RelatriodeAulaPrtica:Bacteriocinas

Professora:VeraLcia Alunos:PmellaCristinaDiasRibeiro;PedroLuizSilvadeMiranda 1. Introduo Muitas bactrias so capazes de produzir determinadas substncias com atividade antimicrobiana, denominadas genericamente de bacteriocinas, que podem ser definidas como peptdeos ou protenas sintetizadas no ribossoma bacteriano e que apresentam atividade contra linhagens da mesma espcie e de espcies filogeneticamente relacionadas. A sntese de bacteriocinas codificada por genes contidos em plasmdio, transposons ou no cromossomo bacteriano. As bacteriocinas so produzidas tanto por linhagens de bactrias Gram-negativas quanto Grampositivas. As primeiras bacteriocinas descritas foram as colicinas, que constituem um tipo de bacteriocina, produzidas por certas linhagens de Escherichia coli, que apresentam atividade antimicrobiana contra outras linhagens de E. coli e outros membros da famlia Enterobacteriaceae. Do ponto de vista ecolgico, as colicinas so molculas anticompetidoras, que capacitam as bactrias a responderem a mudanas ambientais e que, aparentemente, desempenham um papel nas interaes competitivas entre membros de uma comunidade microbiana. Assume-se que as colicinas tenham maior significado nas interaes competitivas intra do que interespecficas. Um grande nmero de aplicaes prticas das colicinas tem sido sugerido, como: controle de doenas de plantas de origem bacteriana e tratamento de desordens intestinais, dentre elas as diarrias, constipao e doenas inflamatrias crnicas do intestino. Nos pases do leste Europeu so usados dois produtos farmacuticos contendo E. coli produtoras de colicinas (Mutaflor e Symbioflor). As bactrias lticas (LAB) despertam interesse devido ao seu potencial de utilizao no biocontrole em alimentos. Elas podem exercer atividade inibitria frente a outras bactrias devido competio direta por nutrientes e pela produo de compostos antagonsticos como cidos orgnicos, diacetil, perxido de hidrognio e bacteriocinas. At o momento, a nisina a nica bacteriocina permitida para uso em cerca de 50 pases, incluindo o Brasil onde ela aprovada para uso em todos os tipos de queijos, e tambm aplicada na superfcie externa de salsichas de diferentes

tipos. 2. Material e Mtodos Os materiais utilizados para a realizao do experimento em aula prtica foram: Placas de Meio Man Rogosa e Sharpe slido( MRS-Oxoid); Tubos com Agar nutriente 0,75%; Culturas de Bactrias lticas produtoras de substncias antimicrobianas; Culturas de bactrias indicadoras K12. A execuo do experimento se deu da seguinte maneira: - Repicou-se as linhagens de bactrias lticas para caldo MRS e incubou-se a 37C por 24 horas em anaerobiose. - Fez-se trs spots contendo 5 L na superfcie do meio MRS slido que foram posteriormente incubados a 37C por 24 horas. - Colocou-se 1,0 mL de clorofrmio na tampa da placa de Petri na posio invertida e deixou-se a placa fechada por 20 minutos, sempre com bastante cuidado, uma vez que o clorofrmio inflamvel. - Entreabriu-se a placa de Petri por 20 minutos, para permitir a evaporao do clorofrmio residual. - Adicionou-se aos tubos contendo gar nutriente 0,75% previamente fundido, 0,1 mL da cultura da bactria indicadora e verter sobre a placa de MRS slido contendo os spots. Incubou-se a 37C por 24 horas em aerobiose. - Fez-se as leituras. Trs linhagens de bactrias E. coli provenientes de amostras de urina de pacientes humanos com infeco urinria diagnosticada foram crescidas em caldo MRS, por 24h horas a 37C. Posteriormente trs spots foram feitos nas placas de Petri contendo meio MRS slido e estas foram incubadas por 24h a 37C. Depois da incubao haviam trs colnias bem formadas na placa. Posteriormente as colnias foram mortas por formol. O formol mata as clulas bacterianas, mas as colicinas produzidas continuam no meio. Aps estes procedimentos 5mL do agar nutriente 0,75% onde as E. coli k12 haviam crescido previamente, foram colocados sobre as colnias mortas, at cobri-las. Ento a placa foi novamente incubada a 37C por 24h. Posteriormente foi feita a anlise da placa.

3. Resultados: Aps a incubao de 24h as placas foram retiradas e verificou-se a presena de halos de diferentes tamanhos ao redor das colnias. 4. Discusso Halos so evidncias de que alguma substncia liberada pelas colnias inibiu o crescimento da bactria K12, que suscetvel s colicinas produzidas. As trs colnias possuam halos de tamanhos diferentes, indicando que elas produzem uma substncia inibitria em quantidades diferentes. Diversas cepas de E. coli so produtoras de colicinas, ento possvel que a substncia inibitria tambm seja uma colicina. 5. Concluses A grande diversidade metablica dos microorganismos permite que elas possam colonizar muitos ecossistemas, boa parte deles inspita para outros organismos. A produo de substncias que inibem o crescimento de outros microorganismos os torna fortes competidores. Este estudo evidenciou a produo de substncias antimicrobianas. Entretanto outros estudos so necessrios para esclarecer a natureza das substncias inibitrias produzidas por estas trs cepas no experimento. 6. Referncias Bibliogrficas DE VUYST, L.; LEROY, F. Bacteriocins from Lactic Acid Bacteria: Production, Purification, and Food Applications. J. Mol. Microbiol. Biotechnol., v.13, p.194-199, 2007. ASSEFA, E.; BEYENE, F.; SANTHANAM, A. Isolation and characterization of inhibitory substance producing lactic acid bacteria from Ergo, Ethiopian traditional fermented milk. Livestock Research for Rural Development. Volume 20, Article #44. Retrieved August 24, 2008, from http://www.cipav.org.co/lrrd/lrrd20/3/asse20044.htm

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