Manual Técnico de Leishmanioses Caninas

MANUAL TCNICO
Leishmanioses
Caninas
Manual Tcnico Leishmanioses Caninas

Leishmaniose Tegumentar Americana e Leishmaniose Visceral
2015
CORPO TCNICO
Alceu Bisetto Jnior
Aline Kuhn Sbruzzi Pasquali
Eliane Maria Pozzolo
Italmar Teodorico Navarro
Luciana Chiyo
Regina Mitsuka Bregan
Renata Cristina Ferreira Dias
Ricardo Friedrich
Roberta Lemos Freire
Vanete Thomaz Soccol
APOIO
9 Regional de Sade
PREFCIO
A leishmaniose uma importante doena de impacto na sade
pblica e de notificao obrigatria. Tendo em vista o recente primeiro caso
de leishmaniose visceral humana no Paran e a constatao de ces com
sorologia positiva em territrio paranaense, necessrio que os Mdicos
Veterinrios estejam atentos para o diagnstico.
O Conselho Federal e os Conselhos Regionais de Medicina Veterinria
vm conquistando o reconhecimento da sociedade pelo desempenho do
Mdico Veterinrio como agente promotor de sade.
As Resolues n 287/98 e n 218/97 do Ministrio da Sade incluem
o Mdico Veterinrio como profissional legalmente reconhecido como
atuante na promoo da sade. H muitos anos os Mdicos Veterinrios
compem os quadros de funcionrios das Vigilncias Epidemiolgicas
municipais, estaduais e federal. Em 2011, o Ministrio da Sade publicou
a Portaria n 2.488 incluindo o Mdico Veterinrio no Ncleo de Apoio
Sade da Famlia (NASF) com o objetivo de ampliar a abrangncia e o
escopo das aes de ateno bsica sade. O Mdico Veterinrio atua na
promoo e na proteo da sade no mbito individual e coletivo, ajudando
na preveno de agravos, diagnstico, tratamento, reabilitao, reduo de
danos e na manuteno da sade.
Alguns exemplos de aes desenvolvidas pelos profissionais que
compem a equipe do NASF: desenvolvimento de projetos de sade com
base na vulnerabilidade dos indivduos frente a animais e demais riscos
ambientais no territrio, avaliao dos fatores de risco sade relativos
interao entre humanos, animais e o meio ambiente no domiclio e
reas circunvizinhas, intervenes no territrio e na sade de grupos
populacionais e da coletividade, preveno e diagnstico situacional de
riscos de doenas transmissveis por animais vertebrados ou invertebrados,
controle de doenas de carter antropozoontico, identificao de condies
socioambientais propcias proliferao de vetores de doenas, pragas
urbanas e animais sinantrpicos, aes de preveno e promoo da sade,
construo conjunta de projetos teraputicos, educao permanente.

Como a composio do NASF definida por gestores municipais a
partir dos critrios de prioridade conforme os dados epidemiolgicos e as
necessidades locais, o Estado do Paran, por meio do Sistema CFMV/CRMVs,
Sindicatos, Associaes e do prprio Mdico Veterinrio, principalmente
em nvel de Conselhos Municipais de Sade, deve sugerir a incluso de mais
Mdicos Veterinrios no NASF.
Alm do Mdico Veterinrio atuante nas Vigilncias Epidemiolgicas
e no NASF, importantssimo que o Clnico de pequenos animais saiba
identificar a doena (leishmaniose visceral e tegumentar), para notificla e, observando o Cdigo de tica do Mdico Veterinrio, bem como os
princpios bsicos de sade pblica, legislao de proteo aos animais e
normas do CFMV, promover a eutansia dos casos devidamente justificados,
enquanto tal medida se fizer necessria no Brasil.
Esta cartilha foi cuidadosamente desenvolvida por uma equipe
tcnica, com a coordenao da Professora Doutora Vanete Thomaz Soccol,
preocupada em fornecer o maior detalhamento sobre a leishmaniose
tegumentar e visceral. So abordados temas como agente etiolgico,
ciclo, transmisso, patogenia, sinais clnicos, diagnstico e eutansia, de
acordo com a bibliografia mais atualizada e de acordo com as pesquisas
epidemiolgicas regionais. Fotografias e modelos de fichas foram
disponibilizados para facilitar a rotina clnica dos Mdicos Veterinrios
Paranaenses. Desta maneira, espero que todos os Mdicos Veterinrios e
outros Profissionais interessados encontrem as informaes que necessitam
para o melhor desempenho de seus trabalhos e para a melhoria do status
sanitrio da leishmaniose no Estado do Paran.
Nossos agradecimentos a toda a equipe envolvida no
desenvolvimento deste trabalho.
Md.Vet. Eliel de Freitas
CRMV-PR n 00826
Presidente CRMV-PR
SUMRIO
LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA (LTA)........................................... 9
Agente etiolgico..................................................................................... 9
Espcies de Leishmania: seus vetores, reservatrios e distribuio
geogrfica.............................................................................................. 10
Transmisso.......................................................................................... 12
Ciclo evolutivo........................................................................................ 12
Vetor...................................................................................................... 13
Caractersticas morfolgicas do vetor................................................... 13
Manifestaes clnicas da LTA............................................................... 14
Diagnstico ........................................................................................... 15
Escarificao........................................................................... 16
Impresso por aposio (imprint)............................................ 17
Bipsia para exame histopatolgico, cultura do parasito ou PCR
(Reao em Cadeia Polimerase)............................................ 17
Puno aspirativa.................................................................... 18
Inoculao em animais de laboratrio.................................... 18
Molecular................................................................................. 18
Tratamento............................................................................................. 19
LEISHMANIOSE VISCERAL (LV)......................................................................... 21

Agente etiolgico................................................................................... 22
Transmisso.......................................................................................... 23
Patogenia............................................................................................... 23
Manifestaes clnicas........................................................................... 24
Diagnstico............................................................................................ 26
Impresso por aposio (Imprint)........................................... 28
Puno aspirativa por agulha fina (PAAF).............................. 28

