BIOLOGIA MOLECULAR

HISTORICO
1600 1800 1900 1950

Fundao da gentica (Mendel, 1866) e da evoluo (Darwin, 1859) Descoberta do microscpio

Princpio transformante Griffiths, 1928

Fatores e fermentos Garrod e Bateson, 1909

Dupla Hlice Watson e Crick, 1953

Clulas, Nuclena (Miecher, 1869) organelas Cromatina (Flemming,1879)

Diviso Celular Sutton e Boveri, 1902 Genes e enzimas Beadle e Tatum, 1940

DNA:depositrio Avery, 1944

O princpio transformante: Griffiths, F. 1928

Camundongo sobrevive

Cepa rugosa (L)

Cepa Lisa (L) Camundongo morre

+
Cepa Lisa (L) inativada pelo calor Camundongo sobrevive Cepa Lisa (L) inativada pelo calor Cepa rugosa (L) viva Camundongo morre

O princpio transformante: Avery O. 1944

protenas

RNA
Cepa Lisa (L) inativada pelo calor

polissacardeos lipdeos

Cepa rugosa (L) viva

Camundongo sobrevive

DNA
Cepa rugosa (L) viva Camundongo morre

O DNA o depositrio da informao gentica

Neel, Beet, Pauling, e Ingram e a anemia falciforme, 1941-57

O problema dos bioqumicos

Identificar e caracterizar genes: a busca do gene perdido

Experimentos que levaram ao modelo da dupla hlice

Alexander Todd descreve que o DNA um polinucleotdeo

Experimentos que levaram ao modelo da dupla hlice

a-hlice descrita como a estrutura das protenas Rosalind Franklin faz experimentos de difrao de Raios-X que so mostrados a Watson

Esses experimentos sugerem uma estrutura magricela e helicide, com duas fitas e um dimetro com pirimidinas e purinas pareando

Experimentos que levaram ao modelo da dupla hlice

Erwin Chargaff se encontra com Watson e Crick e relata seus achados: as quantidades relativas de A e T so iguais e C e G tambm.

Resumo: DNA

Resumo: DNA

Evoluo do conhecimento em biologia molecular desde a dupla-hlice

PCR,1985 Transgnicos, 1980 Primeiro gene humano,1977 Insulina Enzimas de restrio,1971 recombinante,1982 Sequencimento de DNA, 1975 Bancos de DNA recombinante, armazenamento 1973 de dados 1971 Replicao, 1958 Hibridizao DNA polimerase, 1961 por Sothern,1975 Cdigo gentico, 1961 Retrotranscrio, 1970 Regulao da expresso gnica,1961 Transcrio 1957 Dupla-hlice, 1953

Genmica, 1991

1950

1960

1970

1980

1990

Como ns podemos manipular o DNA? 1a etapa: purificao

Como ns podemos manipular o DNA? 2a etapa: visualizao

Como ns podemos manipular o DNA? 2a etapa: visualizao: eletroforese em gel

Como ns podemos manipular o DNA? 3a etapa: cortar e colar

GAATTC CTTAAG

GGGCCC CCCGGG

Enzimas de restrio: tesouras moleculares

Criao de molculas recombinantes

DNA Estranho

Plasmdio aberto, Gene resistente Ampicillina Fragmentos do DNA estranho insert Mistura com aenzima Ligase

LIGATION
Plasmdio circular, com Insert

Como clonar um gene?

isolar o DNA - digerir com enzimas de restrio - digerir os plasmdeos com a mesma enzima - ligar as fitas de DNA e plasmidiais

Como clonar um gene?

Introduzir os plasmdeos recombinantes nas bactrias - selecionar os plasmdeos

CLONAGEM DA INSULINA Insulina recombinante (Humulin) -introduzir gene responsvel pela produo de insulina dos seres humanos em bactrias (plasmdios) -bactrias produzem insulina humana recombinante -produo praticamente ilimitada e com custos muito baixos em comparao ao outro mtodo

Transgnicos

Primeiro mamfero transgnico: hormnio do crescimento

Tabaco com gene luminescente de bactria

Transgnico que reverteu o sexo

Identificao humana: teste de paternidade por DNA

Complementaridade pode ser usada para se fazer uma pescaria molecular

Hibridizao por Southern

1. Separao do DNA fragmentado por eletroforese em gel Plo negativo -------------2. Transferncia do DNA fragmentado para um suporte slido (filtro de Nitrocelulose) 3. Hibridizao com a sonda marcada

Poos

++++++++++ 4. Lavagem do filtro para manter apenas a sonda hibridizada com o fragmento de DNA especifico

5. Exposio a um filme de Raios-X

Teste de Paternidade

Paternidade

Incluso

Excluso

O que mudou na era genmica/Ps-genmica?

10000

1000

100

...escala!

10

1 1970 1980 1990 2000

Abordagem mica de doenas complexas

Sistemas automatizados Biomatemtica Bioinformtica Bioestatstica

Larga-escala

Melhores ferramentas Vacinas Testes genticos Remdios

Reinveno do dogma central da biologia molecular?

DNA genoma

RNA transcriptoma

PTN proteoma

DNA na sociedade
DNA
Teste de Paternidade Diagnstico de doenas

Medicamentos inteligentes (dosagens pessoais)

Drogas recombinantes: insulina, vacina HBV

Trangnicos

Projeto genoma: santo Graal Cdigo da vida rvore da vida Livro de receitas

Manual de informaes

Quando o DNA vira notcia (Massarani et al, C&A:26, 2003)

Informaes sobre 751 notcias em 5 jornais dirios brasileiros
Jun/2000- mai/2001

Distribuio dos artigos por assunto

Mapeamento gentico 78% Associao entre genes e doenas e comportamento 30% Trangnicos 23,7%

Atitude da imprensa
Postura favorvel 54% favorvel com ressalvas 5% Postura desfavorvel 15,7% prs e contras 30,1%

Clonagem 13,7%

A ideologia do DNA no sculo XX Dcada de 20: hereditariedade e, em ltima anlise, os (desconhecidos) genes definem as caractersticas do indivduo das morfolgicas as comportamentais. Dcada de 60: dogma central aps o modelo da dupla-hlice cria a idia do DNA como um plano mestre da execuo da vida Dcada de 90: Genoma, aos invs do DNA apenas, reconstitui a o conceito de entendimento da planta dos seres vivos (blueprint)