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FOSFATASE ALCALINA CINÉTICA

K021
INSTRUÇÕES DE USO
FINALIDADE EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAIS TÉCNICA
Método para a determinação da Fosfatase Alcalina. Teste Espectrofotômetro termostatizado, pipetas, relógio ou A Bioclin recomenda, para uso do kit, utilizar como
cinético, somente para uso diagnóstico in vitro. cronômetro, tubos de ensaio, Biocontrol N, Biocontrol calibrador o kit Biocal Bioclin e como soro controle os kits
P Bioclin e Biocal Bioclin. Encontram-se no mercado Biocontrol N e P Bioclin.
PRINCÍPIO DE AÇÃO especializado de artigos para Laboratórios de Análises
Metodologia: Cinética IFCC Clínicas. Adicionar 20 L de Amostra a 1,0 mL do Reagente de
A Fosfatase Alcalina catalisa a transferência do grupo Trabalho, misturar e transferir para cubeta termostatizada
Fosfato do substrato p-Nitrofenilfosfato (pNFF) para CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO E TRANSPORTE a 37ºC e esperar 1 minuto. Fazer a leitura inicial,
o 2-Amino-2-Metil-1-Propanol (AMP), formando o A temperatura de armazenamento deverá ser de 2 a disparando simultaneamente o cronômetro. Repetir as
p-Nitrofenol de acordo com a equação abaixo: 8ºC. O transporte, em temperaturas entre 15 e 30ºC, não leituras após 1, 2 e 3 minutos. Calcular a média das
deverá exceder a 72 (setenta e duas) horas. Manter ao diferenças de absorbância por minuto (A/min.) e utilizá-la
p-NFF + AMP ALP
p-Nitrofenol + AMP-Fosfato abrigo da luz e evitar umidade. Não congelar. para cálculo do resultado.

A velocidade de liberação do p-Nitrofenol, que possui CUIDADOS ESPECIAIS CÁLCULOS

