Você está na página 1de 9

1

EFEITOS DA ADMINISTRAO DE ISOFLAVONAS SOBRE O METABOLISMO DE RATAS


OVARIECTOMIZADAS.
1

Prof. Dr. Carlos Alexandre Habitante


Coordenador do Curso de Educao Fsica UNIDERP Universidade para o Desenvolvimento do
Estado e da Regio do Pantanal. Rua Alexandre Herculano, 1400 Parque dos Poderes. CEP: 79037280. Telefone: (067) 3318 3000. Cidade: Campo Grande, MS, Brasil. Endereo para
Correspondncia: habitante355@gmail.com
Ana Berenis Blan de Menezes - Acadmica do curso de nutrio UNIDERP Universidade para o
Desenvolvimento do Estado e da Regio do Pantanal.
Neire Alves de Lima Acadmica do curso de nutrio UNIDERP Universidade para o
Desenvolvimento do Estado e da Regio do Pantanal

RESUMO
Objetivo
O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos da dieta suplementada com isoflavonas sobre o
metabolismo de ratas ovariectomizadas.
Mtodos
Foram utilizadas 27 ratas adultas, com 3 meses de idade, pesando aproximadamente 200 gramas e foram
divididas em 3 grupos: Grupo Controle (GC) - Ratas pseudo-ovariectomizadas que receberam dieta
padro; Grupo Dieta Padro (GDP) - Ratas ovariectomizadas que receberam dieta padro; Grupo Dieta
Isoflavona (GDI) - Ratas ovariectomizadas que receberam dieta padro suplementada com Isoflavona
de Soja e todos os grupos receberam gua ad libitum. Os animais foram sacrificados em jejum, por
decapto, colhidos os rgos, tecidos e soro para dosagens bioqumicas.
Resultados
Foram analisados peso dos tecidos adiposos brancos, fgado e rim, a evoluo do peso corporal e as
concentraes sricas de colesterol total, HDL-colesterol, triglicerdeos e glicose.
Os resultados demonstraram que a administrao de isoflavonas em ratas ovariectomizadas reduziu o
ganho de peso, o peso dos tecidos adiposos e as concentraes de colesterol e triglicerdeos
desencadeadas pela cirurgia, alm de aumentar a concentrao de HDL colesterol.
Concluso
A administrao de isoflavonas em ratas ovariectomizadas reduziu o ganho de peso, o peso dos tecidos
adiposos e as concentraes de colesterol e triglicerdeos desencadeadas pela cirurgia, alm de aumentar
a concentrao de HDL colesterol. H controvrsias quanto a dose ideal de isoflavonas para
administrao segura.
Palavras-chave: Isoflavonas; metabolismo lipdico; glicemia; ratas ovariectomizadas.
Introduo
A menopausa caracterizada pela suspenso irreversvel da funo ovariana, com o declnio da
secreo estrognica8 . Apresenta mudanas neuropsicolgicas, no perfil lipdico, em particular, aumento
das lipoprotenas de baixa densidade (c-LDL) e reduo das lipoprotenas de alta densidade (c-HDL)7.

Nessa fase, h alteraes fisiolgicas e clnicas decorrentes do hipoestrogenismo, como: fogachos,


