Concentrao de hidroxiprolina como marcador bioqumico do dano msculo esqutico aps treinamento de resistncia de fora.

Hydroxyproline of concentration as biomarker of muscle skeletal damage after endurance training

NOGUEIRA,A.C.; SIMO R.; CARVALHO M.C.G.A.; VALE, R.G.S.; DANTAS P.M.S. Concentrao de hidroxiprolina como marcador bioqumico do dano msculo esqutico aps treinamento de resistncia de fora. R. bras. Ci e Mov. 2007; 15(2): 33-38. resumo: A gerao de fora elevada nas aes musculares excntricas pode afetar as estruturas musculares e tendneas do tecido conjuntivo. Por isso, o objetivo deste estudo foi comparar a concentrao de hidroxiprolina antes e depois de um treino de resistncia de fora em 30RM, j que a hidroxiprolina pode ser utilizada como marcador do dano msculo esqueltico. Foi necessrio ento, comparar o efeito agudo do treino de resistncia de fora na concentrao de hidroxiprolina em oito homens com idades variando entre 17 e 25 anos. Uma coleta de urina basal e trs testes de 30RM foram realizados, e aps recuperao, executaram trs sries de 30RM com outra coleta de urina feita duas horas depois. O tratamento estatstico dado para as mdias da concentrao de hidroxiprolina de pr e ps-treino, atravs do teste t-Student pareado, mostrou no haver diferena significativa (p>0,05). Assim, no foi possvel inferir que houve algum dano por este mtodo de anlise. Palavras-chave: tendo, excntrico, colgeno, hidroxiprolina, resistncia de fora. NOGUEIRA,A.C.; SIMO R.; CARVALHO M.C.G.A.; VALE, R.G.S.; DANTAS P.M.S. Hydroxyproline of concentration as biomarker of muscle skeletal damage after endurance training. R. bras. Ci e Mov. 2007; 15(2): 33-38. abstract: The increased force due to the concentric and eccentric muscle actions may affect the connective tissue structures in muscle and tendon. So, this paper goal was to compare the hydroxyproline concentration before and after 30RM muscle endurance training, since hydroxyproline can be used as a biomarker of connective tissue damage. For such it was necessary to compare the muscle endurance training acute effect on the hydroxyproline concentration of 8 trained men whose ages varied between 17 and 25 years. A basal urine collection and a three 30RM test were performed. After the recovery, they performed three sets of 30RM and another urine collection two hours later was taken. The statistical treatment used to compare the averages oh the hydroxyproline concentration before and after training across paired Student t-test showed no significant difference (p>0.05). So, it is not possible to infer that there was no damage through this method of analysis. Keywords: tendon, eccentric, collagen, hydroxyproline, muscle endurance.

antonio de Carvalho nogueira1, Roberto simo2, Mauro Csar Gurgel de alencar Carvalho1, Rodrigo Gomes de souza vale1, Paulo Moreira silva dantas1, estlio Henrique Martin dantas1,

Mestrado em Cincia da Motricidade Humana (Rio de Janeiro UCB) LABIMH/ PROCIMH. Escola de Educao Fsica e Desportos Universidade Federal do Rio de Janeiro (EEFD/UFRJ).

Recebimento: 14/09/2006 Aceite: 21/12/2006

Correspondncia: Estrada do Lameiro, 661, casa trs. Santssimo RJ. E-mail: atpase@ig.com.br