(Reao em Cadeia Polimerase)............................................ 28
Molecular................................................................................. 29
Tratamento............................................................................................. 29
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS...................................................................... 31
ANEXOS............................................................................................................. 36
Ficha Epidemiolgica para Leishmaniose Visceral................................ 36
Ficha Epidemiolgica para Leishmaniose Tegumentar Americana....... 37
Colheita de Material para Diagnstico de Leishmaniose....................... 38
Tcnica de Escarificao e Colorao:................................... 41
Colorao de May-Grunwald-Giemsa..................................... 42
Manual Tcnico - Leishmaniose Canina
LEISHMANIOSE TEGUMENTAR
AMERICANA (LTA)
A leishmaniose tegumentar americana (LTA) uma zoonose com
distribuio mundial. O parasito transmitido ao hospedeiro vertebrado
(animais selvagens, candeos domsticos e homem) pela picada do
inseto vetor. Os vetores so fmeas de Lutzomyia spp., pertencentes
famlia Psychodidae, subfamlia Flebotominae. Mais de 40 espcies de
flebotomneos esto presentes no Estado do Paran, com predominncia
de Lutzomyia neivai e Lu. whitmani.
Nas reas endmicas onde a LTA ocorre em humanos, com
frequncia os ces domsticos podem estar infectados. A participao de
animais domsticos no ciclo epidemiolgico da LTA conhecida desde o
sculo XX.
A primeira notificao de LTA no Estado do Paran foi feita por
Rabelo em 1917. Na dcada de 40, Pessoa & Barreto notificaram vrios casos
da doena na regio norte do Paran. Miranda et al. nos anos 50 assinala
casos na regio do Vale do Rio Ribeira. Portanto, a LTA endmica no Paran
e vem sendo notificada anualmente. No final dos anos 80, nos anos 9394 e 2001 apresentou brotes epidmicos. Na regio central do Estado a
doena tem notificao mais recente. Portanto so trs as principais reas
de transmisso: Vale do Rio Ribeira, norte-noroeste do Estado do Paran e
regio central.
Agente etiolgico
Os agentes etiolgicos pertencem famlia Trypanossomatidae,
gnero Leishmania Ross, 1903. No Brasil 10 espcies j foram descritas
sendo que sete podem afetar o homem e animais (L. (V.) braziliensis, L. (L.)
9
amazonensis, L. (V.) guyanensis, L. (V.) lainsoni, L. (V.) shawi, L. (V.) naiffi, L.

(L.) infantum) e trs apenas animais (L. enriettii, L. deanei, L. forattini).
O parasito intracelular obrigatrio nos hospedeiros vertebrados e
nos vetores esto no intestino, portanto so dimrficos e heteroxenos;
Forma promastigota (flagelada): encontrada no tubo
digestivo do inseto vetor ou em meios de cultura (NNN, CCS)
(Fig. 01);
Forma amastigota (aflagelada): presente nas clulas
do sistema monoctico fagocitrio (SMF) dos hospedeiros
vertebrados (fig. 02).
Fig. 01: Forma promastigota de

Leishmania sp.
Fonte: www.ufrgs.br
Fig. 02: Forma amastigota de Leishmania sp.

Fonte: www.ufrgs.br
Espcies de Leishmania: seus vetores,

reservatrios e distribuio geogrca
Aqui sero apresentadas apenas as trs espcies que possuem mais
ampla distribuio geogrfica e com maior nmero de casos registrados.
Leishmania (Vianna) braziliensis

Distribuio geogrfica: possui ampla distribuio, indo do sul do
10
Par ao nordeste do Brasil, atingindo tambm o centro e o sul do pas. Na

Amaznia, a infeco usualmente encontrada em reas de terra firme.
Reservatrio: co, raposa, equino, mula, roedores domsticos ou
sinantrpicos e outros presentes no peri-domiclio;
Vetores: Lutzomyia whitmani, Lu.intermedia, Lu. pessoai, Lu.
migonei, Lu. wellcomei. A espcie vetora pode ser diferente dependendo da
distribuio geogrfica dos flebotomneos.
Leishmania (Leishmania) amazonensis

Distribuio geogrfica: florestas primrias e secundrias da regio
Amaznica, principalmente em reas de igap e floresta tipo vrzea. Sua
presena amplia-se para o nordeste (Bahia), sudeste (Minas Gerais e So
Paulo) e centro-oeste (Gois).
Reservatrio: roedores selvagens (rato-soi - Proechymis, alm de
Oryzomys, que s vezes apresentam parasito na pele sem leses cutneas).
Tem sido observada tambm em marsupiais.
Vetores: Lutzomyia flaviscutellata, Lu. olmecanociva e Lu. reducta.
Leishmania (Viannia) guyanensis

Distribuio geogrfica: Limitada ao norte da bacia amaznica
(Amap, Roraima, Amazonas e Par), estendendo-se pelas Guianas,
encontrada principalmente em florestas de terra firme (reas que no
alagam no perodo de chuvas).
Reservatrio: Bicho-preguia (Choloepus didactilus), tamandu
(Tamandu tetradactyla), marsupiais e roedores. A infeco animal
geralmente inaparente (verdadeiros reservatrios), com parasitos
encontrados na pele e vsceras.
Vetores: Lutzomyia umbratilis, Lu. anduzei.
11
Transmisso
Ocorre pela picada de fmeas de flebotomneos infectadas com
promastigotas. A presena do vetor essencial para a disseminao do
parasito. No ocorre transmisso do parasito de hospedeiro vertebrado
para hospedeiro vertebrado.
Ciclo evolutivo
A fmea de flebotomneo se infecta ao realizar a hematofagia em
um reservatrio (mamferos) infectado, ingerindo a forma amastigota.
No intestino do inseto se transforma em promastigota, multiplicandose por diviso binria simples.
Por fim ocorre a migrao para a probscida e pode ser inoculada
na pele do prximo hospedeiro vertebrado, quando do repasto sanguneo.
Aps a inoculao os parasitos so fagocitados e assumem a forma
amastigota, iniciando novos ciclos de multiplicao (Fig. 03).
Na pele dos hospedeiros
vertebrados o vetor realiza o
repasto sanguneo e inocula
promastigotas
Diviso no trato digestivo e
migrao para a prosbscide
As promastigotas
so fagocitadas por
macrfagos
As promastigotas se
transformam em amastigotas
no interior dos macrfagos
Amastigotas se transformam em
promastigotas no trato digestivo
As amastigotas se multiplicam por

diviso binria nas clulas (incluindo
macrfagos) de vrios tecidos
Estgio de diagnstico
Estgio infectante
Fig. 03: Ciclo evolutivo da LTA.

