Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
ANLISES FSICO-QUMICAS E
BACTERIOLGICAS DA GUA
SO LUS - MA
2005
LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA
Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento
adenild@bol.com.br
LABORATRIO DE BROMATOLOGIA
Prof. Dr. Victor Elias Mouchrek Filho
victo@ufma.br
PARTE A: ................................................................................................................................................4
ANLISES FSICO-QUMICAS DA GUA ................................................................................................5
1 GENERALIDADES ..................................................................................................................................5
2 IMPORTNCIA DA ANLISE DE GUA ................................................................................................10
3 PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS ....................................................................................................11
3.1 TEMPERATURA ................................................................................................................................11
3.2 COR ..................................................................................................................................................11
3.3 ODOR E SABOR.................................................................................................................................12
3.4 TURBIDEZ ........................................................................................................................................13
3.5 CONDUTIVIDADE ELTRICA ...........................................................................................................14
3.6 DUREZA............................................................................................................................................15
3.7 ALCALINIDADE ................................................................................................................................16
3.8 PH.....................................................................................................................................................16
3.9 CLORO RESIDUAL LIVRE.................................................................................................................17
3.10 CLORETO .......................................................................................................................................17
4 AMOSTRAGEM ....................................................................................................................................18
4.1 QUANTIDADE DE AMOSTRA ............................................................................................................18
4.2 TOMADA DA AMOSTRA....................................................................................................................18
5 LEGISLAO .......................................................................................................................................19
6 ANLISES FSICO-QUMICAS ..............................................................................................................19
6.1 DETERMINAO DA ALCALINIDADE T.A., T.A.T.......................................................................19
6.2 DETERMINAO DE CA2+ ................................................................................................................22
6.3 DETERMINAO DE MG2+ ...............................................................................................................23
6.4 DUREZA TOTAL ...............................................................................................................................23
6.5 DETERMINAO DE CLORETOS......................................................................................................24
6.6 DETERMINAO DE PH...................................................................................................................25
6.7 DETERMINAO DA CONDUTIVIDADE ELTRICA .........................................................................25
6.8 DETERMINAO DA COR ................................................................................................................26
6.9 DETERMINAO DA TURBIDEZ ......................................................................................................26
6.10 DETERMINAO DE CLORO RESIDUAL ........................................................................................26
PARTE B ................................................................................................................................................27
ANLISE BACTERIOLGICA DE GUAS...............................................................................................28
1. CONSIDERAES INICIAIS ................................................................................................................28
2 ANLISES BACTERIOLGICAS ...........................................................................................................30
2.1 COLIMETRIA (POTABILIDADE).......................................................................................................30
2.1.1 BACTRIAS DO GRUPO COLIFORME ...............................................................................................30
2.1.2 COLETAS DE AMOSTRAS PARA ANLISES BACTERIOLGICAS DA GUA .......................................30
2.1.3 PROCEDIMENTO DE COLETA ..........................................................................................................31
2.1.4 TCNICAS DE COLETA DE AMOSTRA ..............................................................................................32
2.1.5 TCNICA DOS TUBOS MLTIPLOS (NMP/100ML).........................................................................35
2.1.5.1 CONSIDERAES GERAIS ...........................................................................................................35
2.1.5.2 MATERIAL ..................................................................................................................................35
2.1.5.3 METODOLOGIA ...........................................................................................................................37
2.1.6 MTODO PARA DETECO DE COLIFORMES TOTAIS E ESCHERICHIA COLI USANDO MEIOS COM
ONPG E MUG............................................................................................................................................41
PARTE A:
1 GENERALIDADES
Visto pelo lado de fora, o planeta deveria se
chamar gua. Com algumas ilhas de terra firme, cerca
de 2/3 de sua superfcie so dominados pelos vastos
oceanos.
Os plos e suas vizinhanas esto cobertos pelas
guas slidas das gigantescas geleiras. A pequena
quantidade de gua restante divide-se entre a atmosfera, o
subsolo, os rios e os lagos.
Estimam-se em cerca de 1,35 milhes de quilmetros cbicos o volume total de gua
na Terra.
Geleiras - 1,979%
Oceanos - 97,50%
Subterrneas - 0,514%
Atmosfera - 0,001%
esto
localizados
na
Regio
Amaznica.
Os 30% restantes distribuem-se
desigualmente pelo Pas, para atender a
93% da populao.
