em primeiro lugar, com nove exemplares enquanto os
SRD somam seis animais. Alm destes dois casos, teve-se ces das raas Husky
Siberiano, Dobermann Pinschers, Boxer, Bulldog Ingls, Pastor Alemo e Golden
Retriever com um representante cada. As raas Rottweiler, Pastor Alemo e
Dobermann

Pinscher

so

largamente

citadas

como

predispostas

ao

desenvolvimento de osteossarcoma (DALECK et al., 2006; DERNELL et al., 2007;

AMARAL, 2008; THOMAS et al., 2009; KEALY; MCALLISTER, 2012) ao contrrio do
Bulldog e do Husky Siberiano, no comumente citados. Os caninos Husky Siberiano,
Boxer e Golden Retriever podem ser includos na lista de animais predispostos, j
que, segundo Ru, Terracini e Glickman (1998), o aumento do peso e principalmente
da altura predispem o aparecimento do tumor principalmente em membros.
A mdia de idade dos animais avaliados foi de 8,59 2,92 anos. A mdia de
idade dos ces com osteossarcoma bastante semelhante, 8,61 3,16 anos, pouco
acima da mdia descrita na literatura. Thompson e Pool (2002), Donato et al. (2005),
Daleck et al. (2006), Dernell et al. (2007) e Amaral (2008) relatam ser o
osteossarcoma mais freqente em ces de meia idade a idosos com pico aos sete
anos. A mdia de peso dos animais acometidos por leses sseas neoplsicas
primrias foi 36,59 11,24 quilos e osteossarcoma foi 37,28 11,0 quilos
respectivamente, sendo este o peso de raas consideradas de grande porte, o que
concorda com as observaes de Thompson e Pool (2002), Donato et al. (2005),
Daleck et al. (2006), Dernell et al. (2007), Amaral (2008) e Kealy e Mcallister (2012).
Considerando que a grande maioria das leses ocorreu em esqueleto
apendicular (90,9%), de se esperar que a claudicao seja o sinal clnico
predominante, o que tambm citado por Erdem e Pead (2000), Lucroy; Peck e
Berry (2001), Mehl et al. (2001), Thompson e Pool (2002), Donato et al. (2005),

79

Hidaka et al. (2006), Dernell et al. (2007) e Amaral (2008). Dois ces apresentaram
leso em ossos do esqueleto axial sendo um caso de osteossarcoma em asa ilaca
direita e um caso de fibrossarcoma em corpo mandibular esquerdo. O canino
portador da leso neoplsica na asa ilaca apresentou claudicao, esta
possivelmente devido a extenso do tumor para a musculatura da coxa, interferindo
com a movimentao do membro. Foi possvel observar ao corte, nos planos
superficiais, extensa necrose da musculatura adjacente a asa ilaca afetada que
corrobora tal afirmao. J a cadela com fibrossarcoma mandibular apresentou
aumento de volume local e discreto comprometimento da apreenso de alimentos.
Todos os ces com neoplasia ssea primria manifestaram dor. Tal fato
esperado uma vez que no crescimento neoplsico ocorre no s a elevao do
peristeo (KEALY; MCALLISTER, 2012) como muitas vezes h ruptura da cortical
ssea e necrose causando dor extrema.
O aumento de volume regional foi observado em quase todos os ces
portadores de neoplasia ssea podendo ser devido a proliferao de tecido sseo
associado a

algum grau de edema inflamatrio ou ainda por interferncia na

drenagem venosa principalmente no caso de membros, conforme descrito por

Erdem e Pead (2000), Lucroy; Peck e Berry (2001), Mehl et al. (2001), Donato et al.
(2005), Hidaka et al. (2006), Dernell et al. (2007), Amaral (2008) e Kealy e Mcallister
(2012). Somente uma cadela da raa Rottweiler portadora de osteossarcoma (caso
n 14) no apresentou aumento de volume local uma vez que as alteraes sseas
eram bem iniciais, no havendo grande proliferao ssea nem componente extrasseo notvel.
O emagrecimento foi observado em apenas quatro ces. Sabe-se que a
perda de peso pode ser devido a sndrome paraneoplsica (DERNELL et al., 2007)
ou ainda, derivada de anorexia por dor intensa. Todos os ces nessa situao
apresentaram tempo de leso acima de 45 dias, o que pode justificar este achado.
Embora trauma seja amplamente associado as neoplasias sseas (DERNELL
et al., 2007; KEALY; MCALLISTER, 2012) nenhum animal com neoplasia ssea
apresentou histrico prvio.
Somente em uma cadela com neoplasia ssea houve relato de dispnia no
momento da coleta de material em funo do tempo decorrido da neoplasia, cerca
de trs meses, ter sido suficiente para o desenvolvimento de leses metastticas
observadas necropsia em pleura parietal e parnquima pulmonar pois no havia