Fonte: Adaptado de CDC.
12
O vetor realiza o repasto

sanguneo (ingere macrfagos
infectados com amastigotas)
Vetor
Os vetores de Leishmania sp. so flebotomneos (Fig. 04), conhecidos
popularmente como: mosquito-palha, cangalhinha, flebtomo, arrepiado,
assadura, asa da palha, birigui, orelha de veado e tatura.
Diferentemente de outros vetores que se desenvolvem em gua,
estes se desenvolvem em solo mido, mas no molhados, ou em detritos
ricos em matria orgnica em decomposio e com pouca luminosidade.
Possuem hbitos noturnos, iniciando suas atividades aps o
crepsculo at ao amanhecer. Durante o dia vivem escondidos em buracos
ou troncos de rvores, nas casas, nos estbulos, canis, pocilgas, frestas,
fendas de paredes, lixo, entre outros (Fig. 05). Apresentam voo em ziguezague.
Fig. 04: Flebotomneo fmea adulta ingurgitada.

Fonte: Ministrio da Sade
Fig. 05: Local propcio para desenvolvimento do vetor.

Fonte: Italmar Teodorico Navarro
Caractersticas morfolgicas do vetor

Ambos os sexos so de cor castanho-clara ou cor de palha, corpo
piloso, cabea refletida sob o trax arqueado, olhos grandes, pretos, afastados,
palpos nos cinco artculos e antenas com 16 artculos. Asas so hialinas,
13
grandes, lanceoladas, pilosas, em posio ereta. Pernas so compridas. A

extremidade posterior do abdmen bem diferenciada entre machos e
fmeas (em machos bifurcada e nas fmeas a extremidade levemente
arredondada). Os adultos medem de 2 a 3mm de comprimento. Existem
vrias espcies de flebotomneos, de diferentes gneros (Psychodopygus,
Lutzomyia), que transmitem o parasito. Abaixo so descritas as espcies de
Leishmania e seus respectivos vetores.
Tabela 1 - Espcies de Leishmania e seus respectivos vetores.
Gnero e Espcie
Vetor
Leishmania
Lu. whitmani
L. (V.) braziliensis
Ps. welcomei
Lu. neivai
Lu. intermedia
L. (L.) amazonensis
Lu. flaviscutellata
L. (V.) guyanensis
Lu. umbratilis
L. (V.) lainsoni
Lu. ubiquitalis
Ps. ayrozai
L. (V.) naiffi
Ps. paraensis
Ps. squamiventris
L. (V.) shawi
Lu. whitmani
L. (V.) deanei
Lu. furcate
Manifestaes clnicas da LTA

Na LTA h o aparecimento de pequena leso eritemato-papulosa
no local da picada do vetor, onde ocorre a multiplicao do protozorio
no interior dos macrfagos. Posteriormente forma-se um ndulo que d
origem lcera. A leso possui formato arredondado, com bordas elevadas
e infiltradas, podendo ser nica ou mltipla, dependendo do nmero de
14
picadas (Fig. 06).

Alguns animais podem apresentar ndulos com aspecto tumoral na
pele ou mucosas. As leses geralmente so de difcil cicatrizao. Estas no
so pruriginosas nem doloridas, e em ces se apresentam principalmente
em regies como saco escrotal, focinho (Fig. 07), boca, prepcio, e demais
reas rarefeitas ou ausentes de pelos, cuja exposio da pele ao vetor
maior.
Fig. 06: lcera clssica de LTA em orelha

Foto: Rafael Andr Ferreira Dias
Fig. 07: Ferida de LTA em processo de cicatrizao,

regio de focinho.
Foto: Italmar Teodorico Navarro
Diagnstico
Clnico
Avaliar caractersticas das leses de pele (localizada, nica,
mltipla);
lceras com bordas elevadas em moldura;
Fundo granuloso com ou sem exsudao;
lceras indolores;
No cordo linftico podem se desenvolver ndulos que
ulceram, lembrando esporotricoses;
15
Podem ser observadas ppulas na periferia das leses.
Epidemiolgico
Avaliar se:
Animal proveniente de rea endmica;
Se o animal visitou reas endmicas;
Verificar se o caso autctone.
Sorolgico
O teste recomendado pelo Ministrio da Sade (MS) para triagem
no diagnstico de LTA o Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA).
Para confirmao do diagnstico sorolgico deve ser feito um segundo
exame que o MS recomenda a reao de imunofluorescncia indireta (RIFI).
SOROLOGIA NEGATIVA NO DESCARTA A INFECO!

O exame parasitolgico o padro ouro
Parasitolgico
O exame parasitolgico direto o procedimento de primeira escolha,
por ser mais rpido, menor custo, fcil execuo e ser o exame de certeza.
Para a pesquisa direta so utilizados os seguintes procedimentos:
Escarificao
Antes da colheita de material, deve-se fazer uma antissepsia com
gua e sabo (Fig.08). A colheita de material pode ser realiza aps anestesia
local (Fig. 09), na borda interna da leso ulcerada recente, sem secreo
16
purulenta, ou na superfcie da leso no ulcerada, utilizando um estilete

descartvel, lmina de bisturi ou palito de madeira, com extremidade em
bisel, previamente esterilizados.
Aps a colheita, realiza-se a distenso do material em lmina (limpa
previamente com lcool). Na medida do possvel, deve-se colher material
abundante para aumentar a probabilidade de confirmao de diagnstico.
Aps a confeco da lmina a mesma dever ser fixada em metanol por cinco
minutos e posteriormente encaminhada para laboratrio de referncia para
Fig. 08: Antissepsia da leso

Fonte: Rafael Andr Ferreira Dias
Fig. 09: Anestesia local na borda da leso

Fonte: Rafael Andr Ferreira Dias
colorao da lmina e pesquisa do parasito.

