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UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHO

DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA QUMICA


PROGRAMA DE CONTROLE DE QUALIDADE DE ALIMENTOS E GUA
PAVILHO TECNOLGICO

ANLISES FSICO-QUMICAS E
BACTERIOLGICAS DA GUA

PROF. DR. VICTOR ELIAS MOUCHREK FILHO


PROFA. DRA. ADENILDE RIBEIRO NASCIMENTO

SO LUS - MA
2005

PROGRAMA DE CONTROLE DE QUALIDADE DE ALIMENTOS E GUA


PAVILHO TECNOLGICO - UFMA

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA
Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento
adenild@bol.com.br

LABORATRIO DE BROMATOLOGIA
Prof. Dr. Victor Elias Mouchrek Filho
victo@ufma.br

PARTE A: ................................................................................................................................................4
ANLISES FSICO-QUMICAS DA GUA ................................................................................................5
1 GENERALIDADES ..................................................................................................................................5
2 IMPORTNCIA DA ANLISE DE GUA ................................................................................................10
3 PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS ....................................................................................................11
3.1 TEMPERATURA ................................................................................................................................11
3.2 COR ..................................................................................................................................................11
3.3 ODOR E SABOR.................................................................................................................................12
3.4 TURBIDEZ ........................................................................................................................................13
3.5 CONDUTIVIDADE ELTRICA ...........................................................................................................14
3.6 DUREZA............................................................................................................................................15
3.7 ALCALINIDADE ................................................................................................................................16
3.8 PH.....................................................................................................................................................16
3.9 CLORO RESIDUAL LIVRE.................................................................................................................17
3.10 CLORETO .......................................................................................................................................17
4 AMOSTRAGEM ....................................................................................................................................18
4.1 QUANTIDADE DE AMOSTRA ............................................................................................................18
4.2 TOMADA DA AMOSTRA....................................................................................................................18
5 LEGISLAO .......................................................................................................................................19
6 ANLISES FSICO-QUMICAS ..............................................................................................................19
6.1 DETERMINAO DA ALCALINIDADE T.A., T.A.T.......................................................................19
6.2 DETERMINAO DE CA2+ ................................................................................................................22
6.3 DETERMINAO DE MG2+ ...............................................................................................................23
6.4 DUREZA TOTAL ...............................................................................................................................23
6.5 DETERMINAO DE CLORETOS......................................................................................................24
6.6 DETERMINAO DE PH...................................................................................................................25
6.7 DETERMINAO DA CONDUTIVIDADE ELTRICA .........................................................................25
6.8 DETERMINAO DA COR ................................................................................................................26
6.9 DETERMINAO DA TURBIDEZ ......................................................................................................26
6.10 DETERMINAO DE CLORO RESIDUAL ........................................................................................26

PARTE B ................................................................................................................................................27
ANLISE BACTERIOLGICA DE GUAS...............................................................................................28
1. CONSIDERAES INICIAIS ................................................................................................................28
2 ANLISES BACTERIOLGICAS ...........................................................................................................30
2.1 COLIMETRIA (POTABILIDADE).......................................................................................................30
2.1.1 BACTRIAS DO GRUPO COLIFORME ...............................................................................................30
2.1.2 COLETAS DE AMOSTRAS PARA ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA .......................................30
2.1.3 PROCEDIMENTO DE COLETA ..........................................................................................................31
2.1.4 TCNICAS DE COLETA DE AMOSTRA ..............................................................................................32
2.1.5 TCNICA DOS TUBOS MLTIPLOS (NMP/100ML).........................................................................35
2.1.5.1 CONSIDERAES GERAIS ...........................................................................................................35
2.1.5.2 MATERIAL ..................................................................................................................................35
2.1.5.3 METODOLOGIA ...........................................................................................................................37
2.1.6 MTODO PARA DETECO DE COLIFORMES TOTAIS E ESCHERICHIA COLI USANDO MEIOS COM
ONPG E MUG............................................................................................................................................41

3 ENUMERAO DO NMP/100ML DE ENTEROCOCCUS SP. ...................................................................44


4 TESTE PARA A PRESENA DE PSEUDOMONAS SP...............................................................................46
5 BALNEABILIDADE DAS PRAIAS ..........................................................................................................48
APNDICES ............................................................................................................................................50
REFERNCIAS ........................................................................................................................................58

PARTE A:

ANLISES FSICO-QUMICAS DA GUA

ANLISES FSICO-QUMICAS DA GUA

1 GENERALIDADES
Visto pelo lado de fora, o planeta deveria se
chamar gua. Com algumas ilhas de terra firme, cerca
de 2/3 de sua superfcie so dominados pelos vastos
oceanos.
Os plos e suas vizinhanas esto cobertos pelas
guas slidas das gigantescas geleiras. A pequena
quantidade de gua restante divide-se entre a atmosfera, o
subsolo, os rios e os lagos.
Estimam-se em cerca de 1,35 milhes de quilmetros cbicos o volume total de gua
na Terra.

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Onde est a gua no planeta?


Todos sabem que o Planeta Terra formado por muita gua, mas...

Ou, ainda, distribuda como veremos a seguir.

Geleiras - 1,979%

Oceanos - 97,50%

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Rios e Lagos - 0,006%

Subterrneas - 0,514%

Atmosfera - 0,001%

A situao da gua no Brasil

O Brasil detm 13,7% da gua doce


superficial do mundo.
Os 70 % da gua disponvel para
uso

esto

localizados

na

Regio

Amaznica.
Os 30% restantes distribuem-se
desigualmente pelo Pas, para atender a
93% da populao.

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A generosidade da natureza fazia crer em inesgotveis mananciais, abundantes e


renovveis. Hoje, o mau uso, aliado crescente demanda pelo recurso, vem preocupando
especialistas e autoridades no assunto, pelo evidente decrscimo da disponibilidade de gua
limpa em todo o planeta.
Recurso natural de valor econmico, estratgico e social, essencial existncia e
bem estar do homem e manuteno dos ecossistemas do planeta, a gua um bem comum a
toda a humanidade.
A gua um poderoso solvente, sendo assim ela dissolve algumas pores de quase
tudo com o que entra em contato.
Na cidade a gua contaminada por esgoto, monxido de carbono, poluio,
produtos derivados de petrleo e bactrias.
O cloro utilizado para proteger a gua pode contamin-la ao reagir com as
substncias orgnicas presentes na gua, formando os nocivos trihalometanos.
A agricultura contamina a gua com fertilizantes, inseticidas, fungicidas, herbicidas e
nitratos que so carregados pela chuva ou infiltrados no solo, contaminando os mananciais
subterrneos e os lenis freticos.
A gua subterrnea tambm contaminada por todos estes poluentes que se infiltram
no solo, atingindo os mananciais que abastecem os poos de gua de diversos tipos.
A gua da chuva contaminada pela poluio que se encontra no ar, podendo estar
contaminada com partculas de arsnio, chumbo, outros poluentes e inclusive ser uma chuva
cida.
A indstria contamina a gua atravs do despejo nos rios e lagos de desinfetantes,
detergentes, solventes, metais pesados, resduos radioativos e derivados de petrleo.
Os contaminantes da gua podem ser:

Biolgicos - a gua um excelente meio para o crescimento microbiano.

Dissolvidos - fazendo parte de sua composio qumica.

Em suspenso - fazendo parte da composio fsica: sedimentos, partculas,


areia, barro, etc.
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Formas de contaminao da gua:


Uso de fertilizantes, inseticidas, nitratos, herbicidas e fungicidas utilizados nas
plantaes e que se infiltram na terra, atingindo os mananciais subterrneos.
Detergentes, desinfetantes, solventes e metais pesados que so descarregados no
esgoto (e muitas vezes nos rios) pelas indstrias.
Lixo e detrito que so jogados nos rios e lagos.
Produtos derivados de petrleo que vazam e so arrastados pela gua da chuva.
Restos de animais mortos.
Chuva cida.

Problemas mais comuns na gua so:

Turbidez - A turbidez a presena de partculas de sujeira, barro e areia, que


retiram o aspecto cristalino da gua, deixando-a com uma aparncia turva e
opaca.

Gosto e cheiro estranhos - Gostos e cheiros indesejveis, como de bolor, de


terra ou de peixe, so causados pela presena de algas, hmus e outros detritos
que naturalmente esto presentes nas fontes de gua como rios e lagos.

Cor estranha - A presena de ferro e cobre pode deix-la amarronzada. Alm


do aspecto visual, essa gua pode manchar pias e sanitrios. A gua que causa
manchas pretas possui partculas de mangans.

Cheiro de ovo podre - Este cheiro causado pela presena de hidrognio


sulfdrico, produzido por bactrias que se encontram em poos profundos e
fontes de guas estagnadas por longos perodos.

Gosto de ferrugem/gosto metlico - O excesso de ferro e de outros metais


alteram o sabor e aparncia da gua. O sabor da gua pode se apresentar
metlico, mesmo que visualmente a colorao esteja normal, pois a colorao
enferrujada s aparece depois de alguns minutos em contato com o ar.
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Gosto e cheiro de cloro - O cloro usado pelas estaes de tratamento para


desinfetar a gua. Porm, a presena de cloro prejudica o sabor e o cheiro da
gua que vai ser utilizada para beber ou na culinria em geral.

