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Wanderley de Souza1,4, rica dos Santos Martins-Duarte2,4, Leandro Lemgruber2,4, Mrcia Attias3,4, Rossiane Claudia Vommaro3,4
Doutor em Cincias pelo Instituto de Biofsica da Universidade Federal do Rio de Janeiro. Diretoria de Programa, Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial, Rio de Janeiro, Brasil
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Mestre em Cincias Biolgicas (Biofsica) pelo Instituto de Biofsica da Universidade Federal do Rio de Janeiro.
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Laboratrio de Ultraestrutura Celular Hertha Meyer, Instituto de Biofsica Carlos Chagas Filho, Universidade Federal do Rio de Janeiro Rio de Janeiro, Brasil
Endereo para correspondncia/Corresponding Author: WANDERLEY DE SOUZA Instituto de Biofsica UFRJ - Av. Carlos Chagas Filho, 373 Prdio do CCS - Bloco G - sala 19 - Cidade Universitria Ilha do Fundo Cep 21941-902 Rio de Janeiro RJ Fone/Fax: +55 (21)2260-2364 E-mail: wsouza@biof.ufrj.br
Organizao estrutural do taquizoto de Toxoplasma gondii. Sci Med. 2010;20[1], aceito para publicao.
Este artigo passou pelo processo de reviso por pares e foi aceito para publicao na Scientia Medica, mas ainda dever ser submetido a diagramao e correo de provas. Deve ser citado como: Souza W, Martins-Duarte ES, Lemgruber L, Attias M, Vommaro RC.
This article has been peer-reviewed and approved for publication in Scientia Medica, but has yet to undergo copy-editing and proof correction. Please cite this article as: Souza W, Martins-Duarte ES, Lemgruber L, Attias M, Vommaro RC.
Structural organization of the tachyzoite of Toxoplasma gondii. Sci Med. 2010;20[1], accepted article.
RESUMO
OBJETIVOS: fazer uma reviso dos aspectos bsicos da ultraestrutura do taquizoto de Toxoplasma gondii, agente etiolgico da toxoplasmose. FONTE DE DADOS: os dados apresentados tomam como referncia resultados recentes obtidos pelos principais grupos de pesquisadores no mundo, que se dedicam ao estudo do Toxoplasma gondii, incluindo-se dados do prprio grupo de autores. SNTESE DOS DADOS: os taquizotos de Toxoplasma gondii so responsveis pela fase aguda da infeco, penetrando ativamente, atravs do complexo apical, em clulas dos hospedeiros onde se multiplicam. So abordadas caractersticas ultraestruturais e moleculares particulares da pelcula, do citoesqueleto, de organelas secretrias (rptrias, micronemas e grnulos densos) e no secretrias (apicoplasto) exclusivas do filo Apicomplexa, alm das peculiaridades do ncleo, mitocndria, acidocalcisomas, retculo endoplasmtico e complexo de Golgi desses parasitos intracelulares. CONCLUSES: estas caractersticas confirmam que o sucesso nas etapas de adeso, invaso e multiplicao do parasito possui clara correlao com suas caractersticas morfofuncionais. DESCRITORES: TOXOPLASMA / ultraestrutura; APICOMPLEXA; TOXOPLASMOSE; REAO DE FASE
AGUDA; ANTICORPOS ANTIPROTOZORIOS; ANTGENOS DE PROTOZORIOS / imunologia.
ABSTRACT
AIMS: To review basic aspects on the ultrastructure of the tachyzoite of Toxoplasma gondii, the causative agent of toxoplasmosis. SOURCE OF DATA: The data presented are based on recent publications by the most distinguished research groups in the area dedicated to the study of Toxoplasma gondii, including studies from the present authors. SUMMARY OF FINDINGS: The tachyzoites are responsible for the acute phase of the infection by actively penetrating, through the parasites' apical complex, the host cells where they multiply. Both ultrastructural and molecular particularities of the pellicle, the cytoskeleton, secretory (rhoptries, micronemas and dense granules) and non secretory (apicoplast) organelles, specific to Apicomplexa phylum, besides peculiar features of the nucleus, mitochondrion, acidocalcisomes, endoplasmic reticulum and Golgi complex of these intracellular parasites. CONCLUSIONS: These characteristics confirm that the success in the process of adhesion, invasion and multiplication of this parasite is clearly correlated to its morphology. KEY WORDS: TOXOPLASMA / ultrastructure; APICOMPLEXA; TOXOPLASMOSIS; ACUTE-PHASE
REACTION; ANTIBODIES, PROTOZOAN; ANTIGENS PROTOZOAN / immunology.
