Cromatografia

Definio
Tipos
Cromatografia em Camada Delgada
Aplicaes
Tcnica Geral
Vantagens
Desvantagens
Toxicidade e Primeiros Socorros
Descarte de Resduos
EPIs e EPCs
Referncias
 A cromatografia um mtodo fsico-qumico de
separao dos componentes de uma mistura. Essa
tcnica se destaca devido sua facilidade em efetuar a
separao, identificao e quantificao das espcies
qumicas, por si mesma ou em conjunto com outras
tcnicas instrumentais de anlise.

realizada atravs da distribuio destes componentes

entre duas fases, que esto em contato ntimo. Uma das
fases permanece estacionria enquanto a outra se move
atravs dela.
 Durante a passagem da fase mvel sobre a fase

estacionria, os componentes da mistura so distribudos

entre as duas fases, de tal forma que cada um dos

componentes seletivamente retido pela fase

estacionria, resultando em migraes diferenciais destes

componentes, ou seja, os componentes da amostra tm

diferentes velocidades ao passarem pela fase

estacionria.
 A cromatografia em camada delgada (CCD) consiste na
separao dos componentes de uma mistura slido-
lquido onde a fase mvel (lquida) migra sobre uma
camada delgada de ADSORVENTE retido em uma
superfcie plana (fase estacionria slida). O processo
de separao est fundamentado, principalmente no
fenmeno de ADSORO.
 um p insolvel, dividido de forma
muito fina, inerte e capaz de adsorver
as toxinas ou outras substncias em sua
superfcie extensa.
 Na adsoro as molculas de um lquido (fase mvel)

unem-se superfcie do adsorvente (fase estacionria

slida). As foras que unem a molcula superfcie so

as interaes moleculares.

O grau de adsoro depende da temperatura,

da presso, da rea da superfcie e da fora das

interaes moleculares.

A intensidade das interaes varia na seguinte ordem

aproximada:
Formao de sal Coordenao

Ligao de Dipolo Van der

Hidrognio dipolo Waals
 importante ressaltar que Absoro diferente de
Adsoro. Na Absoro, uma substancia se infiltra na
outra, enquanto que a Adsoro apenas superficial.

Absoro Adsoro
 Estabelecer a identidade de dois compostos;

Determinar o nmero de componentes de uma mistura;

Determinar o solvente apropriado para uma separao por

cromatografia em coluna;

Monitorar uma separao realizada por cromatografia em

coluna atravs da identificao de fraes coletadas;

Checar a eficincia de uma separao;

Monitorar o andamento de uma reao.

 Preparao das placas cromatogrficas e ativao:
Espalhamento e placas pr-fabricadas.

Adsorvente usado: Slica gel

Fonte: http://www.chinasilicagel.com/3-drying-indicator/5-1b.jpg
Fonte: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-40422005000300030
 Existem vrias formas bastante simples de preparar a
placa. Uma delas consiste em preparar a suspenso
do adsorvente no solvente adequado (na maioria das
vezes o dispersante utilizado a gua) e, mantendo-se
a placa de vidro na posio horizontal transferir a
suspenso para a superfcie da placa, espalhando-se
de maneira uniforme manualmente (com um basto
de vidro) ou com o auxlio de um espalhador. A
dificuldade encontrada nesse processo a obteno
de superfcies uniformes.
Aps a deposio, deixa-se a placa secar ao ar.
 A etapa final a transferncia da placa para

uma estufa por um determinado tempo para

que ocorra a sua ativao; o tempo e a
temperatura dependem do adsorvente usado
e da atividade desejada.

A slica, por exemplo, ativada a 105 -110 C

por 30 a 60 minutos. A espessura da camada

de slica a ser depositada de 0,25 mm para
placas analticas e de 1,0 mm para placas

preparativas.
 As placas devem ser: inertes aos reagentes e solventes,

resistentes temperatura e uniformes.

