Agrupamento de Escolas Romeu Correia - Feij Escola Secundria Romeu Correia Ano Lectivo 2010/2011

Actividade Laboratorial

DNA FINGERPRINT CSI FRAUDE CANINA?

Marisa Milhano 12A1 n22 Biologia Professora Leonor Martins 1 de Fevereiro de 2011

Actividade Laboratorial DNA Fingerprint CSI Fraude Canina?

NDICE
Introduo Material Necessrio - Parte I CSI Fraude Canina? - Parte II Electroforese em gel de agarose Procedimento Laboratorial - Parte I CSI Fraude Canina? - Parte II Electroforese em gel de agarose Etapa 1 Preparao das solues Etapa 2 Preparao do gel Etapa 3 Aplicao das amostras Etapa 4 Condies de electroforese Etapa 5 Colorao do gel Resultados - Resultados obtidos (1 turno) - Resultados obtidos (2 turno) Anlise dos resultados e Concluses - Anlise dos resultados e concluses obtidas - Resultados esperados - Concluses esperadas Bibliografia Webgrafia 16 18 19 21 21 12 14 8 9 10 10 11 8 6 6 3

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INTRODUO
O DNA, ou o cido desoxirribonucleico, uma molcula constituda por milhares de nucletidos. Estes nucletidos so constitudos por uma base azotada, por uma pentose, a desoxirribose, e um grupo fosfato, sendo que a presena deste ltimo confere molcula uma carga negativa. O DNA pode ser classificado em trs diferentes tipos: DNA funcional, que contm a informao necessria para sintetizar protenas e RNA; DNA repetitivo, composto maioritariamente por sequncias de DNA repetidas sem sentido; e DNA espaador, que corresponde a todas as unidades que ainda no foram identificadas e que, aparentemente, no possuem qualquer funo. Cada segmento de DNA funcional designa-se por gene. Os genes responsveis por um determinado carcter constituem o gentipo do indivduo para esse carcter. Estes podem apresentar formas alternativas, sendo cada uma dessas formas chamadas genes alelos, ou simplesmente alelos. Assim, o gentipo o conjunto dos alelos presentes num organismo para uma determinada caracterstica. Cada indivduo que apresente um gentipo formado por dois alelos iguais para uma determinada caracterstica denomina-se homozigtico, enquanto um indivduo que apresente um gentipo formado por dois alelos diferentes para a mesma caracterstica denominado heterozigtico. A descoberta de todos estes conhecimentos abriu o caminho para que a Engenharia Gentica desenvolvesse tcnicas e processos de manipulao dos genes num organismo. O DNA Fingerprint foi uma tcnica desenvolvida nos anos 80 do sculo XX, que se baseia no facto de, semelhana das impresses digitais, no existirem dois indivduos com igual DNA, exceptuando nos casos de gmeos verdadeiros. Esta tcnica consiste na aplicao de enzimas de restrio, que vo actuar em locais especficos, onde existem sequncias de bases repetidas (DNA repetitivo), que correspondem a zonas de restrio. Ao cortarem estas zonas, as enzimas produzem fragmentos de DNA que variam em nmero, tamanho e localizao, de indivduo para indivduo.

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Estes fragmentos so depois sujeitos a uma Electroforese, tcnica que consiste na aplicao duma diferena de potencial elctrico numa superfcie, normalmente um gel (poroso), o que faz com que ocorra a separao dos fragmentos de DNA consoante o seu tamanho: os de menores dimenses iro deslocar-se ao longo da superfcie mais rapidamente, enquanto os de maiores dimenses iro demorar mais tempo a alcanar a mesma distncia. Esta tcnica pode ser aplicada para esclarecer questes de paternidade, e ser esse o principal objectivo desta actividade experimental. Assim, foi criada a seguinte situao: O Sr. Alo comprou um co a um criador de uma raa muito apreciada. Querendo um animal de grande qualidade, e sem olhar a custos, pediu ao criador que lhe vendesse o melhor co da sua explorao. O criador vendeu-lhe um co garantindo que o pai era um co da sua explorao, campeo nacional em exposies. Imensamente feliz, o Sr. Alo levou para casa um belo cachorro, que em breve se desenvolveu num co adulto, nada parecido com o seu pai, sem aquele porte altivo nem caractersticas de campeo. Admitindo a hiptese de ter sido ludibriado, o Sr. Alo voltou explorao, recolheu amostras de plo da me, do alegado pai, campeo, mas tambm de um outro macho adulto daquela raa que partilhava o canil, e que poderia muito bem ser ele o verdadeiro pai, pois no partilhava as caractersticas de porte e pujana do afamado co e tinha fortes semelhanas com o animal adquirido. Tendo assim amostras de plo dos dois possveis pais (P1 e P2), da me (M) e do filho (F), o seu prprio co, o Sr. Alo pediu a uma geneticista molecular que corresse uma bateria de testes com marcadores genticos, que permitissem identificar a paternidade do seu animal. No laboratrio, os tcnicos extraram DNA dos plos de cada um dos animais (em extraces totalmente separadas, de modo a evitar cruzamento das amostras), e amplificaram, pela tcnica de PCR (Reaco de Polimerase em Cadeia) um fragmento especfico de candeos, bastante polimrfico, que pode originar dois alelos diferentes (heterozigotia) ou iguais (homozigotia) em cada um dos indivduos.
Texto adaptado do manual do Kit Biognius.

