P2 – INSTRUMENTAÇÃO E CONTROLE DE BIOPROCESSOS

1. Quais as características peculiares dos bioprocesso que dificultam a aplicação de controle automático
a esses processos?

Em um bioprocesso a peça chave é o biorreator, sendo as dificuldades da aplicação do controle automático

associadas as medições das variáveis a serem controladas. Assim, a temperatura, o pH e a pressão parcial, por
exemplo, são variáveis que podem ser avaliadas de forma direta, entretanto, variáveis químicas e bioquímicas
apresentam alta complexidade, sendo necessário o desenvolvimento de biossensores que possam relacionar
estas variáveis com sinais elétricos ou espectrofotométricos

2. Quais os benefícios advindos da aplicação de controle automático em bioprocessos?

A monitoração e o controle de processos são essenciais, pois garantem uma produtividade alta e estável,
resultados passíveis de reprodutibilidade e auxiliam na manutenção do controle de qualidade, otimizando o
processo e reduzindo custos de funcionamento da planta.

3. Explique o motivo da temperatura ser uma variável quase sempre monitorada e controlada em
bioprocessos. Quais tipos de sensores são disponíveis para medida desta variável? Qual o princípio no
qual está baseada a medida da temperatura utilizando termorresistores? Em que se baseia a medida de
temperatura utilizando termômetros de bulbo?

A temperatura é um dos fatores intrínsecos de um bioprocesso, pois atua como fator determinante para o
crescimento microbiano e tem-se que as moléculas e compostos biológicos possuem atividade e função
altamente sensíveis a esse parâmetro. Assim, é uma variável de fácil mensuração e controlem sendo que sua
medição ocorre por meio de sensores como o termopar, termômetros de bulbo e termorresistores.

O princípio da termorresistência se baseia na agitação térmica dos metais, com o aumento da temperatura do
meio há o aumento da resistência elétrica, sendo a relação resistência-temperatura não linear, exceto no
intervalo de temperatura entre 25-45 graus. Quanto à medida de temperatura pelo termômetro de bulbo, essa
se baseia na dilatação térmica de fluidos.

4. Desenvolva a análise dinâmica de um termômetro de mercúrio de bulbo de vidro, obtendo a função

de transferência que relaciona a temperatura medida pelo termômetro T(s) e a temperatura do
ambiente Ta (s) no qual o termômetro é inserido. Obtenha o perfil temporal da temperatura lida pelo
termômetro após uma perturbação degrau de amplitude A ocorrer na temperatura do ambiente Ta.

𝑑𝐻
= ℎ 𝐴 (𝑇𝑎 − 𝑇 ) 𝐻 = 𝐻𝑟𝑒𝑓 + 𝑚 𝑐𝑝 (𝑇 − 𝑇𝑟𝑒𝑓)
𝑑𝑡

Quando H ref = 0 tem-se que Tref = 0

𝑑 (𝑚 𝑐𝑝 𝑇 ) 𝑚 𝑐𝑝 𝑑𝑇 𝑑𝑇
= ℎ 𝐴 (𝑇𝑎 − 𝑇 ) → = 𝑇𝑎 − 𝑇 → 𝜏𝑝 = 𝑇𝑎 − 𝑇
𝑑𝑡 ℎ 𝐴 𝑑𝑡 𝑑𝑡

𝑑𝑇̂
Em termos de variáveis desvio: 𝑇̂ = 𝑇 − 𝑇 (0) 𝑇̂ 𝑎 = 𝑇𝑎 − 𝑇𝑎𝑠 → 𝜏𝑝 𝑑𝑡 = 𝑇𝑎 − 𝑇𝑎𝑠 − 𝑇̂

Aplicando a transformada de Laplace: 𝜏𝑝 [𝑠 𝑇̂ − 𝑇 (0)] = 𝑇𝑎 (𝑠) − 𝑇̂ (𝑠)

 𝑇̂ (𝑠) 1
Equação final: 𝐺 (𝑠) = =
𝑇𝑎 (𝑠) 𝜏 𝑝 +1

𝑌̂ (𝑠) 𝑘𝑝
A função obtida representa um modelo de primeira ordem , dado por: 𝐺 (𝑠) = =
𝐹̂ (𝑠) 𝜏 𝑝 +1

Após uma perturbação degrau de amplitude A em Ta, tem-se:

1 𝐴 1
𝑇̂ (𝑠) = 𝑇𝑎 (𝑠) ∙ 𝑝𝑒𝑟𝑡𝑢𝑟𝑏𝑎çã𝑜 → 𝑇̂ (𝑠) = ∙
𝜏𝑝 + 1 𝑠 𝜏𝑝 + 1

−𝑡 −𝑡
Aplicando Laplace inversa: 𝑇 (𝑡) − 𝑇 (0) = 𝐴 ∙ ( 1 − 𝑒 𝜏𝑝 ) ∴ 𝑇 (𝑡) = 𝑇 (0) + 𝐴 ∙ ( 1 − 𝑒 𝜏𝑝 )

5. Utilize o resultado anterior para demonstrar que, após decorrido um tempo igual a três vezes a
constante de tempo ( 𝞽p), a temperatura lida pelo termômetro atinge 95% do valor final a ser medido.