2 IMPORTNCIA DA ANLISE DE GUA


A gua para ser consumida pelo homem no pode conter substncias dissolvidas em
nveis txicos e nem transportar em suspenso microrganismos patognicos que provocam
doenas.
A forma de avaliar a sua qualidade atravs das anlises fsico-qumicas e
microbiolgicas (bacteriolgicas) realizadas por laboratrios especializados. No Brasil,
existem padres de potabilidade regidos por portarias e resolues legais, que do subsdios
aos laboratrios na expedio de seus laudos.
O importante, no entanto, a conscientizao do cidado da necessidade de manter
um programa de monitoramento da qualidade da gua que ele consome. A necessidade do
monitoramento deve-se ao fato de possveis mudanas em algumas caractersticas da gua que
podem ocorrer com o tempo ou devido a condies externas que possam vir a contaminar o
manancial com substncias txicas, sal, ou bactrias.
A gua utilizada na irrigao e na indstria tambm precisa ser de boa qualidade. Na
irrigao a gua no pode conter sais em excesso para no prejudicar as plantas e o solo, e
nem conter substncias dissolvidas que possam causar danos aos equipamentos. Na indstria,
dependendo de algumas caractersticas fsico-qumicas, a gua quando no submetida ao
devido tratamento pode ocasionar incrustao e corroso dos equipamentos, diminuindo sua
vida til.
necessrio o conhecimento da qualidade da gua tambm em outras atividades,
como: criao de peixes, camares, galinha, gado, etc.
Essas anlises classificam a gua em:

Potvel - adequada para o consumo humano (dentro dos padres de potabilidade


estabelecidos pelos rgos especializados);

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Contaminada - contm microrganismos patognicos e, para tornar-se potvel,


precisa sofrer desinfeco ou ser submetida a fervura;

Poluda - apresenta qualquer espcie de poluio e pode estar tambm


contaminada. Mesmo isenta de microrganismos patognicos, a gua poluda
imprpria para o consumo, pois pode conter tanto substncias txicas, como
grande concentrao de substncias qumicas (magnsio, clcio, metais em forma
de bicarbonatos, sulfatos, cloretos e outros), o que a torna dura ou corrosiva.

3 PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS
3.1 TEMPERATURA
Variaes de temperatura so parte do regime climtico normal, e corpos de gua
naturais apresentam variaes sazonais e diurnas. A temperatura superficial influenciada por
fatores tais como latitude, altitude, estao do ano, perodo do dia, taxa de fluxo e
profundidade. A elevao da temperatura em um corpo dgua geralmente provocada por
despejos industriais.
As guas tm uma amplitude trmica pequena, variando de 1 a 2C em relao ao
ambiente.

3.2 COR
A cor de uma gua conseqncia de substncias dissolvidas. Quando pura, e em
grandes volumes, a gua azulada.
Quando rica em ferro, arroxeada. Quando rica em mangans, negra e, quando
rica em cidos hmicos, amarelada.
A medida da cor de uma gua feita pela comparao com solues conhecidas de
platina-cobalto ou com discos de vidro corados calibrados com a soluo de platina-cobalto.
Uma unidade de cor corresponde quela produzida por 1mg/L de platina, na forma
de on cloroplatinado Unidade Hanzen (mg Pt Co/L).
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Especial cuidado deve ser tomado na anotao do pH em que foi realizada a medida,
pois sua intensidade aumenta com o pH.
Da mesma forma a cor influenciada por matrias slidas em suspenso (turbidez),
que devem ser eliminadas antes da medida.
Para guas relativamente lmpidas a determinao pode ser feita sem a preocupao
com a turbidez. Neste caso a cor obtida referida como sendo aparente.
Para ser potvel uma gua no deve apresentar nenhuma cor de considervel
intensidade. Segundo a Portaria 518, de 25 de maro de 2004 ANVISA MS o ndice
mximo permitido deve ser 15 mg Pt Co/L ou 15 UH.

3.3 ODOR E SABOR


Odor e sabor so duas sensaes que se manifestam conjuntamente, o que torna
difcil sua separao.
O odor e o sabor de uma gua dependem dos sais e gases dissolvidos.
Como o paladar humano tem sensibilidade distinta para os diversos sais, poucos
miligramas por litro de alguns sais, como ferro e cobre so detectvis, enquanto que, vrias
centenas de miligramas de cloreto de sdio no so percebidas.
Em geral as guas so desprovidas de odor sendo no objetvel.
Algumas fontes termais podem exalar cheiro de ovo podre devido ao seu contedo de
H2S (gs sulfdrico).
Da mesma maneira guas que percolam matrias orgnicas em decomposio (turfa,
por exemplo) podem apresentar H2S.
A Tabela 1A apresenta a relao de alguns sais dissolvidos e as sensaes causadas
ao paladar humano.

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Tabela 1A. Sais dissolvidos com suas respectivas sensaes.


Sais dissolvidos

Sensaes

Cloreto de sdio (NaCl)

Salgado

Sulfato de Sdio (Na2SO4)

Ligeiramente salgado

Bicarbonato de Sdio (NaHCO3)

Ligeiramente salgado a doce

Carbonato de Sdio (Na2CO3)

Amargo e salgado

Cloreto de Clcio (CaCl2)

Fortemente amargo

Sulfato de Clcio (CaSO4)

Ligeiramente amargo

Sulfato de Magnsio (MgSO4)

Ligeiramente amargo em saturao

Cloreto de Magnsio (MgCl2)

Amargo e doce

Gs Carbnico (CO2)

Adstringente e picante

3.4 TURBIDEZ
a medida da dificuldade de um feixe de luz atravessar uma certa quantidade de
gua.
A turbidez causada por matrias slidas em suspenso (argila, colides, matria
orgnica etc.).
A turbidez medida atravs do turbidmetro de Jackson, comparando-se o
espalhamento de um feixe de luz ao passar pela amostra com o espalhamento de um feixe de
igual intensidade ao passar por uma suspenso padro.
Quanto maior o espalhamento maior ser a turbidez.
Os valores so expressos em Unidade de Turbidez (UT).
A cor da gua interfere negativamente na medida da turbidez devido sua
propriedade de absorver luz.

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Segundo a Portaria 518, de 25 de maro de 2004 ANVISA - MS o limite mximo


de turbidez em gua potvel deve ser 5 UT.
As guas normalmente no apresentam problemas devido ao excesso de turbidez.
Em alguns casos, guas ricas em ons Fe, podem apresentar uma elevao de sua
turbidez quando entram em contato com o oxignio do ar.

3.5 CONDUTIVIDADE ELTRICA


A condutividade uma expresso numrica da capacidade de uma gua conduzir a
corrente eltrica.
Depende das concentraes inicas e da temperatura e indica a quantidade de sais
existentes na coluna dgua, e, portanto, representa uma medida indireta da concentrao de
poluentes. Em geral, nveis superiores a 100 S/cm indicam ambientes impactados.
A condutividade tambm fornece uma boa indicao das modificaes na
composio de uma gua, especialmente na sua concentrao mineral, mas no fornece
nenhuma indicao das quantidades relativas dos vrios componentes.
medida que mais slidos dissolvidos so adicionados, a condutividade da gua
aumenta. Altos valores podem indicar caractersticas corrosivas da gua.
A medida feita atravs de condutivmetro e a unidade usada o MHO (inverso de
OHM, unidade de resistncia).
Como a condutividade aumenta com a temperatura, usa-se 25C como temperatura
padro, sendo necessrio fazer a correo da medida em funo da temperatura se o
condutivmetro no o fizer automaticamente.
Contudo, para as guas as medidas usuais de condutividade so dadas em
microMHO/cm.

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Nota: No Sistema Internacional de Unidades, adotado pelo Brasil, a unidade de


condutncia Siemens, abreviando-se S (maisculo). Para as guas o correto seria nos
referirmos a microsiemens por centmetro (S/cm).

3.6 DUREZA
A dureza definida como a dificuldade de uma gua em dissolver (fazer espuma)
sabo pelo efeito do clcio, magnsio e outros elementos como Fe, Mn, Cu, Ba etc.
guas duras so inconvenientes porque o sabo no limpa eficientemente,
aumentando seu consumo, e deixando uma pelcula insolvel sobre a pele, pias, banheiras e
azulejos do banheiro.
A dureza pode ser expressa como dureza temporria, permanente e total.
Dureza temporria ou de carbonatos
devida aos ons de clcio e de magnsio que sob aquecimento se combinam com
ons bicarbonato e carbonatos, podendo ser eliminada por fervura.
Em caldeiras e tubulaes por onde passa gua quente (chuveiro eltrico por
exemplo) os sais formados devido dureza temporria se precipitam formando crostas e
criando uma srie de problemas, como o entupimento.
Dureza permanente
devida aos ons de clcio e magnsio que se combinam com sulfato, cloretos,
nitratos e outros, dando origem a compostos solveis que no podem ser retirados pelo
aquecimento.
Dureza total
a soma da dureza temporria com a permanente. A dureza expressa em
miligrama por litro (mg/L) ou miliequivalente por litro (meq/L) de CaCO3 (carbonato de
clcio) e segundo a Portaria 518, de 25 de maro de 2004 ANVISA - MS o limite mximo
de dureza total em gua potvel de 500 mg/L.

