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Tcnicas Histolgicas
O termo Tcnicas Histolgicas refere-se ao conjunto de metodologias empregadas para a obteno de material biolgico para estudo ao microscpio.
9. Montagem
8. Colorao Desidratao
Incluso a. Em parafina para a ML b. Em plstico para a ME Colocao do corte a. Sobre lminas de vidro para a ML b. Sobre grades e redes metlicas para a ME
Coleta de Material
Consiste na obteno do fragmento de rgo a ser estudado
Fixao
Processo que se destina a matar as clulas, procurando manter sua estrutura preservada, o mais prximo possvel do que seria no animal vivo.
Deixar o fragmento coletado no lquido fixador, por tempo determinado, de acordo com a soluo utilizada. Os lquidos fixadores variam desde uma substncia qumica isolada, como o lcool, o formol, at as misturas fixadoras, como o Bouin.
Incluso
A incluso consiste em colocar o corte em frma, cobrindo-o com parafina lquida, que se fundir temperatura ambiente. Antes de incluir necessrio desidratar a pea, diafanizla e mergulh-la em parafina lquida.
Desidratao - O material imerso em vrios banhos de lcool, em ordem crescente de concentrao, at o lcool absoluto. Diafanizao O material imerso em xilol, para clareamento. Imerso em parafina O material mantido em parafina lquida, a 58 graus (em estufa), por tempo determinado.
9. Montagem
8. Colorao Desidratao
Incluso a. Em parafina para a ML b. Em plstico para a ME Colocao do corte a. Sobre lminas de vidro para a ML b. Sobre grades e redes metlicas para a ME
Microtomia
Consiste na obteno de cortes finos, que sero corados para observao
O bloco de parafina contendo o fragmento colocado no suporte do micrtomo; aps regular a espessura dos cortes em micrmetros, so retiradas fitas de parafina contendo o material.
Microtomia
Consiste na obteno de cortes finos, que sero corados para observao
A colocao da fita de parafina em banho-maria a 40oC distende os cortes, que so recolhidos em lminas de vidro.
Colorao
necessrio corar para que clulas e tecidos possam ser identificados. Antes de corar necessrio desparafinizar e hidratar o corte.
Colorao e Montagem
Consiste em mergulhar a lmina contendo o corte no(s) corante(s), de acordo com o que se deseja corar; Na montagem, uma gota de resina colocada sobre a lamnula e esta pressionada sobre a lmina, protegendo o corte histolgico.
Corantes
Microscopia
Observao de clulas e tecidos ao microscpio
A lmina deve ser colocada na platina do microscpio, com a lamnula voltada para a objetiva. O foco deve ser ajustado para cada lente objetiva, utilizando-se os parafusos macro ou micromtrico.
MICROSCOPIA PTICA
MTODOS HISTOQUMICOS PARA EVISENCIAR SUBSTNCIAS PRESENTES NAS CLULAS COLORAES DE ROTINA: HE,Tricrmico de Gmori
COLORAES ESPECFICAS: Intensidade de cor proporcional concentrao DNA: feulgen Polissacardeos (glicognio): PAS RNA: ribonuclease Catecolaminas: formaldedo (fluorescente) Protenas: milton (tirosina) diaminoazobenzeno (triptofano)
TCNICAS HISTOLGICAS (rotina) CORANTES BSICOS: azul de toluidina, hematoxilina CORANTES CIDOS: eosina, orange G, fucsina cida Outros corantes: impregnao pela prata e ouro
E P
E CI
E
100m
E P P P E P P
100m
CC
100m
TCNICAS HISTOQUMICAS CONCEITO: substncia, radical, grupamentos qumicos PRINCPIOS: compostos no difusveis bom fixador produtos insolveis no se difundem nos reagentes Especificidade e sensibilidade CROMFORO E FLUORFORO Fixao insolvel corada ou fluorescente (histoqumica)
SUBSTNCIAS IDENTIFICVEIS: a)ons: Fe+3 ioniza Fe preso protenas ferrocianeto de K + Fe+ fosfato nitrato de prata b) lpides: sudam IV vermelho sudam negro
EXEMPLOS 1.PAS (periodic acid shiff) *obteno do reativo de shiff (fucsina bsica + c. Sulfuroso = shiff) *Oxidao do vic-glicol peridico aldedo carb. com vic-glicol + cido shiff + aldedo = PAS +
Microscopia de fluorescncia
ANTIGEN
epitope
V
P
Hematoxilina e eosina
100m
E P
100m
Microscopia Eletrnica
9. Montagem
8. Colorao Desidratao
Incluso a. Em parafina para a ML b. Em plstico para a ME Colocao do corte a. Sobre lminas de vidro para a ML b. Sobre grades e redes metlicas para a ME
Glutaraldedo e
Tetrxido de smio
Incluso
A incluso de material biolgico para observao ao ME feita em resinas como epon, araldite.
Ultra-microtomia
Colorao/Contrastao
Imagem observada
C N
C
1 m
N
C L
2 m
MET
MEV
Bobina de varredura
Desvio dos eltrons IMAGEM
MEV