10
11
3 PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS
3.1 TEMPERATURA
Variaes de temperatura so parte do regime climtico normal, e corpos de gua
naturais apresentam variaes sazonais e diurnas. A temperatura superficial influenciada por
fatores tais como latitude, altitude, estao do ano, perodo do dia, taxa de fluxo e
profundidade. A elevao da temperatura em um corpo dgua geralmente provocada por
despejos industriais.
As guas tm uma amplitude trmica pequena, variando de 1 a 2C em relao ao
ambiente.
3.2 COR
A cor de uma gua conseqncia de substncias dissolvidas. Quando pura, e em
grandes volumes, a gua azulada.
Quando rica em ferro, arroxeada. Quando rica em mangans, negra e, quando
rica em cidos hmicos, amarelada.
A medida da cor de uma gua feita pela comparao com solues conhecidas de
platina-cobalto ou com discos de vidro corados calibrados com a soluo de platina-cobalto.
Uma unidade de cor corresponde quela produzida por 1mg/L de platina, na forma
de on cloroplatinado Unidade Hanzen (mg Pt Co/L).
- Prof. Dr. Victor Elias Mouchrek Filho -
12
Especial cuidado deve ser tomado na anotao do pH em que foi realizada a medida,
pois sua intensidade aumenta com o pH.
Da mesma forma a cor influenciada por matrias slidas em suspenso (turbidez),
que devem ser eliminadas antes da medida.
Para guas relativamente lmpidas a determinao pode ser feita sem a preocupao
com a turbidez. Neste caso a cor obtida referida como sendo aparente.
Para ser potvel uma gua no deve apresentar nenhuma cor de considervel
intensidade. Segundo a Portaria 518, de 25 de maro de 2004 ANVISA MS o ndice
mximo permitido deve ser 15 mg Pt Co/L ou 15 UH.
13
Sensaes
Salgado
Ligeiramente salgado
Amargo e salgado
Fortemente amargo
Ligeiramente amargo
Amargo e doce
Gs Carbnico (CO2)
Adstringente e picante
3.4 TURBIDEZ
a medida da dificuldade de um feixe de luz atravessar uma certa quantidade de
gua.
A turbidez causada por matrias slidas em suspenso (argila, colides, matria
orgnica etc.).
A turbidez medida atravs do turbidmetro de Jackson, comparando-se o
espalhamento de um feixe de luz ao passar pela amostra com o espalhamento de um feixe de
igual intensidade ao passar por uma suspenso padro.
Quanto maior o espalhamento maior ser a turbidez.
Os valores so expressos em Unidade de Turbidez (UT).
A cor da gua interfere negativamente na medida da turbidez devido sua
propriedade de absorver luz.
14
15
3.6 DUREZA
A dureza definida como a dificuldade de uma gua em dissolver (fazer espuma)
sabo pelo efeito do clcio, magnsio e outros elementos como Fe, Mn, Cu, Ba etc.
guas duras so inconvenientes porque o sabo no limpa eficientemente,
aumentando seu consumo, e deixando uma pelcula insolvel sobre a pele, pias, banheiras e
azulejos do banheiro.
A dureza pode ser expressa como dureza temporria, permanente e total.
Dureza temporria ou de carbonatos
devida aos ons de clcio e de magnsio que sob aquecimento se combinam com
ons bicarbonato e carbonatos, podendo ser eliminada por fervura.
Em caldeiras e tubulaes por onde passa gua quente (chuveiro eltrico por
exemplo) os sais formados devido dureza temporria se precipitam formando crostas e
criando uma srie de problemas, como o entupimento.
Dureza permanente
devida aos ons de clcio e magnsio que se combinam com sulfato, cloretos,
nitratos e outros, dando origem a compostos solveis que no podem ser retirados pelo
aquecimento.
Dureza total
a soma da dureza temporria com a permanente. A dureza expressa em
miligrama por litro (mg/L) ou miliequivalente por litro (meq/L) de CaCO3 (carbonato de
clcio) e segundo a Portaria 518, de 25 de maro de 2004 ANVISA - MS o limite mximo
de dureza total em gua potvel de 500 mg/L.
16
3.7 ALCALINIDADE
a medida total das substncias presentes na gua capaz de neutralizarem cidos.
Em outras palavras, a quantidade de substncias presentes numa gua e que atuam
como tampo.
Se numa gua quimicamente pura (pH = 7) for adicionada pequena quantidade de um
cido fraco seu pH mudar instantaneamente.