Tambm existem placas cromatogrficas pr-

fabricadas dos adsorventes mais utilizados que esto

disponveis no mercado h algum tempo. Apesar de
terem custo bem mais elevado, dispensam a fase de
preparao e so bem mais uniformes e homogneas,
o que melhora a separao, nessas placas a camada
de adsorvente est depositada sobre uma lmina de
material plstico, alumnio ou vidro.
 Fonte: Qumica Orgnica
Experimental Tcnicas de
Pequena Escala

Preparao de uma placa de cromatografia em camada fina

 SLICA (SiO2)
A slica empregada na separao de compostos
lipoflicos como aldedos, cetonas, fenis, cidos
graxos, aminocidos, alcalides, terpenides e
esterides, usando o mecanismo de adsoro.
ALUMINA (Al2O3)
A alumina geralmente empregada na separao de
compostos lipoflicos e, pelo fato de poder ser
preparada com caractersticas cida, neutra e
alcalina, bastante til na separao de substncias
que apresentam variaes dessas caractersticas.
 Aplicao das amostras nas placas cromatogrficas:
Solventes usados: Etanol e Diclorometano

A amostra dissolvida em um solvente voltil para a

aplicao na placa, pois tais solventes podem ser
facilmente eliminados aps a aplicao, a
evaporao do solvente ajuda a manter as manchas
formadas menores, e quanto menores as manchas
melhor poder ser a separao.

importante ressaltar que a soluo no deve ser

muito diluda, pois exige um grande volume de
amostra, aumentando assim as manchas na placa.
 A evaporao do solvente importante pois se
no evaporado corretamente pode ocorrer
tambm a cromatografia por partio onde a
fase estacionria um slido recoberto com
uma fina camada de lquido, no caso o
solvente que no evaporou
Aplicao na placa de CCD com uma pipeta capilar
 Seleo da fase mvel (Eluente): Solventes usados: 1,2
dicloroetano e cido actico

A fase mvel o solvente ou uma mistura de solventes

que usada para eluir uma mistura e promover a
separao dos seus componentes.

A eluio a separao dos componentes de uma

mistura causada por um fluxo de eluente.

A escolha do solvente depende dos materiais a serem

separados. Um solvente que faz com que todo o
material aplicado se mova totalmente com a frente
do solvente muito polar, j um que no movimenta o
material atravs da placa no suficientemente polar.
 s vezes, um nico solvente capaz de
separar todos os componentes da mistura,
porm melhores resultados so obtidos com
misturas de solventes, pois obtm-se
uma polaridade mdia em relao
polaridade dos componentes da mistura.
Com a expanso do solvente as manchas
formam anis concntricos. Pela aparncia
dos anis pode-se fazer uma avaliao da
aplicabilidade do solvente.
 Fonte: Qumica Orgnica Experimental Tcnicas de Pequena Escala

Mtodos dos anis concntricos para testar solvente

Tabela 1: Solventes (eluentes) para a cromatografia

Aumento da
Polaridade e
poder de
solvente
em relao
grupos
funcionais
polares
 Preparao da cuba cromatogrfica:
A cuba cromatogrfica o recipiente com tampa
removvel onde a placa fica contida e realizada a
separao.

O nvel do solvente colocado na cuba dever ficar

abaixo dos pontos de aplicao das amostras. Durante a
ascenso do solvente o sistema fica fechado para que a
atmosfera esteja saturada pelo vapor do solvente, isso
importante pois se aberto o sistema o solvente ir se
evaporar para saturar a atmosfera e equilibrar o sistema
liquido-gasoso, podendo produzir variaes nos
resultados.
 Um papel de filtro colocado nas paredes da cuba para
facilitar a saturao, que indispensvel para boa
migrao das substncias.

A placa cromatogrfica dever ser retirada da cuba

somente quando o solvente atingir um limite pr-
determinado na parte superior da placa (cerca de 2 cm).
 Desenvolvimento do cromatograma:

A placa transferida para uma cuba cromatogrfica

contendo o solvente, que ascende pela placa.
Durante este processo, chamado desenvolvimento do
cromatograma, os vrios componentes da mistura so
separados.

A separao baseada em muitos equilbrios dos

solutos entre as fases mvel e estacionria e resulta das
diferenas de velocidade, nas quais os componentes
individuais da mistura migram pela placa.
 Fonte: Qumica Orgnica Experimental
Tcnicas de Pequena Escala

Cmara de desenvolvimento com uma placa de

cromatografia em camada fina
 Revelao dos cromatogramas:

Quando os compostos a serem separados so

coloridos, a separao pode ser acompanhada
visualmente, porm mais frequente que os
compostos sejam incolores. Neste caso, deve-se usar
reagentes para torna-los visveis.