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3.7 ALCALINIDADE
a medida total das substncias presentes na gua capaz de neutralizarem cidos.
Em outras palavras, a quantidade de substncias presentes numa gua e que atuam
como tampo.
Se numa gua quimicamente pura (pH = 7) for adicionada pequena quantidade de um
cido fraco seu pH mudar instantaneamente.
Numa gua com certa alcalinidade a adio de uma pequena quantidade de cido
fraco no provocar a elevao de seu pH, porque os ons presentes iro neutralizar o cido.
Em guas a alcalinidade devida principalmente aos carbonatos e bicarbonatos.
Alcalinidade total a soma da alcalinidade produzida por todos estes ons presentes
numa gua. guas que percolam rochas calcrias (calcita = CaCO3) geralmente possuem
alcalinidade elevada.
A alcalinidade de uma gua expressa em mg/L de CaCO3 e deve apresentar iseno
de alcalinidade custica.

3.8 PH
a medida da concentrao de ons H+ na gua.
O balano dos ons hidrognio e hidrxido (OH-) determinam quo cida ou bsica
ela .
Na gua quimicamente pura os ons H+ esto em equilbrio com os ons OH- e seu
pH neutro, ou seja, igual a 7.
Os principais fatores que determinam o pH da gua so o gs carbnico dissolvido e
a alcalinidade.
Segundo a Portaria 518, de 25 de maro de 2004 ANVISA - MS os limites
permitidos variam entre 6,0 a 9,5.

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3.9 CLORO RESIDUAL LIVRE


Conhecer o teor de cloro ativo que permanece aps a desinfeco (clorao) da gua,
permite garantir a qualidade microbiolgica da gua, ou seja, se ela est em condies de uso.
Segundo a Portaria 518, de 25 de maro de 2004 ANVISA - MS os limites
permitidos de cloro residual na gua so de 0,2 a 2,0 mg Cl2/L.

3.10 CLORETO
O cloreto o nion Cl- que se apresenta nas guas subterrneas atravs de solos e
rochas.
Nas guas superficiais so fontes importantes as descargas de esgotos sanitrios,
sendo que cada pessoa expele atravs da urina cerca 6 g de cloreto por dia, o que faz com que
os esgotos apresentem concentraes de cloreto que ultrapassam a 15 mg/L.
Diversos so os efluentes industriais que apresentam elevadas concentraes de
cloreto como os da indstria do petrleo, algumas indstrias farmacuticas, curtumes etc.
Nas regies costeiras, atravs da chamada intruso da lngua salina, so encontradas
guas com nveis altos de cloreto. Nas guas tratadas, a adio de cloro puro ou em soluo
leva a uma elevao do nvel de cloreto, resultante das reaes de dissociao do cloro na
gua.
Para as guas de abastecimento pblico, a concentrao de cloreto constitui-se em
padro de potabilidade. Segundo a Portaria 518, de 25 de maro de 2004 ANVISA - MS o
limite mximo permissvel para cloreto na gua de 250 mg/L.
O cloreto provoca sabor salgado na gua, sendo o cloreto de sdio o mais
restritivo por provocar sabor em concentraes da ordem de 250 mg/L, valor este que
tomado como padro de potabilidade.

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4 AMOSTRAGEM
4.1 QUANTIDADE DE AMOSTRA
A amostragem da gua para anlise fsico-qumica feita coletando-se 1,5-2,0 litros
da gua numa garrafa plstica ou de vidro, nova ou que s tenha sido utilizada com gua.

4.2 TOMADA DA AMOSTRA


Lava-se o recipiente trs vezes com a gua do local que se deseja analisar, e na
quarta vez enche-se, identifica-se com dados sobre o interessado, a procedncia, local da
coleta, data da coleta e envia-se o mais rpido possvel ao laboratrio.
Caso no seja possvel enviar no mesmo dia, colocar sob refrigerao at o momento
do envio.Cuidar para no momento da coleta no deixar as mos entrar em contato com a gua.
importante tambm observar alguns procedimentos que dependem do local da coleta:

a) Tomada de amostra de rio ou lago


Para encher os vidros com gua de rio ou lagoa tem que se procurar a amostra a 2 cm
da margem e obt-la de 20 a 30 cm abaixo do nvel da gua, a fim de no ficar contaminada, e
que seja representativa. A boca do vidro deve estar na mesma direo da corrente, para que
no entre gua superficial.
b) Tomada de amostra de uma torneira
Para anlise bacteriolgica, abrir a torneira e deixar sair a gua por 3 a 4 minutos;
fechar a torneira e flamb-la com um swab embebido em lcool (esterilizao direta); em
seguida, deixar correr gua por 2 a 3 minutos, encher o vidro e fechar rapidamente.
c) Tomada de amostra de gua de piscina ou de caixa de gua
Geralmente a gua ingressa pela parte superior e sai pela parte inferior. Devemos
tomar duas amostras: quando a gua ingressa e quando a gua egressa. O objetivo
determinar se a fonte de contaminao est depositada no tanque reservatrio. Nas piscinas ou
em tanques de gua similares, devemos tomar uma amostra da zona em que supe que o fluxo
de gua menor onde a gua mais parada.
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d) Tomada de amostra de gua de poo


Geralmente efetua-se por um sistema de roldanas, com um balde na extremidade da
corda. A tcnica correta esterilizar o balde queimando 30 a 40 mL de lcool etlico, em
seguida coletar a amostra de gua.

5 LEGISLAO
Foi publicada pelo Ministrio da Sade a nova Portaria n 518 de 25 de maro de
2004 que estabelece os procedimentos e responsabilidades relativos ao controle e vigilncia
da qualidade da gua para consumo humano e seu padro de potabilidade, e d outras
providncias, e a Resoluo RDC n 54 de 15 de junho de 2000, que dispe sobre o
Regulamento Tcnico para Fixao de Identidade e Qualidade de gua Mineral Natural e
gua Natural.

6 ANLISES FSICO-QUMICAS
6.1 DETERMINAO DA ALCALINIDADE T.A., T.A.T.
O conhecimento das alcalinidades permite determinar a quantidade de OH, CO32 e
HCO3 contidos em uma amostra de gua. Em geral no existem hidrxidos, restando os
carbonatos que aparecem com pouca freqncia e o bicarbonato sempre existindo. Sabe-se
que no pode coexistir OH e HCO3.
O ttulo alcalimtrico T.A. efetuado em presena de fenolftalena, correspondendo
quantidade de hidrxidos e carbonatos; o ttulo alcalimtrico total T.A.T. efetuado em
presena de metil orange e corresponde quantidade de hidrxidos, carbonatos e
bicarbonatos.
Processo analtico:
1. Pipetar 100 mL da amostra para um erlenmeyer de 250 mL.
2. Juntar 2 gotas de fenolftalena indicador. Se no aparecer colorao rsea, o T.A.
nulo, isto , no existe OH nem CO32, neste caso omite-se o terceiro passo deste
processo analtico.
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3. Titular com soluo de H2SO4 0,04 at descoramento, anotando o gasto como F


mL, onde F o volume gasto de cido usando fenolftalena.
4. Juntar ao mesmo erlenmeyer, 2 gotas de metil orange indicador.
5. Titular com o H2SO4 at colorao rosa (salmo), anotando o gato como M mL
(M = gasto de cido usando metil orange; T = volume total do cido gasto com os
dois indicadores).

Clculo completo dos diferentes casos de alcalinidade


Tomando por base os volumes gastos com fenolftalena e o volume total
(fenolftalena + metil orange) o clculo de alcalinidade vai se enquadrar nos casos a seguir.

1 Caso: T = F
CO32 = zero
HCO3 = zero
OH = 2 x F x 3,398 mg L-1 em CaCO3.
2 Caso: F > T
HCO3 = zero
OH = 2 (2 x F T) x 3,398 mg L-1 em CaCO3.
CO32 = 4 (T F) x 5,995 mg L-1 em CaCO3.
3 Caso: F = T
OH = zero
HCO3 = zero
CO32 = 2 x T x 5,995 mg L-1 em CaCO3.
4 Caso: F < T
OH = zero
CO32 = 4 x F x 5,995 mg L-1 em CO3Ca
HCO3 = 2 (T 2 x F) x 12,2 mg L-1 em CO3Ca.
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5 Caso: F = 0
OH = zero
CO32 = zero
HCO3 = 2 x T x 12,2 mg L-1 em CaCO3.

Os ttulos alcalimtricos tambm podem ser expressos em graus franceses. Nas


determinaes de Ca2+ e Mg2+ e dureza total lana-se mo dos mtodos complexomtricos
(Complexometria).
O preparo de alguns indicadores usados nas determinaes est descrito a seguir.
Murexida (sal amoniacal do cido purprico)
Preparo:
Indicador slido Mistura-se bem homogneo 1g de murexida com 199g de NaCl
cristalizado por anlise Merck. A mistura realizada em um grau de porcelana.
Indicador lquido Prepara-se como indicador uma soluo aquosa saturada, que
se prepara no momento, dissolvendo aproximadamente 0,17g do murexida em 100mL de gua
destilada.
cido calconcarboxlico Soluo 0,4% de cido calconcarboxlico Merck em
metanol para anlises Merck. Este indicador especfico do clcio e permite determina-lo em
presena de grandes quantidades de magnsio. O final da dosagem se d quando h mudana
de cor de vermelho-vinho para azul lmpido. Este indicador se conserva por tempo limitado, o
ideal prepar-lo semanalmente.
Os indicadores citados so utilizados na determinao do Ca2+, o cido
calconcarboxlico mais usado por ter a viragem mais ntida, isto , de vermelho vinho para
azul lmpido. Enquanto que a virada com a murexida confusa, passando de rosa vivo para
roxo claro.
Eriocromo black T (Negro de eriocromo T): indicador utilizado na
determinao do magnsio. Pode ser slido ou lquido:

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22

Preparo:
Indicador slido Tritura-se, mistura-se em um grau de porcelana 1g do indicador
com 99% de ClNa cristalizado para anlise.
Indicador lquido O indicador no estvel em soluo aquosa, em caso de
necessidade, pode-se dissolver 0,2% em lcool. Entretanto, uma maneira mais estvel a que
se segue: 0,2g do corante em uma mistura de 15mL de trietanolamina pura Merck e 5mL de
C2H5OH absoluto para anlise.
A virada desse indicador tambm de vermelho vinho para azul lmpido.
Para os indicadores lquidos utiliza-se 6 a 7 gotas, enquanto que para os slidos se
usa pitadas.
Soluo tampo pH = 10
Preparo:
A 200 mL de gua destilada se dissolve 54 g de NH4Cl; a esta soluo se agrega 350
mL de amonaco lquido d = 0,910 e se completa para um litro de gua destilada.