Impresso por aposio (imprint)
O fragmento de tecido obtido em bipsia deve ser comprimido
sobre uma lmina de vidro. Aps fixao e colorao com corante especfico
para protozorios a lmina ser observada microscopia ptica (400x).
(Reao em Cadeia Polimerase)
A biopsia pode ser realizada com punch de 4mm de dimetro ou em
cunha, com o uso de bisturi.
A histopatologia mostra que o sitio principal de reao a
17
derme. Os parasitos, quando presentes, so encontrados em vacolos

intracitoplasmticos dos macrfagos ou nos espaos intercelulares, ou
isolados.
O material obtido por biopsia poder tambm ser colocado em meio
de cultura (NNN, CCS) para multiplicao dos parasitos e facilitar a leitura ou
ainda ser macerado e inoculado em animais de laboratrio.
Puno aspirativa
Pode ser realizada na borda interna da leso, utilizando uma seringa
de 5ml e agulha 25x8 mm, com 3ml de soluo salina estril com antibitico
(Penicilina G potssica 25.000 U + estreptomicina 100 g/ml). O material
colhido por puno poder ser utilizado para esfregao, inoculao em meio
de cultivo (NNN, CCS) ou em animais de laboratrio. As lminas devem ser
fixadas em metanol para envio ao laboratrio de referncia, onde ser
corada e avaliada a microscopia ptica para pesquisa do parasito.
Inoculao em animais de laboratrio
A inoculao em animais de laboratrio possvel, mas geralmente
usada apenas em pesquisa. O animal de escolha o hamster (Mesocricetus
auratus) para L. braziliensis e Balb C para L. amazonensis, e os locais de
preferncia so as extremidades, principalmente na parte superior das
patas posteriores. O inculo deve ser obtido a partir de uma suspenso
homogeneizada do material de bipsia em soluo salina estril. As leses
no hamster se desenvolvem tardiamente (a partir de um ms).
Molecular
A pesquisa de DNA do parasito Leishmania pela tcnica de PCR
(Reao em Cadeia da Polimerase) amplamente utilizada para verificar a
presena ou ausncia do DNA do parasita tendo a vantagem de diferenciar
18
as espcies de Leishmania. Para isso necessrio usar primers marcadores

especficos para cada espcie.
Encaminhamento do material
O MATERIAL COLHIDO DEVE SER ENCAMINHADO PARA
UM DOS LABORATRIOS CENTRAIS ESTADUAIS (LACEN) OU
UNIVERSIDADES CONVENIADAS.
Diagnstico diferencial
Vrios sinais clnicos da LTA podem estar presentes em outras
enfermidades, sendo necessrio o diagnstico diferencial. As principais
patologias que podem ser confundidas com LTA so: linfoma, leucemia,
doenas infecciosas, dermatite, oulicose, escabiose, foliculite, dermatite
alrgica, pododermatites, no desgaste das unhas, desnutrio, erlichiose,
endoparasitos, ectoparasitos, doenas cardacas e intestinais crnicas,
trauma.
Tratamento
No h, at o momento, nenhum tratamento eficaz para LTA em
ces, visto que o animal permanece reservatrio do parasito.
Deve ser realizada a eutansia para reduzir riscos para
humanos
A eutansia deve ser realizada conforme a Resoluo CFMV n
1000/2002, a qual dispe sobre procedimentos e mtodos de eutansia em
animais.
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O mdico veterinrio que realizar a eutansia deve elaborar um

Termo de Consentimento do Proprietrio para procedimento de eutansia,
conforme a Resoluo CFMV n 1071/2014. Caso o proprietrio se recuse
a realizar a eutansia, o mdico veterinrio deve lavrar um Termo de
Responsabilidade por Recusa Eutansia. O termo deve deixar claro que o
proprietrio est ciente dos riscos sade pblica ocasionados pela recusa
da eutansia e que tem conhecimento das sanes legais que lhe podem
ser aplicadas.
Aps a eutansia, o mdico veterinrio deve lavrar o Atestado de
bito do Animal, conforme a Resoluo CFMV n 844/2006, a qual dispe
sobre o atestado de bito animal.
Conforme o Cdigo de tica do Mdico Veterinrio um dever do
mdico veterinrio realizar a eutansia nos casos devidamente justificados,
observando os princpios bsicos de sade pblica (inciso XIII, artigo 6 da
Resoluo CFMV n 722/2002).
Quando o animal for diagnosticado com leishmaniose, o
caso deve ser notificado aos rgos pblicos citados, visto
que esta uma doena de notificao compulsria (ver
anexos):

SECRETARIA ESTADUAL DE SADE
Telefone CIEVS: 0800-643-8484
http://formsus.datasus.gov.br/site/formulario.php?id_
aplicacao=5376

SERVIO DISQUE NOTIFICA
Telefone disque notifica: 0800-644-6645
E-mail: notifica@saude.gov.br
Site: www.saude.gov.br/svs
20
LEISHMANIOSE VISCERAL (LV)

Nomes populares da LV: Calazar e Barriga dgua.
A LV tem ampla distribuio geogrfica, ocorrendo na sia, Europa,
Oriente Mdio, frica e Amricas.
O primeiro registro do caso humano da doena no Brasil ocorreu
em 1913, quando Migone, no Paraguai, descreveu o caso em material de
necropsia de paciente oriundo de Boa Esperana, Mato Grosso. A partir
de um estudo realizado para o diagnstico e distribuio da febre amarela
no Brasil, encontrou-se 41 casos positivos para Leishmania sp., sendo
identificados em lminas de viscerotomias praticadas post-mortem em
indivduos oriundos das regies norte e nordeste do Brasil.
A seguir, Lu. longipalpis foi incriminado como vetor e foram
descobertos os primeiros casos da infeco em ces.
Desde ento a transmisso da doena vem sendo descrita em vrios
estados da Federao, principalmente nas regies nordeste (nos anos 80)
e nos anos 90 nas regies sudeste e centro-oeste. Na regio sul do pas a
LV foi registrada primeiramente no Rio Grande do Sul, com registros dos
primeiros casos canino e humano em 2008 e 2009, respectivamente. Em
Santa Catarina foi registrado somente LV canina.
No estado do Paran a Leishmaniose Visceral Canina foi registrada
em 2013 e o primeiro caso de LV em humano foi confirmado em julho de
2015.
Fig. 10- Distribuio especial de LV no Brasil de 1983 a 2010. Fonte: SINAN SVS
21
Agente etiolgico
Leishmania sp.:
Ordem Kinetoplastida
Famlia Trypanosomatidae
Parasito intracelular obrigatrio e heteroxeno
Formas: amastigota e promastigota.
Hospedeiros vertebrados: ces e humanos
Hospedeiros invertebrados: Lutzomyia longipalpis
Leishmania infantum (syn. L. chagasi)