Numa gua com certa alcalinidade a adio de uma pequena quantidade de cido
fraco no provocar a elevao de seu pH, porque os ons presentes iro neutralizar o cido.
Em guas a alcalinidade devida principalmente aos carbonatos e bicarbonatos.
Alcalinidade total a soma da alcalinidade produzida por todos estes ons presentes
numa gua. guas que percolam rochas calcrias (calcita = CaCO3) geralmente possuem
alcalinidade elevada.
A alcalinidade de uma gua expressa em mg/L de CaCO3 e deve apresentar iseno
de alcalinidade custica.
3.8 PH
a medida da concentrao de ons H+ na gua.
O balano dos ons hidrognio e hidrxido (OH-) determinam quo cida ou bsica
ela .
Na gua quimicamente pura os ons H+ esto em equilbrio com os ons OH- e seu
pH neutro, ou seja, igual a 7.
Os principais fatores que determinam o pH da gua so o gs carbnico dissolvido e
a alcalinidade.
Segundo a Portaria 518, de 25 de maro de 2004 ANVISA - MS os limites
permitidos variam entre 6,0 a 9,5.
17
3.10 CLORETO
O cloreto o nion Cl- que se apresenta nas guas subterrneas atravs de solos e
rochas.
Nas guas superficiais so fontes importantes as descargas de esgotos sanitrios,
sendo que cada pessoa expele atravs da urina cerca 6 g de cloreto por dia, o que faz com que
os esgotos apresentem concentraes de cloreto que ultrapassam a 15 mg/L.
Diversos so os efluentes industriais que apresentam elevadas concentraes de
cloreto como os da indstria do petrleo, algumas indstrias farmacuticas, curtumes etc.
Nas regies costeiras, atravs da chamada intruso da lngua salina, so encontradas
guas com nveis altos de cloreto. Nas guas tratadas, a adio de cloro puro ou em soluo
leva a uma elevao do nvel de cloreto, resultante das reaes de dissociao do cloro na
gua.
Para as guas de abastecimento pblico, a concentrao de cloreto constitui-se em
padro de potabilidade. Segundo a Portaria 518, de 25 de maro de 2004 ANVISA - MS o
limite mximo permissvel para cloreto na gua de 250 mg/L.
O cloreto provoca sabor salgado na gua, sendo o cloreto de sdio o mais
restritivo por provocar sabor em concentraes da ordem de 250 mg/L, valor este que
tomado como padro de potabilidade.
18
4 AMOSTRAGEM
4.1 QUANTIDADE DE AMOSTRA
A amostragem da gua para anlise fsico-qumica feita coletando-se 1,5-2,0 litros
da gua numa garrafa plstica ou de vidro, nova ou que s tenha sido utilizada com gua.
19
5 LEGISLAO
Foi publicada pelo Ministrio da Sade a nova Portaria n 518 de 25 de maro de
2004 que estabelece os procedimentos e responsabilidades relativos ao controle e vigilncia
da qualidade da gua para consumo humano e seu padro de potabilidade, e d outras
providncias, e a Resoluo RDC n 54 de 15 de junho de 2000, que dispe sobre o
Regulamento Tcnico para Fixao de Identidade e Qualidade de gua Mineral Natural e
gua Natural.
6 ANLISES FSICO-QUMICAS
6.1 DETERMINAO DA ALCALINIDADE T.A., T.A.T.
O conhecimento das alcalinidades permite determinar a quantidade de OH, CO32 e
HCO3 contidos em uma amostra de gua. Em geral no existem hidrxidos, restando os
carbonatos que aparecem com pouca freqncia e o bicarbonato sempre existindo. Sabe-se
que no pode coexistir OH e HCO3.
O ttulo alcalimtrico T.A. efetuado em presena de fenolftalena, correspondendo
quantidade de hidrxidos e carbonatos; o ttulo alcalimtrico total T.A.T. efetuado em
presena de metil orange e corresponde quantidade de hidrxidos, carbonatos e
bicarbonatos.
Processo analtico:
1. Pipetar 100 mL da amostra para um erlenmeyer de 250 mL.
2. Juntar 2 gotas de fenolftalena indicador. Se no aparecer colorao rsea, o T.A.
nulo, isto , no existe OH nem CO32, neste caso omite-se o terceiro passo deste
processo analtico.