6.2 DETERMINAO DE CA2+


Numa alquota de 50 mL, juntar 2 mL de KOH a 10% (para tornar o pH alcalino),
uma pequena quantidade do indicador murexida ou cido calconcarboxlico e titular com
soluo Na2EDTA 0,02 N. O ponto final de titulao se d quando h a passagem de
vermelho vinho para azul, no caso de se usar o cido calconcarboxlico como indicador, e de
rosa vivo para roxo claro se utilizar murexida como indicador. Utiliza-se as equaes:
Ca 2 + =

Bx400xf
ppm Ca 2 +
mL da amostra

B = mL de Na2EDTA 0,02 N gastos na titulao.


Ca 2+ =

Bx1000
ppm CaCO 3
mL da amostra

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6.3 DETERMINAO DE MG2+


Em uma alquota de 50 mL adicionar 3 mL de soluo tampo, 6 a 7 gotas do
indicador Eriocromo black T e titular com soluo Na2EDTA 0,02 N, at a virada do
indicador Eriocromo. Titular com soluo Na2EDTA 0,02 N, at virada de vermelho vinho
para azul lmpido. Nesta operao se determina clcio e magnsio conjuntamente; por
diferena se tem o magnsio. A equao a seguinte:
(A - B)x243xf
ppm Mg 2+
mL da amostra

Mg 2 + =

A = volume em mL gasto de Na2EDTA 0,02 N na titulao.


B = volume em mL gasto na titulao de Ca2+.
Mg 2+ =

(A - B)x1000
ppm CaCO 3
mL da amostra

6.4 DUREZA TOTAL


A dureza total expressa pela frmula:
DT =

Ax1000xf
ppm
mL da amostra

Na2EDTA ou titriplex III (sal dissdico do cido etilenodiamin tetractico)


Preparo:
Peso molecular do Na2EDTA: 372,24g
Eq. grama = mol/2 = 186,12
Dissolve-se 3,722 g em um pouco de gua destilada e se completa a 1000 mL em
balo volumtrico.

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6.5 DETERMINAO DE CLORETOS


Neste processo analtico, os cloretos so determinados por precipitao usando-se
uma soluo padro de AgNO3 e o indicador K2CrO4.

Soluo padro de AgNO3 0,0141 N


Preparo:
Dissolve-se 2,3970 g de nitrato de prata em gua destilada e completar o volume para
1 litro em balo volumtrico. Homogeneizar.
Dissolve-se 50 g de K2CrO4 em pequena quantidade de gua destilada; adicionar a
soluo de nitrato de prata at que se firme um precipitado vermelho. Deixar em repouso por
12 horas. Filtrar e diluir o para 1 litro.
Reao:
K2CrO4 + 2AgNO3 Ag2CrO4 + 2KNO3

Processo analtico:
1. Pipetar 50 mL da amostra de gua para uma cpsula de cor branca. Se a gua for
muito colorida, juntar um pouco de Al(OH)3, filtrar e lavar com gua destilada.
2. Colocar aproximadamente a mesma quantidade de gua destilada em uma segunda
cpsula, para servir de comparador de cor.
3. Juntar a cada cpsula 1 mL do indicador cromato de potssio.
4. Titular lentamente com soluo padro de AgNO3 agitando sempre com um
basto, at ligeira colorao vermelha (comparar com a cpsula contendo gua
destilada), anotar o volume gasto com A mL.
5. Se o gasto A mL de AgNO3 ultrapassar a 8 mL, deve-se utilizar menor quantidade
da amostra de gua e depois diluir a 50 mL com gua destilada.

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Clculo dos cloretos: Utiliza-se a seguinte equao.


(A - 0,2)x0,5x1000xf
= mgL-1Cl
mL da amostra
A subtrao de 0,2 mL corresponde ao volume do indicador necessrio para
precipitar o AgCrO4 em quantidade suficiente para avermelhar a soluo.

6.6 DETERMINAO DE PH
A determinao realizada em um pH-metro. Retira-se a proteo do eletrodo de
vidro, lava-se o mesmo com gua destilada. Em seguida calibra-se o pH-metro da seguinte
forma:

Coloca-se o eletrodo em uma soluo tampo pH 6,86 calibrando-se em


seguida.

Coloca-se o eletrodo em uma soluo tampo pH 4,01 calibrando-se em


seguida.

Coloca-se o eletrodo em na soluo na soluo amostra e l-se o pH em


seguida.

6.7 DETERMINAO DA CONDUTIVIDADE ELTRICA


A determinao realizada em um condutivmetro:
Frmulas:
X=

1.000 .000
V (lido)

Y=

0,935
X

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6.8 DETERMINAO DA COR

A determinao realizada em um espectrofotmetro da seguinte forma:

Ajusta-se o aparelho para um comprimento de onda de 455 nm;

Coloca-se a clula com gua destilada e calibra-se;

Em seguida coloca-se a clula com a amostra.

6.9 DETERMINAO DA TURBIDEZ

A determinao realizada em um espectrofotmetro da seguinte forma:

Ajusta-se o aparelho para um comprimento de onda de 860 nm;

Coloca-se a clula com gua destilada e calibra-se;

Em seguida coloca-se a clula com a amostra.

6.10 DETERMINAO DE CLORO RESIDUAL

Coloca-se 200 mL de amostra em erlenmeyer de 250 mL. Adiciona-se alguns cristais


de KI, 1 mL de CH3COOH concentrado, e 1 mL da soluo de amido a 1%.
Titula-se com soluo de Na2S2O3 0,001 N, at que a cor azul desaparea.
Calcula-se o cloro residual pela expresso:
ppm de cloro residual = mL Na2S2O3 x 0,1773

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PARTE B

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

28

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1. CONSIDERAES INICIAIS
A

gua um elemento essencial vida,

conseqentemente sua potabilidade e qualidade so


importantes para o bem estar e sade da populao.
A microbiologia da gua compreende no
estudo das bactrias, vrus, algas, protozorios e
fungos microscpicos. Alguns desses microrganismos
so prprios do habitat local e outros so lanados nas fontes hdricas pela ao do ar, solo ou
ainda provenientes de processos industriais e domsticos.
Os despejos de resduos industriais e domsticos nas fontes hdricas proporcionam a
sua contaminao trazendo agentes etiolgicos de carter infeccioso ou parasitrio, sendo
responsvel pela alta incidncia de doenas que afetam a populao (principalmente crianas
com enterites e diarrias). Os agentes veiculados pela gua e causadores de doenas podem
ser de natureza biolgica ou qumica.
As doenas causadas por contaminantes biolgicos
presentes na gua (bactrias, vrus ou protozorios) constituemse nos problemas de sade pblica mais comum em nosso pas.
Essas doenas so transmitidas por excrementos humanos e de
animais despejados nas fontes de gua, tornando-a imprpria
para o consumo. A transmisso dessas doenas ocorre de forma
direta ou indireta: com a ingesto da gua, no preparo de
alimentos, na higiene pessoal, na agricultura ou no lazer. Os
principais microrganismos presentes na gua contaminada e responsveis pelas numerosas
doenas so Salmonella sp, Shigella sp, Escherichia coli, Vibrio cholerae.
As espcies bacterianas existentes nas guas naturais so principalmente espcies dos
gneros Pseudomonas, Chromobacterium, Proteus, Micrococcus, Bacillus, Enterococcus,
Enterobacter e Escherichia coli. provvel que as trs ltimas bactrias sejam
contaminantes.
- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

29

Mas existem ainda outros tipos de contaminao relacionada com a gua a presena
de protozorios causadores de infeces parasitrias no homem como a amebase (Entamoeba
hystolitica), giardase (Giardia lamblia) e a balantidase (Balantidium coli).
Outro fator importante da gua a transmisso de algumas doenas endmicas como
a malria, dengue e febre amarela (a Tabela 1A mostra algumas doenas veiculadas pela
gua). A gua um ambiente propcio para a evoluo do ciclo de vetores responsveis por
essas doenas. A gua o maior veculo de contaminao humana, portanto, a gua
distribuda populao deve ser de boa qualidade com todas as caractersticas determinadas
pela legislao vigente (Portaria n. 36/MS/90, do Ministrio de Sade).
Tabela 1B. Algumas doenas de transmisso hdrica.
Organismos

BACTRIAS

VRUS

PROTOZORIOS

Doenas

Salmonella Typhi

Febre Tifide

Salmonella sp.