80

imagem radiogrfica do mesmo. Dos outros quatro animais, o tempo decorrido

desde a observao da leso radiogrfica sugestiva de neoplasia ssea at a
necropsia foi semelhante e havia leses metastticas nos pulmes de tamanhos
similares, porm em nmero consideravelmente menor, o que pode no ter
interferido tanto na capacidade respiratria destes at o momento da necropsia.
Em todas as neoplasias em esqueleto apendicular, a metfise foi o local mais
acometido, concordando com os achados de Thompson e Pool (2002), Dernell et al.
(2007), Amaral (2008), Thrall (2010) e Kealy e Mcallister (2012). O elevado
percentual de pacientes portadores de osteossarcoma apendicular assim como a
alta frequncia de acometimento de mero e rdio concordam com os trabalhos de
Thompson e Pool (2002), Dernell et al. (2007), Amaral (2008), Thrall (2010) e Kealy
e Mcallister (2012).
Os dois casos de condrossarcoma localizaram-se em metfise proximal de
tbia (Quadro 1) discordando de Thompson e Pool (2002) que citam ter como
localizao predominante os ossos chatos. Entretanto, estes mesmos autores
afirmam que a imagem radiogrfica nos casos apendiculares predominantemente
ltica, de baixa radiodensidade, com pouca ou nenhuma reao periosteal,
compatvel com as imagens observadas nestes casos.
Todas as neoplasias sseas foram leses nicas, o que est de acordo com o
descrito por Thompson e Pool (2002), Dernell et al. (2007) e Amaral (2008) que
relatam serem as leses de osteossarcomas monostticas na grande maioria dos
casos.
Os membros torcicos foram mais afetados que os plvicos, inclusive
considerando-se somente os osteossarcomas apendiculares, concordando com os
relatos de Thompson e Pool (2002) e Dernell et al. (2007) que afirmaram ser os
membros torcicos duas vezes mais afetados que os plvicos. No entanto, tal
achado contrrio ao relatado por Amaral (2008) que encontrou maior nmero de
leses neoplsicas e no-neoplsicas em membros plvicos do que em membros
torcicos em 20 ces avaliados.
Dos 22 animais portadores de neoplasia ssea, onze realizaram radiografia
de trax no momento da descoberta da leso ssea, no havendo imagem sugestiva
de metstase em nenhum caso. Apesar de no se observar radiograficamente
indcios de metstase, em dois animais (casos n 1 e 12) observou-se ndulos tanto
na macro como na microscopia. Alm deste, outros trs animais (casos n 4,6 e 8)

81

que no tiveram o trax radiografado apresentavam ndulos metastticos em

pulmo necropsia e contrariamente a descrio de Kealy e McAllister (2012),
apresentavam dimenses pequenas, da ordem de milmetros enquanto as
metstases em bala de canho, da ordem de centmetros, so consideradas
diretamente relacionadas com osteossarcoma. Recentemente, Eberle et al. (2011)
observaram

que

deteco

de

metstases

pulmonares

em

ces

com

osteossarcoma apendicular significativamente maior quando examinada atravs

da tomografia computadorizada em comparao com radiografias, comprovado
atravs da avaliao macroscpica. Tal observao refora o fato de a grande
maioria dos ces terem desenvolvido doena metasttica pulmonar embora esta no
tivesse sido detectada no momento do diagnstico sseo. Provavelmente, as leses
j estavam presentes no parnquima pulmonar embora no tivessem tamanho
suficiente para imprimir imagem no filme radiogrfico. sabido que a tomografia
computadorizada uma tcnica mais acurada que a radiografia. Apesar disso,
Waters et al. (1998) afirmam que leses pulmonares abaixo de 1 mm de dimetro
no so detectadas pela tomografia helicoidal.
Segundo Amaral (2008), Thrall (2010) e Kealy e McAllister (2012), as leses
neoplsicas apresentam heterogeneicidade, ora com predomnio ltico ora
esclertico.