INTRODUO Toxoplasma gondii (T. gondii) um patgeno intracelular obrigatrio capaz de infectar e se replicar em qualquer clula nucleada de mamferos e aves. o agente etiolgico da toxoplasmose, uma das infeces parasitrias mais comuns ao homem e a outros animais homeotrmicos. Possui ampla distribuio, infectando cronicamente aproximadamente um tero da populao mundial.1 Na maioria dos adultos a toxoplasmose assintomtica, porm em alguns indivduos pode causar cegueira e, em crianas congenitamente infectadas, retardo mental. Em indivduos imunocomprometidos causa grande morbidade e mortalidade.2 T. gondii foi primeiramente descrito em 1908 por Nicolle e Manceaux em um roedor encontrado na Tunsia, Norte da frica, e por Splendore, no Brasil, em um coelho.3,4 O nome da espcie originrio do roedor Ctenodactylus gundi, do qual foi isolado; e o gnero derivado do grego toxon (arco) e plasma (molde) devido ao seu formato encurvado e crescente. Pertence ao filo Apicomplexa, no qual esto includos diversos patgenos de importncia mdica e veterinria, como Plasmodium spp (agente causador da malria), Cryptosporidium spp (causador de diarrias graves em imunocomprometidos), Eimeria spp (causador da coccidiose em aves) e Besnoitia sp, Babesia bovis e Theileria spp (parasitos de gado). O filo Apicomplexa caracterizado pela presena do complexo apical, composto de organelas secretrias especializadas, como rptrias e micronemas, e de elementos do citoesqueleto, como os anis polares e o conide, este ltimo apenas nos coccdeos, subclasse que inclui T. gondii (Figura 1).5,6 CICLO DE VIDA EM DOIS TIPOS DE HOSPEDEIROS O ciclo de vida de T. gondii apresenta uma fase assexuada, que se passa na maioria dos animais, e uma fase sexuada, que se passa nos feldeos. Ao longo de todo o ciclo possui trs formas infectivas: a taquizota (forma de multiplicao rpida da fase aguda), a bradizota (forma de multiplicao lenta, encontrada dentro de cistos tissulares) e a esporozota (forma encontrada nos oocistos). O ciclo assexuado tem lugar nos inmeros hospedeiros intermedirios e consiste em dois estgios de vida distintos dependendo da fase da infeco: aguda ou crnica. A forma taquizota, objeto desta reviso, est presente nas manifestaes clnicas da fase aguda da toxoplasmose. decorrente da alta taxa de proliferao dos taquizotos com consequente ativao de uma forte resposta inflamatria pelo hospedeiro. A forma taquizota tambm a responsvel pela transmisso vertical para o feto via placenta.7 Sob presso do sistema imunolgico do hospedeiro, os taquizotos diferenciam-se em bradizotos, de multiplicao lenta e metabolismo baixo, que formam os cistos teciduais ou tissulares.8
ORGANELAS SECRETORAS O processo de invaso tem incio quando o taquizoto entra em contato com a superfcie da clula hospedeira. Normalmente ocorre uma reorientao do parasito, posicionando-se perpendicularmente superfcie celular atravs do seu polo apical.69 Aparentemente, o T. gondii no tem preferncias para se ligar a nenhum subdomnio presente na membrana da clula hospedeira e nem h a transferncia de molculas desses domnios para a membrana do VP que se forma.70 Isto provavelmente est ligado ao ciclo de vida do protozorio. Como ele capaz de infectar diferentes tipos celulares, sem ter subdomnios para se ligar a uma clula, ele pode utilizar receptores e ligantes comuns a todas as clulas para se ligar membrana plasmtica. No momento da adeso do taquizoto superfcie da clula hospedeira, h secreo das protenas dos micronemas e rptrias.69 Enquanto ocorre a internalizao do parasito, forma-se uma estrutura transitria, a juno mvel.71 Alexander et al.72 demonstraram que esta seria formada por um complexo protico de diferentes organelas. Esses autores identificaram nesta estrutura as protenas AMA 1 (ancorada por GPI e secretada pelos micronemas) e as RON 2, 4 e 5 (presentes no pescoo das rptrias e secretadas durante a invaso).72 Ao formar essa juno transitria, o parasito sofre uma constrio, deformando seu corpo. Ele suportaria esta constrio graas associao dos microtbulos subpeliculares, anteriormente. rede subpelicular e complexo intramembranar, como mencionado
5. 6. 7. 8. 9.