elevada absorbância a 405 nm, é proporcional a atividade 1- Somente para uso diagnóstico in vitro profissional. ALP (U/L) = A/min. x 2757
enzimática da Fosfatase Alcalina da amostra. 2- Seguir com rigor a metodologia proposta para obtenção Os resultados serão expressos em U/L.
de resultados exatos.
REAGENTES 3- A água utilizada na limpeza do material deve ser LIMITAÇÕES DO PROCESSO
Número 1 - Tampão - Conservar entre 2 e 8ºC. Contém: recente e isenta de agentes contaminantes. O método cinético baseia-se na absortividade molar.
2-Amino 2-Metil Propanol < 1,0 mol/L, ativadores, 4- Colunas deionizadoras saturadas liberam água Por essa razão, as leituras devem ser realizadas em um
estabilizante e conservante. alcalina, íons diversos, agentes oxidantes e redutores, espectrofotômetro que cumpra as seguintes condições:
Comprimento de onda 405 nm
Número 2 - Substrato - Conservar entre 2 e 8ºC. Contém: que podem alterar de forma significativa os resultados.
Semi trajetória da banda de passagem 10 nm
Substrato p-NFF (p-Nitrofenilfosfato) < 100 mmol/L, 5- É importante, para o bom desempenho do teste, um
Luz espúria menor que 0,5%
estabilizante e conservante. rigoroso controle de tempo e temperatura.
Cubeta de 1cm termostatizada
6- Recomendamos aplicar as normas locais, estaduais e
APRESENTAÇÃO federais de proteção ambiental para que o descarte dos
INTERFERENTES
reagentes e do material biológico seja feito de acordo
Apresentação Reagente Nº 1 Reagente Nº 2 Não utilizar amostras hemolisadas ou lipêmicas, pois os
com a legislação vigente.
1 108 mL 12 mL resultados obtidos poderão ser falsamente elevados.
7- Para obtenção de informações relacionadas à
2 1 x 40 mL 1 x 10 mL biossegurança ou em caso de acidentes com o produto, CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE
consultar as FISPQ (Ficha de Informações de Segurança O Laboratório Clínico deve possuir um programa interno
3 2 x 40 mL 2 x 10 mL
de Produtos Químicos) disponibilizadas no site de controle da qualidade, onde procedimentos, normas,
4 4 x 40 mL 4 x 10 mL www.bioclin.com.br ou através de solicitação pelo SAC limites e tolerância para variações sejam claramente
5 2 x 40 mL 1 x 20 mL (Serviço de Assessoria ao Cliente) da Quibasa. estabelecidos. É importante ressaltar que todos os
8- Não utilizar o produto em caso de danos na embalagem. sistemas de medição apresentam uma variabilidade
6 4 x 40 mL 2 x 20 mL
9- É imprescindível que os instrumentos e equipamentos analítica característica, que deve ser monitorada pelos
7 4 x 27 mL 1 x 12 mL utilizados estejam devidamente calibrados e submetidos próprios laboratórios. Para tanto, é recomendável a
8 6 x 36 mL 6 x 4 mL às manutenções periódicas. utilização de controles, que permitem avaliar a precisão e
a exatidão das dosagens.
9 6 x 36 mL 2 x 12 mL AMOSTRAS
10 3 x 36 mL 3 x 4 mL Soro ou plasma (Heparina) livre de hemólise. O analito é RASTREABILIDADE
estável 07 dias entre 2 e 8ºC e 30 dias a 10ºC negativos. A calibração do kit pode ser feita utilizando o fator de
11 3 x 36 mL 1 x 12 mL
calibração teórico, baseado na absortividade molar do
12 6 x 36 mL 1 x 24 mL DESCRIÇÃO DO PROCESSO p-Nitrofenol, ou através do calibrador BIOCAL. A Bioclin
13 1 x 20 mL 1 x 5 mL recomenda o uso do calibrador BIOCAL, que também é
PREPARO DO REAGENTE DE TRABALHO rastreável à absortividade molar do p-Nitrofenol.
14 2 x 20 mL 2 x 5 mL
Misturar nove (9) partes do Reagente Nº 1 com uma (1)
15 3 x 20 mL 3 x 5 mL parte do Reagente Nº 2. O reagente de trabalho é estável VALORES DE REFERÊNCIA
16 4 x 20 mL 4 x 5 mL durante 14 dias, entre 2 e 8ºC. Armazenar ao abrigo da Os valores de referência, em U/L, para o presente
luz. método, foram obtidos através da determinação da
17 5 x 20 mL 5 x 5 mL Fosfatase Alcalina em populações sadias.
18 6 x 20 mL 6 x 5 mL CONDIÇÕES DE REAÇÃO Adultos: 27 a 100 U/L
É condição indispensável o uso de cubeta termostatizada Crianças: 75 a 390 U/L
a 37ºC, caminho óptico de 1cm e leitura em 405 nm. (Incluindo adolescentes até 15 anos)
Estes valores devem ser usados como orientação, sendo
que cada laboratório deverá criar sua faixa de valores de
referência, de acordo com a população atendida.
Os resultados fornecidos por este kit devem ser
interpretados pelo profissional médico responsável, não
sendo o único critério para a determinação do diagnóstico
e/ou tratamento do paciente.
DESEMPENHO DO PRODUTO
CONTROLE DE QUALIDADE
Exatidão
COMPARAÇÃO DE MÉTODOS E ESPECIFICIDADE
METODOLÓGICA
O kit Fosfatase Alcalina Cinética foi comparado com outro
método para dosagem de Fosfatase, comercialmente
disponível. Foram realizadas 42 análises e os
resultados foram avaliados. A equação linear obtida foi
Y = 0,9979X - 0,486, e o coeficiente de correlação
0,9996. Com estes resultados, pode-se concluir que o kit
apresenta boa especificidade metodológica.
Linearidade EC REP OBELIS S.A. Português 2/2
A reação é linear até a concentração de 1500 U/L. Para
Bd. Général Wahis, 53
amostras com valores acima de 1500 U/L, recomenda-se
1030 Brussels, Belgium
diluir a amostra com NaCl 0,85%. Multiplicar o resultado
obtido pelo fator de diluição.
ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR
Serviço de Assessoria ao Cliente
SIGNIFICADO DIAGNÓSTICO
Tel.: 0800 0315454
A Fosfatase Alcalina está presente em altas concentrações
E-mail: sac@bioclin.com.br
nos ossos, fígado, intestino e placenta. Constitui um
útil indicador de doenças hepáticas e de doenças
Número de registro do kit de Fofatase Alcalina Cinética na
ósseas associadas a hiperatividade osteoblástica.
ANVISA: 10269360072
As condições em que a Fosfatase Alcalina está
aumentada são: nas doenças hepáticas e do trato
Revisão: Fevereiro/2019
biliar, na metástase do fígado e metástase óssea, na
acromegalia, no hipertireoidismo, no raquitismo, na
mononucleose infecciosa, na doença de Paget (atividade
osteoblástica) e no crescimento ósseo fisiológico.
Valores diminuídos da Fosfatase Alcalina podem ser
observados no hipotireoidismo, retardo de crescimento
nas crianças, hipofosfatasia (erro metabólico inato) e
desnutrição grave.

