AULA 02

RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD DATA:

08/09/2018
VERSÃO:01
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICA MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA

CURSO DE GRADUAÇÃO DE FARMÁCIA (EAD)

PÓLO NATAL – RN

RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICASDA DISCIPLINA DE

MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA – AULA 02

Aluna: Rackel Nínive Machado Rêgo Nascimento

Matricula : 01236928
Professor Orientador: Andreia de Lima Sá

NATAL – RN
2018
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INTRODUÇÃO

O presente relatório tem como objetivo definir método de contagem de

leveduras, definição da coloração de Gram, visualização a morfologia e classificação
as bactérias nas lâminas de acordo com o seu comportamento diante dos corantes
de Gram.
.
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CONTAGEM DE LEVEDURAS POR DILUIÇÃO SERIADA

CONTAGEM LEVEDURA - Eleger a melhor diluição que se encontra dentro do parâmetro

(15 - 150) contar as colônias em cada placa, fazer a média aritmética das placas,
multiplicar pelo inverso da diluição e fator correção do volume semeado, resultado em
UFC/g ou mL (1 dígito antes e 1 dígito depois da vírgula).

CALCULO DA UFC/G OU ML DA AMOSTRA ESTUDADA

Números de colônias: 46.

1ml da cultura de bactérias com 99 ml de solução salina, isso formou uma diluição
de 1/100.
Cálculos:
0,1x1/100 = 1/1000 ou 0,001
46 / 1/1000
46x1000 = 46000UFC

Multipliquei o grau da diluição pela quantidade que pus na placa. (0,1 x 1/100)
para um resultado de 1/1000 ou 0,001.
Dividimos o numero de UFC da diluição (numero de colônias contadas pelo
resultado obtido na etapa 4.
Dividimos 46 por 1/1000, que é o mesmo que multiplicar por 1000.
O resultado é de 46000 UFC na amostra original.

As leveduras são fungos não filamentosos, normalmente disseminados por

inseto vetores, pelos ventos e correntes aéreas. A contagem de leveduras é
aplicável principalmente, na análise de alimentos ácidos, com pH menor que 4,5,
alimentos parcialmente desidratados e farinhas. Na contagem direta de leveduras
por microscopia podemos determinar a viabilidade da amostra utilizando o corante
azul de metileno na amostra diluída, transferindo o conteúdo para uma câmara de
Neubauer e analisando no microscópio, sendo que as leveduras mortas possuem
coloração azul. Na contagem das células devem ser desprezados os “brotamentos”
a menos que seu tamanho seja maior que metade da célula original .O número de
células por quadrado deve estar situado entre 20 e 30 .Caso a concentração no
campo ótico seja superior à faixa desejada, fazer diluições da suspensão original e
em seguida corar as células com a solução de azul de metileno. As células situadas
sobre as linhas divisórias à esquerda e abaixo dos quadrados, são contadas como
pertencentes àquele quadrado.
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COLORAÇÃO DE GRAM

É um dos passos mais importantes para a identificação bacteriana, com a finalidade

de facilitar a observação microscópica das bactérias e diferenciá-las quanto às suas
características morfotintoriais.

 PREPARO DO ESFREGAÇO: Coloca-se no centro da lâmina, com a alça de platina

estéril uma alçada do material a ser examinado e com movimentos circulares
espalhamos cuidadosamente. Se o material estiver em meio sólido, colocamos
previamente uma gota de solução salina estéril com a alça de platina no centro da
lâmina e sobre esta uma alçada do material, misturamos e espalhamos. O esfregaço
deve ser fixado pelo calor, passando a lâmina três a quatro vezes pela chama do
bico de Bunsen. O aquecimento fixa e mata as bactérias do esfregaço. Deixar a
lâmina esfriar.
 COLORAÇÃO PELO MÉTODO DE GRAM: é uma das mais importantes e
rotineiras em Microbiologia, e uma coloração composta e diferencial, pois permite a
diferenciação de bactérias em Gram positivas e negativas.

1. Definir o fundamento da coloração de Gram;

2. Visualizar a morfologia e classificar as bactérias nas lâminas de acordo
com o seu comportamento diante dos corantes de Gram.
.
Cobrir o esfregaço com cristal violeta durante 1 minuto, escorrer o corante e lavar
rapidamente. Cobrir a preparação com lugol, durante 1 minuto. Lavar em água corrente.
Diferenciar com álcool etílico a 95% até que não se desprenda mais corante (cerca de 30
segundos). Lavar e escorrer o excesso de água. Cobrir a lâmina com fucsina diluída
durante 30 segundos, Lavar em água corrente, escorrer, secar com papel de filtro e passar
rapidamente na chama do bico de Bunsen para terminar a secagem. Examinar em
microscópio ótico utilizando objetiva de imersão (100x), com o condensador alto e o
diafragma aberto.

Coloração de Gram: Preparar esfregaço e corar pelo método de Gram. A ausência de

cocos Gram positivos indica teste negativo para Staphylococcus aureus. A presença de
cocos Gram positivos indica a necessidade da realização de testes complementares.
Pesquisa de termonuclease: Fazer orifícios eqüidistantes com cerca de 2 mm de diâmetro
no ágar para ensaio de termonuclease ou no ágar azul de toluidina - DNA, em placas
previamente preparadas. Colocar os tubos das culturas, mantidos em caldo BHI, em
banho-maria fervente por 15 minutos. Deixar esfriar e preencher completamente um orifício
para cada cultivo a ser analisado. Incubar a 36 ± 1ºC por 4 horas ou a 50 ± 2ºC por 2
horas. O aparecimento, ao redor dos orifícios, de um halo rosa no ágar azul de toluidina ou
de um halo de clarificação no agar para ensaio de DNAse com verde de metila, será
indicativo de reação positiva para termonuclease. Considerar como positivas as culturas
que apresentarem halo de diâmetro superior a 1 mm. O Staphylococcus aureus é
termonuclease positiva.
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Finalidade bacteriológica:

Diferenciais – Possuem substâncias que evidenciam a utilização de determinados

substratos. Estabelecem diferenças entre microrganismos de características
parecidas. Ex: Mac Conkey e Teague.
Seletivos – permitem o crescimento de um tipo particular de microrganismos ou
suprimem o crescimento de outros tipos de microrganismos. Ex: ágar SS e ágar
verde brilhante.
Enriquecimento – favorece o crescimento da espécie desejada, mas não o
crescimento das outras espécies presentes em uma população mista.
Estoque - meio pobre em nutrientes, utilizado para manter as culturas armazenadas
por um determinado período de tempo.

 COMPOSIÇÃO DE MEIOS BÁSICOS:

Caldo Simples: Agar Sabouraud (para fungos)
Extrato de carne........................0,3% Glicose ...........................................40g
Peptona.....................................1,0% Peptona ..........................................10g
Cloreto de sódio.......................0,5% Ágar – ágar ......................................15g
Água destilada......................100ml Água destilada ............................1000 ml

BIBLIOGRAFIA:

www.edisciplina.usp.br
www.acervodigital.ufpr.br
http://www.ebah.com.br