Duas espcies de Leishmania pertencentes ao complexo Leishmania
(L.) donovani so causadoras de doena visceral no mundo. Leishmania (L.)
donovani o agente etiolgico presente na sia e L. (L.) infantum encontrada
em pases da regio Mediterrnea e nas Amricas. Os reservatrios da LV
so os ces (Canis familiaris) e raposas (Dusycionvetulus) e o vetor Lu.
longipalpis (Fig. 11).
Fig. 11: Flebotomneo

Foto: GeniltonVieira/IOC/Fiocruz
22
Transmisso
O vetor (flebotomneo) se infecta ao realizar a hematofagia no
hospedeiro vertebrado, ingerindo formas amastigotas. No intestino do
inseto se transforma em promastigota, multiplicando-se por diviso binria
simples. As formas promastigotas migram para a probscida quando j
podem ser inoculadas na pele do prximo hospedeiro vertebrado pela
picada. Aps a inoculao, os parasitos so fagocitados e se transformam
em amastigota, iniciando novos ciclos de multiplicao.
Caracterstica marcante deste protozorio o fato de parasitar o
compartimento fagolisossomal de fagcitos mononucleares, conhecidos
como clulas hospedeiras.
A diferena entre a LTA e a LV que, na ltima, os parasitos ou
macrfagos parasitados podem se expandir e promover infeco em rgos
distantes como fgado, bao, medula ssea.
Patogenia
Na forma visceral as manifestaes clnicas refletem o equilbrio
entre a multiplicao dos parasitos nas clulas do sistema fagcito
mononuclear. Os parasitos se aderem rapidamente s clulas desse sistema
e se diferenciam em forma amastigota; a resposta imunitria do indivduo e
as alteraes degenerativas so resultantes desse processo.
Os rgos mais afetados so: linfonodo, bao, fgado, medula
ssea e pele.
23
Manifestaes clnicas
importante ressaltar que a leishmaniose visceral pode cursar
de forma assintomtica, oligossintomtica ou sintomtica. Cerca de 60%
dos ces so assintomticos, ou seja, nem todos os animais desenvolvem
a doena. Os sinais clnicos podem demorar de meses a anos para se
manifestar aps a infeco. A infeo pode iniciar como uma leso cutnea
e, posteriormente, disseminar-se sistemicamente.
Ces assintomticos: ausncia de sinais clnicos sugestivos
da infeco por Leishmania infantum (Fig. 12).
Ces oligossintomticos: apresentao de alguns sinais
clnicos como moderada perda de peso, leses de pele e/ou
pelos opacos (Fig. 13).
Ces sintomticos: todos ou alguns sinais mais comuns da
doena como (fig. 14):

Sinais neuromusculares paresia, convulso,
atrofia muscular

Adenomegalia linfonodo poplteo, pr escapular e
submandibular

Sinais oftalmolgicos blefarite, uvete,
conjuntivite, ceratite

Mucosa palidez, epistaxe, lceras e ndulos

Derme eritema, prurido, alopecia,
hiperqueratose, onicogrifose (Fig. 15)

Outros sinais gstricos (vmito, diarreia),
insuficincia renal, artrose, abdominais (hepatomegalia,
esplenomegalia).
24
Fig. 12: Co assintomtico.

Foto: Vitor Marcio Ribeiro
Fig. 14: Co sintomtico.

Fig. 16: Descamao de pele e caquexia.

Fig. 13: Co oligossintomtico.

Fig. 15: Onicogrifose.

Foto: Renata Cristina Ferreira Dias
Fig. 17: Descamao de pele, emagrecimento, leso

em articulao e priapismo.
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Diagnstico
Clnico
Evoluo lenta e insidiosa. Muitas vezes confundido com sarna
demodcica
Epidemiolgico
Verificar se:
Animal proveniente de rea endmica;
Se o animal visitou locais endmicos;
Se o caso autctone.
Sorolgico
Durante muitos anos para inqurito sorolgico canino no Brasil
eram utilizadas as metodologias: ensaio imunoenzimtico (ELISA) como
teste de triagem e reao de imunofluorescncia indireta (RIFI) como exame
confirmatrio.
Atualmente, segundo a nota tcnica conjunta No 01/2011 CGDT
CGLAB/DEVIT/SVS/MS, o diagnstico sorolgico para ces preconizado pelo
Ministrio da Sade o teste imunocromatogrfico denominado TRDPP
Biomanguinhos, que usado como exame de triagem, e o teste ELISA
indireto como exame confirmatrio.
Teste triagem: TR DPP
Teste confirmatrio: ELISA
O teste ELISA uma tcnica com 100% sensibilidade e 99,3%
especificidade. Esta tcnica consegue detectar animais assintomticos,
apresentando maior sensibilidade.
26
O teste imunocromatogrfico TR DPP um teste que segundo

a literatura apresenta sensibilidade de 93 a 100% e especificidade de 92
a 100%. Porm, alguns artigos j mostraram que a sensibilidade do teste
depende da situao clnica do animal, sendo observada maior sensibilidade
de diagnstico em ces sintomticos. Em ces assintomticos a sensibilidade
registrada em diferentes artigos publicados variou de 12 a 47%.
A RIFI continua sendo uma tcnica interessante especialmente para
o clnico pois apresenta sensibilidade de 90 a 100% e especificidade entre
80 a 100%.
Para um diagnstico correto, alm dos testes sorolgicos, pode
ser realizado o exame parasitolgico, pois o padro ouro. Os exames
sorolgicos indicam apenas que o hospedeiro entrou em contato com o
parasito.
Parasitolgico
O mtodo parasitolgico consiste na observao de formas
amastigotas em material biolgico (puno de linfonodo e medula ssea).
O material obtido utilizado para a confeco de esfregao ou impresso
em lminas, histologia, isolamento em meios de cultura ou inoculao
em animais de laboratrio. As punes hepticas so sugeridas por
alguns autores, porm, so consideradas procedimentos invasivos e
exigem ambientes apropriados para a colheita, no sendo procedimentos
adequados para estudos epidemiolgicos em larga escala.
O exame parasitolgico apresenta 100% de especificidade, porm
a sensibilidade varivel de acordo com material colhido e o grau de
parasitemia. o procedimento de primeira escolha, por ser mais rpido, de
menor custo e de fcil execuo.
Para a pesquisa direta so utilizados os seguintes procedimentos:
27
Impresso por aposio (Imprint)