Nesse caso a Amplitude da perturbação seria: 𝐴 = 𝑇𝑎𝑓 − 𝑇 (0)

−3τ𝑝
Se o tempo equivale a 3𝞽p tem-se: 𝑇 (𝑡) = 𝑇 (0) + [(𝑇𝑎𝑓 − 𝑇 (0)) ∙ ( 1 − 𝑒 𝜏𝑝 )]

𝑇 (𝑡) = 𝑇 (0) + [(𝑇𝑎𝑓 − 𝑇 (0)) ∙ 0,95] → 𝑇 (𝑡) = 𝑇 (0) + 0,95 𝑇𝑎𝑓 − 0,95 𝑇 (0)

𝑇 (𝑡) = 0,95 𝑇𝑎𝑓 + 0,05 𝑇 (0) 𝑐𝑜𝑚𝑜 0,05 𝑇 (0) ≈ 0 → 𝑇 (𝑡) = 0,95 𝑇𝑎𝑓

6. O que vem a ser um transdutor?

Os transdutores são equipamentos utilizados para a medição de pressão. Assim, seu princípio se baseia na
tradução em sinais elétricos da deformação elástica do elemento sensor que é proporcional à pressão medida.

7. Explique a importância de se medir e controlar a pressão em bioprocessos. Qual o princípio em que

se baseia as medidas de pressão?

A medição de pressão é importante para controlar o estado térmico do vapor durante processos de
esterilização, assim a manutenção de pressões positivas no head -space do biorreator auxilia a assepsia.
Ademais, apesar de não influenciar diretamente o microrganismo, a pressão afeta o seu metabolismo, uma vez
que age sobre a solubilidade dos gases dissolvidos. Seu princípio se baseia na deformação elástica do elemento
sensor, que é transformada em sinais elétricos proporcionais à pressão medida.

8. Explique os motivos para se medir e controlar vazões em bioprocessos. Quais os tipos de medidores
de vazão disponível.

Para o caso de gases, as medidas são responsáveis por quantificar o ar fornecido ao fermentador e controlar a
concentração de oxigênio dissolvido no meio. Os medidores utilizados são piezométricos, para vazões de
gases e líquidos, e a medição consiste na diferença de pressão (ΔP) que o fluido sofre ao atravessar uma
restrição ao fluxo, correlacionando essa ΔP à vazão de fluido. Assim, as formas de obtenção da restrição de
fluxo são por utilização de dispositivos hidráulicos, como tubo Venturi, bocal, placa de orifício, tubo pitot,
cotovelo e outros.

9. Obtenha a equação geral dos medidores de vazão de fluidos incompressíveis por pressão diferencial.

10. Esquematize e equacione o medidor térmico de vazão mássica.

11. Explique o funcionamento de um medidor de vazão de área variável.

Um medidor de vazão de área variável contém um flutuador

para determinar a vazão, o fluido escoa por um tubo vertical
cônico, de baixo para cima, na qual há um flutuador. Como o
peso do flutuador é constante, o aumento da vazão acarreta um
aumento da área livre de escoamento, portanto a posição do
flutuador é uma indicação de vazão e pode ser convertida em
sinais elétricos gerando medidas em linhas de vazão.
12. Explique por que o pH é também uma variável quase sempre monitorada e controlada em
bioprocessos. Explique sucintamente como é realizada a medida de pH utilizando sondas.

O pH é uma variável quase sempre monitorada e controlada por influenciar na atividade enzimática e no
metabolismo microbiano. O pH é medido potenciometricamente, combinando o eletrodo do vidro (eletrodo
indicador) com eletrodo de referência, a diferença de potencial entre os dois eletrodos é proporcional à
atividade [íons H+).

13. Aponte as razões de se monitorar e controlar o nível de oxigênio dissolvido em bioprocessos.

A medida e controle do nível de OD é fundamental em bioprocessos aeróbicos devido à influência desse

componente no metabolismo celular

14. Qual o método mais comumente utilizado para medida de oxigênio dissolvido? Descreva
sucintamente uma sonda de oxigênio dissolvido, descrevendo seu funcionamento e apresentando as
reações catódica e anódica. Quais as diferenças entre uma sonda polarográfica e uma sonda galvânica?