Procedimentos usados: vapores de iodo e Lmpadas

de raio UV.
 Fsicos: podem ser visualizados atravs de luz ultravioleta,
por se tornarem fluorescentes quando excitados por essas
radiaes. Quando as substncias no so fluorescentes,
podem-se utilizar adsorventes impregnados com
reagentes fluorescentes.
Biolgicos e Enzimticos: Utiliza-se reaes enzimticas
ou bacterianas para tornar a mancha visvel.
Tipos de reveladores biolgicos:
Antibiticos
Enzimas
Substratos
 Procedimentos Qumicos: Aplicao de um reativo qumico
para formar um derivado colorido ou fluorescente.

Tipos de reveladores qumicos:

Alcalides: Dragendorff, iodoplatinato

Flavonides: NP-PEG

Anti-oxidantes: -caroteno

Saponinas, terpenos e esterides: anisaldedosulfrico

Antraquinonase cumarinas: vapor de amnia

Fenlicos, saponinase terpenides: soluo de CeSO4

Compostos fenlicos: FeCl3

Revelador universal: vapores de iodo
 Tcnicas para as revelaes utilizadas:

Raio UV: baseia-se na utilizao de

substncias fluorescentes misturadas slica quando
da preparao das placas, possibilitando a
revelao dos compostos em cmaras de luz
ultravioleta.

Vapores de Iodo: vale-se do fato de que o iodo

complexa-se com compostos insaturados, de modo
que placas que os contenham, ao serem
colocadas em uma cmara contendo cristais
de iodo, apresentaro pontos amarronzados.
 Um composto percorre sempre a mesma distncia em relao ao
deslocamento da frente de solvente. A razo entre esses
deslocamentos o valor de Rf.

Rf = distncia percorrida pela substncia

distncia percorrida pela frente do solvente

Quando as condies so especificadas, Rf constante para um

composto e corresponde uma propriedade fsica do mesmo, os
valores ideais para Rf esto entre 0,4 e 0,6.

E ele pode ser usado para auxiliar a identificao de uma substncia.

Porm no um mtodo com uma boa exatido, por isso a
identificao do composto deve ser confirmada por outra tcnica.
Portanto, as comparaes feitas do Rf obtido com o Rf de padres
considerado um mtodo qualitativo.
Rf(componente 1) = 22 = 0,35 Rf(componente 2) = 50 = 0,77
65 65
 Fcil execuo;
Maior rapidez;
Menor trajeto da fase mvel ;
Boa resoluo;
Manchas em geral menos difusas;
Baixo custo;
Versatilidade.
 Difcil reprodutibilidade: muito difcil a
confeco de duas placas idnticas, com a
mesma quantidade de amostra, etc;

Difcil determinao exata do Rf.

 Cafena Primeiros Socorros
Inflamabilidade: No inflamvel

Contato com a pele: No apresenta riscos. Lavar com gua em

abundncia
Contato com os olhos: No apresenta riscos. Lavar com gua em
abundncia
Ingesto: O consumo excessivo pode causar
casos de insnia, enxaqueca, tremuras,
palpitaes. Estimulante do SNC.
Inalao: No apresenta riscos.
 Paracetamol
Inflamabilidade: No inflamvel
Ingesto: Alto potencial hepatotxico, no devendo ser utilizadas mais que
4000 mg dirias (8 comprimidos de 500mg).
Crianas com menos de 37 kg tem a dose limite diria em 80 mg/kg.
Em indivduos adultos pode ocorrer toxicidade em doses nicas de 10 - 15 g
(20 a 30 comprimidos de 500mg) (150 - 250 mg/kg) e uma dose de 20 a 25 g
(40 a 50 comprimidos de 500mg) pode levar a fatalidade.
 cido acetilsaliclico

Inflamabilidade: No inflamvel

Contato com a pele: um composto muito presente em remdios para a

eliminao de verrugas e no tratamento de acne (em baixas
concentraes 0,5%), porm o contato prolongado com a exposio
luz solar, pode causar manchas e queimaduras.

Ingesto :
Toxicidade suave a moderada: 150-300mg/Kg
Toxicidade severa: 300-500mg/Kg
Potencialmente letal: >500mg/Kg
Estimulao do centro respiratrio
H sintomas no sistema nervoso central (zumbido no ouvido incluindo
perda de audio, convulses e coma), a hipoprotrombinemia e edema
pulmonar no-cardiognico .
rgos alvo: o fgado, rins, pulmes e o VIII nervo craniano.