sudoreses, nervosismo, irritabilidade, insnia, cefalia, vertigem, depresso, labilidade emocional,
diminuio da capacidade de memorizao, parestesia, formigamento, palpitaes, mialgias, altralgias,
atrofia urogenital e diminuio da libido 9,11 . As alteraes lipdicas so responsveis pelos eventos
cardiovasculares, principalmente, pela doena coronariana, uma das principais causas de morte em
mulheres na ps- menopausa.
A deficincia estrognica uma das causas mais comuns de hipercolesterolemia e hiperglicemia
(BHATHENA21 ) em mulheres na ps- menopausa
. A terapia de reposio estrognica diminui o risco de enfermidades cardiovascular por fatores,
como melhora no perfil lipdico atravs da reduo dos nveis circulantes de c-LDL, aumento na
concentrao plasmtica de c-HDL e diminuio do colesterol total8, 18, 19 .
Os pesquisadores tm grande interesse na farmacologia e fisiologia das isoflavonas, pois se
comportam como estrgenos na maioria dos sistemas biolgicos. Em adio sua atividade antiestrognica, funciona como regulador hormonal quando h excesso de estrgenos e possui propriedades
biolgicas tais como: antioxidantes, inibidores de atividades enzimticas como colagenase e elastase 32 .
Uma das opes alternativas aos estrgenos tem sido as isoflavonas genericamente conhecidas
como fitoestrgenos. Sua molcula tem uma estrutura semelhante ao 17--estradiol e capaz de atuar
sobre os receptores estrognicos simulando algumas das propriedades dos hormnios femininos,
incluindo os efeitos protetores cardiovasculares e sobre o perfil lipdico 6,10. Um estudo realizado pela
Universidade Federal de So Paulo, com 80 mulheres na menopausa que receberam 100mg/dia de
fitoestrgenos de soja, apresentou significativa diminuio nos nveis de colesterol sangneo 16 . Um
mecanismo proposto a atuao sobre os receptores de estrognios simulando algumas das propriedades
dos hormnios femininos.
A dieta rica em soja parece tambm ser benfica para o sistema cardiovascular, pelo efeito
favorvel sobre o perfil lipdico3, 4. Alguns estudos demonstram elevao do HDL em cerca de 10% dos
casos5, 6.
Em estudos experimentais, a induo da reduo de estrgenos pode ser observada em ratas
submetidas a ovariectomia bilateral que constituem um modelo animal para o estudo das alteraes psmenopusicas como as mudanas do perfil lipdico 6, 10, 12, 20.
Diante do exposto, este trabalho teve por objetivo investigar os efeitos da dieta suplementada
com isoflavonas sobre o metabolismo de ratas ovariectomizadas.

MTODOS
Foram utilizadas vinte e sete Ratas Wistar adultas, virgens pesando aproximadamente 20015
gramas e trs meses idade no incio do experimento, provenientes do Biotrio Central da Universidade
para o Desenvolvimento do Estado e Regio do Pantanal- UNIDERP e mantidos no Biotrio da
UNIDERP, num regime de luz (12 horas claro e 12 horas escuro) e temperatura controlada (25 2C).
Os animais foram distribudos aleatoriamente em trs grupos contendo nove ratas em cada
grupo, conforme esquema experimental abaixo descrito:
Grupo Controle (GC) - Ratas pseudo-ovariectomizadas que receberam dieta comercial padro
(nuvilab) e gua ad libitum.
Grupo Dieta Padro (GDP) - Ratas ovariectomizadas que receberam dieta comercial padro
(nuvilab) e gua ad libitum

Grupo Dieta Isoflavona (GDI) - Ratas ovariectomizadas que receberam dieta comercial padro
(nuvilab) suplementada com Isoflavona de Soja e gua ad libitum.
Os animais dos grupos GDP e GDI foram submetidos ovariectomia sendo anestesiados via
intraperitoneal com soluo de cloridrato de xilazina (20 mg/Kg) e ketamina (100mg/Kg). Foram
realizadas duas incises bilaterais paralelas ultima costela, para a exposio e retirada dos ovrios. Na
regio do corte dos ovrios foi realizada cauterizao para preveno de hemorragias. Os animais do
grupo controle(GC) foram submetidos aos mesmos procedimentos cirrgicos dos grupo dieta
padro(GDP) e grupo dieta isoflavonas (GDI) no entanto, no foram retirados os ovrios.
No ps-operatrio, todos os animais receberam a mesma quantidade de gua e rao. No Grupo
GDI foi acrescentado dieta padro isoflavo nas isoladas da soja, na proporo de 1.66 mg/kg/dia
durante onze semanas aps o procedimento cirrgico. Os grupos GC e GDP receberam dieta padro.
Durante todo o processo experimental a evoluo do peso corporal de todas as ratas foi registrada uma
vez por semana, sempre nos mesmos dias e horrios.
Na dcima primeira semana ps-operatro, os animais foram sacrificados por decapitao, em
jejum, entre 10:00 e 12:00 horas da manh. Imediatamente aps a decapitao, foram retirados e
pesados os tecidos adiposos brancos parametrial (PAR) e retroperitoneal (RET), fgado e rins.
Para a anlise das concentraes de metablitos e hormnios, os animais foram mantidos em
jejum das 22:00h s 10:00h. O sangue foi coletado imediatamente aps o sacrifcio, atravs de um funil
diretamente no tubo de ensaio, foi centrifugado e o soro utilizado para determinao das concentraes
de triglicerdeos, colesterol, HDL-colesterol e glicose atravs de kits colorimtricos enzimticos
(Labtest Diagnstica S.A).
Os resultados foram expressos como mdia das variveis. Para anlise estatstica foi utilizada a
anlise de varincia de trs vias Anova three way para a comparao dos efeitos da ovariectomia e do
tratamento com isoflavonas. Para a comparao entre as mdias dos resultados obtidos foi aplicado o
teste de comparaes mltiplas de Duncan, utilizando como nvel de significncia (p 0,05).