Precisão REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

REPETIBILIDADE 1 - International Federation of Clinical Chemistry (1978).
A repetibilidade foi calculada a partir de 40 determinações Section Nº 2. Provisional recommendations on the theory
sucessivas, utilizando 3 amostras com concentrações of reference values. Part. I. The concept of reference
diferentes, obtendo-se os seguintes resultados: values. Expert panel on the Theory of Reference Values –
Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3
Clin. Chim. Acta 87/3: 459F (1978).
2 - Spandrio, L. et al – Considerazioni sulla determina-
Concentração zione della fosfatesi alcalina del siero com método
105,80 278,40 196,93
Média (U/L) cinético – LAB2/2:123 (1975).
Desvio 3 - Gardner, M. D. et al – Frecuency distribution and
0,76 1,88 2,63
Padrão (U/L) ‘reference values’ of plasma alkaline phosphatase
Coeficiente de (EC3.1.3.1) activity in the adult population of Scotish new
0,72 0,67 1,34 town – J. Clin. Pathol. 31/12:1202 (1978).
Variação (%)
4 - Demaría, I; Setta, F.; Lorenzo, L. – VIII Congreso
REPRODUTIBILIDADE Argentino de Bioquímica, Octubre 1990 – Revista de la
A reprodutibilidade foi calculada a partir de 40 Asociación Bioquímica Argentina 54/3 (1990).
determinações sucessivas durante 3 dias consecutivos,
utilizando 3 amostras com concentrações diferentes, GARANTIA DE QUALIDADE
obtendo-se os seguintes resultados: Antes de serem liberados para o consumo, todos os
reagentes Bioclin são testados pelo Departamento
Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3
de Controle de Qualidade. A qualidade dos reagentes
Concentração
105,93 277,02 195,05
é assegurada até a data de validade mencionada na
Média (U/L) embalagem de apresentação, desde que armazenados e
Desvio transportados nas condições adequadas.
2,70 1,71 1,76
Padrão (U/L)
QUIBASA QUÍMICA BÁSICA Ltda
Coeficiente de
2,55 0,62 0,90 Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca
Variação (%)
CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil
Sensibilidade Tel.: (31) 3439.5454 - Fax: (31) 3439.5455
A sensibilidade foi calculada a partir de 40 determinações E-mail: bioclin@bioclin.com.br
de uma amotra isenta de Fosfatase. A média CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indústria Brasileira
encontrada foi 1,58 U/L, e o desvio padrão 0,50 U/L.
A sensibilidade, que indica o limite de detecção do EC REP
REPRESENTANTE
MARCA CE
EC REP EUROPEU AUTORIZADO EC REP
método, corresponde a média mais 3 vezes o desvio
padrão, sendo igual a 3,08 U/L.
NÃO UTILIZAR SE A
PROTEGER DA
PANTONE
LUZ 654
EC
E CALOR PANTONE 5435
REP EC REP EMBALAGEM ESTIVER
DANIFICADA
 Español 1/2