Das

leses

radiogrficas

consideradas

mistas,

cinco

foram

diagnosticadas como osteossarcomas sendo quatro osteossarcomas osteoblsticos

produtivos e um osteossarcomas osteoblsticos minimamente produtivos. Um
condrossarcoma apresentou padro misto. Naquelas com predomnio esclertico,
quatro eram osteossarcoma osteoblstico produtivo. Leses com predomnio ltico
incluram um condrossarcoma, o hemangiossarcoma, o fibrossarcoma e nove
osteossarcomas sendo quatro subclassificado como osteoblstico produtivo e cinco
como no produtivo. Segundo Thompson e Pool (2002), o padro misto no est
associado ao osteossarcoma osteoblstico minimamente produtivo, diferente ao
observado no presente trabalho.
interessante ressaltar que todos os quatro osteossarcomas com padro
radiogrfico esclertico foram subclassificados como osteoblsticos produtivos. Isto
esperado uma vez que a produo de material osteide franca, o que gera uma
imagem radiogrfica de produo ssea. J os subtipos minimamente produtivos
apresentaram somente padro radiogrfico misto ou ltico.

82

De forma semelhante, era de se esperar que o fibrossarcoma (Figura 2A) e o

hemangiossarcoma apresentassem padro radiogrfico ltico uma vez que so
neoplasias que no produzem material osteide ou osso e so caracterizadas pela
substituio do tecido sseo sadio pelas clulas neoplsicas fibroblsticas e
vasculares (SLAYTER et al., 1994; FLETCHER; UNNI; MERTENS, 2002;
THOMPSON; POOL, 2002).
Trs osteossarcomas apresentaram fratura patolgica associada a imagem
radiogrfica sendo dois deles com padro radiogrfico ltico e um misto. Este fato
esperado uma vez que nestes dois padres, observa-se perda de integridade de
cortical ssea levando ao enfraquecimento e consequente fratura do osso (KEALY;
MCALLISTER, 2012). Nenhuma das neoplasias classificadas radiograficamente
como esclertica, onde h aumento da proliferao ssea, apresentaram fratura
patolgica, o que pode estar relacionado ao aumento da ddensidade ssea local.
Em cinco neoplasias observou-se a formao de componente extra-sseo,
isto , uma proliferao tumoral que se expande para fora do limite do osso (AHRAR
et al., 2004). O componente extra-sseo foi observado em quatro osteossarcomas e
no fibrossarcoma, em todos os trs padres radiogrficos.
As metfises foram as reas atingidas na maioria dos casos, excetuando-se
as leses da escpula e do esqueleto axial. Algumas leses muitas vezes se
estenderam para a epfise e o tero diafisrio distal e mdio. Tal achado vai ao
encontro aos relatos de Thompson e Pool (2002), Dernell et al. (2007), Amaral
(2008), Thrall (2010) e Kealy e McAllister (2012).
Todas as formas de coleta forneceram material diagnstico, semelhante ao
descrito por Amaral (2008).
Vale ressaltar que, ao contrrio do que acontece em pacientes humanos, a
anestesia geral sempre recomendada no apenas para conteno do paciente
veterinrio durante o procedimento, mas principalmente pelo conforto e analgesia
segundo orientao do Colgio Brasileiro de Experimentao Animal (COBEA).
Assim sendo, em medicina veterinria, seja na bipsia fechada ou na aberta, a
obrigatoriedade do emprego da anestesia geral pode ser considerada uma
desvantagem devido aos riscos anestsicos e aumento do custo de realizao do
exame, diferente do que ocorre em medicina conforme citado por Logan et al.
(1996), Pramesh et al. (2001) e Jelinek et al. (2002).

83

A maioria dos trabalhos consultados relata ser o pulmo o local mais atingido
por metstases, semelhante aos achados deste estudo, onde o pulmo foi o rgo
mais atingido por metstases, presentes em 100% dos casos avaliados na
necropsia. No entanto, com relao aos demais rgos, no h dados de frequncia
relatados (DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008; KEALY; MCALLISTER, 2012).
A ocorrncia de metstase principalmente nos casos de osteossarcoma um
importante fator a ser considerado. Nenhum co apresentou leso pulmonar
radiograficamente visvel no momento do diagnstico radiogrfico da leso ssea,
porm quatro animais biopsiados e sem a pea para comparao evoluiram para
quadros graves de metstase pulmonar alguns meses aps o diagnstico sseo.
Isso refora a importncia do acompanhamento clnico em casos onde a bipsia foi
inconclusiva ou no foi capaz de identificar o exato tipo tumoral.
Todas

