Ilustrações: Uberti

Efeito da temperatura sobre a

velocidade da reação enzimática
Desenvolvimento e criação: Christianne Salbego e Vera M. Treis Trindade
Disciplina de Bioquímica I - Curso de Farmácia - Dep. Bioquímica - ICBS - UFRGS - 2009
 ATENÇÃO!
Esta simulação foi
desenvolvida seguindo o
protocolo descrito nas
páginas 41 e 42 da apostila.
Identifique e confira o material a ser utilizado na simulação prática
da curva de temperatura da pirofosfatase
Diferentes temperaturas de incubação

37°°C 45°°C 70°°C

Temperatura
ambiente
20°°C

0°°C

Chris-Vera
Identifique e confira o material a ser utilizado na simulação prática
da curva de temperatura da pirofosfatase

pipetas de vidro e tubos de ensaio

Chris-Vera
Identifique e confira o material a ser utilizado na simulação prática
do efeito da temperatura sobre a velocidade da pirofosfatase
(curva de temperatura)
PPi EDTA molibdato
tampão MgCl2 água 0,01M 0,1M enzima de amonio Redutor

Chris-Vera
Pipetar tampão, cofator, água, PPi e enzima* nos tubos conforme
indicado na página 42 da apostila.
* enzima (somente em A)

Chris-Vera
Incubação do sistema em diferentes temperaturas
durante 20 minutos

A C
2 2

0°C 37°C 45°C 70°C

20°C

Chris-Vera
Parar a reação enzimática com a adição de molibdato
de amônio 0,25% em ácido sulfúrico 0,5N
Qual a outra função deste reativo ?

Chris-Vera
 Pipetar 0,1 mL de enzima nos tubos controles

Por que este procedimento ocorre nesta fase da técnica?

Chris-Vera
Pipetar 0,4mL de reagente redutor

Chris-Vera
Observar o desenvolvimento da cor a temperatura
ambiente durante 7 minutos
Após acrescentar 0,1 mL de EDTA 0,1M (parar a reação de cor)

Chris-Vera
Leitura da absorvância em 650 nm usando o tubo B
calibrar o zero de absorvância

Chris-Vera
Leitura da absorvância em 650 nm usando o tubo B
calibrar o zero de absorvância

Chris-Vera
Faça o relatório desta aula prática simulada
conforme o indicado na apostila usando os
resultados abaixo.
RELATÓRIO N°°6
Leituras da curva de temperatura da pirofosfatase

Tubos Extinção em 650nm Temperatura

C1 0,05 0 ºC
C2 0,14 Ambiente
C3 0,18 37 ºC
C4 0,17 45 ºC
C5 0,05 70 ºC
A1 0,07 0 ºC
A2 0,29 Ambiente
A3 0,43 37 ºC
A4 0,78 45 ºC
A5 0,12 70 ºC

Por favor, veja o slide seguinte!!!

Chris-Vera
☺ AGRADECIMENTOS
Técnicos de laboratório:
Lucia Martini
Norma Silva
Luiz Paulo Silva Braga
Lia Regina Blazina
Fernanda Timm Souza
Geancarlo Zanatta

Alunos de Bioquímica I do curso de Farmácia-UFRGS - 2008/2

Monitores:
Eduardo Rigon Zimmer
Thaline Silva
Lucas Ewald

Professoras:
Letícia Pettenuzzo
Cristiane Matté