FOSFATASA ALCALINA CINÉTICA

K021
INSTRUCCIONES DE USO
FINALIDAD EQUIPAMIENTOS E INSUMOS OPERACIONALES TÉCNICA
Método para la determinación de Fosfatasa Alcalina. Test Espectrofotometro termostatizado, pipetas, reloj o La Bioclin recomienda, para uso del kit, utilizar como
cinético, solamente para uso diagnóstico in vitro. cronómetro, tubos de ensayo, Biocontrol N, Biocontrol calibrador el kit Biocal Bioclin y como suero control los
P Bioclin y Biocal Bioclin. Materiales encontrados en el kits Biocontrol N y P Bioclin.
PRINCIPIO DE ACCIÓN mercado especializado de articulos para Laboratorios de
Metodología: Cinética IFCC Análisis Clínicos. Adicionar 20 L de Muestra a 1,0 mL del Reactivo de
La Fosfatasa Alcalina cataliza la transferencia del Trabajo, mezclar y transferir para cubeta termostatizada
grupo Fosfato del sustrato p-Nitrofenilfosfato (pNFF) CONDICIONES DE ALMACENAMENTO Y a 37ºC y esperar 1 minuto. Hacer la lectura inicial,
a 2-Amino-2-Metil-1-Propanol (AMP), liberando el TRANSPORTE disparando simultaneamente el cronometro. Repetir
p-Nitrofenol de acuerdo con la ecuación siguiente: La temperatura de almacenamento deberá ser de 2 a
las lecturas después de 1, 2 y 3 minutos. Calcular la
8°C. El transporte en temperaturas entre 15 y 30ºC no
deberá exceder a 72 (setenta y dos) horas. Mantener media de las diferencias de absorbancia por minuto
p-NFF + AMP ALP
p-Nitrofenol + AMP-Fosfato (A/min.) y utilizar para cálculo del resultado.
cubierta de la luz y evitar humedad. No congelar.
La velocidad de liberación de p-Nitrofenol, que tiene alta CÁLCULOS
CUIDADOS ESPECIALES
absorbancia a 405 nm, es proporcional a la actividad ALP (U/L) = A/min. x 2757
1- Solamente para el uso diagnóstico in vitro
enzimática de la Fosfatasa Alcalina de la muestra. Los resultados seran expresos en U/L.
profesional.
2- Seguir con rigor la metodología propuesta para
REACTIVOS obtención de resultados exactos. LIMITACIONES DEL PROCESO
Número 1 - Tampón - Almacenar entre 2 y 8ºC. Contiene: 3- El agua utilizada en la limpieza del material debe ser El método cinético basease en la absortividad molar. Por
2-Amino 2-Metil Propanol < 1,0 mol/L, activadores, reciente e exenta de agentes contaminantes. esto, las lecturas deben ser hechas en espectrofotometro
estabilizante y conservante. 4- Columnas deionizadoras saturadas liberan agua con las seguintes condiciones:
Número 2 - Sustrato - Almacenar entre 2 y 8ºC. Contiene: alcalina, iones diversos, agentes oxidantes y reductores, Comprimento de onda 405 nm
Sustrato p-NFF (p-Nitrofenilfosfato) < 100 mmol/L, que pueden alterar de forma significativa los resultados. Semi trajetoria de banda de pasaje 10 nm
estabilizante y conservante. 5- Es importante para un bueno resultado del test un Luz espúria menor que 0,5%
rigoroso control de tiempo y temperatura. Cubeta de 1cm termostatizada
PRESENTACIÓN 6- Se recomienda la aplicación de la ley local, estatal y
federal de protección ambiental para la eliminación de
Presentación Reactivo Nº 1 Reactivo Nº 2 INTERFERENTES
reactivos y material biológico se hace de acuerdo con la
1 108 mL 12 mL legislación vigente. No utilizar muestras hemolizadas o lipemicas, pues estas
7- Para obtener información relacionada con la seguridad muestras pueden elevar falsamente los resultados.
2 1 x 40 mL 1 x 10 mL
biológica o en caso de accidentes con el producto,
3 2 x 40 mL 2 x 10 mL consultar la FISPQ (Ficha de Informaciones de la CONTROL INTERNO DE CALIDAD
Seguridad de Productos Químicos) disponibles en el site El Laboratorio Clínico debe poseer un programa interno
4 4 x 40 mL 4 x 10 mL de control de calidad, donde procedimientos, normas,
www.bioclin.com.br o solicitando a través del SAC
5 2 x 40 mL 1 x 20 mL (Servicio de Asesoría al Cliente) de Quibasa. límites y tolerancia para variaciones sean claramente
8- No utilice el producto en caso de daños en su embalaje. establecidos. Es importante resaltar que todos los
6 4 x 40 mL 2 x 20 mL
9- Es esencial que los instrumentos y equipos utilizados sistemas de medición presentan una variabilidad analítica
7 4 x 27 mL 1 x 12 mL estén adecuadamente calibrados y sometidos a característica, que debe ser vigilada por los propios
mantenimientos periódicos. laboratorios. Por lo tanto, es recomendable la utilización
8 6 x 36 mL 6 x 4 mL
de controles, que permiten la evaluación, la precisión y la
9 6 x 36 mL 2 x 12 mL MUESTRAS exactitud de las dosificaciones.
Suero o plasma (Heparina) libre de hemolisis. El analito
10 3 x 36 mL 3 x 4 mL
es estable 07 días a temperaturas entre 2 y 8ºC y por 30 TRAZABILIDAD
11 3 x 36 mL 1 x 12 mL dias a 10ºC negativos. El kit se puede calibrar usando el factor de calibración
12 6 x 36 mL 1 x 24 mL teórica basada en la capacidad de absorción molar del
DESCRIPCIÓN DEL PROCESO
p-Nitrofenol, o a través del calibrador BIOCAL. Bioclin
13 1 x 20 mL 1 x 5 mL
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO recomienda el uso del calibrador BIOCAL que también es
14 2 x 20 mL 2 x 5 mL trazable a la absorción molar del p-Nitrofenol.
Mezclar nueve (9) partes del Reactivo Nº 1 con una (1)
15 3 x 20 mL 3 x 5 mL parte del Reactivo Nº 2. El Reactivo de Trabajo es estable
por 14 días a temperaturas entre 2 y 8ºC. Mantener al VALORES DE REFERENCIA
