Universidade Federal do Amazonas Programa de Ps-Graduao em Inovao Farmacutica

Manaus-2013

Mecanismos celulares de resistncia a drogas antineoplsicas

captao (OATP, OCT...) efluxo (Pgp , MRPs...)

ativao protenas apoptticas (MAPK,P53,...)

ativao (CYPs,...)

enzimas antioxidantes (SOD,GST, catalase, ...)

protenas antiapoptticas

reparo DNA inativao (GSTs, ...)

Representao de diferentes mecanismos envolvidos na resistncia de drogas antineoplsicas

OATP: transporte de polipeptdeo nion; OCT: transporte de ction orgnico; Pgp: glicoprotena-P, MRP: multirresistncia associada a protenas; CYP: citocromo P-450; SOD: superxido dismutase; GST: glutationa transferase; MAPK: protena quinase ativada por mitgenos.

Fonte: AKHDAR et al., 2012.

Estudo da glicoprotena P como alvo de drogas multirresistentes

molcula do frmaco eliminada

frmaco antitumoral
espao extracelular membrana plasmtica

glicoprotena P inibidor

difuso

Citoplasma

Representao esquemtica da estrutura de glicoprotena P e a eliminao de uma molcula de frmaco Fonte:http://www.d.umn.edu/~jfitzake/Lectures/DMED/Antineoplastics/GeneralConcepts/PGlycoprotein.gif

O uso de excipientes para superar MDR e como inibidores da P-gp

Citotoxicidade em clulas resistentes - adjuvante TPGS

Clulas : 1x104/poo PLX 5M (H460/taxR) 50nM (KB-8-5) Concentraes: 15 M TPGS 15 M TPGS (mod.) Tempo: 48 hs de incubao

Citotoxicidade em clulas resistentes adjuvante VE

Clulas : 1x104/poo PLX 5M (H460/taxR) 50nM (KB-8-5) Concentraes: 50 M VE 50 M VE (mod.) / TS (VE succinato) TPD (sal de fosfato dissdico) TA ( acetato de VE) Tempo: 48 hs de incubao

Efeito anticancergeno in vivo

Ratos nudes Injeo subcutnea : 1x106cells - H460/tax R Administrao: VE (500 mg/kg em150 L PBS contendo 0,5 mg Pluronic F127) em emulso 3 dias antes da adm de taxol Morte dos animais: tumor = 2cm de comprimento

Efeito anticancergeno in vivo

Absoro celular de rodamina 123 em clulas H460/tax-R por citometria de fluxo

Clulas: 2,5x105 H460/taxR placas 12 poos Incubao: compostos (conc. teste citox.) / 5h Incubao: 5 M Rh 123 / 1h Lavagem Anlise por citometria de fluxo

Acmulo intracelular de doxorrubicina (DOX) em clulas H460/tax-R por microscopia de fluorescncia

Anlise da expresso de P-gp por western blotting

Determinao de ATP intracelular

Kit ATPlite luminescncia Clulas: 1x104 / 96 poos Incubao com compostos: 2hs Lavagem Adio do reagente do kit Incubao: 15 minutos Leitura da luminescncia

Ensaio P-gp ATPase

Kit P-gp-Glo (Promega). Incubao: 25 g de enzima G-pg + 20 L tampo + 10 L de verapamil (200M) + 100 M de Na3VO4 + compostos testes (5x concentrado 50M) Incio: MgATP (10mM) Termino: 40` depois add de 50 l de firefly luciferase inicia uma reao dependente de ATP. Leitura aps 60 em sistema de imagem

CONCLUSES

Identificao da estrutura fundamental de TPGS para superar MDR. VE pode melhorar a eficcia teraputica de PTX, tanto in vitro e em ratinhos nus portadores de tumores. O novo pedido de VE para servir como um sensibilizador da MDR ser atrativo, devido sua segurana.

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