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Introduo
O treinamento de fora hoje o mtodo mais utilizado para aumentar a sobrecarga com intuito de provocar adaptaes na musculatura esqueltica. Tal sobrecarga pode estar relacionada a um determinado percentual da maior carga possvel de ser levantada em um nico movimento mximo (1RM), ou relacionada com uma quantidade estipulada de repeties mximas (8, 10, 12.... RM)10. O msculo-esqueltico um tecido extremamente plstico que se adapta rapidamente as demandas impostas. O estmulo mecnico, como aumento da sobrecarga, provoca adaptaes e alteraes nas caractersticas contrteis das fibras musculares. Com o intuito de maximizar os ganhos de fora, aes musculares concntricas ou excntricas ou ainda, a combinao das duas, podem ser empregadas para provocar alteraes no msculo-esqueltico, principalmente com objetivo de promover a hipertrofia muscular. No entanto, durante as aes excntricas, o msculo se alonga sob tenso, distendendo assim os elementos do tecido conjuntivo associados tanto aos tendes quanto s clulas musculares. Em contraste, durante as aes concntricas, apenas os tecidos conjuntivos associados aos tendes so distendidos9.

hidroxiprolina, quando comparados antes e depois do treinamento, podem identificar o grau de dano sobre o tecido conjuntivo. O maior risco de dano muscular ocorre durante a ao muscular excntrica intensa, pois neste tipo de ao realiza-se trabalho de fora e de alongamento simultaneamente, aumentando assim o estresse sobre os tecidos6,19. No entanto, prvias aes musculares concntricas de alta intensidade podem aumentar a susceptibilidade do msculo ao dano, quando acompanhada por aes musculares excntricas8,18. A maioria da literatura abordada, no faz referncia ao risco de dano sob o treinamento de resistncia de fora com implementos de pesos livres e sim com equipamentos isocinticos2,5. Alm disso, os estudos encontrados analisaram as aes musculares concntricas e excntricas de forma isolada4. Com isso, tm-se como objetivo verificar os nveis de hidroxiprolina antes e depois de um treinamento de resistncia de fora, com velocidade controlada nas aes excntricas e concntricas associadas.

Materiais e Mtodos
Amostra

As aes musculares quando impostas aos msculos esquelticos com sobrecarga promovem danos aos tecidos conjuntivos, e o aumento na excreo urinria de hidroxiprolina indica os referidos danos teciduais. O colgeno tem como parte fundamental a hidroxiprolina que formada preferencialmente atravs da oxidao da prolina e entra no metabolismo durante a degradao do prprio colgeno. Nesta degradao se formam peptdeos contendo hidroxiprolina que em parte no sofrem Adotaram-se como critrios de excluso: a) hidrlise posterior e so eliminados pela 20 uso de medicamentos que tivessem influncia urina . sobre o comportamento das respostas Regimes de treinamento intenso funcionais; b) problemas osteomioarticulares aumentam a fora de tenso no osso e no que poderiam limitar a realizao dos tendo e isso pode acarretar mudanas na exerccios propostos; c) falta de familiarizao taxa da sntese e degradao do colgeno. com os exerccios propostos. Tambm foi A gerao de fora elevada durante as sugerido que o padro nas horas de sono e o aes musculares excntricas, pode tipo de alimentao no fossem modificadas afetar o metabolismo do colgeno e at do habitual. Este estudo foi apresentado ao as estruturas musculares e tendneas do Comit de tica em Pesquisa da Universidade tecido conjuntivo. Portanto, os nveis de Castelo Branco (UCB-RJ) e todos os voluntrios
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Participaram da amostra oito homens voluntrios (22,7 4 anos; 177 4 cm; 72,6 4,8 kg). Todos referiram serem saudveis e fisicamente ativos, realizando atividades de fora, pelo menos trs vezes por semana e familiarizados com exerccios e equipamentos utilizados neste estudo. Para seleo da amostra respeitaram-se os seguintes critrios de incluso: a) prtica regular de atividades de fora h pelo menos seis meses; b) IMC 25 Kg.m-2 evitando-se nveis de sobrepeso que comprometessem a qualidade de execuo dos movimentos; c) questionrio PAR-Q negativo.