16 4 x 20 mL 4 x 5 mL Los valores de referencia en U/L, para el presente
abrigo de la luz.
17 5 x 20 mL 5 x 5 mL método, fueron obtenidos por la determinación de
CONDICIONES DE REACCIÓN Fosfatasa Alcalina en poblaciones sanas.
18 6 x 20 mL 6 x 5 mL
Es condiciones indispensable el uso de cubeta Adultos: 27 a 100 U/L
termostatizada a 37ºC, paso de luz de 1 cm y lectura en Niños: 75 a 390 U/L
405 nm. (Incluindo los adolescentes haste los 15 años)
Estos valores deben ser usados como orientación, sendo Linearidad EC REP OBELIS S.A. Español 2/2
que cada laboratorio debera crear su rango de valores de La reacción es linear hasta la concentración de 1500
referencia, de acuerdo con la población atendida. U/L. Para muestras con valores encima de 1500 U/L, se Bd. Général Wahis, 53
Los resultados proporcionados por este kit deben ser recomienda diluir la muestra con NaCl 0,85%. Multiplicar 1030 Brussels, Belgium
interpretados por el profesional médico responsable, no el resultado obtenido por el factor de dilución.
siendo el único criterio para determinar el diagnóstico y/o ATENDIMIENTO AL CONSUMIDOR
tratamiento del paciente. SIGNIFICADO DIAGNÓSTICO Servicio de Asesoría al Cliente
La Fosfatasa Alcalina esta presente en altas Tel.: 0800 0315454
DESEMPEÑO DEL PRODUCTO concentraciones en huesos, hígado, intestino y placenta. E-mail: sac@bioclin.com.br
CONTROL DE CALIDAD Constitue un util indicador de enfermedades hepáticas
y de enfermedades oseas associadas con hiperatividad Número de registro del kit de Fosfatasa Alcalina
Exactitud osteoblástica. Cinética en la ANVISA: 10269360072
COMPARACIÓN DE METODOS Y ESPECIFICIDAD Las condiciones en que aumenta de la Fosfatase
METODOLÓGICA Alcalina son: en enfermedades hepáticas y del trato Revisión: Febrero/2019
El kit Fosfatasa Alcalina Cinética fue comparado con otro biliar, en la metastasis del hígado y metastasis osea, en
método para dosificación de Fosfatasa comercialmente la acromegalia, en el hipertireoidismo, en el raquitismo,
disponible. Fueron realizadas 42 análisis y los resultados en la mononucleosis infecciosa, en la enfermedades de
fueron evaluados. La ecuación linear obtenida fue Paget (actividad osteoblástica) y en el crescimento oseo
Y = 0,9979X - 0,486, con coeficiente de correlación igual fisiológico.
a 0,9996. Con estos resultados se puede concluir que el Valores disminuídos de la Fosfatasa Alcalina pueden ser
kit presenta buena especificidad metodológica. observados en el hipotireoidismo, retardo de crescimiento
en los niños, hipofosfatasia (error metabólico inato),
Precisión desnutrición grave.
REPETIBILIDAD
La repetibilidad fue calculada a partir de 40 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
determinaciones sucesivas, utilizando 3 muestras con 1 - International Federation of Clinical Chemistry (1978).
concentraciones diferentes, obteniéndose los siguientes Section Nº2. Provisional recommendations on the theory
resultados: of reference values. Part. I. The concept of reference SIMBOLOGÍA UNIVERSAL
values. Expert panel on the Theory of Reference Values –
Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3
Clin. Chim. Acta 87/3: 459F (1978).
Concentración
105,80 278,40 196,93
2 - Spandrio, L. et al – Considerazioni sulla determina-
Promedio (U/L) zione della fosfatasi alcalina del suero com método
Desvío cinético – LAB2/2:123 (1975).
0,76 1,88 2,63 3 - Gardner, M. D. et al – Frecuency distribution and
Patrón (U/L)
‘reference values’ of plasma alkaline phosphatase
Coeficiente de (EC3.1.3.1) activity in the adult population of Scotish new
0,72 0,67 1,34
Variación (%) town – J. Clin. Pathol. 31/12:1202 (1978).
4 - Demaría, I; Setta, F.; Lorenzo, L. – VIII Congreso
REPRODUCTIBILIDAD Argentino de Bioquímica, Octubre 1990 – Revista de la
La reproductibilidad fue calculada a partir de 40 Asociación Bioquímica Argentina 54/3 (1990).
determinaciones sucesivas durante 3 días consecutivos,
utilizando 3 muestras con concentraciones diferentes, GARANTÍA DE CALIDAD
obteniéndose los siguientes resultados: Antes de ser liberados para el consumo, todos los
Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 reactivos Bioclin son testados por el Departamento
de Control de Calidad. La calidad de los reactivos es
Concentración assegurada hasta la fecha de validad mencionada en la
105,93 277,02 195,05
Promedio (U/L) caja de presentación, si almacenados y transportados en
Desvío condiciones adecuadas.
2,70 1,71 1,76
Patrón (U/L)
QUIBASA QUÍMICA BÁSICA Ltda
Coeficiente de
Variación (%)
2,55 0,62 0,90 Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca
CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil
Tel.: +55 (31) 3439.5454 - Fax: +55 (31) 3439.5455
Sensibilidad
E-mail: bioclin@bioclin.com.br
La sensibilidad fue calculada a partir de 40 determinaciones
CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Industria Brasileña
de uma muestra exenta de Fosfatasa. El promedio
encontrado fue 1,58 U/L, y el desvío patrón 0,50 U/L.
La sensibilidad, que indica el límite de detección del
método, corresponde el promedio mas 3 veces el desvío EUROPEA REPRESENTANTE
MARCADO CE
patrón siendo 3,08 U/L. EC
EC REP
REP AUTORIZADO EC REP