as

marcaes

encontradas

para

os

trs

anticorpos

foram

citoplasmticas, o que concorda com avaliaes semelhantes em Medicina

(VERMEULEN; VERMEER; BOSMAN, 1989; INGRAM et al., 1994; PARK et al.,
1995; YAN; SAGE, 1999; SATELLI; LI, 2011).
Em relao aos achados de marcao anti-vimentina, segundo Minin e
Moldaver (2008), a formao da rede de filamentos intermedirios comea prxima
ao ncleo e j foi demonstrado que filamentos de vimentina podem se mover no
citoplasma em direo ao ncleo ou a membrana plasmtica. Ainda, j foi
demonstrado a presena da protena no ncleo. Isso concorda com o observado na
leitura de praticamente todas as lminas de vimentina, onde havia marcao
perinuclear notvel e eventualmente nuclear mesmo que neste ltimo caso, ainda
no se saiba exatamente a funo dela (SATELLI; LI, 2011).
Observou-se diferena na intensidade de marcao anti-vimentina entre as
lminas avaliadas. Tal achado apresenta algumas possibilidades de ocorrncia. A
primeira delas seria a diferena quantitativa na expresso de vimentina entre os
tipos celulares avaliados. Sabe-se que a vimentina superexpressa em diversos
tipos celulares tumorais e est diretamente implicada na transformao epitelialmesenquimal (LI et al, 2010; MENDEZ; KOJIMA; GOLDMAN, 2010; PAN et al.,
2010; SATELLI; LI, 2011). As neoplasias avaliadas foram todas de origem
mesenquimal. Assim sendo, possvel que, durante a carcinognese, o gene da
vimentina sofra alteraes que levem a uma superexpresso da mesma. Observouse diferenas de intensidade de marcao e at mesmo ausncia desta dentro de

84

uma mesma amostra. Em muitos casos no se observou marcao anti-vimentina

em reas que continham clulas neoplsicas. A ausncia de marcao dentro de um
mesmo corte pode ser explicada pela maior ou menor expresso da protena entre
as diferentes clulas.
Seria esperado tambm que clulas anaplsicas apresentassem menor
intensidade de marcao pela protena indicando perda de semelhana com a clula
original, entretanto isso no foi observado. Algumas neoplasias mais bem
diferenciadas, com produo marcante de matriz osteide tiveram menor
intensidade de marcao anti-vimentina assim como o percentual de positividade.
Esse foi o caso de dois osteossarcomas osteoblsticos produtivos. A produo de
osteide caracterstica dos osteoblastos e nos osteossarcomas osteoblsticos
produtivos, ela se mantm, o que indica uma proximidade maior com as funes
originais da clula quando comparado com os minimamente produtivos (CHEN et al.,
2011). Assim sendo, possvel que, nos osteossarcomas caninos, o aumento da
expresso de vimentina esteja relacionado a fentipos tumorais mais agressivos,
mais anaplsicos e menos semelhantes s clulas originais, e portanto a menor
expresso de vimentina nestas neoplasias pode ser justificada como algo positivo
em termos de prognstico.
A segunda possibilidade para uma reduo na intensidade de marcao seria
a interferncia dos processos de fixao e descalcificao que alguns cortes
sofreram principalmente em se tratando de regies mais internas do corte onde a
fixao pode no ser to eficiente ou demorar mais a acontecer (DE MATOS et al.,
2010; LEONG; COOPER; LEONG, 2010). Apesar disso, houve cortes do mesmo
animal, fixados e descalcificados da mesma forma que tiveram intensidade de
marcao diferente, no justificando a interferncia desses fatores, pelo menos no
neste caso. Entretanto, possvel que a no marcao do anticorpo anti-vimentina
observada no caso n 10 esteja relacionada a estes fatores.
Nos casos de mitoses atpicas, a marcao do anticorpo anti-vimentina foi
mais suave em vrias lminas. Duas explicaes so possveis. A primeira que
durante a mitose, a relao ncleo:citoplasma se altera e com isso, a poro
citoplasmtica tornaria-se menos visvel microscopia, da

a marcao menos

evidente. Outra possibilidade que, durante a mitose das clulas neoplsicas, a

expresso de vimentina seja reduzida em detrimento a outros tipos de protenas de
citoesqueleto mais necessrias ao evento com por exemplo, os microtbulos.