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Desta forma, no contexto das actividades laboratoriais realizadas anteriormente, e no estudo do desenvolvimento das tcnicas da Engenharia Gentica, com vista a manipulao do nosso Patrimnio Gentico, realizou-se a actividade laboratorial seguidamente descrita, que possui como principais objectivos compreender o funcionamento da tcnica de DNA Fingerprint e conhecer, de uma forma prtica, as suas principais aplicaes. Com esta actividade laboratorial, e utilizando-se o material fornecido no Kit Biognius, pretende-se assim observar e analisar os resultados obtidos na electroforese em gel de agarose dos diferentes DNA recolhidos, e averiguar a paternidade dos indivduos M, P1 e P2 em relao ao indivduo F.

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MATERIAL NECESSRIO
Parte I CSI Fraude Canina? - DNA da me (tubo cor-de-rosa, 35 L) - DNA do pai possvel 1 (tubo azul, 35 L) - DNA do pai possvel 2 (tubo amarelo, 35 L) - DNA do filho (tubo verde, 35 L)
NOTA [1]: Os DNAs j vinham com tampo de aplicao (azul), pelo que s foi necessrio aplicar as amostras no gel directamente dos tubos. NOTA [2]: O material necessrio a esta parte da actividade laboratorial estava todo includo no Kit Biognius.

Parte II Electroforese em gel de agarose Para a tina de electroforese: - Tina (com tampa) - Tabuleiro - Pente - Elctrodos (fio vermelho e fio preto) - 5 pilhas de 9V cada - Fita cola Para as solues: - Tampo TBE (10x) - Agarose - gua destilada. Para as amostras: - Tampo de aplicao - Seringa - Pontas amarelas - DNA das amostras da parte I da experincia.

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NOTA [3]: O material necessrio a esta parte da actividade laboratorial estava todo includo no Kit Biognius, excluindo a fita-cola e a gua destilada. NOTA [4]: Quer o tabuleiro e quer o pente estavam cobertos por uma pelcula aderente, para proteco do plstico. Esta pelcula foi removida antes da utilizao dos mesmos.

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PROCEDIMENTO LABORATORIAL
Parte I CSI Fraude Canina? 1. Preparou-se uma electroforese em gel de agarose (cujo protocolo ser seguidamente descrito). 2. Aplicou-se uma amostra (de 10 L) de cada um dos materiais biolgicos fornecidos em pistas diferentes. A amostra da Me (M) foi colocada no poo nmero 2, a do possvel Pai 1 (P1) foi colocada no poo nmero 3, a do possvel Pai 2 (P2) foi colocada no poo nmero 5, e por fim, a do Filho (F) foi colocada no poo nmero 7, conforme est exemplificado na Figura 1. 3. Separou-se os fragmentos de DNA atravs da electroforese (que decorreu durante 2 horas aproximadamente no 1 turno, e durante cerca de 14 horas no 2 turno). 4. De seguida, corou-se o gel com o corante Nile Blue (que decorreu durante 14 horas, aproximadamente, no 1 turno, e durante cerca de 48 horas no 2 turno). 5. Observou-se as bandas obtidas. 6. Analisou-se os resultados obtidos.
1 2 3 4 5 6 7 8

P1

P2

Figura 1 Esquema representativo da colocao das amostras de DNA no gel de agarose.