NO UTILICE SI EL
PROTEGER DEL
PANTONE
EC
LUZ 654
Y CALOR PANTONE 5435
REP EC REP EMBALAJE ESTA
DAÑADA
 English 1/2

ALKALINE PHOSPHATASE KINETIC

K021
USAGE INSTRUCTIONS

FUNCTION EQUIPMENTS AND OPERATIONAL INPUTS TECHNIQUE

Method for determination of Alkaline Phosphatase. Kinetic Thermostated spectrophotometer, pipettes, watch Bioclin recommends using the kit Biocal Bioclin as
test, only for in vitro diagnostic use. or stopwatch, test tubes, Biocontrol N, Biocontrol P calibrator and as control serum, Biocontrol N and P
Bioclin and Biocal Bioclin They can be found at markets Bioclin Kits.
PRINCIPLE OF ACTION specialized on Laboratories of Clinical Analysis.
Methodology: Kinetic IFCC Add 20 mL of Sample to 1,0 mL of Working Reagent, 
The Alkaline Phosphatase catalyzes the transfer of TRANSPORTATION AND STORAGE CONDITIONS mix and transfer to a thermostated cuvette at 37ºC 
Phosphate group from the substrate p-Nitrophenylphosphate The storage temperature should be between 2 to 8ºC. and wait for 1 minute. Make the initial reading
(pNPP) to 2-Amino-2-Methyl-1-Propanol (AMP), The transport at temperatures between 15 and simultaneously starting the stopwatch. Repeat readings 
releasing p-Nitrophenol according to the equation below: after 1, 2 and 3 minutes. Calculate the mean
30ºC should not exceed 72 (seventy two) hours. Protect
from light and avoid moisture. Do not freeze. differences in absorbance per minute  (∆A/min.)  and use
p-NPP + AMP ALP
p-Nitrophenol + AMP-Phosphate it to calculate the result.
The rate of p-Nitrophenol releasing, which has high SPECIAL CARE
1- For professional in vitro diagnostic use only. CALCULATIONS
absorbance at 405 nm, is proportional of Alkaline
2- Strictly follow the methodology proposed to obtain ALP (U/L) = ΔA/min. x 2757
Phosphatase enzymatic activity of the sample.
exact results. Results are expressed as U/L.
REAGENTS 3- Water used in material cleaning must to be recent and
free of contaminants. LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
Number 1 - Buffer - Store between 2 and 8ºC. Contains:
2-Amino 2-Methyl Propanol < 1,0 mol/L, activators, 4- Saturated deionizer columns release alkaline water, The kinetic method is based on the molar absorptivity. By
stabilizer and preservative. many ions, oxidizing agents and reducers, that may alter this reason, the readings must be conducted in a
Number 2 - Substrate - Store between 2 and 8ºC. spectrophotometer that satisfies the following conditions:
the results significantly.
Contains: p-NFF Substrate (p-Nitrophenylphosphate) Wavelength 405 nm
5- It is important, for the good development of the test, a
< 100 mmol/L, stabilizer and preservative. Semi trajectory of the pass band 10 nm
rigorous control of time and temperature.
Stray light less than 0,5%
6- We recommend applying the local, state and federal
PRESENTATION 1cm thermostated cuvette
rules for environmental protection, so that disposal
Presentation Reagent Nº 1 Reagent Nº 2 of reagents and biological material can be made in
INTERFERENCES
accordance with current legislation.
1 108 mL 12 mL Do not use hemolyzed or lipemic samples, for the results
7- To obtain information related to biosafety or in obtained might be falsely elevated.
2 1 x 40 mL 1 x 10 mL case of accidents with the product, consult the MSDS
3 2 x 40 mL 2 x 10 mL (Material Safety Data Sheet) available on the website INTERNAL QUALITY CONTROL
www.bioclin.com.br or upon request by the SAC The Clinical Laboratory must have an internal quality
4 4 x 40 mL 4 x 10 mL (Customer Advisory Service) of Quibasa. control, where all procedures, rules, limits and tolerance to