Salmonelose

Shigella sp.

Shigelose (desinteria bacilar)

Escherichia coli patognica

Gastrenterites

Vibrio cholerae

Clera

Lagionella pneumophila

Doena dos legionrios

Leptpspira

Leptospirose (contato)

Enterovirus

Poliomelite, gatroenterites

Rotavrus

Gastroenterites

Vrus da hepatite A

Hepatite A

Adenovrus

Doenas respiratrias,
conjuntivites.

Entamoeba histolytica

Amebase

Girdia Lamblia

Giardse

Cryptosporidium

Criptpsporidiose

Ascaris lumbricides

Verminoses

Enterobius vermicularis
HELMINTOS

Strongyloides stercolaris
Trichuris trichiura
Schistosoma mansoni

Esquistossomose

Nota: H uma serie de outros microrganismos patognicos que, se presentes, podero

ser veiculados atravs de guas de esgoto.


- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

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30

2 ANLISES BACTERIOLGICAS
2.1 COLIMETRIA (POTABILIDADE)
2.1.1 BACTRIAS DO GRUPO COLIFORME

As bactrias do grupo coliforme constituem o indicador de contaminao mais


utilizado em todo o mundo, sendo empregado como parmetro bacteriolgico bsico na
definio de padres para monitoramento da qualidade das guas destinadas ao consumo
humano, bem como para caracterizao e avaliao da qualidade das guas em geral.
Os coliformes so definidos como bacilos gram-negativos, aerbios ou anaerbios
facultativos, no formadores de esporos, que fermentam a lactose com produo de cido e
gs em 48 horas a 35C. Neste grupo esto includos os gneros: Citrobacter, Enterobacter,
Klebsiella, Escherichia, etc., sendo que as bactrias do gnero Escherichia so
exclusivamente de origem fecal e os demais membros do grupo coliforme podem ocorrer s
vezes com relativa abundncia no solo e mesmo em plantas.
Uma grande vantagem da utilizao dos coliformes como indicador de
contaminao, o fato de serem facilmente isolados da gua e identificados. As tcnicas
bacteriolgicas para a sua deteco so simples, alm de rpidas e econmicas, o que pode
permitir a sua aplicao em exames rotineiros para a avaliao da qualidade bacteriolgica da
gua.

2.1.2 COLETAS DE AMOSTRAS PARA ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

As coletas de amostras para anlises microbiolgicas devem sempre anteceder a


coleta de qualquer outro tipo de anlise que no exija esterilidade (fsico-qumica, por
exemplo), a fim de evitar o risco de contaminao local de amostragem por frascos e
amostradores no estreis.
a) Amostragem:

A coleta de amostras lquidas deve ser efetuada conforme recomendaes tcnicas e


com assepsia; sendo requerido um volume mnimo de 100mL, o qual deve ser coletado em
frascos de vidro neutro ou plstico autoclavvel, no txico, com capacidade mnima de
125mL, boca larga e tampa a prova de vazamentos.
- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

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31

b) Identificao:

As amostras devem ser identificadas com as seguintes informaes: nmero da


amostra, data da coleta, local, pH, temperatura, cloro residual e outras informaes
necessrias para que os resultados possam ser interpretados corretamente.

c) Agente neutralizador de cloro residual:

Para amostras de gua tratada (piscina, etc.), deve-se adicionar ao frasco de coleta,
antes de sua esterilizao 0,1mL de uma soluo a 1,8% de Tiossulfato de sdio para cada
100mL da amostra, para neutralizar a ao do cloro residual.

2.1.3 PROCEDIMENTO DE COLETA


a) Coleta em sistemas de abastecimento de gua para consumo:

Antes das coletas das amostras, verifique se o ponto de coleta recebe gua
diretamente do sistema de distribuio e no de caixas, reservatrios, cisternas, etc. A torneira
no deve conter filtros.
Inicialmente, abre-se a torneira e deixa-se escorrer a gua durante 3 a 5 minutos, um
tempo suficiente para eliminar impurezas e guas acumuladas na canalizao. Na desinfeco
da torneira, utiliza-se uma soluo de hipoclorito de sdio ou lcool a 70% para eliminar
qualquer contaminao externa. No caso da desinfeco com hipoclorito, o mesmo deve ser
completamente removido antes da coleta.
Abre-se a torneira a meia seco para que o fluxo seja pequeno e no haja respingos.
Remove-se a tampa do frasco com todos os cuidados e assepsia, tomando precaues para
evitar a contaminao da amostra pelos dedos, luvas ou outros materiais.
Segura-se o frasco verticalmente prximo base e efetua-se o enchimento deixando
um espao vazio de aproximadamente 2,5 5 cm do topo, para posterior homogeneizao da
amostra antes de iniciar a anlise. Fecha-se imediatamente o frasco aps a coleta, fixando-se
bem a tampa; identifica-se adequadamente a amostra no frasco ou na ficha de coleta. As
amostras devem ser acondicionadas em caixas isotrmicas contendo gelo (resfriamento
temporrio) e encaminhadas ao laboratrio. O tempo entre a coleta e entrega da mostra no
laboratrio no deve exceder 12 horas.
- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

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b) Coleta em poos freticos:

Em poos equipados com bombas manuais ou mecnicas, bombeia-se deixando


escorrer durante aproximadamente 5 minutos. Realiza-se a desinfeco da sada da bomba,
deixando-se escorrer novamente a gua antes da coleta das amostras. Em poos sem bombas,
a amostragem deve ser feita diretamente no poo, utilizando-se frascos estreis. As amostras
no devem ser coletadas da camada superficial da gua, para evitar contaminao com
espumas ou com materiais das paredes do poo.

c) Coletas de guas superficiais (rios, lagos etc.):

Quando as amostras forem coletadas diretamente de um corpo receptor, procura-se


selecionar pontos de amostragem representativos, evitando-se a coleta de amostras em reas
ou locais prximo s margens. A coleta em guas superficiais pode ser feita manualmente ou
atravs de equipamentos.

2.1.4 TCNICAS DE COLETA DE AMOSTRA

As tcnicas de coleta para as diversas amostras de gua de torneira e de poo esto


descritas a seguir.

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

33

a) gua de torneira

Caso a torneira apresente alguma sujidade na sua parte


exterior, limpar a mesma.

Abrir a torneira, deixando correr bastante gua. Isto


necessrio, porque alguns coliformes podem se multiplicar na
gua retida durante algum tempo na canalizao ou se
multiplicar nas fibras de juta que servem para vedar a
canalizao.

Abrir a torneira meia seo (tempo de operao 1 minuto).

Rapidamente abrir o frasco esterilizado e, no menor tempo


possvel, coletar a amostra. Nesta operao muito importante
no tocar no bocal do frasco e no deixar que a tampa do frasco
toque em qualquer superfcie (tempo de operao 30 segundos).

Ao coletar, encher o frasco com de seu volume, para poder


tornar possvel no laboratrio a homogeneizao da amostra.

Aps a coleta da amostra, fechar o mais rapidamente possvel


o frasco esterilizado e levar ao laboratrio para a realizao das
anlises.

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

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34

b) gua de poo

Se houver torneira ou outra canalizao, proceder como item anterior.


Quando no houver, amarrar um barbante no frasco de coleta, tendo sempre todos os
cuidados de assepsia, ou flambar um balde interno e externamente antes de coletar a gua.

Descer lentamente o cordo sem


permitir que o frasco toque nos lados
do poo.

Submergir o frasco, permitindo que


se obtenha amostras mais profundas.

c) Mananciais superficiais

Observar o sentido da correnteza e a


profundidade mnima de 30 cm.

Aps as coletas, as amostras devem ser processadas em tempo adequado.

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

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35

2.1.5 TCNICA DOS TUBOS MLTIPLOS (NMP/100ML)


2.1.5.1 CONSIDERAES GERAIS

A determinao do Nmero Mais Provvel (NMP), de coliformes em uma dada


amostra efetuada a partir da tcnica de tubos mltiplos. Esta por sua vez consiste na
inoculao de volumes decrescentes da amostra, em meio de cultura adequado ao crescimento
dos microrganismos pesquisados, sendo cada volume inoculado em uma srie de tubos.
A tcnica do Nmero Mais Provvel (NMP) um meio de estimar a densidade de
microrganismos viveis em gua e alimentos. O NMP est diretamente relacionado
freqncia de ocorrncia de uma srie de resultados positivos que so mais provveis ocorrer
quando um certo nmero de organismos esto presentes numa amostra. A tcnica est baseada
no conhecimento do tipo de distribuio das bactrias em uma amostra e na teoria das
probabilidades. O NMP aquele nmero de organismos por unidade de volume que segundo
a teoria estatstica teria maior probabilidade de representar o nmero real de microrganismos
do que qualquer outro nmero de amostra analisada.
So vrias as aplicaes da tcnica do NMP. A principal a utilizao na pesquisa de
coliformes na gua e alimentos. Por essa esta tcnica, pode-se obter informaes sobre a
populao presuntiva de coliformes (Teste Presuntivo), sobre a populao real de coliformes
(Teste Confirmativo) e sobre a populao de coliformes de origem fecal (Coliformes Fecais
ou Termotolerantes). A determinao do NMP de coliformes totais e fecais e Escherichia coli,
segue o mtodo recomendado pelo Standard Methods for the Examination of water and
Wastewater-APHA/American Public Health Association (1992).