Parte II Electroforese em gel de agarose Etapa 1 Preparao das solues Diluio do Tampo TBE

1. Para a preparao do gel de agarose foi utilizado um tampo TBE com uma concentrao de 0,5 x, que tinha sido inicialmente fornecido com uma concentrao de 10x. Assim, o 1 turno realizou a diluio da soluo inicial, utilizando para isso 20

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ml do tampo TBE 10x, e 380 ml de gua destilada, perfazendo um volume total de 400 mL. 2. De seguida, agitou-se a soluo para a homogenizar, colocando a soluo num frasco com rolha hermtica e invertendo o frasco vrias vezes. Agarose

1. Para a preparao da soluo de agarose, dissolveu-se 1 grama de agarose em 100 ml da soluo Tampo TBE com a concentrao de 0,5 x num frasco com rolha hermtica. 2. Agitou-se para diluir um pouco. 3. De seguida, aqueceu-se o frasco num microondas por 15 segundos, e agitou-se novamente. 4. Repetiu-se esta operao por mais 5 vezes, perfazendo um total de 6 x 15 segundos, at a soluo ficar totalmente transparente. Preparao do corante do gel Nile Blue:

1. O corante do gel foi fornecido em p, dentro de um tubo com o nome Corante. Para se preparar a soluo, utilizou-se todo o contedo do tubo, 40 mg, que foi dissolvido em 200 ml de gua destilada, obtendo-se assim uma concentrao final de 0,02%. Esta soluo foi agitada at todo o corante estar dissolvido. 2. De seguida, a soluo foi colocada num balo de destilao, que foi posteriormente revestido com papel de alumnio, a fim de se evitar a exposio da soluo luz, visto esta se degradar com facilidade na sua presena. 3. A soluo do corante reutilizvel. Assim, aps a colorao de um gel, a soluo pode ser novamente colocada no respectivo frasco e armazenada num armrio at uma nova colorao. A soluo do corante utilizada na actividade laboratorial foi preparada no dia 11 de Janeiro de 2011, no dia da primeira actividade experimental em que se utilizou a tcnica de electroforese em gel de agarose (Extraco de DNA genmico O DNA Parte-se?). Etapa 2 Preparao do gel 1. Vedou-se com fita-cola os dois lados abertos do tabuleiro do gel que vem dentro da tina.

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2. Colocou-se o tabuleiro numa bancada plana, certificando-se de que o tabuleiro ficava totalmente horizontal e nivelado, de modo a que o gel no ficasse mais grosso de um lado e mais fino do outro. 3. Verteu-se para o tabuleiro de forma cuidadosa, devagar e sem deixar formar bolhas, cerca de 40 mL da agarose fundida e arrefecida at cerca de 45-50 C, ou seja, quando j se conseguia segurar o frasco da agarose nas mos, sem ocorrer quaisquer queimaduras. 4. Colocou-se o pente a cerca de 1 cm de distncia do fundo do tabuleiro e completamente paralelo ao fundo do mesmo. Certificou-se que os dentes do pente ficavam submersos no gel em cerca de 3 mm. 5. Aguardou-se cerca de 30 minutos, at o gel ficar totalmente solidificado. 6. Removeu-se o pente para cima, perpendicularmente, com o cuidado para no destruir os poos formados. 7. Retirou-se cuidadosamente a fita-cola, mantendo sempre o tabuleiro na horizontal, e colocou-se o gel com o tabuleiro dentro da tina, com os poos para o lado do elctrodo preto. 8. Verteu-se cuidadosamente algum tampo TBE 0,5x para dentro da tina, at cobrir totalmente o gel. Certificou-se que todos os poos do gel se encontravam cheios de tampo. Etapa 3 Aplicao das amostras 1. Antes da aplicao das amostras, colocou-se a tina com o gel no local da bancada onde a electroforese iria decorrer, certificando-se de que esta no seria tocada ou movida durante o decorrer da mesma. 2. Certificou-se tambm, que o volume das amostras no excedia os 10 L por poo (valor j com o tampo de aplicao includo). 3. As amostras foram colocadas sequencialmente nos poos, conforme foi indicado no Ponto 2 do Procedimento Experimental, parte I CSI Fraude Canina?. Etapa 4 Condies de electroforese 1. Aps a colocao das amostras nos respectivos poos, colocou-se a tampa na tina. 2. Ligou-se os elctrodos (preto ao plo negativo das pilhas e vermelho ao plo positivo).
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3. Verificou-se se havia passagem da corrente elctrica, atravs da verificao da libertao de pequenas bolhas de gs, no lado oposto ao dos poos. 4. Deixou-se electroforese decorrer (durante 2 horas para o 1 turno, e durante 14 horas para o 2 turno). 5. Desligou-se os elctrodos. 6. Retirou-se o gel, cuidadosamente, para a tampa da tina. Etapa 5 Colorao do gel 1. Aps a colocao do gel na tampa da tina, cobriu-se totalmente o gel com o corante Nile Blue. 2. Deixou-se o gel a corar durante aproximadamente 14 horas no 1 turno, e durante acerca de 48 horas no 2 turno. 3. Retirou-se o corante da tampa da tina, vertendo-o novamente para o balo de destilao. 4. Observou-se e registou-se os resultados obtidos.