Este mtodo realizado pela compresso do fragmento de tecido,
obtido por bipsia, sobre uma lmina de microscopia, depois da retirada
do sangue em uma superfcie absorvente (papel filtro). As lminas devem
ser fixadas em metanol para envio ao laboratrio de referncia, onde sero
coradas e avaliadas microscopia ptica para pesquisa do parasito.
Puno aspirativa por agulha fina (PAAF)
Pode ser realizada em linfonodos ou ndulos, utilizando uma seringa
grande e agulha fina (ex.: seringa de 10 ou 20mL e agulha de 25x8mm), com
1mL de soluo salina estril e antibitico (Penicilina G potssica 25.000 U
+ estreptomicina 100 g/mL). O material colhido por puno poder ser
utilizado para esfregao, inoculao em meio e cultivo (NNN, CCS), ou em
animais de laboratrio. As lminas devem ser fixadas em metanol para envio
ao laboratrio de referncia, onde sero coradas e avaliadas a microscopia
ptica para pesquisa do parasito.
(Reao em Cadeia Polimerase)
O local onde ser realizada a bipsia deve ser limpo com gua e
sabo. A seguir, realiza-se um bloqueio anestsico com a infiltrao de
lidocana (Xilocana) a 2% para anestesiar o local.
Para o exame histopatolgico o material retirado por bipsia deve
ser fixado em formol a 10%, em quantidade aproximadamente 20 vezes
maior que o volume do fragmento. O diagnstico confirmatrio pela
histopatologia somente dado quando se identifica o parasito nos tecidos.
O material colhido tambm poder ser inoculado em meio de cultivo
(NNN, CCS) ou em animais de laboratrio.
28
Molecular
A pesquisa de DNA do parasito Leishmania pela tcnica de PCR vem
sendo amplamente utilizada para verificar a presena ou ausncia do DNA
do parasito sendo utilizado primers especficos para L. infantum.
Encaminhamento do material
O MATERIAL COLHIDO DEVE SER ENCAMINHADO PARA

OS LABORATRIOS CENTRAIS ESTADUAIS (LACEN) OU
UNIVERSIDADES CONVENIADAS.
Diagnstico diferencial
A leishmaniose visceral canina deve ser diferenciada de erlichiose,
linfossarcoma, mieloma, seborria, pnfigo e infeces fngicas sistmicas
assim como outras doenas que causam proliferao do sistema
reticuloendotelial.
Tratamento
No h, at o momento, nenhum tratamento eficaz para LVC, visto
que o animal permanece reservatrio.
O Ministrio da Sade recomenda a eutansia.
A eutansia deve ser realizada conforme a Resoluo CFMV n
1000/2002, a qual dispe sobre procedimentos e mtodos de eutansia em
29
animais.
O mdico veterinrio que realizar a eutansia deve elaborar um
Termo de Consentimento do Proprietrio para procedimento de eutansia,
conforme a Resoluo CFMV n 1071/2014. Caso o proprietrio se recuse
a realizar a eutansia, o mdico veterinrio deve lavrar um Termo de
Responsabilidade por Recusa Eutansia. O termo deve deixar claro que o
proprietrio est ciente dos riscos sade pblica ocasionados pela recusa
da eutansia e que tem conhecimento das sanes legais que lhe podem
ser aplicadas.
Aps a eutansia, o mdico veterinrio deve lavrar o Atestado de
bito do Animal, conforme a Resoluo CFMV n 844/2006, a qual dispe
sobre o atestado de bito animal.
Conforme o Cdigo de tica do Mdico Veterinrio um dever do
mdico veterinrio realizar a eutansia nos casos devidamente justificados,
observando os princpios bsicos de sade pblica (inciso XIII, artigo 6 da
Resoluo CFMV n 722/2002).
Quando o animal for diagnosticado com leishmaniose, o
caso deve ser notificado aos rgos pblicos citados, visto
que esta uma doena de notificao compulsria (ver
anexos):

SECRETARIA ESTADUAL DE SADE
Telefone CIEVS: 0800-643-8484
http://formsus.datasus.gov.br/site/formulario.php?id_
aplicacao=5376

SERVIO DISQUE NOTIFICA
Telefone disque notifica: 0800-644-6645
E-mail: notifica@saude.gov.br
Site: www.saude.gov.br/svs
30
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documentos emitidos pelos servios veterinrios de clnica e cirurgia
destinados aos animais de companhia, com relao a declaraes,
atestados, autorizaes e /ou solicitaes dos responsveis pelos animais
submetidos a procedimentos, 2014.
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35
ANEXOS
Ficha Epidemiolgica para Leishmaniose
Visceral
FICHA EPIDEMIOLGICA PARA LEISHMANIOSE VISCERAL
Data:
RG:
Encaminhamento:
CCZ
HV
PARTICULAR
RESENHA
Nome do animal:
Raa:
Idade:
Peso:
Pelagem:
Sexo:
Nome do proprietrio:
Endereo:
Bairro:
Municpio:
Estado:
Procedncia:
ANAMNESE
Queixa principal:
Tratamento:
Vacinao:
SIM
NO
SIM
NO
Se sim, qual?
Se sim, qual?
Vermifugao:
SIM
NO
Ectoparasitos:
SIM
NO
Outras observaes:
EXAME CLNICO
Temperatura:
Emagrecimento:
SIM
NO
Mucosa:
Outros sinais clnicos:
Epistaxe
Onicogrifose
Descamao
Eroses e ceras
Hiperqueratose
Leses oculares
Alopecia (peri-orbital)
Alopecia localizada
Alopecia generalizada
Hepatomegalia
Esplenomegalia
Linfonodo reativo
Apatia
Observaes:
36
Ficha Epidemiolgica para Leishmaniose

Tegumentar Americana
FICHA EPIDEMIOLGICA PARA LEISHMANIOSE
TEGUMENTAR AMERICANA
Data:
RG:
Encaminhamento:
CCZ
HV
PARTICULAR
RESENHA
Nome do animal:
Raa:
Idade:
Peso:
Pelagem:
Sexo:
Nome do proprietrio:
Endereo:
Bairro:
Municpio:
Estado:
Procedncia:
ANAMNESE
Queixa principal:
Tratamento:
Vacinao:
SIM
NO
SIM
NO
Se sim, qual?
Se sim, qual?
Vermifugao:
SIM
NO
Ectoparasitos:
SIM
NO
Outras observaes:
EXAME CLNICO
Temperatura:
Emagrecimento:
SIM
NO
Mucosa:
Outros sinais clnicos:
Epistaxe
Onicogrifose
Descamao
Eroses e ceras
Hiperqueratose
Leses oculares
Alopecia (peri-orbital)
Alopecia localizada
Alopecia generalizada
Hepatomegalia
Esplenomegalia
Linfonodo reativo
Apatia
Observaes:
37
Colheita de Material para Diagnstico de