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assinaram um termo de consentimento, de aquecimento especfico, executado no SH e acordo com a Resoluo 196/96 do Conselho LP respectivamente, composto por uma srie Nacional de Sade do Brasil. de 30 repeties com 40% da carga obtida em 30RM. Posteriormente, realizaram-se trs sries com carga para 30RM nos respectivos Testes de 30RM Os dados foram coletados em trs dias exerccios sempre na mesma ordem (SH e distintos. Na primeira visita, os indivduos, LP). Os intervalos foram fixados em dois aps realizarem as medidas antropomtricas, minutos e 30 segundos entre as sries e executaram o teste de 30RM no aparelho exerccios. A velocidade de execuo foi de leg-press 45 (LP) e supino horizontal controlada por meio de um metrnomo (SH) com a barra longa (Fitness equipment; (Casio HS-30W ), estabelecendo-se trs segundos para cada movimento completo, Franklin Park, IL). A incluso dos indivduos, nas seqncias dos exerccios testados foi totalizando 90 segundos nas 30RM. Um determinada na forma de delineamento profissional experiente em treinamento de alternado. Aps a obteno das cargas fora acompanhou os voluntrios, de modo mximas no teste de 30RM, os indivduos que os avaliados conseguissem executar todas descansaram por 24 horas e foram reavaliados as repeties dentro do tempo previsto, em para obteno da reprodutibilidade das cargas cada movimento, e no tempo total de cada no teste de 30RM em mais dois dias, com srie. Dessa forma, os voluntrios foram intervalo de 24 horas entre os mesmos. Para levados exausto, sem risco de reduo no tanto, considerou-se como 30RM a maior volume total do treinamento. carga estabelecida nos trs dias, com diferena Anlise da Hidroxiprolina menor que 5%. Nos intervalos entre as sesses de testes no foi permitida a realizao A coleta da urina para verificao da de exerccios, a fim de evitar qualquer variao da concentrao de hidroxiprolina interferncia nos resultados obtidos. foi feita antes do protocolo da sesso de Visando reduzir a margem de erro nos treinamento. Os indivduos realizaram um testes de 30RM, foram adotadas as seguintes jejum de 12 horas (perodo da noite) e logo estratgias14: a) instrues padronizadas aps eliminarem a primeira urina, fizeram foram fornecidas antes do teste, de modo que uma hidratao com gua e a partir da, um o avaliado estivesse ciente de toda a rotina perodo de duas horas foi dado para que que envolvia a coleta de dados; b) o avaliado iniciassem a coleta nos frascos previamente foi instrudo sobre a tcnica de execuo distribudos. A mesma foi imediatamente do exerccio; c) o avaliador estava atento acondicionada no gelo e levada para o quanto posio adotada pelo praticante laboratrio para anlise. no momento da medida, pois pequenas variaes no posicionamento das articulaes envolvidas no movimento poderiam acionar outros msculos, levando a interpretaes errneas dos escores obtidos; d) estmulos verbais foram realizados a fim de manter alto o nvel de estimulao; e) os pesos adicionais utilizados no estudo foram previamente aferidos em balana de preciso. Os intervalos entre as tentativas em cada exerccio durante o teste de 30RM foram fixados entre dois a trs minutos.
Procedimento para coleta de dados

Aps a sesso de treinamento, os indivduos aguardaram duas horas e imediatamente aps esse tempo, realizaram a coleta da urina, que a partir da, seguiu os mesmos procedimentos anteriormente citados. Vale ressaltar que neste caso a hidratao foi feita durante os intervalos de recuperao entre as sries.
Tratamento Estatstico

No quarto dia, 48 horas aps a realizao do ltimo teste de 30RM, os indivduos foram submetidos sesso de treinamento para coleta de dados. Anteriormente a conduo do protocolo, os voluntrios realizaram

Para o tratamento dos dados, utilizou-se um teste-t student para amostras pareadas. Em adio, aplicou-se a ANOVA de uma entrada para medidas repetidas, com intuito de verificar as cargas nos teste de 30RM nos exerccios avaliados. Os dados foram tratados no software Statistica 5.5 (Statsoft, USA).O nvel de significncia adotado foi de 5%.