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RESULTADOS
Resultados obtidos (1 turno)

Legenda: M = Me; P1 = Pai possvel 1; P2 = Pai possvel 2; F = Filho

Observao 1 Esquema da observao do gel de agarose do 1 turno, antes da colorao.

As amostras, inicialmente coradas de azul, foram colocadas nos poos efectuados no lado esquerdo do gel de agarose, gel este que possua uma cor transparente. O lado do gel que possua os poos foi colocado do lado do elctrodo preto (plo negativo), no lado esquerdo da tina. Aps o incio da electroforese, observou-se a libertao de pequenas bolhas de gs em ambos os lados dos elctrodos, mas com uma maior intensidade no lado do elctrodo vermelho (plo positivo), no lado direito da tina. Cerca de 2 horas aps o incio da electroforese, foi possvel observar-se uma fila alinhada de quatro manchas azuladas, a uma distncia de cerca de 1/3 dos poos, no lado esquerdo do gel de agarose, com intervalos regulares entre si, excluindo duas manchas, que se encontravam lado a lado. Cerca de 2 cm frente desta fila de manchas azuladas, observou-se tambm uma outra fila de manchas, desta vez de uma cor arroxeada, a cerca de 3/4 de distncia dos poos e directamente alinhada com a fila das manchas anteriores. Possuam os mesmos intervalos regulares entre si, excluindo novamente duas manchas, que se encontravam lado a lado. Estas duas filas de manchas correspondiam ao avano das amostras de DNA.

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Legenda: M = Me; P1 = Pai possvel 1; P2 = Pai possvel 2; F = Filho Observao 2 Esquema da observao do gel de agarose do 1 turno, depois da colorao.

Aps a colorao do gel de agarose com o corante Nile Blue, este adquiriu uma cor azulada em toda a sua superfcie. Aps 14 horas de colorao, foi possvel observar-se uma mancha no muito grossa com um azul muito mais intenso que o da superfcie, aproximadamente a 3/5 de distncia do respectivo poo. Segundo o esquema da Figura 1 (pgina 8), identificou-se esta mancha como sendo correspondente me (M). Do lado direito desta mancha, foi possvel observar-se mais duas manchas azuladas, mas de uma intensidade ligeiramente inferior. Uma primeira mancha encontrava-se aproximadamente a 1/3 de distncia do respectivo poo, enquanto a segunda mancha se encontrava a cerca de 5/6 de distncia do mesmo poo. Segundo o esquema da Figura 1 (pgina 8), identificou-se estas duas manchas como sendo correspondentes ao possvel pai 1 (P1). Aps um intervalo regular, observmos uma outra mancha, que apresentava algum arrasto do seu DNA, aproximadamente ao mesmo nvel e com a mesma intensidade que a primeira mancha de P1, ou seja, a cerca de 1/3 de distncia do seu respectivo poo. Novamente, segundo o esquema da Figura 1 (pgina 8), identificou-se esta mancha como sendo correspondente ao possvel pai 2 (P2). Infelizmente, no foi possvel identificar-se nenhuma mancha que pudesse corresponder ao filho (F). Por fim, foi tambm possvel observar-se quatro manchas, ligeiramente arroxeadas, a cerca de 3/4 de distncia dos quatro poos, que identificou-se como sendo ainda as manchas do corante das amostras, que indicava o avano do DNA.