RESULTADOS E DISCUSSO
figura 1 Evoluo semanal do peso corporal (g) de ratas controle (GC),
ovariectomizadas dieta isoflavona, e (GDI), ovariectomizadas dieta padro (GDP)
300
290
285
280
270

284

244

245

243

228

229

229

278

274

270

268

268

289

284

260
255
250
242

240
230

242

220

238
230

228

227

224

221

221

217

214

210

241

233

232

229

243

239

200
1

GC

GDI

8
GDP

10

11

Este estudo procurou mimetizar o perodo feminino conhecido como menopausa, caracterizada
principalmente pela reduo de estrgenos, que pode, segundo.(Zarrow12 ) Ser observada em ratas
submetidas a ovariectomia bilateral, constituindo modelo animal para o estudo das alteraes psmenopusicas como as mudanas do perfil lipdico 12.
A FIGURA I apresenta os dados relativos evoluo do peso corporal entre os grupos estudados.
Podemos observar que no houve diferenas significativas entre o grupo controle (GC) e o grupo
ovariectomizado tratado com isoflavonas de soja (GDI), que apresentaram ganho percentual de 7,11% e
6,11%, respectivamente. Por outro lado, o grupo ovariectomizado tratado com dieta padro (GDP)
apresentou um ganho percentual de peso corporal de 19,42%. Aps a menopausa, comum entre
mulheres o ganho de peso corporal devido aos efeitos da reduo de estrgenos no metabolismo
energtico. A manuteno do peso corporal resultante da ingesto de isoflavonas demonstra o papel
inibitrio destas substncias nas vias lipognicas, assim como suas atividades semelhantes aos
estrgenos10, 22.
figura 2 - Peso relativo (g/100g de peso corporal) do rim e tecido adiposo retroperitoneal (RET) de ratas
controle (GC), ovariectomizadas dieta padro (GDP) e ovariectomizadas dieta isoflavona (GDI).
+

1,40

1,23

1,20
1,00

0,83

0,95

GC

0,80

GDP
GDI

0,60
0,29

0,29

0,28

0,40
0,20
0,00
RIM

RET

+ p0.05 comparando-se GC a GDP


* p0.05 comparando-se GDP a GDI

figura 3 - Peso relativo (g/100g de peso corporal) do fgado (FIG) e tecido adiposo parametrial (PAR)
de ratas controle (GC), ovariectomizadas dieta padro (GDP) e ovariectomizadas dieta isoflavona
(GDI).
2,97
2,85