- Prof. Dr. Victor Elias Mouchrek Filho -
20
1 Caso: T = F
CO32 = zero
HCO3 = zero
OH = 2 x F x 3,398 mg L-1 em CaCO3.
2 Caso: F > T
HCO3 = zero
OH = 2 (2 x F T) x 3,398 mg L-1 em CaCO3.
CO32 = 4 (T F) x 5,995 mg L-1 em CaCO3.
3 Caso: F = T
OH = zero
HCO3 = zero
CO32 = 2 x T x 5,995 mg L-1 em CaCO3.
4 Caso: F < T
OH = zero
CO32 = 4 x F x 5,995 mg L-1 em CO3Ca
HCO3 = 2 (T 2 x F) x 12,2 mg L-1 em CO3Ca.
- Prof. Dr. Victor Elias Mouchrek Filho -
21
5 Caso: F = 0
OH = zero
CO32 = zero
HCO3 = 2 x T x 12,2 mg L-1 em CaCO3.
22
Preparo:
Indicador slido Tritura-se, mistura-se em um grau de porcelana 1g do indicador
com 99% de ClNa cristalizado para anlise.
Indicador lquido O indicador no estvel em soluo aquosa, em caso de
necessidade, pode-se dissolver 0,2% em lcool. Entretanto, uma maneira mais estvel a que
se segue: 0,2g do corante em uma mistura de 15mL de trietanolamina pura Merck e 5mL de
C2H5OH absoluto para anlise.
A virada desse indicador tambm de vermelho vinho para azul lmpido.
Para os indicadores lquidos utiliza-se 6 a 7 gotas, enquanto que para os slidos se
usa pitadas.
Soluo tampo pH = 10
Preparo:
A 200 mL de gua destilada se dissolve 54 g de NH4Cl; a esta soluo se agrega 350
mL de amonaco lquido d = 0,910 e se completa para um litro de gua destilada.
Bx400xf
ppm Ca 2 +
mL da amostra
Bx1000
ppm CaCO 3
mL da amostra
23
Mg 2 + =
(A - B)x1000
ppm CaCO 3
mL da amostra
Ax1000xf
ppm
mL da amostra
24
Processo analtico:
1. Pipetar 50 mL da amostra de gua para uma cpsula de cor branca. Se a gua for
muito colorida, juntar um pouco de Al(OH)3, filtrar e lavar com gua destilada.
2. Colocar aproximadamente a mesma quantidade de gua destilada em uma segunda
cpsula, para servir de comparador de cor.
3. Juntar a cada cpsula 1 mL do indicador cromato de potssio.
4. Titular lentamente com soluo padro de AgNO3 agitando sempre com um
basto, at ligeira colorao vermelha (comparar com a cpsula contendo gua
destilada), anotar o volume gasto com A mL.
5. Se o gasto A mL de AgNO3 ultrapassar a 8 mL, deve-se utilizar menor quantidade
da amostra de gua e depois diluir a 50 mL com gua destilada.
25
6.6 DETERMINAO DE PH
A determinao realizada em um pH-metro. Retira-se a proteo do eletrodo de
vidro, lava-se o mesmo com gua destilada. Em seguida calibra-se o pH-metro da seguinte
forma:
1.000 .000
V (lido)
Y=
0,935
X
26
PARTE B
28
1. CONSIDERAES INICIAIS
A
29
Mas existem ainda outros tipos de contaminao relacionada com a gua a presena
de protozorios causadores de infeces parasitrias no homem como a amebase (Entamoeba
hystolitica), giardase (Giardia lamblia) e a balantidase (Balantidium coli).
Outro fator importante da gua a transmisso de algumas doenas endmicas como
a malria, dengue e febre amarela (a Tabela 1A mostra algumas doenas veiculadas pela
gua). A gua um ambiente propcio para a evoluo do ciclo de vetores responsveis por
essas doenas. A gua o maior veculo de contaminao humana, portanto, a gua
distribuda populao deve ser de boa qualidade com todas as caractersticas determinadas
pela legislao vigente (Portaria n. 36/MS/90, do Ministrio de Sade).
Tabela 1B. Algumas doenas de transmisso hdrica.
Organismos
BACTRIAS
VRUS
PROTOZORIOS
Doenas
Salmonella Typhi
Febre Tifide
Salmonella sp.
Salmonelose
Shigella sp.