Leishmaniose
Colheita de soro
Para o diagnstico sorolgico da LVC necessria a colheita de
sangue em tubos sem anticoagulantes ou com ativador de cogulo para
separao de soro e hemcias. A qualidade do soro fundamental para
evitar resultado falso positivo ou falso negativo. Material turvo, lipmico,
hemorrgico ou com contaminao bacteriana podem comprometer o
resultado do exame.
Antes da colheita de sangue deve ser feita a conteno do animal,
evitando o estresse do mesmo, em seguida deve-se limpar a rea para
colheita de sangue com lcool 70, secar com gaze esterilizada e pressionar a
rea da veia com torniquete ou manualmente para ocluir o fluxo sanguneo
e proceder com a colheita de sangue.
As reas mais indicadas para colheita de sangue so as veias jugular,
ceflica, safena lateral ou femural. Para cada rea de colheita de sangue h
uma conteno adequada para facilitar o procedimento.
Para colheita de sangue na veia ceflica ou safena lateral o animal
deve estar em decbito esternal, sendo contido por um assistente ficando
do lado oposto ao que ser puncionada a veia. A cabea e o pescoo devem
ser imobilizados e segurar o membro torcico.
Para a colheita de sangue na veia jugular, quando o animal estiver a
campo deve-se colocar o brao na regio esternal do animal e coloc-lo ao
seu lado. Aps este procedimento, imobiliza-se os membros torcicos com
a mo na regio das articulaes mero-carpo radial e com a outra mo
ergue-se a mandbula do co para cima e para trs estendendo.
Aps a colheita do sangue e a correta etiquetagem das amostras,
fundamental e devem ser mantidas em caixas isotrmicas at a chegada
ao laboratrio para separao do soro por centrifugao (1.300g por
38
10 minutos). Aps a centrifugao o soro deve ser transferido para um

microtubo de 2ml, devidamente identificado, e armazenar o soro a 4C
at o momento de envio para laboratrio credenciado ou a execuo do
exame. Para envio ao laboratrio so utilizadas caixas isotrmicas com gelo
reciclvel, a caixa deve ser lacrada e identificada como material de risco
biolgico. A quantidade de soro a ser enviada deve ser 100 a 500 L.
Separao de camada leucocitria para cultura, pesquisa de

formas amastigotas ou reao em cadeia da polimerase
Para obteno de camada leucocitria para isolamento do parasito
ou realizao da tcnica de reao em cadeia da polimerase (PCR), o
sangue deve ser colhido conforme metodologia descrita acima, porm os
tubos a serem usados so com anticoagulante (EDTA para uso em PCR).
Aps colheita a amostra deve ser enviada em no mximo 48 horas para
laboratrio credenciado. A forma de armazenamento desse material para
envio em caixas isotrmicas sem gelo devidamente identificadas como
material de risco biolgico.
Isolamento do parasito ou colheita de amostra para PCR

Material de escolha:
1)
puno de linfonodo - LN
2)
lquido cefalorraquidiano - LCR
3)
medula ssea - MO
A colheita de LN feita por aspirao com auxlio de agulha de
calibre 23 ou 25. Primeiro o animal contido e feito anestesia local. O local
a ser colhido deve ser limpo com lcool 70. Aps secar a rea com gaze
esterilizada, insere-se a agulha no parnquima do linfonodo, puxa o embolo
39
da seringa (de 20ml) em at no mnimo 10ml de presso negativa. Aps a

retirada da agulha do linfonodo remove-se a agulha da seringa e o material
pode ser inoculado em meio de cultura ou preparar lminas para colorao
especfica para pesquisa de formas amastigotas. O gnglio de eleio o
poplteo, que em caso de LVC geralmente est aumentado.
A colheita do LCR realizada por puno do espao sub-aracnideo
na regio do forame magno ou com os ces posicionados em decbito lateral
direito e com a cabea flexionada em ngulo aproximado de 90 em relao
coluna vertebral. Com o dedo polegar esquerdo palpa-se o processo
espinhoso do xis, em sentido caudo-cranial, palpando e deslizando o
dedo at atingir o tubrculo dorsal do atlas, no qual o dedo fica apoiado.
Com a mo direita introduz-se uma agulha (espessura de 0,55 a 0,80mm e
comprimento oscilando entre 20 e 40mm), sem mandril, dependendo do
tamanho do animal, cranialmente ao dedo apoiado.
As punes de MO podem ser feitas na crista ilaca trocanter maior
do fmur, rea transilaca e regio epifisria proximal do mero. O animal
deve ser anestesiado, realiza-se uma antissepsia com lcool 70. A posio
do animal para colheita deve ser de acordo com o local de eleio. Se
colheita no osso femoral ou tibial, deve-se manter o animal em decbito
lateral. J se a colheita for realizada na crista ilaca, deve-se manter o animal
em decbito ventral.
Para melhores resultados nas colheitas de LN, LCR ou MO a seringa
pode ser preparada com 0,5ml de soro fisiolgico esterilizado e contendo
antibiticos (penicilina G potssica 25.000 U + estreptomicina 100 g/
ml). Aps a colheita da amostra o material deve ser inoculado em meio
de cultura (de preferncia meio Novy, Neal e Nicolle NNN) e enviado ao
laboratrio de referncia em caixas isotrmicas e no mximo de 48 horas,
ou ainda pode ser usado para preparao de lminas para pesquisa de
formas amastigotas.
40
Material de necropsia
Quando o animal for necropsiado os seguintes materiais podem ser
colhidos para isolamento do parasito: fragmento de bao, fgado, gnglios
poplteos e medula.
Tcnica de Escarificao e Colorao:
Material utilizado
Luvas;
Lanceta, estilete apropriados, devidamente esterilizados;
Gaze ou algodo;
gua destilada ou soluo fisiolgica;
Lminas novas com borda fosca;
Esparadrapo.
Procedimento
Fazer a limpeza da leso ou da pele com gua destilada ou
soluo fisiolgica, usando gaze. Se o animal tiver mais de uma
leso, eleger duas leses mais recentes;
Secar com gaze esterilizada;
Com auxlio do estilete apropriado, escarificar trs reas
diferentes da borda interna de cada leso, de preferncia na
rea eritematosa de superfcie ntegra que a circunda;
Identificar as lminas;
Colher material rico em linfa, tendo o cuidado de comprimir
a leso para no sangrar;
Fazer, em cada lmina, trs esfregaos em um s sentido,
cuidando para no retornar com o estilete sobre o material j
estendido para no retir-lo de volta. O estilete deve ficar na
posio horizontal em relao lmina. Obs.: havendo uma
41
leso, fazer duas lminas com trs esfregaos, e se houver mais