3,00
2,62

2,80
2,60
2,40

1,99

2,20

GC

1,96

GDP
2,00

GDI

1,80
1,42

1,60
1,40
1,20
FIG

PAR

+ p0.05 comparando-se GC a GDP


p0.05 comparando-se GDP a GDI

Podemos observar nas figuras 2 e 3 que no houve diferenas estatisticamente significantes no peso do
fgado e rim em nenhum dos grupos estudados. Tal resultado importante para a manuteno da
homeostase dos animais, uma vez que estes dois tecidos regulam a concentrao de um grande nmero
de agentes metabolicamente ativos, como enzimas, hormnios e nutrientes 23, 24. Ainda em relao a
figuras 2 nota-se um aumento significante estatisticamente no peso do RET dos animais do GDP em
relao aos animais do GC. Estes resultados so compatveis com a literatura, que demonstra um maior
acmulo de gordura em mulheres a partir da menopausa 25 , investigando a prevalncia de obesidade e
fatores de risco associados em 1035 indivduos, na faixa etria entre 20 e 69 anos, residentes em Pelotas,
RS, verificaram que esta prevalncia aumenta consideravelmente com a idade, sendo cerca de quatro
vezes mais elevada aps os 40 anos, em relao ao grupo entre 20 e 29 anos, e duas vezes superior nas
mulheres, em relao aos homens, a partir da quarta dcada de vida.
Tal adaptao no foi observada no GDI, onde o valore do tecido adiposo branco retroperitoneal
foi igual e o parametrial menor que o GC. Isto sugere uma inibio das vias lipognicas e da captao de
lipdios da dieta por estes tecidos acarretadas pelas isoflavonas, atuando como estrgenos. Neste sentido
(VANDER DER SCHOUW, et. al.27 ), avaliaram a evidncia dos benefcios e riscos cardiovasculares
associados aos fitoestrgenos que desempenham atividade similar ao estrognio. Para (MAKELA et.
al.,199826 ).alguns desses compostos (isoflavonas) so agentes estrognicos por si, podendo atuar como
estrgeno endgeno.
figura 4 - Concentrao srica (mg/dl) de glicose e colesterol total de ratas controle (GC),
ovariectomizadas dieta padro (GDP) e ovariectomizadas dieta isoflavona (GDI).
100
95,64

95

+
91,28

91,61
88,7

90
GC
80,14

85

GDP
GDI

80

75,38

75

70
GLICEMIA

COLESTEROL

+ p0.05 comparando-se GC a GDP


*p0.05 comparando-se GDP a GDI

figura 5 - Concentrao srica (mg/dl) de HDL-Colesterol (HDL) e Triglicerdeos (TG) de ratas


controle (GC), ovariectomizadas dieta padro (GDP) e ovariectomizadas dieta isoflavona (GDI).

6
+
87,88
90
85

* 76,65

75,47

80
75
70

GC

59,4
65
60

GDP

GDI

55
46,38
50

45,9

45
40
HDL

TG

+ p0.05 comparando-se GC a GDP


*p0.05 comparando-se GDP a GDI

Em relao glicemia, no foram observadas alteraes significantes em nenhum dos grupos


estudados, embora nota-se uma tendncia um aumento no GDP em relao ao GC e diminuio do
GDI em relao ao GC. Neste sentido, sabe-se que a reduo dos estrgenos provoca hiperglicemia no
perodo ps- menopausa21 . Por outro lado, a ingesto de isoflavonas da soja pode ser uma alternativa na
preveno do diabetes, principalmente o do tipo 2, por sugerir aumento a sensibilidade insulina28 . No
que diz respeito ao perfil lipdico, foi demonstrado em nosso estudo aumento significante no colesterol
total e nos triglicerdeos dos animais GDP em relao ao controle. Segundo a literatura, durante o
perodo ps- menopausa, as mulheres apresentam mudanas neuropsicolgicas, no perfil lipdico, em
particular, aumento das lipoprotenas de baixa densidade (c-LDL), colesterol e triglicerdeos
plasmticos, alm de reduo das lipoprotenas de alta densidade (c-HDL)7, 2 .
Este aumento no perfil lipdico no foi observado no grupo suplementado com isoflavonas,
demonstrando mais uma vez seu efeito protetor contra dislipidemias. Segundo (WONG, et. al.7 ), as
isoflavonas no s desempenham um papel importante na regulao de lipdios sanguneos, reduzindo
LDL e colesterol e aumentando o HDL, mas tambm protegem contra o desenvolvimento de placas de
ateroma.
Os entercitos e as clulas hepticas sintetizam as lipoprotenas de alta densidade (HDL),
responsveis pelo transporte reverso do colesterol. A enzima lecitina colesterol acil-transferase capta o
colesterol depositado nos vasos sanguneos e tecidos perifricos, e a protena de transferncia do ster de
colesterol (CEPT) transfere o colesterol da HDL para a LDL para que seja transportado e metabolizado
no fgado29 .
Na figura 5, observa-se aumento significante no HDL colesterol do grupo tratado com
isoflavonas em relao aos demais animais estudados. Esta uma importante modificao no
metabolismo lipdico, j que esta frao lipdica caracteriza-se como importante doadora de
apoprotenas para os quilomcrons e VLDL. Alm disso, o HDL retira o colesterol sintetizado nos
tecidos perifricos, levando-o de volta para ser excretado no fgado, atravs de um processo catalisado
pela enzima lecitina colesterol acil transferase 30 . Assim, atuando no transporte reverso do colesterol, o
HDL exerce efeito protetor contra a aterosclerose, estocando temporariamente lipdios, colesterol e
apoprotenas31.
O aumento no HDL colesterol e preservao dos triglicerdeos em funo do tratamento com
isoflavonas sugere que este pode ser um mecanismo de diminuio do colesterol observado no mesmo
grupo. As isoflavonas e seus derivados: daidzena, genistena e glicetena atuam sobre os receptores -

