Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
INTRODUO:
Enzimas esto presentes no citoplasma e em organelas de clulas vivas. Interao enzima-biomolculas causa alterao na estabilidade da estrutura e na funo da enzima. -D-glucuronidase uma hidrolase que catalisa a clivagem do cido glucurnico. Polissacardeos reforam a estabilidade da enzima contra alteraes de presso e temperatura.
INTRODUO:
Polissacardeos foram escolhidos para preparar microcpsulas contendo enzimas.
INTRODUO:
Polissacardeos utilizados: Carboximetil-celulose de Sdio carregado negativamente (CMC); Metil-celulose descarregado (MC); Carboximetil-celulose carregado positivamente (CMCS). Substrato utilizado: Baicalin. Enzima utilizada: -D-glucoronidase (GUS).
OBJETIVO:
O objetivo desse estudo foi identificar a influncia de trs polissacardeos com estruturas moleculares parecidas, porm com diferentes caractersticas, na atividade cataltica e estabilidade da enzima modelo, a GUS. A partir dos resultados e da compreenso da interao enzimapolissacardeo em cada caso, podemos futuramente otimizar a atividade e estabilidade da GUS a partir de modificaes de seu microambiente.
METODOLOGIA:
Calormetro de varrimento diferencial (DSC):
Determina a propriedade termodinmica da GUS na presena ou ausncia de polissacardeos. Espectroscopia de dicrosmo circular (CD): Determina alteraes na estrutura secundria de GUS na presena ou ausncia de polissacardeos. HPLC: Bioconverso de baicalin baicalena catalisada por GUS na presena ou ausncia de polissacardeos. Determina a quantidade de baicalena produzida.
RESULTADOS E DISCUSSO:
Efeito de polissacardeos na atividade da enzima: Alterao da cor das solues. A mudana mais significativa: CMCS, foi devido estabilidade reduzida do baicalin.
RESULTADOS E DISCUSSO:
Efeito de polissacardeos na enzima:
Blank Enzyme activitya (relative activity, %) Denaturation temperatureb (C) Storage stabilityc (remaining activity, %) 0 day 10 days 26 days 100 74 4 100 115 41 100 57 7 100 97 94 100 103 CMC 112 110 MC 105 98 CMCS 96 100
Tabela 1:Efeito de polissacardeos na atividade relativa, na temperatura de desnaturao e na estabilidade de armazenamento de GUS.
RESULTADOS E DISCUSSO:
Efeito de polissacardeos na atividade da enzima:
RESULTADOS E DISCUSSO:
Efeito de polissacardeos na atividade da enzima:
Figura 5: Efeito de polissacardeos nos espectros de CD de GUS sob diferentes condies de pH.
RESULTADOS E DISCUSSO:
RESULTADOS E DISCUSSO:
pH value
TrisHCl blank
4.0
5.0
6.0
7.0
8.0
CMC
6.5
6.7
6.7
7.0
7.5
MC
4.0
5.0
6.0
7.0
8.0
CMCS
7.2
7.5
7.5
7.5
7.5
CONCLUSO:
Atividade enzimtica:
- CMC: melhorou
Estabilidade de pH: - CMC e CMCS: melhorou
Estabilidade de armazenamento:
- CMC e CMCS: melhorou
CONCLUSO:
A presena de polissacardeos influenciou significativamente a atividade e a estabilidade da enzima pela interao eletrosttica entre o polissacardeo e a enzima. Considerando todas as influncias sobre a atividade enzimtica e estabilidade em presena dos trs polissacardeos carregados diferentemente no estudo, a CMC foi a mais favorecida. Este resultado est em conformidade com o microambiente de existncia natural de GUS.
GUS
FIM