85

Autores relacionam a superexpresso da vimentina com a motilidade e a

invaso celular e consequentemente sua implicao nas metstases (LI et al, 2010;
MENDEZ; KOJIMA; GOLDMAN, 2010; SCHOUMACHER et al., 2010; SATELLI; LI,
2011). Essa relao pode ser verdadeira tambm nas neoplasias caninas,
especialmente os osteossarcomas. Nestas neoplasias, o percentual de pacientes
que apresentam metstases pulmonares radiograficamente detectveis no momento
do diagnstico baixo, no entanto, a maioria deles vem a bito ou so eutanasiados
devido a elas (THOMPSON; POOL, 2002, LOUKOPOULOS; THORNTON;
ROBINSON, 2003; DONATO et al., 2005; DERNELL et al., 2007; AMARAL, 2008;
KIRPENSTEIJN et al, 2008; BHANDAL; BOSTON, 2011; EBERLE et al., 2011).
No presente estudo e em estudos anteriores (AMARAL, 2008), observou-se a
presena de micrometstases pulmonares em um pequeno nmero de pacientes
portadores de osteossarcoma e eutanasiados em intervalo menor que um ms aps
o diagnstico da leso apendicular. Essa observao suporta a idia de que a
disseminao tumoral ocorre logo nos primrios estgios da doena, mesmo quando
a leso ssea ainda discreta e no h sinais pulmonares, semelhante ao
observado por Barger et. al (2005) que relata um percentual de aproximadamente
90% de ces acometidos por micrometstases no momento do diagnstico.
possvel que a vimentina, estando superexpressa nessas clulas, impulsione a
capacidade que elas tem de motilidade e invaso. Caso essa capacidade consiga
ser demonstrada nos osteossarcoma caninos, a utilizao de drogas anti-vimentina
poderiam alterar e auxiliar consideravelmente o prognstico dessas neoplasias em
ces.
Outra observao importante a identificao de clulas endoteliais
marcadas com anticorpo anti-vimentina. Sabe-se que estas clulas normalmente
expressam vimentina (MININ; MOLDAVER, 2008; SATELLI; LI, 2011). Neste caso,
essa marcao pode ser importante na avaliao da vasculatura tumoral. O aumento
da vasculatura pode estar diretamente implicado na possibilidade de disseminao
metasttica por via hematgena. Vasculatura evidente foi observada em quatro
casos, sendo dois osteossarcomas, um condrossarcoma e um fibrossarcoma. Com
exceo do canino portador do fibrossarcoma, sobre o qual no se tem essa
informao, os outros trs animais desenvolveram metstases. Sabe-se que as
neoplasias malignas tem a capacidade de induzir a neoangiognese no apenas
para suprimento da massa tumoral mas tambm para disseminao (THOMPSON;

86

POOL, 2002; DERNELL et al., 2007). importante ressaltar que a visualizao dos
vasos se deu em peas de necropsia e amputao e que sua identificao pode no
ser possvel em amostras de bipsia devido ao tamanho das mesmas. A utilizao
de anticorpos anti-vimentina para identificao de neoplasias mesenquiais pode
tambm fornecer informao a respeito da vasculatura tumoral como funo
adicional.
Todas as amostras apresentaram marcao positiva para o anticorpo antiSPARC de aparncia granular, conforme previamente descrito (YAN; SAGE, 1999).
A SPARC encontrada em osteoblastos ativos e ostecitos jovens normais (YAN;
SAGE, 1999; HOENERHOFF et al., 2004; CHLENSKI; COHN, 2010) e sua
expresso maior em clulas neoplsicas na maioria dos casos, apesar de no ser
exclusiva dos osteossarcomas (SCHULZ et al., 1988; GRUNDMANN et al., 1995;
PORTER et al., 1995; TAI; TANG, 2008; CHLENSKI; COHN, 2010), o que concorda
com os resultados aqui observados.
O percentual de positividade encontrado nas neoplasias avaliadas foi
semelhante aos relatos de literatura mdica, principalmente em relao ao
osteossarcoma (FANBURG et al., 1997; HOENERHOFF et al., 2004), confirmando
sua alta sensibilidade.
O envolvimento da SPARC em eventos celulares como inibio do
espalhamento celular, estmulo a sntese de metaloproteinases que degradam
membrana basal e neoangiognese (PORTER et al., 1995; FANBURG et al., 1997;
YAN; SAGE, 1999; DELANY et al., 2003; HOENERHOFF et al., 2004; McKNIGHT et
al., 2006; TAI; TANG, 2008; CHLENSKI; COHN, 2010) a correlacionam com a
invaso tecidual por culas neoplsicas, ou seja, as metstases. Com isso, a
imunorreatividade positiva desta protena em neoplasias sseas caninas pode ter
implicao prognstica negativa, semelhante ao observado em humanos.
Apesar de presente em todas as amostras, a marcao anti-SPARC se
apresentou menos intensa quando comparado com a marcao anti-vimentina
porm com maior uniformidade entre as amostras, no sendo frequentes a
observao de reas marcadas e no marcadas dentro de uma mesma amostra. Os
percentuais de positividade foram altos sendo o mais baixo deles, quase 85%,
pertencente a um osteossarcoma osteoblstico produtivo.
No foi possvel identificar a razo da fraca marcao do anticorpo antiosteocalcina. Alguns autores relatam que, o processo de osmificao aps a