estrognios presentes no fgado. Como conseqncia melhora o perfil lipdico, o que favorece o
catabolismo de colesterol. A estimulao desses receptores proporciona a inibio da lipase heptica,
implicando no metabolismo do colesterol HDL e ocasionando seu incremento 5 .
Os resultados deste estudo demonstram que a administrao de isoflavonas em ratas
ovariectomizadas reduziu o ganho de peso, o peso dos tecidos adiposos e as concentraes de colesterol
e triglicerdeos, alm de aumentar a concentrao de HDL colesterol dos animais.

REFERNCIAS
1.

2.

3.
4.

5.
6.
7.

8.

9.

10.

11.
12.
13.

Setchell, K.D. Phytoestrogens: the biochemistry, physiology, and implications for human
health of soy isoflavones. American Journal Clinical of Nutrition, Bethesda, v. 134, n.6, p.
1333s-1343s, 1998. Supplement.
Koike K., Ohno S, Takahashi N, Suzuki N, Nozaki, Murakami K, et. al. Efficacy of the herbal
medicine Unkeito as an adjunctive to hormone replacement therapy for postmenopausal
women wuth depressive symptoms. Clin Neuropharmacol. 2004; 27(4):157-62.
Davis S.R.Phytoestrogens therapy for menopausal symptoms? There`s no good evidence that
it`s any better than placebo. BMJ 2001; 323:354-5.
De Kleijn M. J., van der Schouw YT, Wilson, Grobbee DE, Jacques PF. Dietary intake
ofphytoestrogens is associated with a favorable metabolic cardiovascular risk profile in
postmenopausal US women: the Framingham study. J Nutr 2002; 132:276-82.
Anderson JW, Johnstone BM, Cook, Newell ME. Meta-analysis of soy protein intake on serum
lipids. N Engl J Med 1995; 333:276-82.
Scheiber M. D.; Rebar R. W. Isoflavones and postmenopausal bone health: a viable alternative
to estrogen therapy. Menopause. 1999, 6, 233 - 241.
Wong; W. W.; Smith E. O; Stuff J. E. et al. Cholesterol- lowering effect of soy protein in
normocholesterolemic and hyper-cholesterolemic men. Am J Clin Nutr (Suppl). 1998, 68,
1385S - 1389S.
Dewell, A.; Hollenbeck, C.B.; Bruce, B. The effects of soyderived phytoestrogens on serum
lipids and lipoprotiens in moderately hypercholesterolemic post- menopausal women. The
Journal of Clinical Endocrinology Metabolism, v. 87, 2002 p. 118-121.
Baracate E.C, Soares Jnior J.M, Hidar M. A, Rodrigues de Lima G. Aspectos Reprodutivos
no climatrio. In: Fernandes CE, coordenador. Conselho Brasileiro Multidisciplinar de
Assistncia Sade da Mulher Climatrica. So Paulo: SOBRAC; Rio de Janeiro:
FEBRASGO; 2003. P. 251.
Potter S. M.; Baum J. A.; Teng H. et al. Soy protein and isoflavones: their effects on blood
lipids and bone density in postmenopausal women. Am J Clin Nutr (Suppl). 1998, 68, 1375S 1379S.
Han, K. Soares JM Jr, Haidar M.A, de Lima G.R, Baracat E.C. Benefits of soy isoflavone
therapeutic regimen on menopausal. Symptoms.Obstet Gynecol. 2002; 99 (3):389-94.
Zarrow,M.X. et al. Experimental Endocrinology - a sourcebook of basic tecniques. New
York: Academic Press, p.136-137, 1964.
Albertazzi P et al. The ffect of dietary soy supplementation on hot flushes. Obstet. Gynecol, v
91, p. 6-11 1998.

14.

15.

16.