10. Dubey JP, Frenkel JK. Feline toxoplasmosis from acutely infected mice and development of toxoplasmosis cysts. J Protozool. 1976;23:537-46. 11. Boyer K, Mcleod R. Toxoplasmosis. In: Long S, Prober S, Pickering L, editors. Principles and rd pratice of pediatric infectious diseases. 3 .ed. NewYork: Churchill Livingstone; 2007. p.1303-22. 12. Cintra WM, De Souza W. Distribution of intramembranous particles and filipin-sterol complexes in the cell membranes of Toxoplasma gondii. Eur J Cell Biol. 1985;37:63-9. 13. Nichols BA, Chiappino ML, Pavesio CE. Endocytosis at the micropore of Toxoplasma gondii. Parasitol Res. 1994;80:91-8. 14. De Souza W. Demonstration and structure of the microtubular system of Toxoplasma gondii. C R Acad Sci D. 1972;275:2899-901. 15. Morrissette NS, Murray JM, Roos DS. Subpellicular microtubules associate with an intramembranous particle lattice in the protozoan parasite Toxoplasma gondii. J Cell Sci. 1997;110:35-42. 16. Hu K, Roos D, Murray JM. A novel polymer of tubulin forms the conoid of Toxoplasma gondii. J Cell Biol. 2002;156:1039-50. 17. Mondragon R, Frixione E. Ca -dependence of conoid extrusion in Toxoplasma gondii tachyzoites. J Eukaryot Microbiol. 1996;43:1207.
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esquemtica. O esquema foi construdo a partir de corte aleatrios do parasito observados em microscopia eletrnica de transmisso. (B) Corte longitudinal onde vrias das estruturas representadas em (A) esto assinaladas; N- ncleo, c- conide, R- rptrias, A-apicoplasto, CGComplexo de Golgi, g- grnulo denso, seta- micronema, VP- vacolo parasitforo. Barra: 1m.
Figura 3. Contrastao negativa de Toxoplasma gondii. (A) Extrao da pelcula com detergentes
revela a estrutura do citoesqueleto com microtbulos subpeliculares distribuindo-se radialmente a partir do anel polar, no centro do qual observa-se o conide. No inserto, maior aumento da regio apical onde se observa a disposio em espiral das fibras do conide, alm do anel apical (cabea de seta) e o anel polar (seta). (B) Alm dos microtbulos, o citoesqueleto tambm compreende uma rede subpelicular que se estende at a poro posterior do parasito e termina numa estrutura circular de maior densidade, que tambm visvel na A (setas). Barras: 0,5m. Inserto: 200nm. (Foto do acervo dos autores, publicada anteriormente no peridico Memrias do Instituto Oswaldo Cruz, reproduzida com permisso.)
Figura 5. Micrografia eletrnica de um corte ultrafino de taquizoto de Toxoplasma gondii evidenciando a estrutura da mitocndria (M) com cristas tpicas (bulbosas), rptria (R) e o apicoplasto (A). No inserto, as quatro membranas que envolvem o apicoplasto podem ser distinguidas. Barras: 250nm. Inserto: 200nm.
Toxoplasma gondii, destacando dois acidocalcissomos com as incluses eletrondensas tpicas apontadas por setas. Conide (c), rptria (R), apicoplasto (A), ncleo (N). Inserto: maior aumento de um dos acidocalcissomos. Barras: 500nm, inserto-200nm.
Figura 7. Microscopia eletrnica de varredura de alta resoluo onde se observa no interior de um vacolo parasitforo (VP) a conformao em roseta dos taquizotos aps sucessivos ciclos de diviso endodiognica. Uma rede de nanotbulos (seta) contribui na estabilidade do conjunto. Cabea de seta: microporo de um taquizoto. Barra: 1m.
transmisso. (A) Dois taquizotos em processo de endodiogenia. Apenas no mais inferior observam-se os perfis das duas clulas filhas (CF). No que se encontra acima deste, apenas uma das clulas filhas observada. (B) Final do processo de endodiogenia onde se observam apenas as clulas filhas. Remanescentes da pelcula mais externa da clula me esto assinalados pela seta e o corpo residual com uma estrela. (C) Diagrama simplificado do processo de diviso do Toxoplasma gondii por endodiogenia. No incio da diviso, dois complexos apicais comeam a se desenvolver no meio da clula lembrando um conide rudimentar e um centro organizador de microtbulos. O ncleo assume formato de ferradura. medida em que o complexo interno se estende a partir destas estruturas, o ncleo, apicoplasto e a mitocndria dividem-se entre as duas clulas filhas em formao. Ao trmino, as clulas filhas brotam e so envoltas pela membrana plasmtica da clula me at a ciso completa. As clulas podem permanecer unidas por um corpo residual. Barras: 1m.