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Resultados obtidos (2 turno)

Legenda: M = Me; P1 = Pai possvel 1; P2 = Pai possvel 2; F = Filho Observao 3 Esquema da observao do gel de agarose do 2 turno, antes da colorao.

Tal como foi realizado pelo 1 turno, no 2 turno as amostras foram tambm inicialmente coradas de azul, e de seguida colocadas nos poos efectuados no lado esquerdo do gel de agarose, que possua igualmente uma cor transparente. O lado do gel que possua os poos foi tambm colocado do lado do elctrodo preto (plo negativo), no lado esquerdo da tina. Aps o incio da electroforese, observou-se, igualmente, a libertao de pequenas bolhas de gs em ambos os lados dos elctrodos, mas, novamente, com uma maior intensidade no lado do elctrodo vermelho (plo positivo), no lado direito da tina. A grande diferena foi a durao da electroforese, que s foi desligada cerca de 14 horas aps o incio da mesma. Assim, desta vez s foi possvel observar-se uma nica fila alinhada de quatro manchas, de colorao azul, a uma distncia de cerca de 4/5 dos poos, no lado direito da tina, do lado do elctrodo vermelho (plo positivo). Esta fila possua os respectivos intervalos regulares entre si, excluindo novamente duas manchas, que se encontravam lado a lado. No se encontrava quaisquer vestgios da fila de manchas arroxeadas. Na sua vez foi possvel observar-se uma ligeira colorao azul-arroxeada nas bolhas de gs do lado do elctrodo vermelho (plo positivo), no lado direito da tina.

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Legenda: M = Me; P1 = Pai possvel 1; P2 = Pai possvel 2; F = Filho

Observao 4 Esquema da observao do gel de agarose do 2 turno, depois da colorao.

Assim como foi realizado pelo 1 turno, o gel de agarose do 2 turno foi tambm corado com o corante Nile Blue, tendo a superfcie do gel adquirido uma cor azulada. Aps 48 horas de colorao, foi apenas possvel observar-se uma nica mancha com um azul mais intenso do que no resto do gel. Esta mancha encontrava-se alinhada com o 3 poo do gel, e possua um ligeiro arrasto na sua colorao, encontrando-se a uma distncia aproximada de 5/6 do respectivo poo. Segundo o esquema da Figura 1 (pgina 8), identificou-se esta mancha como sendo correspondente ao possvel pai 1 (P1). Infelizmente, no foi possvel identificar-se mais nenhuma mancha no gel de agarose.

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ANLISE DOS RESULTADOS E CONCLUSES