Gastrenterites
Vibrio cholerae
Clera
Lagionella pneumophila
Leptpspira
Leptospirose (contato)
Enterovirus
Poliomelite, gatroenterites
Rotavrus
Gastroenterites
Vrus da hepatite A
Hepatite A
Adenovrus
Doenas respiratrias,
conjuntivites.
Entamoeba histolytica
Amebase
Girdia Lamblia
Giardse
Cryptosporidium
Criptpsporidiose
Ascaris lumbricides
Verminoses
Enterobius vermicularis
HELMINTOS
Strongyloides stercolaris
Trichuris trichiura
Schistosoma mansoni
Esquistossomose
30
2 ANLISES BACTERIOLGICAS
2.1 COLIMETRIA (POTABILIDADE)
2.1.1 BACTRIAS DO GRUPO COLIFORME
31
b) Identificao:
Para amostras de gua tratada (piscina, etc.), deve-se adicionar ao frasco de coleta,
antes de sua esterilizao 0,1mL de uma soluo a 1,8% de Tiossulfato de sdio para cada
100mL da amostra, para neutralizar a ao do cloro residual.
Antes das coletas das amostras, verifique se o ponto de coleta recebe gua
diretamente do sistema de distribuio e no de caixas, reservatrios, cisternas, etc. A torneira
no deve conter filtros.
Inicialmente, abre-se a torneira e deixa-se escorrer a gua durante 3 a 5 minutos, um
tempo suficiente para eliminar impurezas e guas acumuladas na canalizao. Na desinfeco
da torneira, utiliza-se uma soluo de hipoclorito de sdio ou lcool a 70% para eliminar
qualquer contaminao externa. No caso da desinfeco com hipoclorito, o mesmo deve ser
completamente removido antes da coleta.
Abre-se a torneira a meia seco para que o fluxo seja pequeno e no haja respingos.
Remove-se a tampa do frasco com todos os cuidados e assepsia, tomando precaues para
evitar a contaminao da amostra pelos dedos, luvas ou outros materiais.
Segura-se o frasco verticalmente prximo base e efetua-se o enchimento deixando
um espao vazio de aproximadamente 2,5 5 cm do topo, para posterior homogeneizao da
amostra antes de iniciar a anlise. Fecha-se imediatamente o frasco aps a coleta, fixando-se
bem a tampa; identifica-se adequadamente a amostra no frasco ou na ficha de coleta. As
amostras devem ser acondicionadas em caixas isotrmicas contendo gelo (resfriamento
temporrio) e encaminhadas ao laboratrio. O tempo entre a coleta e entrega da mostra no
laboratrio no deve exceder 12 horas.
- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -
32
33
a) gua de torneira
34
b) gua de poo
c) Mananciais superficiais
35
2.1.5.2 MATERIAL
a) Meios de Cultura
36
37
2.1.5.3 METODOLOGIA
a) Teste Presuntivo
sries de tubos contendo Caldo Lactosado (CL), onde a lactose utilizada como fonte de
carbono. Os tubos inoculados so incubados a uma temperatura de 35 0,5C, durante
48horas, ocorrendo um enriquecimento de organismos fermentadores da lactose. A
acidificao, com a produo de gs, que evidenciado no tubo de Durhan, prova
presuntiva positiva para a presena de bactrias do grupo coliformes (Apndice A).
b) Teste Confirmativo
38
De cada placa, correspondente a cada tubo, repicar de duas a trs colnias para tubos
contendo o Agar Tripticase Soja (Agar TSA) inclinado. Incubar por 24 horas a 35 C.
Efetuar em cada cultura em Agar TSA (cepas), as seguintes provas bioqumicas:
Indol, Vermelho de Metila (VM), Voges Proskauer (VP), Citrato de Simmons. Esta srie de
testes chamada de IMVIC.
Considerar a cultura positiva para E. coli, quando forem obtidos os seguintes
resultados para o IMVIC.
Considerar positivo o tubo de caldo E.C. para E. coli, quando pelo menos uma
cultura dele proveniente for positiva no teste de IMVIC (Apndice C). A Tabela 2B mostra a
diferenciao dos coliformes em gua.
39
VM
VP
Citrato de Simmons
Tipo
Escherichia coli
-/+
Citrobacter
Enterobacter aerogenes
+/-
+/-
Klebsiella pneumoniae
Por fim, verificar na tabela o NMP (Tabela de Hoskin), correspondente aos tubos de
caldo E.C. positivos para a presena de coliformes fecais e expressar o resultado em
NMP/100 mL.
