Gentica Forense

Fernando Ferreira
Graduando: Biomedicina Forense
8 Perodo
Laboratrio de Bioqumica e Toxicologia Aplicada
Como ela surgiu?

Mtodos antropomtricos.
Alphonse Bertilion (1853 1914)
Mtodo antigo utilizado at hoje.
Padres de reconhecimento da populao.
Padres Biolgicos
1900 Karl Landsteiner - Sistema ABO
Premio Nobel 1930
Utilizado como teste EXCLUSRIO.

1920-1950 Polimorfismo proteico

Auxlio na identificao de suspeitos.

1983 Criao da PCR ( Reao de Polimerase em cadeia)

1984 Sir Alec Jeffreys Regies variveis no DNA

Polimorfismos
VNTR e AFLP
RFLP
SNP
STR (Autossmico, Y-linked e mt) 1991
1990 - CODIS
1992 Boom STR usado criminalmente, mtDNA, publicaes
na rea.
Identificao por DNA

VNTR
RFLP
AFLP
SNP
STR
Autossmico
Y-STR
mt-STR
Identificao por DNA

VNTR
RFLP
AFLP
SNP
STR
Autossmico
Y-STR
mt-STR
VNTR (Variable Number Tandem Repeat)

Minissatlites
Regies complexas
Variaes de cerca de 103 bp.
VNTR na Forense.
RFLP
AFLP
VNTR
Identificao por DNA

VNTR
RFLP
AFLP
SNP
STR
Autossmico
Y-STR
mt-STR
RFLP (Restriction Fragment Length
Polymorphism)
Utilizao de enzimas de restrio.
Identificao de regies com palndromos.
Enzimas de restrio
Quem so os filhos biolgicos?
Identificao por DNA

VNTR
RFLP
AFLP
SNP
STR
Autossmico
Y-STR
mt-STR
AFLP ( Amplified Fragment Lenght
Polymorphism)
Amplificao dos stios de RFLP por PCR.
Identificao por DNA

VNTR
RFLP
AFLP
SNP
STR
Autossmico
Y-STR
mt-STR
SNP (Single Nucleotide Polymorphism)

Investigao de insero, deleo, substituio

de 1-2 pares de base.
10 milhes existem.
1,4 milhes identificados.
Aplicao Forense SNP

Amostras de DNA degradado.

Ancestralidade.
Caractersticas como cor de pele, cabelo e etc..
Patologias Arritmia cardaca (LQTS, genes
KCNH2 e SCN5A)
Toxicologia. (Polimorfismo das CYPs)
4 Tcnicas principais:
Hibridizao alelo-especfiico.
Extenso primal.
Ligao de Oligonucleotdeo.
Clivagem invasiva.
Identificao por DNA

VNTR
RFLP
AFLP
SNP
STR
Autossmico
Y-STR
mt-STR
STR (Short Tandem Repeats)

Microssatlites
Repetio de regies 2-6 bp.
100-500bp totais (VNTR > 1000bp)
Regies amplificadas por PCR.
105 STRs existem.
13 STR
CODIS

COmbined DNA Index System

Banco de dados com perfil gentico de
criminosos.
EUA dcada de 80
Brasil - 2009
Entrega de DNA espontnea
ou mandato judicial.
Como Analisar?

Amostra PCR Eletroforese Eletroferograma.

Eletroferograma
Eletroferograma
Fatores que afetam o gentipo
Mutao
Mutao
Duplicao
Pontos de mutao
Artefatos de amplificao
Stutter
Adenilao sem template.
Imbalance heterozigtico
Droupout allico.
Artefatos da eletroforese
Picos Pull-out
Spikes
Fatores que afetam o gentipo
Mltiplos doadores
Identificao por DNA

VNTR
RFLP
AFLP
SNP
STR
Autossmico
Y-STR
mt-STR
Y-STR

Cromossomo Y.
60 milhes bp
Pseudo-Autossomal (PAR) e Y-especfico (MSY)
Regies homologas ao X. (Evitar)
Combinado com SNP
Mais de 400 loci
Majoritariamente STR tetramricos
Indicado pra casos de estupro e assdios.
Teste de paternidade.
Y-STR
Identificao por DNA

VNTR
RFLP
AFLP
SNP
STR
Autossmico
Y-STR
mt-STR
mt-STR

Identificao por DNA mitocondrial.

Maternalmente herdado.
Possui nvel de mutao 10 vezes maior que o
nuclear.
16,569 bp
37 genes.
mt-STR
Trs testes de DNA
 Comparao

Comparao de eficincia dos trs testes de DNA

Critrio/Teste VNTR SNP STR

Especificidade + +++ ++
Sensibilidade + +++ +++
Facilidade +++ ++ +
p.m. 10-6 10-7 (19 loci) 10-13 /10-20 (13/20 loci)
Comparao
 Exame de DNA

Extrao

Amplificao

Anlise
 Extrao
Fenol
Slica
clorofrmio

Chelex Salting out

Partculas
Magnticas
 Mtodos de Extrao
de DNA

Fenol clorofrmio (Extrao Orgnica)

DNA
 Mtodos de Extrao
de DNA

Chelex
Grnulos de resina polar
 Mtodos de Extrao
de DNA

Extrao Magntica
Granulos Magneticos Apolares
 QIAamp DNA Investigator Kit

Extrao de DNA de amostras forenses (sangue,

ossos, swabs, amostras de crimes sexuais)
Purificao rpida e de tima qualidade, remoo
de contaminantes e inibidores.
 Amplificao
PCR (Reao em Cadeia da polimerase)

Tampo
com MgCl2 Primers

Taq DNA Amostra

Polimerase

H2O dNTPs

Mix
 Amplificao
PCR (Reao em Cadeia da polimerase)

Amplificao de uma
sequncia especfica do DNA
regio alvo
Enzima TaqPolimerase
Fases:
Desnaturao
Anelamento
Extenso

Veriti Thermal Cycler

Reao de Polimerase em Cadeia (PCR)
 ANLISE

Applied Biosystems 3500xl Genetic Analyzer

 ANLISE
Baseado em fluorescncia
Eletroforese Capilar
Anlise de DNA: Sequenciamento e Anlise de Fragmentos
 ANLISE

Eletroferograma - DNA

Fonte: Genomic Engenharia Molecular

 ANLISE

Fonte: Herditas Tecnologia em Anlise de DNA

 ANLISE

Fonte: SEBBM
 Protocolos
Kit QIAamp Investigator, mnimo 2 horas.
Extrao DNA A quantidade de amostras eleva o tempo do
trabalho manual.

Preparao: depende do nmero de

PCR amostras/operador 20 minutos
Amplificao: aproximadamente 2 horas

Depende do nmero de amostras

Preparar Placa para
Sequenciador aproximadamente 30 minutos (1 placa, 96
amostras)

Depende do nmero de amostras 8 amostras

Anlise de Fragmentos
por injeo (1 hora).

Interpretao dos Dados No instantnea

Tempo CSI: aprox. 1 minuto

FILIEM-SE LIGA ACADMICA
DE CINCIAS FORENSES

facebook.com/lacforense lacforense@gmail.com
lacforense
Evento de Abertura da Liga Acadmica

Mesa Redonda As Cincias Forenses na

Universidade
Obrigado