17.
18.
19.

20.
21.
22.

Brzezinski, A. Adlercreutz H, SHAOUL R. Short-term effects of phytoestrogen-rich on


postmenopausal women.J N Am Menopause Soc, v 4,
p. 89-94, 1997.
Uomalis D.H et al. Vasomotor symptom relief by soy isoflavone extract tablets in
postmenopausal women: a multicenter, double-blind, randomized, placebo-controlled study
menopause, v 7, n 4, p. 236-242, 2000.
Han, K.K; Kati, L.M.; Haidar, M.A.; Giro, M.J.B.C.;Baracat, E.C.; YIM, D.K.; CarroPanizzi,M.C. Efeito de isoflavonas sobre os sintomas da sndrome de climatrio. In Simpsio
Brasileiro Sobre Os Benefcios da Soja para a Sade Humana, 1, 2001, Londrina. Anais,
Londrina, PR: Embrapa, 2001 p. 28-32.
Markiewicz, L. et al. In vitro biossays of non-steroidal phytoestrogens. J. Steroid Biochem.
Biol, p.399-405, 1993.
Castelli, P. Cardiovascular disease in womwn.Am J Obstet Gynecol. 1998, 158, 1552-60.
Yeung, S. C. Shirley; Kung W. C., Annie High dietary intake is associated with higher bone
mineral density in posmenopausal but not premenopausal women. J Clin Endocrinol Metab.
2001, 86, 5217-5221.
Matthews, A. R. R. Wing; L.H. Kuller et. al. Influence of the perimenopause on cardiovascular
risk factors and symptsoms of middle healthy women. Areh Inter Med. 154. 2349-2355, 1998.
Bhathena S.J, Velsquez M.T. Beneficial Role of Dietary Phytoestrogens in Obesity and
Diabetes, Am J Clin Nutr 2002; 76(6): 1119-201
Vigna, G.B. et al. Plasma lipoproteins in soy-treated postmenopausal women: a double-blind,
placebo-controlled trial. Nutrition Metabolism and Cardiovascular Diseases, v. 10, n. 6, p. 315322, 2000.

23.

Letteron, P.; Bhahimi-Bourouina, N.;obin, M.A.; Moreau, A.; Feldman, G.; Pessayre, D.
Glucocorticoids inhibit mitochondrial matrix acyl-CoA dehydrogenases and fatty acid betaoxidation. Am J. Physiol., 272 (5pt1): G1141-50, 1997.

24.

Gauthier, M.S.; Couturier, K.; Latour, J.G.; Lavoie, J.M. Concurrent exercise prevents highfat-diet- induced macrovesicular hepatic steatosis. J. Appl. Physiol., 94: 2127-34, 2003.
Gigante DP, Barros FC, Cora LA, Olinto MAT. Prevalncia de obesidade em adultos e seus
fatores de risco. Rev S Pbl 1997; 31:236-46.
Makela, S. et al. Inhibition of 17 beta-hydroxysteroid oxidoreductase by flavonoids in breast
and prostate cancer cells. Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine,
v. 217, n. 3, p. 310-316, 1998.
Van Der Schouw, Y.T. et al. Phyto-oestrogens and cardiovascular disease risk. Nutrition
Metabolism and Cardiovascular Diseases, v. 10, n. 3, p. 154-167, 2000.
Ashcroft, S. J., Protein phosphorilation and beta-cell function. Diabetologia, Berlin, v.37, p.
215-295, 1994. Suplement 2.

25.
26.

27.
28.
29.
30.

Gupta, A.K.; Ross, E.A.; Myers, J.N.; Kashyap, M.L. Increase reverse cholesterol transport in
athletes. Metabolism, 42(6): 684-90, 1993.
Eisenberg, S.J. High density lipoprotein metabolism. J. Lipid. Res., v.25,
p. 1017-25, 1984.

Linscheer, W.G. & Vergroesen, A.J. Lipids. In: Modern Nutrition In Health And Disease. 8 Ed.
Shills, M.E.; Olson, J.A.; Shike, M. Lea and Febiger,
p. 47-88, 1993.
32

SCHRAMM, D.D.;GERMAN, J.B. Potential effects of flavonoids on the etiology of disease.


Journal of Nutritional Biochemistry, v.9. n. 10, p. 560-566, 1998.