87

revelao produz uma cor marrom enegrecido mais marcante e efeito semelhante
pode ser atingido aps tratamento com sulfato de nquel ou cloreto de cobalto
(LEONG; COOPER; LEONG, 2010). provvel que tal procedimento produzisse
uma melhor marcao pelos anticorpos anti-osteocalcina e aprimorasse a
observao.
Os percentuais de positividade do anticorpo anti-osteocalcina nas amostras
positivas foi extremamente alto entretanto, a marcao no ocorreu em todas as
amostras avaliadas. Isso pode estar relacionado aos processos de descalcificao,
uma vez que a fixao tem pouca influncia sobre a imunorreatividade da
osteocalcina (VERMEULEN; VERMEER; BOSMAN, 1989; INGRAM et al., 1994;
PULLIG et al., 2000). Outra possibilidade para a fraca marcao ou ausncia desta
pode estar relacionada a prpria expresso da protena nos osteossarcomas, que
relatada como sendo baixa naqueles que se originam de osteoblastos (CHEN et al.,
2012). Entretanto, destes casos, a ausncia de marcao no fibrossarcoma era
esperada uma vez que esta neoplasia no se caracteriza pela produo desta
protena,

sendo

muitas

vezes

considerada

exclusiva

dos

osteossarcomas

(GRUNDMANN et al., 1995; FANBURG et al., 1997; HOENERHOFF et al., 2004). A

identificao dessa protena pode ser importante na diferenciao entre o
fibrossarcoma e o osteossarcoma fibroblstico uma vez que, apesar da semelhana
histopatolgica, principalmente em amostras de bipsia, somente o segundo produz
a osteocalcina (GRUNDMANN et al., 1995; FANBURG et al., 1997; HOENERHOFF
et al., 2004).
Outra colocao importante que, das trs amostras de osteossarcoma que
no apresentaram marcao positiva, duas eram do tipo osteoblstico minimamente
produtivo, coerente com o padro radiogrfico ltico. Estas amostras so
caracterizadas pela mnima produo de material ostede e no apresentam lacunas
mineralizadas. Sendo a osteocalcina uma protena sintetizada conforme a
mineralizao ocorre (PARK et al., 1995, CHEN et al., 2011; CHEN et al., 2012),
seria esperado que este subtipo tumoral no apresentasse marcao para
osteocalcina. No entanto, sua especificidade para neoplasias formadoras de tecido
sseo citada como de 100%, mesmo em amostras sem evidncias de tecido sseo
(FANBURG et al., 1997; HOENERHOFF et al., 2004) o que traz uma oposio
interessante.

88

O percentual de positividade encontrado (99,9%) nos osteossarcomas

caninos foi acima dos observados em osteossarcomas humanos cuja a ausncia de
marcao nestes casos seja devido a osteossarcomas de clulas pequenas
(VERMEULEN; VERMEER; BOSMAN, 1989; PARK et al., 1995; FANBURG et al.,
1997), um subtipo raramente encontrado em osteossarcomas caninos. No presente
estudo, a ausncia de marcao foi observada em osteossarcomas osteoblsticos,
semelhante ao citado por Chen et al. (2012).
Sabe-se que agentes descalcificadores como o EDTA podem reduzir
consideravelmente