Nota: A Portaria N 518 de 25 de maro de 2004 da Agncia Nacional de Vigilncia
Sanitria (ANVISA), estabelece como padro para potabilidade de guas para consumo,
ausncia de coliformes totais e fecais.
40
Princpio do mtodo:
41
A 19a edio do Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater
(APHA/AWWA/WEF, 1995) traz descrio de um mtodo rpido para determinao de
coliformes totais e E. coli usando substratos definidos.
Este mtodo utiliza substratos hidrolisveis para a deteco simultnea de enzimas
dos coliformes totais e E. coli. Quando assim procedemos, o grupo de coliformes totais
definido como todas as bactrias possuindo a enzima -D-galactosidase, que cliva o substrato
cromognico ONPG (orto-nitrofenil--D-galactopiranosideo) resultando na liberao do
cromgeno de cor amarela, denominado ortonitrofenol.
A bactria E. coli aquela que d uma resposta positiva igual para os coliformes
totais e ainda possui a enzima -glucoronidase, a qual cliva um substrato fluorognico MUG
(4-metilumbeliferil
-D-glucorondio),
42
resultando
na
liberao
do
fluorgeno-4-
B) Presena/ausncia (P/A)
Interpretao:
a) Bactrias coliformes totais
43
calcular o valor do NMP para coliformes totais e E. coli a partir dos tubos positivos, como
feito pelo mtodo tradicional. No caso do procedimento P/A, relatar os resultados como
presente ou ausente em 100mL da amostra.
Resultados:
A verificao da fluorescncia deve ser procedida em rea com pouca luz, pois o
excesso de iluminao mascara a presena de fluorescncia. Lmpadas ultravioletas
germicidas, por serem de pequenos comprimentos de onda, no so adequadamente para este
propsito.
A enzima -glucoronidase produzida por 97% do total de cepas de E. coli. Na
famlia Enterobacteriaceae, somente E. coli e algumas espcies de Shigella sp. e Salmonella
sp. e poucas do gnero Yersinia sp. produzem aquela enzima. Como o mtodo que utiliza o
MUG, no depende da produo de gs para uma leitura positiva, ele til para detectar cepas
de E. coli anaerognicas (no produtoras de gs).
44
Tcnica
Microrganismos pesquisados
Tubos Mltiplos
Tubos Mltiplos
Tubos Mltiplos
Piscina
Mineral
gua de
praia
As
bactrias
do
gnero
Enterococcus
so
45
Meios de Cultura: Caldo azida dextrose para o cultivo e o Agar m-Enterococcus para
o plaqueamento seletivo. O restante do material, equipamentos e vidrarias so idnticos ao
usado para a determinao de coliformes totais.
Mtodos:
Prova Presuntiva:
Homogeneizar a amostra de gua com a agitao do frasco;
Inocular volumes de 10mL em uma srie de trs tubos contando o caldo azida em
confirmao.
Estriar com auxlio de uma ala de platina uma poro do crescimento de cada
tubo positivo sobre uma placa de Petri contendo o meio seletivo Agar mEnterococcus.
Incubar as placas invertidas a 35C por 24
46
Aps o perodo de incubao, a partir dos tubos positivos (turvos), sero feitas estrias
com auxlio de uma ala de platina (tcnica de esgotamento) em placas contendo Agar mEnterococcus (teste confirmativo). Colnias pequenas de cor marrom so tpicas de
Enterococcus sp.
O Apndice E mostra o esquema para pesquisa de Enterococcus sp. em gua
(NMP/100mL). Usa-se a Tabela do NMP para o clculo do NMP/100mL de Enterococcus
(Apndice B).
A espcie Pseudomonas aeruginosa tem sido a responsvel pela maioria dos casos
de doena infecciosa no homem. Trata-se de um microrganismo oportunista, isto , causa
doena somente em condies especiais, quando o organismo humano est debilitado por
algum motivo, como, por exemplo, processos cirrgicos e queimaduras. Nesses casos, esse
microrganismo pode causar bacteremias bem severas, infeces urinrias e respiratrias,
pneumonias, meningites, endocardites, e diversos outros tipos de infeco. Alm disso,
Pseudomonas aeruginosa, bem como outras espcies de Pseudomonas, apresentam grande
importncia para a indstria de alimentos, pois so microrganismos causadores de
deteriorao (produo do muco superficial caracterstico de carnes e produtos crneos
deteriorados).
