Ao de diferentes solues de prpolis na superfcie dentinria - avaliao ultra-estrutural*

CLEUSA APARECIDA CAMPANINI GERALDINI**, ELIZABETH GODOY CEZAR SALGADO***, SIGMAR DE MELLO RODE****

RESUMO
A prpolis um produto natural, coletado pelas abelhas, dos brotos de rvores, flores e plen e conhecida por suas propriedades biolgicas: atividade antibacteriana, anti-inflamatria, cicatrizante, fngica, etc. Neste trabalho avaliou-se in vitro o extrato etanlico de prpolis na superfcie dentinria de 15 dentes divididos em cinco grupos. Com instrumento diamantado removeu-se o esmalte e, com brocas carbide, cilndricas lisas n 0 56, cortou-se aproximadamente 1mm de dentina, em alta rotao sob abundante refrigerao ar/gua, para produzir a camada de esfregao. Em seguida estas superfcies foram tratadas com diferentes concentraes etanlicas de prpolis e com etanol 70% puro, utilizando-se bolinhas de algodo estril para aplicao de cada substncia, esfregando-a por 30 segundos, considerando-se como controle onde foi apenas utilizado o spray gua/ar. Os espcimes, aps serem lavados com gua e secos, foram fixados em um posicionador metlico, metalizados com ouro e avaliados em microscopia eletrnica de varredura. Observou-se que, morfologicamente, as solues estudadas, quando comparadas ao grupo controle, removeram parte da camada de esfregao, sem expor os tbulos dentinrios. O extrato etanlico de prpolis a 10% promoveu uma camada regular cobrindo a superfcie dentinria e a 20% e 30% apresentou partculas com formas esferoidais de vrios tamanhos que ficaram sobrepostas ao esfregao dentinrio, o qual se apresentava re-

gular e com poucos detritos, sugerindo ao de limpeza das substncias utilizadas.

UNITERMOS
Camada de esfregao dentinrio; dentina; prpolis; microscopia eletrnica de varredura.

GERALDINI, C.A.C.; SALGADO, E.G.C.; RODE, S.M. Aplication of prpolis solutions on dentinal surface: scanning electron microscopy evaluation. Ps-Grad Rev Fac Odontol So Jos dos Campos, v.3, n.2, jul./dez. p., 2000.

ABSTRACT
The propolis is a natural product, collected by the bees, of the sprouts of trees flowers and pollen and known by its biological properties: antibacterial activity, anti-inflammatory activity, healing, anti-fungal activity, etc. In this in vitro research the extract of ethyl alcohol propolis was evaluated as a cleaning agent of the dentinal surface of 15 teeth divided in five groups. With diamond instrument the enamel was removed and with no 56 flat end fissure carbide burs, it was cut approximately 1mm

Resumo da Dissertao de Mestrado - rea de Concentrao em Prtese Bucomaxilofacial - Faculdade de Odontologia de So Jos dos Campos - UNESP 12245-000 - SP. ** Aluna do curso de Ps-Graduao, rea de Concentrao em Prtese Bucomaxilofacial, (Nvel Doutorado) da Faculdade de Odontologia de So Jos dos Campos - UNESP 12245-000 - SP. *** Mestre em Cincias pelo Departamento de Engenharia Mecnica do Instituto Tecnolgico de Aeronutica - ITA. ****Depto de Materiais Odontolgicos e Prtese - Faculdade de Odontologia de So Jos dos Campos - UNESP 12245-000 - SP.

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dentine, in high rotation under continuos refrigeration water/ air, to produce a smear-layer. These surfaces were treated with different concentrations of ethyl alcohol propolis and with pure ethyl alcohol 70%, being used sterile cotton pellets for application of each substance scrubbing it for 30 seconds, being considered as control where was just used the spray water/air. The specimens, after washing with water and drying, were fastened in a metallic support, gold sputtered and evaluated with scanning electron microscopy. It was observed that, morphologically, the studied solutions, when compared to the control group, removed part of the smear-layer, without exposing the dentinal tubules. The extract of propolis with ethyl alcohol at 10% promoted a regular covering layer on the dentinal surface. Concentrations at 20% and 30% presented spherical particles with several sizes that were located upon the regular smear-layer, and with few debris, suggesting a cleaning action of the used substances.

presentes em torno da regio e fatores climatolgicos14. O tipo de vegetao da regio de onde a prpolis foi retirada, o que determinaria maior ou menor teor de flavonides totais, da mesma forma a sua qualidade. Segundo Matsuno19(1997), pode-se dizer, que a composio da prpolis de 50 a 55% de resinas, 30% de cera de mel, 8 a 10% de leos essenciais e 5% de plens, e alm disso tambm encontrada uma pequena quantidade de cidos graxos, cidos orgnicos, amino-cidos e vitaminas. A prpolis possui funes biolgicas tais como bactericida, bacteriosttica, antiviral, fungicida, fungisttica, antiflogstica, antialrgica, bioestimuladora, dermatoplstica e anestsica local4, atividade citotxica, cicatrizante do tecido sseo, tecido cartilaginoso, polpa dental entre outros 17,18 . Scheller et al.23 (1977) constataram que a atividade antibitica da prpolis no exercida por uma frao qumica do produto, mas pelo conjunto dos componentes. Do ponto de vista farmacolgico, a prpolis tem sido empregada na forma slida16 ; na forma de ungento base de vaselina, lanolina, manteiga, azeite de oliva, ou extrato leo-alcolico21; na forma de extrato alcolico13; e extrato hidro-alcolico12. A proporo prpolis/veculo pode variar, para que se obtenha resultados bacteriostticos ou bactericidas25. Na Odontologia tem se estudado a ao da prpolis em algumas situaes como: gengivites, periodontites e GUNA5,8; aftas7,15; mumificao pulpar em dentes de ces24; e crie dental em ratos11. Observando-se as excelentes propriedades da prpolis na colmia e tendo em vista inmeros relatos sobre a aplicao clnica da prpolis na rea mdica e odontolgica, a selecionamos para iniciarmos estudos experimentais, in vitro, de aplicao do produto na superfcie dentinria.