Anlise dos resultados e concluses obtidas O principal objectivo da utilizao da Electroforese em gel de agarose foi separar os diferentes fragmentos produzidos pelas enzimas de restrio das diversas amostras de DNA atravs dum gel de agarose (um gel poroso), por meio da aplicao dum campo elctrico, que provocou uma diferena de potencial elctrico entre os dois elctrodos: um preto, que correspondia ao plo negativo, e um vermelho, que correspondia ao plo positivo. Ao colocar-se as amostras de DNA nos poos do gel no lado esquerdo da tina, no lado do elctrodo preto (plo negativo), e ao fechar-se o circuito, verificou-se que estas se movimentavam na direco do plo oposto, para o lado direito da tina, onde se localizava o elctrodo vermelho (plo positivo). Isto acontece pelo facto de, como referido anteriormente, a molcula de DNA possuir uma carga negativa, conferida pelo grupo fosfato que possui. Assim, quando se criou uma diferena de potencial elctrico entre os dois elctrodos da tina, o DNA deslocou-se na direco do plo positivo, uma vez que ocorreu uma atraco entre as cargas opostas. A electroforese do 1 turno foi bem realizada (Observao 1), tendo durado cerca de 2 horas. Assim, todo o DNA das amostras encontrava-se no meio do gel da agarose, como esperado. Tinha-se esta certeza devido presena de dois tipos de partculas coradas nas amostras de DNA: umas partculas coradas de azul, que possuam dimenses menores que os fragmentos de DNA, e umas partculas coradas de roxo, que possuam dimenses superiores aos dos fragmentos. Assim, sabia-se sempre que os fragmentos de DNA se encontravam dentro do intervalo criado pelas duas filas de manchas, o que permitia controlar o avano dos mesmos ao longo do gel. Por outro lado, a electroforese do 2 turno (Observao 2), foi realizada durante demasiado tempo, cerca de 14 horas, o que fez com que no final s existisse uma fila de manchas azuis no gel, quase no fim do mesmo, no lado direito da tina. Como j no era visvel a fila de manchas roxas, foi possvel inferir-se que os fragmentos de menores dimenses tinham j sado do interior do gel, e que por causa disso que foi possvel observar-se a ligeira colorao azul-arroxeada das bolhas de gs no lado do elctrodo vermelho (plo positivo), no lado direito da tina.
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Aps a colorao do gel de agarose do 1 turno (Observao 3), durante cerca de 14 horas, foi possvel observar-se as manchas azuis correspondentes s bandas dos fragmentos de DNA da me (M), do possvel pai 1 (P1), e do possvel pai 2 (P2). Infelizmente, no foi possvel observar-se qualquer banda nos locais esperados para o Filho (F). Foi, no entanto, possvel inferir, a partir das bandas obtidas, que a me (M) era homozigtica para a caracterstica em estudo, visto possuir apenas uma nica banda, ligeiramente densa. Isto s podia querer dizer que esta possua os dois alelos iguais, e que portanto, os fragmentos cortados pelas enzimas de restrio possuam todos o mesmo nmero de bases e as mesmas dimenses. Foi tambm possvel inferir que o possvel pai 1 (P1) era por sua vez heterozigtico para a caracterstica em anlise, visto possuir duas bandas, em diferentes localizaes do gel, e com diferentes densidades. Isto foi justificado pelo facto de este possuir dois alelos diferentes para a caracterstica, o que se traduziu em diferentes nmero de bases e tamanho dos fragmentos de DNA. Por fim, foi igualmente possvel inferir, a partir dos resultados obtidos, que o possvel pai 2 (P2) era, tal como a me (M), homozigtico para a caracterstica em observao, uma vez que s foi possvel observar-se uma nica banda formada pelos seus fragmentos de DNA. Isto s poderia acontecer se este possusse os dois alelos da caracterstica iguais, o que faria com que os fragmentos adquiridos pela aco das enzimas de restrio fossem todos do mesmo tamanho e possussem o mesmo nmero de bases. Por outro lado, a colorao do gel de agarose do 2 turno (Observao 4) durou cerca de 48 horas. Mesmo assim, por a electroforese ter decorrido por demasiado tempo, apenas se esperava encontrar uma banda correspondente ao possvel pai 1 (P1) e outra banda correspondente ao possvel pai 2 (P2). Infelizmente, apenas foi visvel uma nica banca, que correspondia ao possvel pai 1 (P1). Desta forma, foi impossvel inferir se o indivduo P1, ou qualquer outro indivduo da experincia, era homozigtico ou heterozigtico para a caracterstica estudada. Assim, contrariamente ao principal objectivo desta actividade laboratorial, no foi possvel identificar, nem pelo gel de agarose do 1 turno, nem pelo do 2 turno, a paternidade dos indivduos M, P1 e P2 em relao ao indivduo F, visto no se ter observado todas as bandas necessrias para essa concluso.

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Nas actividades laboratoriais realizadas anteriormente com base na mesma tcnica (a Electroforese em gel de agarose), os resultados obtidos tambm foram diferentes dos esperados (seguidamente apresentados), tendo at acontecido na primeira experincia (Extraco de DNA genmico O DNA Parte-se?) que, aps a colorao do gel, nenhuma mancha tenha sido visvel. Estes resultados levaram hiptese de que o problema talvez fosse do corante Nile Blue, que poderia ter sido mal confeccionado, ou que poderia estar de alguma forma degradado pela exposio luz, ou que poderia at ser da durao da colorao do gel, que poderia ter sido excessiva. Contudo, devido aos resultados obtidos nesta experincia laboratorial, teve-se de se abandonar esta hiptese, uma vez que vrias bandas foram visveis aps a colorao do gel. Assim, a nica hiptese que parece justificar os resultados obtidos prende-se com a possvel degradao das amostras presentes no yKit Biognius. No se tem a certeza quanto tempo tm as amostras, e possvel que estas, por serem materiais orgnicos, possam estar alteradas, o que vai condicionar os resultados.

