O meio de crescimento suplementado com extrato de levedura com exceo do sulfato de sdio, que forneceu todo

o inorgnico do meio. Os ingredientes do meio de crescimento para a fermentao so, geralmente, os seguintes:
lactato de amnio, 6-0 g .; acetato de amnio, 3-5 g; KH2PO4, 3 0 g .; Na2SO4, 0 5 g; Mg (02C.CH3) 2,4H20, 0-2 g .;
CaCl2, 0 04 g .; FeCl2, 0 03 g .; ZnCl2, 0-01 g .; MnCl2,4H20, 0,01 g .; Cu (02C. CH3) 2, H20, 0-004 g .; Extracto de
levedura , 0,1 g; lactose, 30 g; glicose, 10 g; Emulso antiespumante de silicone, cerca de 0 5 g. Estes ingredientes,
com exceo dos acares, foram dissolvidos em 900 ml de gua em um pequeno fermentador com agitador,
ajustado para pH 5-8 com H3PO4, no autoclave para esterilizar. Os acares foram dissolvidos em mais 100 ml. de
gua, autoclavados separadamente e adicionados ao fermentador estril e resfriado. Adicionou-se fenilacetato de
potssio estril (20%, p / v) a uma concentrao final de 0,1% (p / v), como uma nica adio, cerca de 40 h aps o
fermentador ter sido inoculado. O miclio foi colhido 68-70 horas aps a inoculao, altura em que a concentrao
de penicilina no caldo era geralmente entre 150 e 300 unidades / ml, e estava aumentando a taxa mxima de cerca
de 10 unidades / ml / h. O pH aumentou at cerca de 7-5, e no necessitou de ajuste durante a fermentao. A
lavagem do miclio foi realizada coletando-o em um grande funil de vidro sinterizado com suco moderada,
resuspendendo-a no volume original de tampo de fosfato de potssio 0,01M a pH 7 e repetindo este procedimento
at o miclio ter sido lavado quatro vezes.

Foram geralmente utilizados frascos cnicos de 100 ml de capacidade, mas o tamanho dos vasos e o volume de seus
contedos foram ocasionalmente aumentados para o trabalho preparatrio. Em cada balo de 100 ml foram
colocados 1-0 g da almofada micelial lavada at um volume total de 10 ml. A concentrao micelial (base seca) era
ento de cerca de 12 mg / ml, como no fermentador no momento da colheita. O meio de crescimento fresco foi
utilizado inicialmente, com bons rendimentos de penicilina. Portanto, um meio nutriente o foi utilizado para
suspender o miclio. Este meio continha: lactose, 30 g; NaNO3, 3-0 g .; Na2SO4, 1-0 g .; KH2PO4, 05 g .; cido
fenilactico, 0-1 g. (como K sal); licor de milho ngreme, 50 ml; o pH foi ajustado para 7 0. Os frascos foram
incubados durante perodos de 1-5 horas em um agitador rotativo (250 rev./min.) em 240. No final deste perodo, o
contedo do frasco foi filtrado atravs do papel e os filtrados foram mantidos para exame.

Efeito das condies sobre o rendimento da penicilina. Quando o miclio lavado foi ressuspenso no meio ngreme de
milho lactose como descrito acima, a penicilina foi produzido a uma taxa uniforme durante pelo menos 5 h. A taxa
de produo foi a mesma que no fermentador no momento da colheita, e geralmente foi entre 8 e 12 unidades / ml.
/h. O rendimento dos frascos duplicados foi notavelmente constante (ver Tabela 1). O oxignio era necessrio para a
sntese de penicilina, uma vez que o miclio sob atmosfera de nitrognio produzia quantidades insignificantes do
antibitico (<0-2 unidade / ml / h). Metade da concentrao de miclio lavado produziu metade da quantidade de
penicilina, quando agitada no ar; portanto, o fornecimento de oxignio no era limitado nas condies descritas. No
mesmo meio nutriente, e tambm na mdia mais simples descrita abaixo, o ajuste do pH entre os limites 5-8 e 7-8
no teve efeito aprecivel no rendimento da penicilina. Foi escolhido um valor de pH de 7-0, uma vez que a
penicilina mais estvel na regio neutra. O requisito para nutrientes foi examinado pela omisso de ingredientes
nicos a partir do meio nutriente e pelo teste de penicilina aps um tempo de incubao padro de 3 h. Os
resultados esto resumidos na Tabela 1. Parece que o licor era dispensvel, exceto na ausncia de fenilacetato;
presumivelmente o licor forneceu precursores para a cadeia lateral da molcula de penicilina, e seu papel nutritivo
no miclio lavado pode ser influenciado pelo fenilacetato. Na presena de fenilacetato (com ou sem licor ngreme de
milho), nitrato, sulfato ou fosfato podem ser omitidos sem diminuir o rendimento da penicilina. A omisso de lactose
e licor de milho resultou em uma diminuio de rendimento de 20%, que poderia ser restaurada pela adio de
qualquer um desses constituintes. Assim, o nico nutriente indispensvel foi o precursor da cadeia lateral, e foi
encontrado posteriormente que o miclio lavado suspenso em fenilacetato de potssio aquoso (0,01%, pH 7)
produziu penicilina a uma taxa de 6-10 unidades / ml / h. Este rendimento pode ser aumentado para o mximo de 8-
12 unidades / ml / h pela adio de lactose ou licor de milho ngreme. A maioria das experincias relatadas abaixo
foi conduzida com fenilacetato de potssio aquoso como meio de suporte para o miclio lavado. O efeito da variao
da concentrao de fenilacetato foi determinado pela incubao do miclio lavado com o meio nutriente completo
(menos o licor de milho e o fenilacetato) ao qual foram adicionadas vrias quantidades de fenilacetato. Foram feitas
vrias tentativas para encontrar as condies em que o miclio lavado poderia ser armazenado, e ainda assim reter
sua atividade. O armazenamento a 20 em massa ou sob nitrognio provocou uma degenerao rpida, apenas 20%
da atividade restante aps 2 dias. Quando a almofada micelial foi finamente dividida e mantida no ar ou oxignio a 2
, manteve-se totalmente ativa durante 1-2 dias, mas apenas 30% da atividade permaneceu aps 6 dias. Uma
lavagem final do miclio com tampo de fosfato de 0 a 1 a pH 7 melhorou ligeiramente as qualidades de
manuteno, provavelmente controlando o aumento do pH que de outra forma ocorreu. A liofilizao ou
congelamento e descongelamento, mesmo na presena de glicerol (20-50%, v / v), destruram completamente a
capacidade de sintetizar a penicilina, assim como moagem com areia ou secagem com acetona.