Inalao: Concentrao atmosfrica mxima permitida de 5mg/m3

 Acetato de etila
Inflamabilidade: Inflamvel
Contato com a pele: causar dermatite, remova a vtima para um chuveiro e retire
desengordurante de tecido orgnico
Contato com os olhos: causa irritao
conjuntival e opacidade da crnea;
Ingesto: dor de cabea, sonolncia e
inconscincia e tambm pode causar
acidose devido hidrolisao
Inalao: os vapores podem causar irritao
para o sistema respiratrio em altas
concentraes e pode causar dor de
cabea, nuseas, diminuio dos reflexos,
irritao pulmonar e efeitos txicos.
Exposio em concentrao acima de 6000
ppm pode causar dor de cabea e
diminuio dos reflexos.
Primeiros Socorros
todas as roupas contaminadas, lavar as
partes atingidas do corpo com sabo e
gua corrente durante 15 minutos, pelo
menos. No colocar qualquer
medicamento ou produto qumico,
encaminhe a vtima ao dermatologista.
lave os olhos imediatamente com grande
quantidade de gua fresca e limpa pelo
menos por 15 minutos. Leve a vtima a um
oftalmologista.
se a vtima estiver consciente, dar gua
para beber e aps induzir o vmito. Obter
socorro mdico imediatamente.
remova a vtima da rea contaminada, se
necessrio inicie respirao artificial e
obtenha socorro.
 cido actico
Inflamabilidade: Inflamvel
Contato com a pele: Causa srios problemas
de pele. Os sintomas incluem vermelhido,
dor e queimaduras.
Contato com os olhos: A soluo pode
causar srios ferimentos seguidos de perda
de viso. A exposio ao vapor pode causar
intensa lacrimao e irritao nos olhos.
Ingesto: A ingesto pode causar graves
ferimentos e levar morte. Os sintomas so
dor de garganta, vmito e diarreia. A
ingesto de 1 ml resulta em perfurao do
esfago.
Inalao: Pode causar irritao nas mucosas
do nariz, garganta, pulmo e dificuldade na Levar a pessoa para um lugar arejado
respirao.
Primeiros Socorros
Usar gua, p qumico ou dixido de
carbono.
Lave imediatamente em gua
corrente por, pelo menos, 15 minutos.
Remova a roupa contaminada e os
sapatos. Lave as roupas e os sapatos
antes de reutiliz-los. Procure ajuda
mdica.
Lave imediatamente com gua
corrente por, pelo menos, 15 minutos,
abrindo e fechando as plpebras.
Procure ajuda mdica imediatamente.
NO INDUZA O VMITO! Se possvel,
d grandes quantidades de gua ou
leite. Nunca d algo pela boca para
uma pessoa inconsciente. Procure um
mdico imediatamente.
 Diclorometano
Inflamabilidade: Vapores inflamveis.
Contato com a pele: Pode causar uma
irritao da pele.
Contato com os olhos: Pode causar uma
irritao dos olhos.
Ingesto: Pode ser perigoso se for
engolido
Inalao: Facilmente absorvido pelas vias
respiratria e drmica. um depressor do
sistema nervoso central e irritante de
mucosas. Produz monxido de carbono
no organismo, o que impossibilita o
transporte do oxignio para os tecidos,
provocando hipxia. Possui potencial
mutagnico.
Primeiros Socorros
Usar CO2, espuma, p qumico ou
gua
Lavar abundantemente com gua. Tirar
a roupa contaminada.
Enxaguar abundantemente com gua,
mantendo a plpebra aberta (durante
pelo menos 10 minutos). Consultar
imediatamente um oftalmologista.
Ateno em caso de vmitos. Perigo
de aspirao! Manter livres as vias
respiratrias. Beber muita gua.
Administrao posterior de: Carvo
ativado (20 - 40 g, numa suspenso a
10%). Chamar um mdico.
Exposio ao ar fresco. Eventualmente,
respirao artificial ou ventilao com
aparelhagem apropriada. Manter livres
as vias respiratrias. Chamar um
mdico caso o sinistrado se queixar de
dores ou de mal-estar geral.
 Etanol
Inflamabilidade: Inflamvel
Contato com a pele: Causa dermatoses e
irritaes moderadas.
Contato com os olhos: Causa severa irritao nos
olhos. Pode causar conjuntivite e problemas na
crnea.
Ingesto: mostra-se relacionada dose, mas a
tolerncia varia amplamente entre os indivduos.
Nveis sangneos maiores do que 100 mg/dl
definem, em termos legais, o estado de
intoxicao e esto tipicamente associados com
ataxia; com 200 mg/dl, os pacientes esto
sonolentos e confusos. Com nveis acima de 400
mg/dl geralmente h depresso respiratria,
podendo levar morte. Pode causar problemas no
fgado, rim e corao.
Inalao: Causa irritao no trato respiratrio. Em
altas concentraes, causa problemas no sistema
nervoso central, dor de cabea, inconscincia e
coma. Pode causar efeitos narcticos.
Primeiros Socorros
Usar p qumico seco, dixido de
carbono gua ou espuma de lcool.
Lave imediatamente com gua
corrente e sabo. Remova a roupa
contaminada e os sapatos. Procure
ajuda mdica. Lave as roupas e os
sapatos antes de reutiliz-los.
Lave imediatamente com gua
corrente por, pelo menos, 15 minutos,
abrindo e fechando ocasionalmente as
plpebras. Procure ajuda mdica
imediatamente.
INDUZA O VMITO! D de 2 a 4 copos
de gua ou leite se a pessoa estiver
consciente. Nunca d algo pela boca
para uma pessoa inconsciente.
Remover o indivduo ao ar livre. Se no
estiver respirando, fazer respirao
artificial. Se respirar com dificuldade, d
oxignio. Procure ajuda mdica.
 Metanol Primeiros Socorros
Inflamabilidade: Inflamvel Importante: a chama quando o metanol - Incndios pequenos: p, dixido de
est queimando limpa e clara, praticamente invisvel a luz do dia! carbono, hlon, gua pulverizada, espuma
comum
- Incndios grandes: gua pulverizada,
espuma do tipo AFFF(R) (com formao de
pelcula aquosa resistente ao lcool) com
sistema de proporo de espuma de 3% ou
6%