Usar Tcnica dos tubos mltiplos para a determinao do NMP/100mL.
- Profa. Dra. Adenilde Ribeiro Nascimento -
47
Material:
Teste Presuntivo:
Inocular 3 tubos com 10mL, 3 com 1mL e 3 com 0,1mL da amostra, em caldo
48
para
posterior
anlise
bacteriolgica.
No
49
As guas sero consideradas imprprias quando for verificada uma das seguintes
ocorrncias:
a) No atendendo aos critrios estabelecidos para as guas prprias;
b) Valor obtido na ultima amostragem for superior a 2500 coliformes fecais
(termotolerantes) ou 2000 de Escherichia coli ou 400 Enterococcus por 100mL.
c) Incidncia elevada ou anormal, na regio, de enfermidades transmissveis por via
hdrica, indicada pelas autoridades sanitrias.
d) Presena de resduos ou despejos, slidos ou lquidos, inclusive esgotos sanitrios,
leos, graxas e outras substncias capazes de oferecer riscos sade ou tornar
desagradvel a recreao.
e) O pH< 6,0 ou pH>9,0 (guas doces), exceo das condies naturais.
f) Florao de algas ou outros organismos at que se comprove que no oferecem
riscos sade humana.
Nota: Nas praias ou balnerios sistematicamente imprprios, recomenda-se a
50
APNDICES
51
10ml
0,1ml
1ml
Caldo
Lactosado
ESTUFA
35C/24-48h
2 aladas
2 aladas
Teste Confirmativo
coliformes totais
(Caldo VB)
Teste Confirmativo
coliformes a 45C
(Caldo E.C.)
BANHO-MARIA
45C/24h
Gs (+)
Presena de
coliformes a 45C
Gs (-)
Ausncia de
coliformes a 45C
TESTE BIOQUMICO
Teste API-20E
ESTUFA
35C/24-48h
Gs (+)
Presena de
coliformes totais
Gs (-)
Ausncia de
coliformes totais
52
Apndice B. Tabela do Nmero Mais Provvel (NMP), para sries de trs tubos.
10 mL
1 mL
0,1 mL
NMP/100mL
10 mL
1 mL
0,1 mL
NMP/100mL
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
0
0
1
1
1
1
2
2
2
2
3
3
3
3
0
0
0
0
1
1
1
1
2
2
2
2
3
3
3
3
0
0
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
3
3
6
9
3
6.1
9.2
12
6.2
9.3
12
16
9.4
13
16
19
3.6
7.2
11
15
7.3
11
15
19
11
15
20
24
16
20
24
29
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
0
0
0
0
1
1
1
1
2
2
2
2
3
3
3
3
0
0
0
0
1
1
1
1
2
2
2
2
3
3
3
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
9.1
14
20
26
15
20
27
34
21
28
35
42
29
36
44
53
23
39
64
95
43
75
120
160
93
150
210
290
240
460
1100
2400
53
Srie Bioqumica
INDOL
E. coli (+)
54
AM O STR A
(gua)
1m l
1m l
IN C U B A O
37C /48H
55
TESTE PRESUNTIVO
Amostra de gua
10ml
1ml
0,1ml
Caldo Azida (concent.
simples e dupla)
(D)
(S)
(S)
TESTE CONFIRMATIVO
10ml
1ml
0,1ml
Tubos (+)
(Turvos)
Agar m-Enterococcus
Identificao
Bioqumica
Isolamento das colnias
tpicas
56
Amostra de gua
10ml
1ml
0,1ml
Teste presuntivo
Caldo Asparagina
Conc. ( D )
Conc. ( S )
Conc. ( S )
Teste confirmativo
Caldo Acetamida
ESTUFA
37C/48 horas
57
AMOSTRA
10 mL
10mL
0,1mL
1mL
ESTUFA a 35C
24/48 horas
Tubos positivos turvao com produo de
gs no tubo de Durham
2 aladas
Caldo
E.C.
Coliformes a 45C
Banho-Maria
45C/24 horas
Gs (-)
Ausncia de
coliformes
fecais
Gs (+)
Presena de
coliformes
fecais
58
REFERNCIAS
SOARES, J.B.; MAIA, A.C.F. gua: microbiologia e tratamento. Fortaleza: EUFC, 1999.