Reaes de RPR em amostras

Aula 4 de soro

Reao de RPR com amostra de soro

O RPR um teste no treponmico que permite a realizao do teste sem inativao da amostra e
leitura a olho nu. A partir de agora voc conhecer essa reao em detalhes.

A padronizao desse teste determina que ele seja realizado em cartes descartveis, de uso
nico, que contm crculos de 18 cm de dimetro. Infelizmente existem fabricantes que no
incluem esses cartes em quantidade suficiente para a realizao dos testes qualitativos e
quantitativos. Por isso, alguns laboratrios os reutilizam.

Esse procedimento inadequado e contraria as boas prticas laboratoriais. Materiais descartveis

devem ser descartados.

Assim, exija que o fornecedor do kit entregue os cartes em quantidade suficiente para fazer o
nmero de testes que foram adquiridos pelo laboratrio. Se houver recusa, denuncie o fornecedor
Vigilncia Sanitria do seu estado.

!
As recomendaes anteriores valem tambm para o teste TRUST.

Confira a seguir a sequncia de sete aes recomendadas para voc adotar em um teste RPR, as
quais sero detalhadas nos prximos tpicos desta aula.

AO 1 Organizar os AO 2 Preparar os AO 3 Utilizar soros

materiais necessrios protocolos de trabalho controle

AO 6 Realizar reao de AO 5 Realizar reao de AO 4 Testar a suspenso

RPR quantitativa RPR qualitativa antignica

AO 7 Anotar os resultados
e liberar os resultados

Diagnstico da Sfilis - Aula 4 1

Antes de iniciar seu trabalho, voc deve consultar os protocolos de Procedimentos Operacionais
Padro (POP), que descrevem detalhadamente:

os procedimentos a serem realizados para cada conjunto diagnstico;

as instrues de uso e os cuidados a serem adotados em cada equipamento que ser
utilizado;
o passo a passo de aes para cada atividade.

Ao 1 Organizao dos materiais necessrios para o teste de RPR

Os materiais necessrios para a realizao do teste esto listados a seguir.

Conjunto diagnstico (kit) para RPR.

Soluo salina (NaCl 0,9%).
Soros controles: reagente com ttulo conhecido e no reagente.
Cartes para RPR, demarcados com 12 crculos com 18 mm de dimetro cada (cartes
de RPR).
Agitador orbital, tipo Kline, ajustado para 180 2 rpm.
Tubos de ensaio 12 X 75 mm, para as diluies em tubo.
Pipetas de volume ajustvel entre 50 L e 200 L.
Ponteiras descartveis para volumes entre 50 L e 200 L.
Recipiente para descarte de ponteiras.
Recipiente de vidro para descontaminao de produtos biolgicos, contendo soluo
aquosa de hipoclorito de sdio (uma parte de gua sanitria comercial mais quatro partes de
gua).
Cronmetro.
Caneta para escrever em plstico.
Protocolo de trabalho.

Diagnstico da Sfilis - Aula 4 2

Ao 2 Preparar os protocolos de trabalho

Observe o modelo de protocolo de trabalho indicado a seguir.

Algumas aes so importantes na hora de preparar os protocolos de trabalho. Confira a seguir.

Antes de iniciar seu trabalho dirio, reveja o contedo dos POP e compare se est de
acordo com as bulas.
Faa as alteraes sempre que o fabricante realizar modificaes na bula.
Observe se houve alterao dos procedimentos recomendados pelo fabricante para testes
de diferentes lotes.
Observe se os procedimentos variam quando o conjunto diagnstico utilizado com
amostras diferentes, como soro ou plasma.
Leia sempre as bulas e mantenha-as disponveis para consulta.

Diagnstico da Sfilis - Aula 4 3

Ao 3 Utilizar soros controles

Os soros controles so amostras que foram previamente caracterizadas como no reagentes

(soros controles negativo) ou reagentes (soros controles positivo). Seu uso na rotina diria
permite ao profissional assegurar-se da qualidade do antgeno e dos testes que realiza.

Veja no prximo tpico como utilizar soros controles para testar a suspenso antignica de RPR.
Mais adiante, neste curso, voc aprender mais sobre este tema ao estudar a respeito do controle
de qualidade dos testes de floculao.