A medida do oxigênio dissolvido se dá através de sondas eletroquímicas, cujo funcionamento se resume à

redução do oxigênio através de um cátodo, após a aplicação de um potencial polarizador interno (sondas
galvânicas) ou externo (sondas polarográficas). Assim, o eletrodo gera uma corrente elétrica proporcional à
quantidade de oxigênio que passa através da membrana.

A sonda polarográfica consiste em eletrodos de platina (cátodo) e de prata (ânodo) imersos em um eletrólito
de cloreto de prata. As equações abaixo descrevem as reações.

1
𝑂 + 𝐻2 𝑂 + 2𝑒 − → 2𝑂𝐻 − 𝐴𝑔 + 𝐶𝑙 − → 𝐴𝑔𝐶𝑙 + 𝑒 −
2 2

A sonda galvânica, por outro lado, é composta por eletrodos de chumbo e prata, com eletrólito alcalino,
gerando a corrente elétrica a partir das seguintes reações:

1
𝑂 + 𝐻2 𝑂 + 2𝑒 − → 2𝑂𝐻 − 𝑃𝑏 → 𝑃𝑏2+ + 2𝑒 −
2 2

Vale ressaltar que as duas sondas medem a pressão parcial de oxigênio e não sua concentração, sendo as
leituras fornecidas estão em forma de porcentagem da pressão de saturação do oxigênio no meio.

17. Discuta a importância de se monitorar e controlar a concentração de biomassa em bioprocessos.

A importância de se monitorar e controlar a concentração de biomassa em bioprocessos se dá no fato de que

este parâmetro determina tanto a velocidade de formação de produto quanto a de crescimento. Essa
determinação é bastante complexa, pois envolve a determinação de populações celulares com propriedades
características.
18. Quais são as características comuns dos métodos para determinação de biomassa? Explique a
determinação de biomassa por turbidimetria, apresentando as equações pertinentes.

Os métodos para determinação de biomassa são medidas indiretas e necessitam de uma curva que relacione a
variação da propriedade medida com a concentração de biomassa, ou seja, uma curva de calibração ou modelo
de observação.

Na turbidimetria, um feixe de luz atravessa um meio, de forma a medir a quantidade de luz recebida em uma
célula fotossensível. A intensidade da luz é dada por: 𝐼 = 𝐼0 + 𝑒 −𝑡 𝑏 em que I = intensidade da radiação
emitida; t = turbidez do meio e b = constante associada ao caminho percorrido pela luz.

2,03 𝐼
Se o meio apresentar material particulado, como uma biomassa, t é definido por: 𝑡 = log( 𝐼0 )
𝑏

A turbidez, por sua vez, depende do número, tamanho e forma das partículas presentes na suspensão, de forma
a saber a quantidade de material particulado em suspensão e, assim, determinar a biomassa.

19. Qual a técnica de análise mais comumente usada para a determinação de substratos e produtos na
fase líquida? Qual o princípio desta técnica?

A técnica mais utilizada é a cromatografia líquida de alta performance (HPLC), a qual se baseia na separação
de componentes presentes na fase líquida, através da interação destes com uma coluna cromatográfica. A
coluna possui uma fase líquida móvel que arrasta os compostos através da fase estacionária, normalmente
sólida. Quanto maior a interação dos componentes com a fase estacionária, maior será o tempo de separação,
diferenciando os compostos através de bandas específicas, analisadas posteriormente em um cromatograma
gerado pelo equipamento.

20) Explique em que consiste a técnica de análise por FIA. Cite 3 exemplos de determinações por FIA,
indicando o método e o detector empregados em cada determinação.

A análise por Injeção em Fluxo (FIA) é utilizada para criar um sinal detectável de um único componente de
uma amostra, através de uma injeção rápida da amostra em um fluxo contínuo de uma solução carreadora. O
fluxo da amostra é combinado com um reagente, gerando um produto que será quantificado ao passar por um
detector.

Exemplos: determinação de glicose (eletrodo plano de carbono, sistema de determinação amperométrica);

determinação de sacarose (determinação espectrofotométrica); determinação de proteínas na urina
(determinação espectrofotométrica).

Prova: Sonda de O2

𝐶
Sem atraso (real) → 𝐶𝑠 = 1 − 𝑒 −𝐾𝑙𝑎 𝑡

𝐶𝑝 𝐾𝑙𝑎 Kp
Com atraso (medido pela sonda) → 𝐶𝑠 = 1 + 𝐾𝑝−𝐾𝑙𝑎 𝑒 −𝐾𝑝 𝑡 − 𝐾𝑝−𝐾𝑙𝑎 𝑒 −𝐾𝑙𝑎 𝑡