5 2 x 40 mL 1 x 20 mL 8- Do not use the product in case of damaged packaging. variations be clearly established. It is important to mention
6 4 x 40 mL 2 x 20 mL
9- It is essential that the instruments and equipments that all measurement systems present a analytical variety,
used are properly calibrated and subjected to periodic and it must be monitor by the laboratory. Therefore, it is
7 4 x 27 mL 1 x 12 mL maintenance. recommendable the use of controls, allowing the precision
8 6 x 36 mL 6 x 4 mL and accuracy of the dosages.
SAMPLES
9 6 x 36 mL 2 x 12 mL
Serum or plasma (Heparin) free o hemolysis. The analyte TRACEABILITY
10 3 x 36 mL 3 x 4 mL is stable for 07 days if kept in temperature between 2 and The kit calibration can be made using the theoretical
11 3 x 36 mL 1 x 12 mL 8ºC and 30 days if kept at 10ºC negative. calibration factor based on the molar absorptivity of
the p-Nitrophenol, or through the BIOCAL calibrator.
12 6 x 36 mL 1 x 24 mL PROCESS DESCRIPTION Bioclin recommends the usage of the BIOCAL calibrator
13 1 x 20 mL 1 x 5 mL which is also traceable to the molar absorptivity of the
PREPARATION OF WORKING REAGENT p-Nitrophenol.
14 2 x 20 mL 2 x 5 mL
Mix nine (09) parts of Reagent Nº 1 with one (01) part of
15 3 x 20 mL 3 x 5 mL Reagent Nº 2. Working Reagent is stable during 14 days, REFERENCE VALUES
16 4 x 20 mL 4 x 5 mL if kept between 2 and 8ºC. Store away from light. The reference values in U/L, for this method were
obtained through the determination of Alkaline
17 5 x 20 mL 5 x 5 mL
REACTION CONDITIONS Phosphatase in healthy populations.
18 6 x 20 mL 6 x 5 mL It is indispensable conditions to use a thermostated Adults: 27 to 100 U/L
cuvette at 37ºC, 1 cm optical path and reading at 405 nm. Children: 75 to 390 U/L
(Including teenager up to 15 years old)
These values should be use as reference, being that Linearity EC REP OBELIS S.A. English 2/2
every laboratory must create their own range of values for The reaction is linear up to the concentration of 1500 U/L.
reference, according to the population served. For sample with value above 1500 U/L, we recomend Bd. Général Wahis, 53
The results provided by this kit must be interpreted by diluting the sample with NaCl 0,85%. Multiply the results 1030 Brussels, Belgium
the medical professional responsible, not being the obtained by the dilution factor.
only criterion for the determination of diagnosis and/or CUSTOMER SERVICE
treatment of the patient. DIAGNOSTIC SIGNIFICANCE Customer Advisory Service
Alkaline Phosphatase is present in high concentrations Phone.: 0800 0315454
PRODUCT PERFORMANCE bone, liver, intestine and placenta. Constitutes a useful E-mail: sac@bioclin.com.br
QUALITY CONTROL indicator of liver and bone diseases associated with
osteoblastic hyperactivity. ANVISA registration for Alkaline Phosphatase Kinetic kit:
Accuracy The conditions under which Alkaline 10269360072
COMPARISON OF METHODS AND SPECIFICITY Phosphatase is increased are: the liver and biliary
METHODOLOGY tract, metastasis liver and bone metastasis, in Review: February/2019
The Alkaline Phosphatase Kinetic was compared with acromegaly, in hyperthyroidism, in rickets, infectious
other commercially available methods for measurement mononudeosis, Paget’s disease (osteoblastic
of Phosphatase. 42 analyzes were performed and the activity) and in physiologic bone growth.
results were evaluated. The linear equation obtained Decreased values of Alkaline Phosphatase may be
was Y = 0,9979X - 0,486 and the correlation coefficient observed in hypothyroidism, growth retardation in
0,9996. With these results, we can conclude that the kit children, hypophosphatasia (inborn metabolic error) and
shows good methodological specificity. severe malnutrition.