de uma leso, fazer uma lmina de cada leso (duas), com trs
esfregaos;
Proteger a leso com gaze e esparadrapo.
Colorao de May-Grunwald-Giemsa
Cobrir a lmina com metanol por 2 minutos para a fixao;
Em um tubo tipo falcon de 15ml, misturar 3 gotas do corante
Giemsa para cada 2ml de gua destilada;
Cobrir a lmina com 15 a 20 gotas de corante May-Grunwald
por 3 minutos;
Acrescentar 20 gotas de gua destilada, homogeneizar e
deixar agir por 2 minutos;
Deixar escorrer a gua da lmina, aps cobrir com soluo
diluda de Giemsa (preparada no incio do procedimento), e
deixar agir por 10 minutos;
Deixar escorrer o corante e lavar a lmina em gua corrente;
Secar a lmina em temperatura ambiente;
Fazer a leitura em microscpio ptico (objetiva de 100x) com
leo de imerso.
Na observao microscpica, deve-se procurar formas amastigotas,
isoladas, ou intracelularmente, que se apresentam arredondadas ou de
forma ovide, com citoplasma azul plido, ncleo excntrico violeta, e
cinetoplasto em forma de bastonete de cor idntica do ncleo.
Pode-se observar tambm que as amastigotas podem se apresentar
no esfregao sob formas tpicas e atpicas sem ncleo; sem cinetoplasto;
com ncleo, mas sem cinetoplasto visvel; sem ncleo, mas com cinetoplasto;
arrebentamento de ncleo; arrebentamento de membrana citoplasmtica
42
forma em ponta de lana. Podem tambm apresentar alteraes em

tamanho, estando maiores ou menores; o cinetoplasto pode estar sob a
forma de basto, arredondadas ou puntiformes. No microscpio, formas
atpicas so achadas frequentemente. Em caso de dvidas, procurar a
observao de formas tpicas.
Resultado positivo: presena de formas amastigotas de Leishmania.
Erros de tcnica:
Sangue: deve-se evitar a colheita do material com muito
sangue, porque o sangue dilui o material e a quantidade de
amastigotas diminui.
Leuccito: encontrado em abundncia em leso
contaminada, geralmente por bactrias. Pode significar erro de
colheita, uma vez que os leuccitos vo se concentrar mais no
centro da leso, lugar inadequado para a pesquisa de formas
amastigotas.
M colorao:
Corante forte: geralmente o aspecto das estruturas
morfolgicas fica com um azul intenso, o que atrapalha
uma boa visualizao;
Corante fraco ou pouco tempo de colorao: as
estruturas morfolgicas ficam avermelhadas, o que
leva a uma difcil observao do citoplasma, ncleo e
cinetoplasto do parasito;
Uso de gua destilada (no tamponada): a gua
destilada tem um pH cido e, se usada para a colorao,
43
as estruturas morfolgicas tendem a ficar muito

acidfilas.
Corante com problemas: observao microscpica, o
esfregao apresenta grumos de corante que, quando em
demasia, qualquer estrutura contida no esfregao no fica
observvel.
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MANUAL TCNICO

Manual Tcnico Leishmanioses Caninas

construo conjunta de projetos teraputicos, educao permanente.

LEISHMANIOSE VISCERAL (LV)......................................................................... 21

Puno aspirativa por agulha fina (PAAF).............................. 28

Manual Tcnico - Leishmaniose Canina

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amazonensis, L. (V.) guyanensis, L. (V.) lainsoni, L. (V.) shawi, L. (V.) naiffi, L.

Fig. 01: Forma promastigota de

Fig. 02: Forma amastigota de Leishmania sp.

Espcies de Leishmania: seus vetores,

Leishmania (Vianna) braziliensis

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Par ao nordeste do Brasil, atingindo tambm o centro e o sul do pas. Na

Leishmania (Leishmania) amazonensis

Leishmania (Viannia) guyanensis

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As amastigotas se multiplicam por

Fig. 03: Ciclo evolutivo da LTA.

O vetor realiza o repasto

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Fig. 04: Flebotomneo fmea adulta ingurgitada.

Fig. 05: Local propcio para desenvolvimento do vetor.

Caractersticas morfolgicas do vetor

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grandes, lanceoladas, pilosas, em posio ereta. Pernas so compridas. A

Manifestaes clnicas da LTA

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picadas (Fig. 06).

Fig. 06: lcera clssica de LTA em orelha

Fig. 07: Ferida de LTA em processo de cicatrizao,

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Podem ser observadas ppulas na periferia das leses.

SOROLOGIA NEGATIVA NO DESCARTA A INFECO!

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purulenta, ou na superfcie da leso no ulcerada, utilizando um estilete

Fig. 08: Antissepsia da leso

Fig. 09: Anestesia local na borda da leso

colorao da lmina e pesquisa do parasito.

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derme. Os parasitos, quando presentes, so encontrados em vacolos

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as espcies de Leishmania. Para isso necessrio usar primers marcadores

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O mdico veterinrio que realizar a eutansia deve elaborar um

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LEISHMANIOSE VISCERAL (LV)

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Leishmania infantum (syn. L. chagasi)

Fig. 11: Flebotomneo

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Fig. 12: Co assintomtico.

Fig. 14: Co sintomtico.

Fig. 16: Descamao de pele e caquexia.

Fig. 13: Co oligossintomtico.

Fig. 15: Onicogrifose.

Fig. 17: Descamao de pele, emagrecimento, leso

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O teste imunocromatogrfico TR DPP um teste que segundo

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