Contato com a pele: absorvido atravs da pele e o contato com o Lavar com gua em abundncia e retirar
lquido provoca desengorduramento e dermatite. vestes contaminadas

Contato com os olhos: irritao da crnea e raramente opacificao no Lavar com gua em abundncia e observar
contato com os olhos na forma lquida do metanol. a plpebra superior e inferior se h alguma
irritao. Em qualquer complicao, procurar
o oftalmologista

Ingesto: Uma dose de 30-100 mL pode ser fatal para o homem. dosagens acima de 40 ml/dl indica uso de
Distrbios digestivos: nuseas, vmitos, diarreia e dor abdominal. Distrbios antdoto especfico: etanol (lcool etlico) EV
neuropsquicos: dor de cabea, vertigens, embriaguez, astenia, ou VO. Nveis acima de 50mcg/dl e a
sonolncia, coma, dilatao das pupilas, diminuio da acuidade visual presena de acidose metablica indicam
e cegueira, devido degenerao das terminaes da retina e do nervo uso de etanol + hemodilise, para melhor
ptico. Hemorragia cerebral, leses do crebro e cerebelo. prognstico do caso.
Distrbios hemodinmicos: hipotenso e insuficincia cardaca. A morte
pode ser em conseqncia de insuficincia respiratria ou cardaca.

Inalao: a inalao de concentraes elevadas de vapores de metanol Levar a vtima a um espao ventilado. Se
(acima de 2.000 ppm) provoca irritao das membranas mucosas do necessrio, reanime a pessoa ou ajude-a a
trato respiratrio e sinais e sintomas de efeitos sistmicos: Distrbios respirar.
neurolgicos: dor de cabea, fadiga, insnia, vertigens, tremores, rudo
nos ouvidos, viso turva, viso dupla e cegueira. Distrbios locais: irritao
e coceira na pele, dermatite e eczema. Distrbios digestivos: nuseas,
vmito e clica. A exposio a concentraes de 25.000 ppm
imediatamente perigosa para a vida e a sade
 Recipientes adequados e rotulados
pelas tcnicas
Posterior descarte por empresa
especializada
Jaleco de algodo de manga comprida e comprimento at o
joelho, calas compridas, sapato fechado, cabelos presos
 Livros
COLLINS, CarolCarolH. H. etetal, introdual, introduo a mo mtodos

cromatogrtodos cromatogrficos, 6ficos, 6eded, ed. , Unicamp,Campinas,1995.

NETTO, J. Z., CAZETTA, J. O. Cromatografia Plana, FunepFunep, Jaboticabal, 2005 ,

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BRAGA, G.L. Introduo a Mtodos Cromatogrficos. 6 Edio

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http://www.slideshare.net/b.cortez/cromatografiaprincpios-cg