2.1.5.2 MATERIAL
a) Meios de Cultura

Os meios de cultura destinam-se ao cultivo artificial de microrganismos. Estes meios


fornecem os princpios nutritivos indispensveis do crescimento microbiano. As exigncias
nutricionais esto relacionadas a uma fonte de carbono, de energia e de sais minerais. Alguns
microrganismos tambm necessitam de outros fatores de crescimento que so substncias que
eles no podem sintetizar, tais como: vitaminas, aminocidos, etc. E ainda o pH e o grau de
umidade devem ser observados nos meios de cultura.
- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

36

Os meios de cultura usados para a colimetria de gua para consumo so:


Caldo Lactosado.
Caldo Verde Brilhante e Bile (CVBB)
Caldo E.C.

Para a identificao bioqumica das colnias suspeitas de Escherichia coli utiliza-se:


Agar EMB (Agar Eosina Azul de Metileno) plaqueamento seletivo;
Agar TSA (Agar Triptona Soja) para o isolamento das colnias;
Agar Citrato de Simmons;
Caldo VM VP (Teste do Vermelho de Metila e Voges-Proskauer);
gua Triptonada (Teste do Indol);

As solues usadas para a realizao dos testes bioqumicos:


Teste de Voges-Proskauer (- Naftol e Hidrxido de Potssio - KOH);
Teste do Indol (Reagentes de Kovacs - p Dimetilaminobenzaldedo);
Teste do Vermelho de Metila (Reagente Vermelho de Metila).
b) Equipamentos e vidrarias
Estufa bacteriolgica a 35C;
Banho-maria regulado a 45C;
Bico de Bunsen;
Ala de platina ou nquel cromo;
Frascos de coleta esterilizados;
Tubos de ensaio;
Tubos de Durham;
Pipetas esterilizadas (10mL e 1mL).

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

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37

2.1.5.3 METODOLOGIA
a) Teste Presuntivo

Visa detectar a presena de fermentadores de lactose, especialmente do grupo


coliforme. Clulas estressadas por tratamentos trmicos, congelamentos, etc., podem ser
recuperadas nessa fase.
Princpio: o teste consiste na semeadura de volumes determinados da amostra em

sries de tubos contendo Caldo Lactosado (CL), onde a lactose utilizada como fonte de
carbono. Os tubos inoculados so incubados a uma temperatura de 35 0,5C, durante
48horas, ocorrendo um enriquecimento de organismos fermentadores da lactose. A
acidificao, com a produo de gs, que evidenciado no tubo de Durhan, prova
presuntiva positiva para a presena de bactrias do grupo coliformes (Apndice A).

b) Teste Confirmativo

Consiste na transferncia de cada cultura com resultado presuntivo positivo para


tubos contendo o Caldo Verde Brilhante e bile 2% (CVBB) com o auxlio de uma ala de
platina. A incubao ser efetuada tambm a uma temperatura de 35 0,5C durante 48
horas. O meio utilizado possui dois inibidores (sais biliares e verde brilhante) do crescimento
da microbiota acompanhante dos coliformes e a lactose como o nico carboidrato. Ento, a
produo de gs, a partir da fermentao da lactose presente neste meio, prova confirmativa
para a presena de bactrias do grupo coliforme (coliformes totais) (Apndice A).

c) Determinao de Coliformes Fecais ou Termotolerantes

O teste baseia-se na transferncia de cada cultura com resultado positivo para


coliformes totais (acidificao do meio com produo de gs, aps 48 horas a 35 0,5C), no
Caldo Verde Brilhante, para tubos contendo o caldo E.C., que sero incubados durante 24
horas a 44,5 0,2C em banho-maria. O resultado ser positivo quando houver produo de
gs a partir da fermentao da lactose contida no meio (Apndice A). O Nmero Mais
Provvel de coliformes totais e fecais dado atravs da Tabela do NMP/100mL
(Apndice B).
- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

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38

d) Escherichia coli (Identificao)

Todas as culturas positivas no caldo E.C. so repicadas


para Agar EMB, com auxilio da ala de platina ou de nquel cromo,
fazendo estrias (por esgotamento). Cada tubo positivo em caldo E.C.
corresponder a uma placa de EMB, identificada, para perfeita
correspondncia.
Incubar a 35C por 24 horas.
Passado este perodo, verificar o crescimento de colnias tpicas de E. coli, isto ,
colnias de 2 a 3mm de dimetro, com brilho metlico esverdeado ou com centro escuro
abrangendo praticamente toda a colnia.

Agar EMB com colnias tpicas


de Escherichia coli

De cada placa, correspondente a cada tubo, repicar de duas a trs colnias para tubos
contendo o Agar Tripticase Soja (Agar TSA) inclinado. Incubar por 24 horas a 35 C.
Efetuar em cada cultura em Agar TSA (cepas), as seguintes provas bioqumicas:
Indol, Vermelho de Metila (VM), Voges Proskauer (VP), Citrato de Simmons. Esta srie de
testes chamada de IMVIC.
Considerar a cultura positiva para E. coli, quando forem obtidos os seguintes
resultados para o IMVIC.
Considerar positivo o tubo de caldo E.C. para E. coli, quando pelo menos uma
cultura dele proveniente for positiva no teste de IMVIC (Apndice C). A Tabela 2B mostra a
diferenciao dos coliformes em gua.

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

39

Tabela 2B. Diferenciao dos coliformes da gua.


Indol

VM

VP

Citrato de Simmons

Tipo

Escherichia coli

Escherichia coli atpica

-/+

Citrobacter

Enterobacter aerogenes

+/-

+/-

Klebsiella pneumoniae

Fonte: Jay, 2005.

Por fim, verificar na tabela o NMP (Tabela de Hoskin), correspondente aos tubos de
caldo E.C. positivos para a presena de coliformes fecais e expressar o resultado em
NMP/100 mL.
Nota: A Portaria N 518 de 25 de maro de 2004 da Agncia Nacional de Vigilncia

Sanitria (ANVISA), estabelece como padro para potabilidade de guas para consumo,
ausncia de coliformes totais e fecais.

e) Contagem Padro de Bactrias Heterotrficas

A contagem das bactrias heterotrficas na gua definida como o nmero total de


bactrias que podem crescer quando incubadas em Agar Plate Count a 37C por 48 horas.
importante que a densidade de bactrias heterotrficas seja mantida sob controle, pois
densidades muito elevadas de microrganismos na gua podem causar riscos sade dos
consumidores, pois algumas bactrias podem atuar como patgenos oportunistas e
deteriorao da qualidade da gua e alimentos, ocasionando odores e sabores desagradveis,
podendo produzir limo ou pelculas.
Alm disso, alguns desses microrganismos, quando presentes em nmero elevado,
podem impedir a deteco de coliformes.
A determinao da densidade de bactrias heterotrficas em guas um importante
instrumento auxiliar no controle bacteriolgico para:

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

40

Avaliao das condies higinicas e de proteo de poos, fontes, reservatrios,

piscinas e sistemas de distribuio de gua para consumo humano;


Avaliao da eficincia das diversas etapas de operao de estaes de tratamento

de gua na remoo de bactrias;


Estimativa da biomassa de bactrias heterotrficas, presentes em corpos de gua;
Determinao das possveis causas de deteriorao da qualidade de gua;
Avaliao das condies higinicas e da eficincia de operao de piscinas;
Avaliao das condies higinicas e de sistemas de envasamento de guas

minerais e potveis de mesa.


Dentro deste grupo de bactrias esto espcies gram-negativas, aerbias e anaerbias
facultativas pertencentes aos seguintes gneros: Pseudomonas, Aeromonas, Klebsiella,
Flavobacterium, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Acinetobacter, Proteus, Alcaligenes e
Escherichia. Alguns membros deste grupo so patgenos oportunistas, mas pouco se conhece
o efeito das altas contagens de bactrias heterotrficas na sade humana. Essas bactrias
podem ainda interferir com a deteco de coliformes nas amostras de gua.
Material:
Meio de Cultura: Plate Count Agar (Agar Padro para Contagem).
Equipamentos e vidrarias: Estufa bacteriolgica; Contador de colnias; Bico de

Busen; Placas de Petri esterilizadas; Pipetas (1mL e 2mL).

Princpio do mtodo:

A determinao da densidade de bactrias heterotrficas em uma amostra baseia-se


no princpio de que, definindo condies de nutrio, temperatura e tempo de incubao, se
houver clulas viveis na gua, que possam se desenvolver nas condies estabelecidas
haver formao de colnias, que sero visualizadas aps o perodo de incubao
determinado.

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

41

Para isso, volumes de 1mL da amostra devem ser pipetados assepticamente e


inoculados em placas de Petri com posterior adio do meio de cultura fundido Agar Plate
Count (Agar Padro para Contagem / Agar PCA) atravs da tcnica de Pour Plate (inoculao
em profundidade). Aps o perodo de incubao (35C), feita a contagem das unidades
formadoras de colnias de bactrias, com auxlio de um contador de colnia, sendo o
resultado expresso em UFC/mL.
Nota: Segundo a Portaria N 518 de 25 de maro de 2004 da Agncia Nacional de

Vigilncia Sanitria (ANVISA), o padro estabelecido para potabilidade de guas para


consumo em relao contagem de bactrias heterotrficas de 500 UFC/mL. Se ocorrer
nmero superior ao recomendado, dever ser providenciada imediata recoleta e inspeo do
local; confirmada e/ou constatada a irregularidade, devero ser tomadas providncias para sua
correo (desinfeco).
O Apndice D mostra o esquema para contagem padro de placas em bactrias
heterotrficas.
Nota: Na anlise bacteriolgica da gua, alm dos coliformes outros gneros de

bactrias so pesquisadas tais como: Pseudomonas e Enterococcus.

