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HEMOGLOBINA
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HEMOGLOBINA

PRINCPIO DE AO
Metodologia: Cianometahemoglobina.
O mtodo baseia-se na oxidao do tomo de Ferro (ferro II) da molcula de Hemoglobina pelo
Ferricianeto de potssio em pH fracamente alcalino, formando a metahemoglobina que convertida
em cianometahemoglobina aps a reao com o Cianeto de potssio. A colorao avermelhada
proporcional concentrao de Hemoglobina presente na amostra.

AMOSTRA
Preparo do Paciente
Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas.
Amostras utilizadas
Sangue total obtido livre de hemlise, colhido com EDTA, citrato ou oxalato.
Estabilidade e armazenamento da amostra
A amostra estvel por 24 Horas entre 2 e 8 C.
Volume ideal utilizado para anlise
(Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise).
Volume mnimo utilizado para anlise
(Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise).
Critrios para rejeio da amostra
No usar amostras com fortes sinais de hemolise e nem com presena de contaminao bacteriana.
Fazer referncia ao manual ou POP de coleta, separao e distribuio de material.

REAGENTE UTILIZADO
HEMOGLOBINA CATLOGO: K023 ANVISA: 10269360097

QUIBASA QUMICA BSICA Ltda


Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca
CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil
Tel.: (31) 3427.5454 - Fax (31) 3427.2999
e-mail: sac@bioclin.com.br
site: www.bioclin.com.br
CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira

Componentes do kit
Nmero 1 - Reagente de Cor Estoque - conservar entre 15 e 30 C. Contm:
Tampo Fosfato 200 mmol/L, Ferricianeto de potssio 120 mmol/L, Cianeto de potssio 150 mmol/L e
surfactante. Manusear este reagente com muito cuidado, reagente txico.

Preparo do Reagente de Trabalho


Em um balo volumtrico de 1 litro colocar aproximadamente 500 mL de gua destilada ou
deionizada.
Transferir todo o contedo de um dos frascos do Reagente de Cor Estoque, lavando-o por 3 vezes
com gua destilada ou deionizada, transferindo as guas de lavagem para o mesmo balo. Completar
o volume para 1.000 mL com gua destilada ou deionizada.
Armazenar em um frasco mbar temperatura ambiente, ao abrigo da luz direta e da umidade.
Estvel por 6 meses entre 15 e 30 C.

Estabilidade
Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo quando conservados de
acordo com a temperatura recomendada. Evitar a contaminao do produto durante o uso para no
afetar a sua estabilidade.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS


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1 - Somente para uso diagnstico in vitro;


2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos;
3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes;
4 - Colunas deionizadoras saturadas liberam gua alcalina, ons diversos e agentes oxidantes e
redutores, que podem alterar de forma significativa os resultados;
5 - No preparo do Reagente de Trabalho, pode ocorrer formao de bolhas, o que normal. No
entanto, deve-se evitar o mximo, pois dificulta o correto acerto do menisco;
6 - muito importante que o frasco empregado para armazenar o reagente de trabalho no contenha
cidos, bases ou solventes orgnicos do tipo detergentes.
7 - O Reagente de Trabalho e os resduos das reaes nunca devem ser desprezados em presena de
reagentes cidos, pois levam a formao de gases txicos.
8 - O sangue total quando coletado em oxalato ou suas misturas requer um intervalo de tempo maior,
para que a leitura seja realizada;
9 - A amostra de sangue deve ser adequadamente homogeneizada antes de ser pipetada;
10 - As ponteiras das pipetas automticas devem estar limpas, secas e em condies fsicas de uso;
11 - O Reagente de Cor no deve ser utilizado se apresentar mudana de colorao;
12 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os critrios de biossegurana de
acordo com a legislao vigente.

EQUIPAMENTOS
Tcnica Manual
Condies de Reao
Equipamento: Espectrofotmetro ou colormetro
Leitura: Comprimento de onda 540 nm (520-550)
Kit de padro de Hemoglobina BIOCLIN
Pipetas para medir amostras e reagentes
Cronmetro

PROCEDIMENTO
Procedimento Manual
Marcar o tubo A (Amostra) e proceder como a seguir:

Amostra
Reagente de Trabalho 2,5 mL
Sangue total 10 L

Homogeneizar e aguardar 5 minutos temperatura ambiente, fazer a leitura a 540 nm (520-550)


acertando o zero com o Reagente de Trabalho. A reao de cor estvel por 60 minutos.

CLCULOS
Para calcular o valor em g/dL ver as instrues contidas no conjunto Padro de Hemoglobina Bioclin.

Fator de calibrao = Concentrao do padro


Absorbncia do padro

Hemoglobina (g/dL) = Absorbncia da amostra x Fator de calibrao

RESULTADOS
Unidade de Medida: g/dL
Fator de Converso de Unidades (g/dL para SI): g/dL de Hemoglobina X 1,61 = mmol/L de
Hemoglobina

CONTROLE DA QUALIDADE
Materiais
Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de
catlogo.
Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados.
Controle Interno
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Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura


ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits.
Deve ser prtica rotineira do Laboratrio Clnico o uso de soro controle para checar a
preciso e exatido das dosagens. Deve ser de 5% o erro mximo permitido em relao
aos valores pr-estabelecidos para os controles.
Citar POP para controle interno.
Controle Externo
Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de
comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade.
Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo
Definir como os dados de controle so arquivados e gerenciados.
Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade.

VALORES DE REFERNCIA
Os valores de referncia em g/dL, para o presente mtodo, foram obtidos atravs da determinao da
Hemoglobina em populaes sadias do sexo masculino e feminino.

Homens............................12,5 a 17,5 g/dL


Mulheres...........................11,5 a 15,5 g/dL

Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever criar sua faixa
de valores de referncia, de acordo com a populao atendida.

LINEARIDADE
Linearidade
A reao linear at 20 g/dL.

LIMITAES DO MTODO
O Reagente de Cor contm cianeto. Manusear com muito cuidado. Txico

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1 - HENRY, R. J., Clinical Chemistry Principles and Techinics Hoeber Division, Haper and Row, New
York.
2 - TONKS, D. B., Clin. Chem., 9:217, 1983.
3 - DRABKIN, D. L., Austin, J. H., J. Biol. Chem. , 112:51, 1935.
4 - BARON, D. N., Bioqumica de la Patologia Mdica Ediciones Toray S/A Barcelona.
5 - Internacional Committe for Standartization in Haematology: Recommendations for Haemoglobino-
metry in Human Blood: Brit., J. Haemat., 13 (suppl.) 71, 1967.
6 - Word Health Organization, International Biological Reference Preparations 1968. W. H. O. Techn.
Rep. Ser. 384, 85, 1968.

Nome Assinatura Data


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Razo:

Nmero Destino
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