percentual

de

imunorreatividade

da

osteocalcina

(VERMEULEN; VERMEER; BOSMAN, 1989) porm, este no foi usado nos casos
onde no foi detectada marcao. .
Mesmo sendo passvel de deteco nas lacunas sseas (VERMEULEN;
VERMEER; BOSMAN, 1989; PARK et al., 1995), no se observou marcao positiva
para o anticorpo anti-osteocalcina nas lacunas sseas das amostras avaliadas.
Porm, observou-se marcao pouco mais intensa nos osteoblastos aprisionados
nas lacunas sseas, em dois osteossarcomas osteoblsticos produtivos. Tal
observao pode estar relacionada ao processo de mineralizao e deposio de
hidroxiapatita nestes locais.
Condrcitos normais no apresentam marcao para osteocalcina (PARK et
al., 1995) assim como condrcitos neoplsicos (FANBURG et al., 1997;
HOENERHOFF et al., 2004). Ainda assim, observou-se marcao positiva no
condrossarcoma avaliado (caso n 7). O mesmo apresentava alguns nichos com
centros de ossificao, o que pode justificar a presena desta protena.

7 CONCLUSO

As fmeas caninas foram mais afetadas por neoplasias sseas que os

machos.

A raa Rottweiler apresentou o maior nmero de ces acometidos por

neoplasias sseas.

Os animais acometidos por neoplasias sseas primrias apresentaram faixa

de idade acima de sete anos e foram de porte grande a gigante.

A claudicao associada a dor e o aumento de volume foram os sinais

clnicos mais freqentemente observados em caninos com leso ssea
apendicular.

A maioria das neoplasias sseas ocorreu em esqueleto apendicular e os

ossos com maior freqncia de leso foram mero e rdio, sendo a regio
metafisria a mais acometida.

A maioria das leses sseas foram monostticas.

O padro radiogrfico mais frequente nas neoplasias sseas primrias foi o

misto.

Dos animais com neoplasia ssea primria que realizaram radiografia torcica
no momento do diagnstico da leso ssea, nenhum deles apresentou
imagem metasttica, caracterizando o mtodo como inadequado para
identificao precoce de metstases.

O osteossarcoma foi a neoplasia ssea mais frequentemente encontrada,

seguida do condrossarcoma.

A maioria dos animais desenvolveu metstases pulmonares posteriormente,

sendo este o principal motivo da indicao da eutansia.

90

A imunorreatividade da vimentina, SPARC e osteocalcina nas neoplasias

sseas caninas foi alta, semelhante ao observado em neoplasias sseas
humanas.

A marcao positiva dos anticorpos anti-vimentina e anti-SPARC pode ter

implicao prognstica nas neoplasias sseas caninas, sendo o prognstico
desfavorvel em casos de imunorreatividade alta e vice-versa.

A identificao da osteocalcina auxilia no diagnstico definitivo.

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9 ANEXOS

100

9.1 Autorizao para posse de cadver canino.

AUTORIZAO

Eu,

______________________________________________________,

identidade n ________________________, expedida por _______________,

CPF _______________________, residindo em ________________________
_______________________________________________________________,
telefone _______________, proprietrio do animal ______________________, da
espcie _____________________, da raa _____________________, pelagem
________________________,

porte

____________________,

idade

________________ e sexo __________________, autorizo a mdica veterinria

Camila Barbosa Amaral (CRMV-RJ 7661) a obter a posse do CORPO do animal
acima citado para experimentao cientfica de sua inteira responsabilidade e
utilizao em aula prtica, nada podendo contestar a respeito posteriormente.

Rio de Janeiro,

_________________________________________
Assinatura do Proprietrio

101

9.2 Autorizao para realizao de procedimento em canino.

AUTORIZAO

Eu,

______________________________________________________,

identidade n ________________________, expedida por _______________,

CPF _______________________, residindo em ________________________
_______________________________________________________________,
telefone _______________, proprietrio do animal ______________________, da
espcie _____________________, da raa _____________________, pelagem
________________________,

porte

____________________,

idade

________________ e sexo __________________, autorizo a mdica veterinria

Camila

Barbosa

Amaral

(CRMV-RJ

7661)

realizar

procedimento

_______________________________________________________________
do animal acima citado, tendo sido esclarecido dos riscos anestsicos e do
procedimento, nada podendo contestar a respeito posteriormente.

Rio de Janeiro,

_________________________________________
Assinatura do Proprietrio

102

9.3 Certificado do Comit de tica no Uso de Animais da UFF.