Resultados esperados

P1

P2

3.000 pb

1.000 pb

600 pb

Legenda: M = Me; P1 = Pai possvel 1; P2 = Pai possvel 2; F = Filho

Figura 2 Resultado esperado na actividade experimental, aps a colorao do gel de agarose.

Os resultados esperados estariam de acordo com a Figura 2.

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Assim, deveria ter sido possvel observar-se uma mancha com um azul muito mais intenso que o da superfcie (lado esquerdo da Figura 2), aproximadamente a 2/3 de distncia do respectivo poo. Segundo o esquema da Figura 1 (pgina 8), esta mancha corresponderia me (M). Do lado direito desta mancha, deveria ter sido possvel observar-se mais duas manchas azuladas, mas de uma intensidade ligeiramente inferior. Uma primeira mancha encontrarse-ia aproximadamente a 1/3 de distncia do respectivo poo, enquanto a segunda mancha encontrar-se-ia no fim do gel. Segundo o esquema da Figura 1 (pgina 8), estas duas manchas corresponderiam ao possvel pai 1 (P1). Do lado direito destas duas manchas, deveria ter sido possvel observar-se uma outra mancha, aproximadamente ao mesmo nvel e com a mesma intensidade que a primeira mancha de P1, ou seja, a cerca de 1/3 de distncia do seu respectivo poo. Novamente, segundo o esquema da Figura 1 (pgina 8), esta mancha corresponderia ao possvel pai 2 (P2). Por fim, direita desta mancha (lado direito da Figura 2), deveria ter sido possvel observar-se duas ltimas manchas azuladas. A primeira deveria encontrar-se a uma distncia de 2/3 do respectivo poo, e a segunda no final do gel. Segundo o esquema da Figura 1 (pgina 8), esta mancha corresponderia ao Filho (F).

Concluses esperadas Segundo os resultados esperados, seria possvel concluir-se que, tanto a Me (M) como o possvel Pai 2 (P2), seriam homozigticos para a caracterstica em estudo, visto s apresentarem uma nica mancha: a me apresentaria dois alelos iguais para a caracterstica, a cerca de 1.000 pares de bases, e o possvel pai 2 apresentaria tambm dois alelos iguais para a mesma caracterstica, a cerca de 3.000 pares de bases. Seria ento possvel concluir-se que o Filho (F) seria heterozigtico, apresentando duas manchas com localizaes diferentes: uma vinda da me (M), a cerca de 1.000 pares de bases, e outra vinda do pai, a 3.000 pares de bases ou a 600 pares de bases. Segundo os resultados esperados, o Filho (F) possuiria uma mancha ao nvel dos 1.000 pares de bases e uma segunda mancha ao nvel dos 600 pares de bases. Com estes resultados, seria possvel concluir-se que o Filho (F) poderia ser filho da me (M) e do possvel pai 1 (P1), mas que nunca poderia ser filho do possvel pai 2 (P2).

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Dir-se-ia ento que, quer a me (M), quer o possvel pai 1 (P1), seriam compatveis com a paternidade do Filho (F). No se poderia garantir com toda a certeza que os dois fossem pais do Filho (F), pois qualquer outro co com aquele perfil seria compatvel, e poderia ser o verdadeiro pai/me. Apenas se poderia ter a certeza, se se tivesse a trabalhar com populaes confinadas num espao, sem que houvesse a hiptese de contacto com o exterior, e em que tivessem sido genotipados todos os indivduos da populao em idade de reproduo. O possvel pai 2 (P2) nunca poderia ser o verdadeiro pai, uma vez que este seria homozigtico, pois apresentaria dois alelos iguais para a caracterstica, a cerca de 3.000 para de bases, sendo que o filho (F) no apresentaria nenhuma mancha nesse tamanho.

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BIBLIOGRAFIA
Kit Biognius Manual do Utilizador Pginas: 4, 13 21, 26 30. MATIAS, Osrio, MARTINS, Pedro, Biologia 12 parte I, Areal Editores, 1 edio, 1 reimpresso, 2009 ISBN: 978-989-647-050-0 Pginas: 82 84, 119 121, 166 167, 175 e 176

WEBGRAFIA
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Figura 2 Kit Biognius Manual do Utilizador - Pgina 32

Nota [1]: Todos os sites encontravam-se em perfeito funcionamento no dia de entrega do relatrio. Nota [2]: Todas as observaes presentes neste relatrio so da minha autoria.

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