Universidade Federal do Recôncavo da Bahia

Centro de Ciências Agrárias, Ambientais e Biológicas - CCAAB

Profa. Maria Gardenny Ribeiro Pimenta
Disciplina de Microbiologia Geral

Prática VII: Método de contagem de mesófilos em placa

1. Objetivos

 Realizar a inoculação de amostra em placa de Petri utilizando a técnica de semeadura

em profundidade;
 Realizar a contagem de bactérias mesófilas (UFC/mL).

2. Materiais

 Ponteiras de 1 mL estéril;
 Placa estéril;
 Pipeta automática de 1 mL;
 Lamparina de álcool;
 Chapa aquecedora;
 Agitador de tubos;
 Caneta para marcar vidraria;
 Ágar Padrão para Contagem (PCA);
 Solução Salina 0,85%;
 Amostra.

3. Procedimento

3.1. Diluição da amostra.

 Colocar 1 mL da amostra no tubo de ensaio contendo 9 mL de solução salina (10-1);

 Retirar 1 mL da diluição 10-1 para outro tubo de 9 mL de solução salina 0,85% (10-2);
 Repetir o procedimento para as outras diluições subsequentes até a diluição 10-5.

3.2. Inoculação por plaqueamento em profundidade.

 Homogeneizar a amostra diluída;

 Transferir 1 mL para a placa de Petri estéril;
 Verter 15 mL de ágar fundido (44 a 46 °C) na placa de Petri;
 Homogeneizar as placas com movimentos suaves rotatórios (em forma de oito), para
melhor mistura da amostra com o meio de cultura;
 Esperar solidificar;
 Inverter as placas e incubar a 35±1 °C por 48±2 horas.
3.3. Contagem e cálculo dos resultados.

 Selecionar as placas com número de colônias entre 30 e 300 colônias;

 Contar as colônias das placas com diluições correspondentes;
 Efetuar a média das placas e multiplicar o número de colônias pelo inverso da diluição
inoculada;
 Expressar o resultado em UFC/mL.

4. Comentário

A contagem pode ser feita utilizando os métodos de plaqueamento em profundidade,

superfície e filtração em membrana. O plaqueamento em profundidade tem limite de
detecção de 10 UFC/g para produtos sólidos ou 1 UFC/mL para produtos líquidos. A técnica de
plaqueamento em profundidade aplica-se para contagem total de aeróbios mesófilos,
contagem de clostrídios, sulfito redutores, contagem de enterobactérias, contagem de
enterococos e contagem de bactérias lácteas.

5. Questionário

5.1. Qual o objetivo da diluição seriada?

5.2. Observando o experimento, faça a contagem e calcule o resultado do crescimento na
placa em UFC/mL.
5.3. O que são bactérias mesófilas aeróbias?
5.4. Por que se utiliza o Ágar Padrão para Contagem (PCA)?

6. Referências bibliográficas

OKURA, M. H.; RENDE, J. C. Microbiologia: Roteiros de Aulas Práticas. Ribeirão

Preto:Tecmedd, 2008. 201p.
VERMELHO, A. B.; PEREIRA, A. F.; COELHO, R. R. R.; SOUTO-PADRÓN, T. Práticas de
Microbiologia. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006. 239p.
SILVA, N.; JUNQUEIRA, V. C. A.; SILVEIRA, N. F. A.; TANIWAKI, M. H.; SANTOS, R. F. S.;
GOMES, R. A. R. Manual de Métodos de Análise Microbiológica de Alimentos. 3 ed. São
Paulo: Livraria Varela, 2007. 552p.