Elementos Genéticos em Bactérias

Agradecimentos: Profa. Dra. Aline Maria da Silva

Instituto de Química- USP

Bibliografia:
Genes VII - Benjamin Lewin
Biologia Molecular Básica-Arnaldo Zaha
Lenhinger Principles of Biochemistry (3a. Ed.)
 Elementos Genéticos
Cromossomo: Longo, usualmente circular, dupla-
fita

Plasmídio: pequeno, usualmente circular, dupla-fita

Elemento transponível: DNA dupla-fita, inserido

no cromossomo ou no plasmídio e que pode se
transferir de lugar

Bacteriófago: DNA fita simples ou dupla-fita

 Cromossomo de E.coli

4,6 x 106 pares de bases

Circular
Uma origem de replicação (Ori C)
Totalmente sequenciado
Cromossomo
E.coli
 Plasmídios
Elementos genéticos móveis extracromossomais

Capacidade de se auto-replicar

Tamanho variado: 1000 a 200000 pares de bases

Multicópia ou cópia única

Confere vantagens adaptativas

 Transposons
Seqüências de DNA que codificam a enzima
transposase

Capacidade de se transferir (transposição): cópia

idêntica é inserida em outro sítio genômico

Transposons simples (Sequências de Inserção):

codificam apenas a transposase

Transposons complexos: transposase + outros

genes (ex: resistência a antibióticos)
 Bacteriófagos
Ciclo Lítico

Ciclo Lisogênico (Prófago)

Ciclo lítico Ciclo lisogênico
Ciclo lítico
Transferência do material
genético em bactérias
Transformação
Transformação
Transformação
Transformação
Transdução
Conjugação: transferência de
plasmídeo
 Cromossomos Eucarióticos:
Compactação do Material Genético

Agradecimentos: Profa. Dra. Aline Maria da Silva

Instituto de Química- USP

Bibliografia:
Genes VII - Benjamin Lewin
Biologia Molecular Básica-Arnaldo Zaha
Lenhinger Principles of Biochemistry (3a. Ed.)
 Compactação do Material Genético
Organismo / Forma Dimensões Tamanho do Número de
Compartimento DNA bases

Fago T4 iscosaedro 0,065x0,10um 55um 170 000

E.coli cilindro 1,7 x 0,65 um 1,3 mm 4,6 x 106

Mitocondria esferóide 3 x 0,5um 50um 16 000

Humana 10 dsDNA

Núcleo Humano esferóide 6um diametro 1,8m 6 x 109

46 cromossomos (diplóide)
Número normal de cromossomos em alguns
organismos
 Empacotamento do
DNA do bacteriófago
lambda

Pré- Capsídeos Vazios

Partícula Madura
 Dupla hélice de DNA:
Watson-Crick, 1953
Sulco
menor

Sulco
maior
enrolado

superenrolado
Conformação
tridimensional do
DNA circular
fechado
 Quebra em uma
das cadeias da
dupla-fita

DNA circular DNA circular

superespiralado relaxado
Superenrolamento para anular a tensão criada pela
abertura da hélice
Superenrolamento crescente
Superenrolamento Superenrolamento
negativo positivo
Introdução de superhélice negativa pela DNA girase:
uma topoisomerase de E.coli.
Brometo de Etídio
Eletroforese de DNA em
gel de agarose
 Eletroforese de
DNA em gel de
agarose corado
com EtBr

DNA relaxado

Diferentes graus
de
superenrolamento
após tratamento
com
topoisomerase

DNA
totalmente
superenrolado
 Compactação de Genomas Procarióticos

O material genético apresenta-se organizado de forma

compacta ocupando 1/3 do volume total da célula
bacteriana Nucleóide

Densidade do DNA na célula bacteriana é alta:

10mg /ml !!!!
Nucleóide expelido
de um célula
bacteriana lisada:
Alças de uma fibra

Nucleóide
da Bactéria
Empacotamento
do genoma
bacteriano

Proteínas com
caráter básico
estão envolvidas na
organização da
fibra compacta e na
formação das alças
do nucleóide
 Compactação de Genomas Eucarióticos

Proteínas nucleares específicas + DNA

Cromatina

Eucromatina Heterocromatina
menos compactada mais compactada

Cromossomos
Estado mais condensado na Mitose ou Meiose
Corte de um núcleo corado com Feulgen

Heterocromatina
Nucléolo

Heterocromatina

Citoplasma
Telômero Cromossomo
mitótico

Centrômero

Cromátides irmãs

Telômero
Cromossomo Artificial
de Levedura (YAC)

Centrômero
Telômero
Sequencia para
Replicação Autônoma
Replicação dos
Telômeros
Cromossomos
desprovidos de
histonas:
arcabouço de
proteínas no qual
as alças do DNA
estão ancoradas
 Níveis de
Compactação
da Cromatina

Fibra de 30nm

Razão de compactação
~1000-2000

Razão de compactação
~7000
Cerne de DNA de ligação dos
histonas do nucleossomos
nucleossomo
Enrolamento helicoidal da
fibra de 30nm: 6
nucleossomos por volta
organizados radialmente
Estrutura Molecular da Cromatina:Nucleossomos

Eletroforese
em gel de
agarose
Estrutura Molecular da Cromatina:Nucleossomos
Nucleossomo: DNA organizado em duas voltas
Geração da partícula central do Nucleossomo através da
digestão completa com nuclease
 Histonas:
Proteínas com
caráter básico
(carga +) que
interagem com o
DNA (carga -)

Nucleossomo
Organização das histonas no nucleossomo
Não replicado

Replicado
Mecanismo de Montagem dos Nuclessomos na
Replicação
No nucleossomo segmentos do DNA podem ser
aproximados
As caudas N-terminais
das histonas podem ser
modificadas
covalentemente de
modo reversível:
Fosforilação,
acetilação, metilação ou
ubiquitinação

Alteração funcional do
octâmero de histonas
levando a mudançãs
estruturais da
cromatina na
transcrição e na
replicação
Acetilação ou metilação da lisina
ou fosforilação da serina reduz a
carga líquida das histonas
Modelo para Transcrição na
Presença de Nucleossomos