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Resultados
Inicialmente so ilustrados os resultados referentes s cargas obtidas nos testes de 30RM. No foram verificadas diferenas significativas entre as cargas obtidas para 30RM nos exerccios LP (p=0,256) e SH (p=0,351). Na tabela 1, verifica-se que no pstreino as medidas da mdia e da mediana se aproximaram. O coeficiente de variao obteve reduo em virtude de uma diminuio dos valores do desvio padro e da mdia. Isso mostra uma tendncia convergncia dos dados da amostra. A mdia de hidroxiprolina excretada no ps-treino foi menor que a

excretada no pr-treinamento (13,3 mg/d < 21,1mg/d). O desvio padro mostra que a variabilidade na concentrao de hidroxiprolina foi muito maior no pr-treino (26,88 mg/d), do que no ps-treino (5,53 mg/d). O erro padro apresentado explica que h uma possibilidade de erro de (9,50 mg/d e 1,95 mg/d) para o pr e o ps-treino respectivamente. Portanto, uma menor possibilidade de erro na concentrao de hidroxiprolina excretados no ps-treino. Como a amostra ficou prxima da distribuio normal foi possvel usar testes paramtricos para comparar as mdias.

Tabela 1 - Anlise descritiva dos nveis de hidroxiprolina em mg/d.

HP Pr Ps Min 4,0 5,4 Mx 86,9 22,7 Mdia 21,1 13,3 Md 13,5 14,3 dP 26,88 5,53 ePe 9,50 1,95 ass 2,69 0,13 Curt 7,44 -0,02 Cv % 127,10 41,56

HP = Hidroxiprolina; Min = Mnimo; Mx = Mximo; Md = Mediana; DP= desvio padro; EPE = Erro Padro; Ass = Assimetria; Curt = Curtose; CV = Coeficiente de Variao.

No grfico 1, pode-se observar a diminuio da concentrao de hidroxiprolina no ps-treino. Contudo, a estatstica adequada (Teste t-Student pareado) mostrou no haver diferena significativa entre as comparaes do pr e ps-teste (p = 0,368).
G RF I C O 1 concentrao mdia de hidroxiprolina pr e ps-treino.

mas sem ocorrer diferena significativa entre as comparaes do pr e ps-teste. Com o intuito de sustentar esses resultados, buscamos na literatura estudos com anlises similares de hidroxiprolina. Nessa busca, encontramos dois estudos aproximados no tempo de anlise de urina ps-treino. Os mesmos analisaram a concentrao de hidroxiprolina nos tempos de 5 min. e 1h ps-treino, e como no presente estudo, tambm no encontraram diferenas significativas,. Esses autores justificam seus achados hipotetizando que o tempo de coleta ps-treino pode ter sido insuficiente para que se detectasse uma concentrao mais elevada de hidroxiprolina. Portanto, o tempo de duas horas dado para a coleta de urina e posterior anlise de hidroxiprolina neste experimento, pode tambm ter sido insuficiente para que se conseguisse uma concentrao mais elevada desta varivel e o respectivo dano no tecido conjuntivo. As referncias supra citadas,, alm de serem justificativas para os achados deste estudo, tambm corroboram com outros achados. Por exemplo: outros autores mostraram concentrao mais elevada de hidroxiprolina com coletas aps 24 horas do trmino do treinamento7,15. Tais achados sugerem que imediatamente aps a degradao do colgeno existe a necessidade de regenerao imediata ou do rearranjo das clulas do colgeno e somente aps vrias horas, a