Mantenha os soros controles congelados a -20C em alquotas

com volume suficiente para que sejam utilizadas uma nica vez.

Ao 4 Validar a suspenso antignica de RPR

Inicie o seu trabalho testando a qualidade da suspenso antignica.

Para essa tarefa, voc dever dispor de soros controles positivos, com ttulos previamente
estabelecidos, e de soros controles negativos, selecionados das amostras da rotina de seu
laboratrio.

!
Jamais teste as amostras dos indivduos sem ter validado a
suspenso antignica. Com esse procedimento, voc ir se
certificar de que no houve perda de reatividade na reao.

Acompanhe a seguir o passo a passo dessa tarefa, utilizando soros controles positivos com ttulo
16 ou diluio 1/16 com a execuo das diluies diretamente no carto de RPR.

Diagnstico da Sfilis - Aula 4 4

Faa seu protocolo de trabalho marcando a posio dos controles e das amostras.

1 Descongele os soros controles.

2 Utilize a suspenso antignica do kit RPR.

3 Faa diluies seriadas do soro controle positivo 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 diretamente no
carto, conforme apresentado a seguir.

a) Pipete 50 L de soluo salina nos crculos de nmeros 3 a 7.

b) Em seguida, pipete 50 L de soro controle positivo no segundo crculo.

c) Pipete 50 L de soro controle positivo no terceiro crculo, faa a homogeneizao do soro com a
soluo salina trs a quatro vezes, utilizando a mesma pipeta e ponteira. Para isso, aspire e devolva,
cuidadosamente, a soluo para o mesmo crculo da lmina. Em seguida, transfira 50 L dessa
mistura para o quarto crculo.

d) Realize a homogeneizao do contedo do quarto crculo e transfira 50 L dessa mistura para o

quinto crculo.

e) Proceda com a homogeneizao e transfira a mistura sucessivamente at o stimo crculo.

f) Por fim, homogeneze a mistura no stimo crculo, retire 50 L e despreze-a em recipiente prprio
para descarte de produto biolgico.

4 Pipete no primeiro crculo 50 L do soro controle negativo.

5 Cuidadosamente, por inverso, homogeneze a suspenso antignica de RPR.

6 Dispense exatamente uma gota em cada um dos crculos de 1 a 7.

7 Coloque o carto no agitador orbital e deixe agitar por 8 minutos a 180 rpm.

8 Faa a leitura da reao, imediatamente aps o trmino da agitao.

9 A suspenso antignica estar validada para ser utilizada nas amostras da rotina se o controle
negativo no apresentar floculao e se o controle positivo apresentar o ttulo esperado neste
caso, de 1/16.

Diagnstico da Sfilis - Aula 4 5

Caso a suspenso antignica no seja validada, utilize outro kit de RPR e repita o procedimento de
validao da suspenso com os controles. No utilize suspenses que no passaram no teste de
validao.

Ao 5 Realizar reao de RPR qualitativa

Antes de iniciar a reao, faa um protocolo para definir em que crculos da lmina sero
colocados os soros controles e as amostras em anlise. Neste caso, os soros controles so
usados para estabelecer o parmetro para a leitura da floculao. Eles podem ser usados puros,
uma vez que apresentam reatividade conhecida.

O teste qualitativo realizado com as amostras de soro puro (1/1) e diludo a 1/8. Voc deve fazer
as diluies a 1/8 em tubos antes de iniciar o teste.

Confira o passo a passo a seguir.

Diagnstico da Sfilis - Aula 4 6

 1 Identifique um tubo para cada amostra.

2 Pipete 350 L de soluo salina em cada tubo previamente identificado.

3 Homogeneze a amostra e pipete 50 L no tubo correspondente. Com esses volumes voc vai obter
a diluio de 1/8.

4 Pipete 50 L do soro controle negativo no primeiro crculo do carto de RPR.

5 Pipete 50 L do soro controle positivo no segundo crculo.

6 Pipete 50 L da amostra do usurio 1 pura (1/1) no terceiro crculo.

7 Pipete 50 L da amostra do usurio 1 diluda a 1/8 no quarto crculo.

8 Repita o procedimento pipetando 50 L de cada amostra pura e diluda das amostras em anlise,
tendo o cuidado de seguir a ordem que voc estabeleceu no protocolo de trabalho.