Precision BIBLIOGRAPHIC REFERENCES

REPEATABILITY 1 - International Federation of Clinical Chemistry (1978).
The repeatability was calculated from 40 successive Section Nº 2. Provisional recommendations on the theory
determinations, using 3 samples with different of reference values. Part. I. The concept of reference
concentrations, obtaining the following results: values. Expert panel on the Theory of Reference Values –
Clin. Chim. Acta 87/3: 459F (1978).
Sample 1 Sample 2 Sample 3
2 - Spandrio, L. et al – Considerazioni sulla determinazione UNIVERSAL SYMBOLOGY
Average della fosfatesi alcalina del siero com método cinético –
105,80 278,40 196,93
Concentration (U/L) LAB2/2:123 (1975).
Standard 3 - Gardner, M. D. et al – Frecuency distribution and
0,76 1,88 2,63 ‘reference values’ of plasma alkaline phosphatase
Deviation (U/L)
(EC3.1.3.1) activity in the adult population of Scotish new
Coefficient of town – J. Clin. Pathol. 31/12:1202 (1978).
0,72 0,67 1,34
Variation (%) 4 - Demaría, I; Setta, F.; Lorenzo, L. – VIII Congreso
Argentino de Bioquímica, Octubre 1990 – Revista de la
REPRODUCIBILITY Asociación Bioquímica Argentina 54/3 (1990).
The reproducibility was calculated from 40 successive
determinations for 3 consecutive days, using 3 samples QUALITY ASSURANCE
with different concentrations, obtaining the following Before being released for consumption, all Bioclin 
results: reagents are tested by the Department of
Sample 1 Sample 2 Sample 3 Quality Control. The quality of reagents is assured
until expiration date stated on the presentation
Average packaging, when stored and transported under
105,93 277,02 195,05
Concentration (U/L) appropriate conditions.
Standard
2,70 1,71 1,76
Deviation (U/L) QUIBASA QUÍMICA BÁSICA Ltda
Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca
Coefficient of
Variation (%)
2,55 0,62 0,90 CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil
Phone.: +55 (31) 3439.5454 - Fax: +55 (31) 3439.5455
E-mail: bioclin@bioclin.com.br
Sensitivity
CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Made in Brazil
The sensitivity was calculated from 40 determinations
of a sample free the Phosphatase. The average found
was 1,58 U/L and the standard deviation of 0,50 U/L.
The sensitivity, that indicates the method detection limit,
corresponds the average plus 3 times the standard
deviation and is equal to 3,08 U/L.
EUROPEAN AUTHORIZED
EC
EC REP
REP REPRESENTATIVE EC REP CE MARK

DO NOT USE IF
KEEP AWAY
PANTONE
EC 654
REP
FROM PANTONE 5435
SUNLIGHT EC REP PACKAGE IS
DAMAGED