Discusso
Diversos estudos indicam que a ao muscular excntrica mais comumente associada ao dano no tecido msculoesqueltico1,4,16. Portanto, era de se esperar que um determinado grau de dano pudesse ser observado ao final das aes musculares excntricas associadas s aes concntricas em 30RM com velocidade controlada. No entanto, no verificamos na literatura estudos que suportassem a evidncia de dano no tecido conjuntivo aps uma sesso de resistncia de fora em dois exerccios distintos. O principal resultado encontrado nesse experimento foi diminuio do nvel da varivel hidroxiprolina no ps-treino,
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prolina ento hidrolisada e liberada na urina como hidroxiprolina. Entende-se com isso, que a concentrao de hidroxiprolina logo aps, e at 2 horas depois do treino, deve ser inferior a concentrao pr-treino, exatamente como mostrou este estudo, apesar do tratamento estatstico no ter apresentado diferena significativa. Essa hiptese pode ser fundamentada pelas declaraes de um importante estudo13. O mesmo relata que ocorre na literatura um consenso no que se refere identificao da concentrao de colgeno relacionados aos componentes bioqumicos, que por sua vez, so determinantes na regenerao dos danos pelo aumento da bioatividade molecular. Diferentemente dos resultados encontrados pelos estudos citados anteriormente7,15, Brown et al., reportam que no encontraram diferena significativa na quantidade de hidroxiprolina plasmtica 24 e 216 horas (1 e 9 dias), ps-exerccio. Porm, a concentrao de colgeno foi aumentada em 46,6 e 44,3% respectivamente. Contudo, tal aumento da concentrao de colgeno, sem identificao do aumento da hidroxiprolina plasmtica e conseqentemente de qualquer dano, justifica uma possvel regenerao do dano pela alta concentrao de colgeno encontrada. J que como referenciado, ele determinante na regenerao dos danos.

duas horas depois de trs sries de 30RM, para essa amostra, no foi tempo suficiente para que se conseguisse observar, atravs da sobrecarga aplicada, um efeito agudo elevado na concentrao de hidroxiprolina e conseqentemente algum grau de dano no tecido conjuntivo. Talvez a necessidade imediata de formao de colgeno para regenerar o tecido conjuntivo, provavelmente via metaloproteinases, seja prioritria e absorva rapidamente a hidroxiprolina do meio para a referida regenerao. Alm disso, a adaptao dos indivduos s aes musculares utilizadas, pode tambm no ter permitido a deteco de uma concentrao elevada de hidroxiprolina, e conseqentemente, algum grau de dano no tecido conjuntivo, j que indivduos treinados podem estar bem adaptados s aes musculares estudadas, obtendo com isso um efeito protetor e conseqentemente menor mudana nos indicadores do dano muscular5,16.

Contudo, o presente estudo apontou algumas limitaes que podem ter interferido nos resultados. Dentre elas destacamse o nmero de participantes, o nvel de estresse, o estado psicolgico dos indivduos e o jejum de 12 horas que foi controlado pelos prprios indivduos. Entretanto esta pesquisa levantou desdobramentos para futuras investigaes e interessantes questionamentos relacionados dinmica Mackey et al., reportam que o do processo de turnover do colgeno e da estiramento muscular pode ser um estmulo liberao da hidroxiprolina no sangue e para a proliferao do colgeno. Assim, posterior excreo pela urina. So eles: apesar deste estudo no ter mensurado a concentrao do colgeno, pode ser que os 1) Como ocorre esse processo de turnover e a liberao da hidroxiprolina em funo 90 estiramentos utilizados (trs sries de do tempo? 30 RM), tenham provocado a captao de componentes bioqumicos, como a prolina 2) necessrio mais tempo para filtragem nos rins de modo que haja maior e a prpria hidroxiprolina, para aumentar quantidade de hidroxiprolina na urina? a concentrao do colgeno. Isso pode ter impedido a deteco de concentraes mais Recomendam-se ainda outros estudos elevadas de hidroxiprolina no tempo de sobre este assunto, levando-se em duas horas ps-treino. Sendo assim e de considerao outras formas de treinamento acordo com os resultados encontrados na e tempos de coleta de hidroxiprolina presente investigao, pode-se concluir que diferentes do realizado aqui.

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