9 Faa delicadamente a homogeneizao da suspenso antignica.

10 Aspire a suspenso antignica at encher a seringa, retire o mbolo e deixe pingar, no prprio
Erlenmeyer, algumas gotas para eliminar bolhas de ar.

11 Dispense exatamente uma gota em cada crculo da lmina que contenha amostra.

12 Coloque a lmina no agitador orbital e deixe-a por 8 minutos sob agitao a 180 rpm.

13 Faa a leitura da reao imediatamente aps o trmino da agitao.

14 Compare o resultado do controle negativo com o resultado das amostras testadas, para determinar
o padro de ausncia de reatividade. Quando a reatividade da amostra estiver igual ao controle
negativo, o resultado ser no reagente. Caso seja observada reatividade na amostra pura ou
diluda a 1/8, dever ser feito o RPR qualitativo para determinar o ttulo da amostra.

Quando a amostra de soro puro no apresentar reatividade, mas houver reatividade na

amostra diluda a 1/8, ter ocorrido o fenmeno de prozona. Saiba mais sobre este fenmeno
na Aula 2 do manual, pgina 2.

Diagnstico da Sfilis - Aula 4 7

Ao 6 Realizar reao de RPR quantitativa

Veja agora o exemplo de um RPR quantitativo com diluies realizadas diretamente no carto.
Prepare antes seu protocolo de trabalho e defina os crculos nos quais sero pipetadas as
amostras, as diluies que sero testadas e os soros controles.

Diagnstico da Sfilis - Aula 4 8

Confira os procedimentos no passo a passo a seguir.

1 Realize diluies seriadas da amostra de 1/2 a 1/32. Voc pode fazer a diluio em tubo e
transferir 50 L de cada diluio para o carto, conforme previsto no protocolo, ou fazer a diluio
diretamente na lmina. Para isso:

a) pipete 50 L de soluo salina em cada um dos crculos de nmeros 4 a 8;

b) em seguida, pipete no terceiro crculo 50 L da amostra 1;

c) pipete 50 L da amostra 1 no quarto crculo, faa a homogeneizao do soro e da soluo

salina e transfira 50 L dessa mistura para o quinto crculo;

d) homogeneze o contedo do quinto crculo e transfira 50 L dessa mistura para o sexto

crculo;

e) proceda com a homogeneizao e transfira, sucessivamente, at o oitavo crculo;

f) homogeneze a mistura no oitavo crculo, retire 50 L e despreze em recipiente prprio para

descarte de produto biolgico.

2 Pipete 50 L do soro controle positivo no segundo crculo.

3 Cuidadosamente, por inverso, homogeneze a suspenso antignica.

4 Dispense exatamente uma gota em cada um dos crculos do 1 ao 8.

5 Coloque a lmina no agitador orbital e deixe agitar por 8 minutos a 180 rpm.

6 Faa a leitura da reao imediatamente aps o trmino da agitao.

a) Utilize o resultado do controle negativo para determinar o padro de ausncia de reatividade.

b) O ttulo da amostra ser definido pela ltima diluio que apresentar reatividade.

Diagnstico da Sfilis - Aula 4 9

Ao 7 Registrar e liberar os resultados do teste RPR

Ao finalizar a reao, voc dever transferir para o laudo os resultados anotados no protocolo.

!
As amostras reagentes devem ter o ttulo reportado no laudo.

O laudo dever apresentar-se:

legvel, sem rasuras na sua transcrio;

escrito em lngua portuguesa;
datado e assinado por profissional habilitado.

!
O laudo dever estar de acordo com o disposto na Resoluo RDC
n 302/ANVISA, de 13 de outubro de 2005, suas alteraes, ou
outro instrumento legal que venha a substitu-la.

Diagnstico da Sfilis - Aula 4 10

 Referncias

LARSEN, S.A., POPE, V., JOHNSON, R.E., KENNEDY, JR., E.J. A Manual of Tests for Syphilis.
Washington: APHA, 1998, 361p. 9 edio

LARSEN S.A., STEINER, B.M., RUDOLPH, A.H. Laboratory Diagnosis and Interpretation of Tests
for Syphilis. Clin. Microbiol. Rev., Washington, v.8, n.1, p.1-21, 1995.

Diagnstico da Sfilis - Aula 4 11