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O que so Anticorpos mono clonais

Os anticorpos monoclonais foram descobertos por Csar Milstein e Georges Khler.


No ano de 1975 foi publicadona revista nature . Tal de descoberta foi de tamanha importncia
que os mesmos foram condecorados com o premio Nobel de medicina no ano de 1984.
Sua descoberta consiste em produzir clones de clulas que geram anticorpos com
especificidades nicas ao fundir as clulas normais formadas de anticorpos com uma linhagem
tumoral de clula B apropriada (chamadas de hibridoma).
Estes clones podem ser desenvolvidos na forma asciticas em camundongos, quando
ttulos bastante considerveis de anticorpo monoclonal podem ser alcanado, mas, tendo em
mente a necessidade de evitar o uso de animais sempre q possvel, a programao da cultura
em grande escala deve ser preferida.
Lembrese que, em um bom anti-soro, cerca de 90% das molculas de Ig apresentam
pouca ou nenhuma avidez pelo antgeno. Um contraste evidente e fornecido pelos anticorpos
monoclonais, onde todas as molculas produzidas por um determinado hibridoma so
idnticas: elas apresentam a mesma classe de Ig e o mesmo altipo, a mesma regio varivel,
estrutura e ideotipo, afinidade e especificidade por um determinado epitopo.
O problema e muito reduzido com uma preparao de anticorpo monoclonal, posto que
toda Ig e anticorpo propiciando, assim, uma relao sinal:rudo muito superior. Por serem
direcionados no sentido de epitopos nicos no antgeno, os anticorpos monoclonais
frequentemente exibem alta especificidade em relao as suas baixas reatividades cruzadas
com outros antgenos.
Uma vantagem evidente do anticorpo monoclonal como reagente e que ele fornece o
material padronizado nico, para que todos os laboratrios do mundo utilizem um suprimento
interminvel, caso a imortalidade e a pureza da linhagem celular seja mantidas; os anti-soros
estimulados em diferentes animais, por outro lado, podem ser muitos diferentes entre si.
As utilizaes dos anticorpos monoclonais so realmente imensas e compreendem :

Imunoensaio;

Diagnostico de neoplasias

Tipagem tissula

Sorotipagem de micro-organismo

Separao de tipos celulares individuais com marcadores de superfcie


especficos (Ex: subpopulaoes de linfcitos)

Neutralizao teraputica de citocinas inflamatrias

Estas e muitas outras reas foram transformadas por tecnologia do hibridoma.

Anticorpos catalticos
Um desenvolvimento particularmente interessante com um enorme potencial e o
reconhecimento de que um anticorpo monoclonal para um anlogo estvel do estado de
transio de uma determinada reao pode atuar como uma enzima ao catalisar aquela
reao.

Anticorpos monoclonais humanos podem ser elaborados

Os anticorpos monoclonais de camundongos injetados em seres humanos para fins


teraputicos so espantosamente imunognicos, e os anticorpos humanos anti anticorpos de
camundongos ( HAMA) assim formados constituem um inconveniente lamentvel, acelerando a
depurao do anticorpo monoclonal do sangue e, possivelmente, gerando reaes de
hipersensibilidade. Eles tambm impedem que o anticorpo de anticorpo de camundongo
alcance seu alvo e, em alguns casos, bloqueiam sua ligao do antgeno.
Com tudo , em geral, a lgica aponta para remoo das pores xenogenticas ( no
prprias) do anti corpo monoclonal e sua substituio por estrutura de Ig humana usando a
tecnologia do DNA Recombinante.
Uma conduta mais refinada consiste em enxertar as seis regies determinantes de
complementaridade (CDR) de um anticorpo monoclonal de roedor com alta afinidade em uma
estrutura de Ig inteiramente humana, sem perda da reatividade especifica.
No obstante as dificuldades de encontra bons parceiros de fuso, foram estabelecidos
grandes nmeros de anticorpos monoclonais humanos. Uma restrio adicional surge porque
as clulas B do sangue perifrico, que so as nicas clulas b prontamente disponveis em
seres humanos, no so normalmente consideradas como uma boa fonte de clulas produtoras
de anticorpos.

Ainda existe um obstculo pelo fato de que mesmo os anticorpos humanos podem
provocar respostas antiidiotipo; estas podem precisar ser evitadas atravs do uso de
anticorpos, produzidos por engenharia gentica, que comportam diferentes idiotipos para
injees subsequentes. Seria ainda mas satisfatrio se os receptores prospectivos pudesse ser
inicialmente levados a tolera o idiotipo, talvez atravs da co-administrao do anticorpo
teraputico juntamente com uma no-depletor de anti- CD4.
Muitos anticorpos monoclonais humanos esto aguardando a autorizao para uso
clinico.

Produo de anticorpos monoclonal.


Preparao de anticorpos monoclonais, contem apenas um anticorpo derivado de uma
nica clula B clonada, consequentemente eles so altamente especficos para um nico tipo
de etipico. Eles podem ser aplicados por exemplo nos diagnsticos microbiolgico e no
tratamento de cncer.
Na produo de um anticorpo monoclonal, o primeiro passo e injetar o antgeno
contendo o epitopo especifico de interesse, em um animal. Cada clula B produz um nico tipo
de anticorpo. As clulas B so isoladas do bao e, em seguida, misturada com clulas de
mieloma. Um tipo de clula cancerosa que se multiplica continuamente. Com a adio de
polietileno glicol, os dois tipos de clulas se fundem, formando clulas chamadas de
hibridomas.
A mistura de clulas B, clulas de mielona, e hibridomas so cultivadas sobre
condies que permitem a multiplicao apenas das clulas de hibridomas. Cada clula de
hibridoma produz um nico tipo de anticorpo, contra um nico etipico.
As clulas de hibridomas, ento , so separadas em selas em uma placa de titulao, e
so testadas quanto a capacidade de produzir o anticorpo desejado. A clula de hibidroma, que
produz o anticorpo monoclonal desejado e cultivado. Os anticorpos monoclonais so isolados
e purificados.

Anticorpos policlonais
O primeiro passo para a produo de um anticorpo a purificao do antignio para o qual
queremos produzir um anticorpo. Isto pode ser realizado atravs de tcnicas de purificao
como a cromatografia e a eletroforese.
Segue-se a imunizao do animal com o antignio de interesse. Este passo realizado
injetando no animal (coelho, cabra, cavalo, etc.) o antignio juntamente com um conjunto de
substncias que ativam o sistema imunolgico, denominados de coadjuvantes. Aps alguns

dias, o sangue do animal colhido e atravs de centrifugao separado o plasma sanguneo


(soro), dos restantes elementos celulares. no plasma que se encontram os anticorpos.
Este soro pode ser utilizado logo aps a centrifugao (soro total ou whole serum), pois a
grande maioria dos anticorpos ali presentes so os anticorpos sintetizados contra o antignio
injetado. Alm dos anticorpos, este soro total tambm contm protenas.
Para a obteno de um soro mais puro, importante separar a frao das imunoglobulinas
especficas das protenas (soro de frao de imunoglobulinas ou Ig fraction). Este grau
de purificao geralmente realizado atravs de cromatografia por afinidade, na qual se usa
a a protena A ou o prprio antignio como fase estacionria numa coluna de afinidade, sendo
que o anticorpo purificado libertado da coluna atravs do uso de uma soluo com pH 2,5.