2.1.6 MTODO PARA DETECO DE COLIFORMES TOTAIS E ESCHERICHIA COLI USANDO


MEIOS COM ONPG E MUG

A 19a edio do Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater
(APHA/AWWA/WEF, 1995) traz descrio de um mtodo rpido para determinao de
coliformes totais e E. coli usando substratos definidos.
Este mtodo utiliza substratos hidrolisveis para a deteco simultnea de enzimas
dos coliformes totais e E. coli. Quando assim procedemos, o grupo de coliformes totais
definido como todas as bactrias possuindo a enzima -D-galactosidase, que cliva o substrato
cromognico ONPG (orto-nitrofenil--D-galactopiranosideo) resultando na liberao do
cromgeno de cor amarela, denominado ortonitrofenol.
A bactria E. coli aquela que d uma resposta positiva igual para os coliformes
totais e ainda possui a enzima -glucoronidase, a qual cliva um substrato fluorognico MUG

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

(4-metilumbeliferil

-D-glucorondio),

42

resultando

na

liberao

do

fluorgeno-4-

metilhumbeliferona que fluoresce sob a luz ultravioleta.


Estes testes podem ser usados nas provas de tubos mltiplos ou Presena/Ausncia
P/A (amostra nica de 100mL).
Procedimento:
A) Tubos mltiplos

Assepticamente adicionar 10mL da amostra de gua em cada tubo, tampar e agitar


bastante para dissolver o meio. Incubar a 35C0,5C por 24 horas.

B) Presena/ausncia (P/A)

Assepticamente adicionar o substrato enzimtico pr-pesado a 100mL da amostra de


gua num frasco de vidro no fluorescente. Em ambos os casos misturar completamente para
dissolver. Incubar a 35C0,5C por 24 horas.

Interpretao:
a) Bactrias coliformes totais

Decorridos s 24 horas de incubao, examinar os tubos ou frascos, por uma


mudana na cor. Quando o substrato ONPG, este hidrolisado pela enzima bacteriana para
dar origem ao amarelo ortonitrofenol; esta resposta cromognica uma reao positiva para
coliformes totais.
As amostras so negativas para coliformes totais se a colorao amarela no for
observada.
b) Escherichia coli

Os tubos ou frascos positivos para coliformes totais sero examinados para


fluorescncia usando lmpada de ultravioleta de longo comprimento de onda (366nm). A
presena da fluorescncia um teste positivo para E. coli. No caso do procedimento do NMP,
- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

43

calcular o valor do NMP para coliformes totais e E. coli a partir dos tubos positivos, como
feito pelo mtodo tradicional. No caso do procedimento P/A, relatar os resultados como
presente ou ausente em 100mL da amostra.
Resultados:

A verificao da fluorescncia deve ser procedida em rea com pouca luz, pois o
excesso de iluminao mascara a presena de fluorescncia. Lmpadas ultravioletas
germicidas, por serem de pequenos comprimentos de onda, no so adequadamente para este
propsito.
A enzima -glucoronidase produzida por 97% do total de cepas de E. coli. Na
famlia Enterobacteriaceae, somente E. coli e algumas espcies de Shigella sp. e Salmonella
sp. e poucas do gnero Yersinia sp. produzem aquela enzima. Como o mtodo que utiliza o
MUG, no depende da produo de gs para uma leitura positiva, ele til para detectar cepas
de E. coli anaerognicas (no produtoras de gs).

1 passo: Adicione o reagente amostra e


leve a estufa bacteriolgica por 24 horas a
uma temperatura de 35C.

2 passo: Leia os resultados:


Incolor = negativo
Amarelo = coliformes totais
Amarelo/fluorescente = E. coli

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

44

A Tabela 3B mostra dados referentes s anlises microbiolgicas para guas oriundas


de diferentes fontes.
Tabela 3B. Anlises microbiolgicas para guas de diferentes fontes.
Tipos de
gua
Poo
Torneira,
cisternas e
caixas
dgua

Tcnica

Microrganismos pesquisados

Tubos Mltiplos

Coliformes Totais e Termotolerantes


(NMP/100mL); Pseudomonas aeruginosa.
(NMP/100mL) e Contagem Padro em Placas
(Agar PCA) (UFC/mL)

Tubos Mltiplos

Coliformes Totais e Termotolerantes


(NMP/100mL) e Contagem Padro em Placas
(Agar PCA) (UFC/mL).

Tubos Mltiplos
Piscina

Mineral

gua de
praia

OBS: Adicionar 0,1mL de


soluo 1,8% de
Tiossulfato de Sdio
(Na2S2O3) aos frascos de
coleta antes de autoclavar.

Usar uma srie de 10 tubos


de Lactosado Duplo,
inoculando 10mL da
amostra em cada tubo.
Diluir as amostras em gua
marinha sinttica e usar
Tcnica de Tubos
Mltiplos.

Coliformes Totais e Termotolerantes


(NMP/100mL), Contagem Padro em Placas
(Agar PCA) (UFC/mL), Contagem de
Staphylococcus aureus (UFC/mL),
Pseudomonas aeruginosa.(NMP/100mL)
Coliformes Totais e Termotolerantes
(NMP/100mL); Pseudomonas aeruginosa.
(NMP/100mL), Contagem Padro em Placas
(Agar PCA) (UFC/mL), Enterococcus sp.
(UFC/mL) e Clostridium sp. (UFC/mL)
Coliformes Termotolerantes (NMP/100mL),
Contagem e identificao de Escherichia coli;
Enterococcus sp. (NMP/100mL)

3 ENUMERAO DO NMP/100ML DE ENTEROCOCCUS SP.

As

bactrias

do

gnero

Enterococcus

so

classificadas primariamente como cocos Gram positivos


entricos, catalase negativa. So encontradas no meio
ambiente em diversos locais como: solo, alimentos, gua,
plantas, animais, pssaros e insetos.
Enterococcus sp.

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

45

Em humanos e em outros animais, os enterococos fazem parte da flora bacteriana


normal do trato gastrintestinal. As espcies mais comumente encontradas em humanos so:
Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium.
Material:

Meios de Cultura: Caldo azida dextrose para o cultivo e o Agar m-Enterococcus para
o plaqueamento seletivo. O restante do material, equipamentos e vidrarias so idnticos ao
usado para a determinao de coliformes totais.
Mtodos:

Prova Presuntiva:
Homogeneizar a amostra de gua com a agitao do frasco;
Inocular volumes de 10mL em uma srie de trs tubos contando o caldo azida em

concentrao dupla; em seguida inocular volumes de 1mL e 0,1mL em duas


sries de trs tubos contando o caldo azida em concentrao simples
respectivamente (Tcnica dos tubos mltiplos).
Incubar os tubos inoculados a 35C por 24 horas. Observar se h turvao nos

tubos. Caso negativo, fazer nova leitura com 48 horas.


Prova Confirmativa:
Submeter todos os tubos de caldo azida dextrose com turvao a prova de

confirmao.
Estriar com auxlio de uma ala de platina uma poro do crescimento de cada

tubo positivo sobre uma placa de Petri contendo o meio seletivo Agar mEnterococcus.
Incubar as placas invertidas a 35C por 24

horas. Colnias pretas amarronzadas com


halos marrons confirmam a presena de
enterococos fecais.

Agar m-Enterococcus - colnias de Enterococcus sp.


- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

46

Aps o perodo de incubao, a partir dos tubos positivos (turvos), sero feitas estrias
com auxlio de uma ala de platina (tcnica de esgotamento) em placas contendo Agar mEnterococcus (teste confirmativo). Colnias pequenas de cor marrom so tpicas de
Enterococcus sp.
O Apndice E mostra o esquema para pesquisa de Enterococcus sp. em gua
(NMP/100mL). Usa-se a Tabela do NMP para o clculo do NMP/100mL de Enterococcus
(Apndice B).

4 TESTE PARA A PRESENA DE PSEUDOMONAS SP.

um gnero de microrganismos pertencentes famlia Pseudomonadaceae, que


compreende mais de 100 espcies. So bastonetes curtos e Gram-negativos, autctones de
ambientes aquticos, so mveis, aerbios estritos e no formadoras de esporos. Podem ser
encontradas em vrios ambientes diferentes, tais
como solo, gua, plantas e tecido de animais.
Ocorre em freqncia baixa tambm na pele,
garganta e fezes das pessoas sadias. Sobrevive a
temperaturas que variam entre 4C e 42C. Em
cultura produz um pigmento esverdeado.
Pseudomonas sp.

A espcie Pseudomonas aeruginosa tem sido a responsvel pela maioria dos casos
de doena infecciosa no homem. Trata-se de um microrganismo oportunista, isto , causa
doena somente em condies especiais, quando o organismo humano est debilitado por
algum motivo, como, por exemplo, processos cirrgicos e queimaduras. Nesses casos, esse
microrganismo pode causar bacteremias bem severas, infeces urinrias e respiratrias,
pneumonias, meningites, endocardites, e diversos outros tipos de infeco. Alm disso,
Pseudomonas aeruginosa, bem como outras espcies de Pseudomonas, apresentam grande
importncia para a indstria de alimentos, pois so microrganismos causadores de
deteriorao (produo do muco superficial caracterstico de carnes e produtos crneos
deteriorados).
Usar Tcnica dos tubos mltiplos para a determinao do NMP/100mL.
- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

47

Material:

Meios de Cultura: Caldo Asparagina, Caldo Acetamida, Agar Asparagina, Agar


Cetrimide.
Procedimento:

Teste Presuntivo:
Inocular 3 tubos com 10mL, 3 com 1mL e 3 com 0,1mL da amostra, em caldo

asparagina em concentrao dupla para 10mL da amostra e concentrao simples


para volumes de 1mL ou menos.Incubar os tubos a 35C por 48 horas.
Aps o perodo de incubao, examine os tubos num quarto escuro sob luz

ultravioleta de comprimento de onda longo (no germicida). A presena de


pigmento fluorescente esverdeado constitui um teste presuntivo positivo para
Pseudomonas.
Confirmar os tubos positivos, inoculando 0,1mL da cultura em caldo acetamida.

Uma reao positiva confirmatria dada pelo desenvolvimento do alto pH


indicado pela cor prpura ou rosa intenso aps 24-48 horas de incubao a 35C.
Computar e registrar o NMP pela Tabela do NMP (Apndice B).

O Apndice F mostra o esquema para pesquisa de Pseudomonas sp. em gua


(NMP/100mL).

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

48

5 BALNEABILIDADE DAS PRAIAS

O programa de monitoramento da balneabilidade das praias deve atender as


especificaes da Resoluo N 375 de 17 de maro de 2005 do Conselho Nacional do
Meio Ambiente (CONAMA), que define critrios para a classificao das guas destinadas a

balneabilidade (recreao de contato primrio).


O monitoramento deve ser realizado nos pontos de
coleta, distribudos ao longo da faixa de praias litornea das
cidades, onde so coletadas amostras de gua com freqncia
semanal

para

posterior

anlise

bacteriolgica.

No

estabelecimento dos critrios para a escolha dos pontos ou


estaes, deve-se considerar entre outros: proximidade do
desge de rios, riachos e galerias pluviais, densidade
populacional e freqncia dos banhistas.
Toda semana deve ser fornecido o Boletim de Balneabilidade das Praias, com dados
de colimetria. Os dados obtidos durante certo perodo de tempo, servem para avaliar a
evoluo temporal da qualidade das guas das praias.
A Resoluo N 357 (CONAMA), estabelece critrios para a classificao das guas
doces, salobras e salinas destinadas balneabilidade (recreao de contato primrio) tero sua
condio avaliada nas categorias prprias e imprprias.
As guas consideradas prprias podero ser subdivididas nas seguintes categorias:
a) Excelente: quando em 80% ou mais de um conjunto de amostras obtidas em cada
uma das cinco semanas anteriores, coletadas no mesmo local, houver, no mximo,
250 coliformes fecais (termotolerantes) ou 200 Escherichia coli ou 25

Enterococcus por 100mL.


b) Muito Boa: quando em 80% ou mais de um conjunto de amostras obtidas em
cada uma das cinco semanas anteriores, coletadas no mesmo local, houver, no
mximo, 500 coliformes fecais (termotolerantes) ou 400 Escherichia coli ou 50
Enterococcus por 100mL.
c) Satisfatria: quando em 80% ou mais de um conjunto de amostras obtidas em
cada uma das cinco semanas anteriores, coletadas no mesmo local, houver, no
- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA

49

mximo, 1000 coliformes fecais (termotolerantes) ou 800 Escherichia coli ou 100


Enterococcus por 100mL.
Nota: Os padres referentes aos enterococos aplicam-se somente s marinhas.

As guas sero consideradas imprprias quando for verificada uma das seguintes
ocorrncias:
a) No atendendo aos critrios estabelecidos para as guas prprias;
b) Valor obtido na ultima amostragem for superior a 2500 coliformes fecais
(termotolerantes) ou 2000 de Escherichia coli ou 400 Enterococcus por 100mL.
c) Incidncia elevada ou anormal, na regio, de enfermidades transmissveis por via
hdrica, indicada pelas autoridades sanitrias.
d) Presena de resduos ou despejos, slidos ou lquidos, inclusive esgotos sanitrios,
leos, graxas e outras substncias capazes de oferecer riscos sade ou tornar
desagradvel a recreao.
e) O pH< 6,0 ou pH>9,0 (guas doces), exceo das condies naturais.
f) Florao de algas ou outros organismos at que se comprove que no oferecem
riscos sade humana.
Nota: Nas praias ou balnerios sistematicamente imprprios, recomenda-se a

pesquisa de organismos patognicos.


O Apndice G mostra o esquema para determinao do NMP de Coliformes a 45C
em guas de praia (balneabilidade).

- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -

50

APNDICES

51

Apndice A. Enumerao (NMP/100mL) de coliformes totais e a 45C.

10ml

0,1ml

1ml

Caldo
Lactosado

ESTUFA
35C/24-48h

2 aladas

2 aladas
Teste Confirmativo
coliformes totais
(Caldo VB)

Teste Confirmativo
coliformes a 45C
(Caldo E.C.)

BANHO-MARIA
45C/24h

Gs (+)
Presena de
coliformes a 45C

Gs (-)
Ausncia de
coliformes a 45C

TESTE BIOQUMICO
Teste API-20E

ESTUFA
35C/24-48h

Gs (+)
Presena de
coliformes totais

Gs (-)
Ausncia de
coliformes totais

52

Apndice B. Tabela do Nmero Mais Provvel (NMP), para sries de trs tubos.

Nmero de tubos positivas nas diluies

Nmero de tubos positivos nas diluies

10 mL

1 mL

0,1 mL

NMP/100mL

10 mL

1 mL

0,1 mL

NMP/100mL

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1

0
1
0
0
1
1
1
1
2
2
2
2
3
3
3
3
0
0
0
0
1
1
1
1
2
2
2
2
3
3
3
3

0
0
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3

3
3
6
9
3
6.1
9.2
12
6.2
9.3
12
16
9.4
13
16
19
3.6
7.2
11
15
7.3
11
15
19
11
15
20
24
16
20
24
29

2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3

0
0
0
0
1
1
1
1
2
2
2
2
3
3
3
3
0
0
0
0
1
1
1
1
2
2
2
2
3
3
3
3

0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3

9.1
14
20
26
15
20
27
34
21
28
35
42
29
36
44
53
23
39
64
95
43
75
120
160
93
150
210
290
240
460
1100
2400

Fonte: American Public Health Association (APHA, 1992).

53

Apndice C . Identificao de Escherichia coli

Caldo E.C., presena de gs


(+) para coliformes a 45C.

Agar Eosina Azul de Metileno (Agar EMB)


com crescimento de E. coli.

Isolamento em Agar Tripcase Soja


(Agar TSA)

Srie Bioqumica

INDOL

E. coli (+)

54

Apndice D. Esquema para contagem padro em placas de bactrias heterotrficas.

AM O STR A
(gua)

1m l

1m l

Plate C ount Agar


(Agar PC A)

IN C U B A O
37C /48H

55

Apndice E. Esquema para pesquisa de Enterococcus sp. em gua (NMP/100mL).

TESTE PRESUNTIVO

Amostra de gua

10ml

1ml

0,1ml
Caldo Azida (concent.
simples e dupla)

(D)

(S)

(S)

ESTUFA 35C/48 horas

TESTE CONFIRMATIVO

10ml

1ml

0,1ml
Tubos (+)
(Turvos)

Agar m-Enterococcus

ESTUFA 35C/24 horas

Identificao
Bioqumica
Isolamento das colnias
tpicas

56

Apndice F. Esquema para pesquisa de Pseudomonas sp. em gua (NMP/100mL)

Amostra de gua

10ml

1ml

0,1ml
Teste presuntivo
Caldo Asparagina

Conc. ( D )

Conc. ( S )

Conc. ( S )

Teste presuntivo positivo (presena de uma fluorescncia


esverdeada na luz ultravioleta)

Teste confirmativo
Caldo Acetamida

ESTUFA
37C/48 horas

Teste confirmativo positivo em caldo acetamida para a presena de


Pseudomonas aeruginosa (cor prpura ou rosa intenso)

57

Apndice G. Enumerao de Coliformes a 45C em guas de Praia (Balneabilidade).

AMOSTRA

10 mL

90 mL gua Marinha Sinttica

10mL

0,1mL

1mL

ESTUFA a 35C
24/48 horas
Tubos positivos turvao com produo de
gs no tubo de Durham
2 aladas
Caldo
E.C.

Coliformes a 45C

Banho-Maria
45C/24 horas

Gs (-)
Ausncia de
coliformes
fecais

Gs (+)
Presena de
coliformes
fecais

58

REFERNCIAS

AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination


of Water and Wastewater. 18 ed. Washington/D.C: APHA/AWWA/WEF.1992.

JAY, J.M. Microbiologia de alimentos. 6.ed. Porto Alegre: ArtMed, 2005.


MACDO, J.A.B. guas & guas. So Paulo: Varela, 2001.
SILVA, N.; NETO, R.C.; JUNQUEIRA,V.C.A.; SILVEIRA, N.F.A. Manual de mtodos de
anlise microbiolgica da gua. Campinas: ITAL/Ncleo de Microbiologia, 2000.

SOARES, J.B.; MAIA, A.C.F. gua: microbiologia e tratamento. Fortaleza: EUFC, 1999.

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