UNITERMS
Dentin; Smear-layer; Propolis; Scanning electron microscopy.

INTRODUO
Na histria da medicina popular a prpolis pode ser considerada como um dos mais eficientes medicamentos naturais descobertos. A importncia dessa medicina alternativa extremamente relevante no Brasil, principalmente porque sua zona rural bastante extensa e muito rica no tocante s propriedades farmacolgicas de sua variada flora. A utilizao da prpolis na medicina popular anterior poca do Egito antigo. Aristteles, no seu livro Catlogo Animal, a registrou como medicamento para tratamento de abcessos e feridas, ou seja, usado para preveno das infeces19. A origem da palavra prpolis grega, com o significado pr= defesa e polis= cidade, que combinados significam defesa da cidade, ou seja, da colmia, que por vezes abriga dezenas de milhares de abelhas. A prpolis empregada pelas abelhas no reparo de frestas ou danos colmia, e no preparo de locais asspticos para a postura da abelha rainha. uma resina viscosa constituda basicamente por uma mistura de resina das cascas e dos brotos de rvores, com a seiva das flores, saliva das abelhas, cera e plen 19. As variaes na composio so determinadas principalmente pela flora da rea ecolgica, pelos ciclos evolutivos das plantas provedoras de resinas, pelos microorganismos

MATERIAL

MTODO

Foram selecionados 15 coroas de dentes molares ntegros, que foram seccionadas ao meio, no sentido mesio distal, com disco de carborundum em pea de mo. Aps a remoo do esmalte da poro vestibular e lingual dos fragmentos da co-

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roa, com instrumento rotatrio de carbide cilndrico liso n0 56, da KG Sorensen, cortou-se por 30 segundos aproximadamente 1mm de dentina em alta rotao e abundante refrigerao ar/gua, produzindo assim uma camada de esfregao dentinrio, em ambas as faces, sendo utilizada uma broca para cada dente, de acordo com o preconizado por Arajo et al1(1997). A prpolis foi obtida de colmias localizadas na regio de Bauru, Estado de So Paulo. Aps a limpeza da prpolis, preparou-se o extrato diluindo em etanol a 700 G.L. Os dentes foram divididos aleatoriamente em grupos de trs, nos quais nas superfcies dentin-

rias se fez uso de bolinha de algodo estril para aplicao das solues por 30 segundos. Aps o tratamento, todos os dentes foram lavados com spray ar/gua e secos com jatos de ar livres de impurezas e armazenados em recipiente estril. Aps a metalizao (Sputter Coater, Balzer SCD 50), os corpos de prova foram observados no Microscpio Eletrnico de Varredura (modelo DSM 950-ZEISS), do Centro Tcnico Aeroespacial - CTA em So Jos dos Campos, com aumentos originais que variavam de quinhentas a quatro mil vezes. Eletronmicrografias foram obtidas para anlise morfolgica comparativa dos espcimes.

Quadro 1 - Distribuio dos grupos segundo o tratamento superficial dentinrio e a concentrao da soluo
GRUPO G1 G2 G3 G4 G5 TRATAMENTO SUPERFICIAL DENTINRIO Sem tratamento superficial (controle) Etanol Extrato Etanlico de Prpolis (EEP) Extrato Etanlico de Prpolis (EEP) Extrato Etanlico de Prpolis (EEP) CONCENTRAO 70% 10% 20% 30%

RESULTADOS E DISCUSSO
Apesar da prpolis estar despertando grande interesse na sociedade nos ltimos tempos, ela utilizada desde a antigidade. Na dermatologia h vrios relatos de uso da prpolis, em forma de pomadas, emplastos, ungentos e em spray para facilitar a aplicao5. Em solues, as concentraes, utilizando o lcool como veculo principal, variavam entre 5 a 30%, as quais no foram muito diferentes das que utilizamos em nosso experimento. O objetivo deste trabalho foi verificar a alterao da morfologia da superfcie dentinria na aplicao de solues de prpolis em etanol. Inicialmente utilizamos isoladamente o etanol a 70% para diferenciar do resultado quando associssemos o prpolis. Com relao s solues utilizadas, pudemos observar que todas promoveram algum tipo de alterao na morfologia da camada superficial de esfregao dentinrio. Boyde et al. 2(1963) e Eick

et al.6(1970) verificaram uma camada sobre a dentina, composta de substncias orgnicas e inorgnicas que denominaram de camada de esfregao. Nossos resultados so concordes com os autores, nas alteraes morfolgicas ocorridas na dentina do grupo um, controle sem limpeza; verificamos uma camada irregular depositada sobre a superfcie, que obstrua a entrada dos tbulos dentinrios, chamada de esfregao dentinrio (Figura 1). Quando do preparo cavitrio, os profissionais dispunham de duas opes para limpar a cavidade: a primeira sugeria que a limpeza deveria ser mecnica; e a segunda preconizava que se deveria associar ao mtodo mecnico, um qumico com alguma soluo, como por exemplo o lcool 22. Brnnstrm & Johnson 3 (1974) e Gwinnett10(1984), utilizando etanol, observaram que a dentina permaneceu com esfregao dentinrio e assim, com microrganismos. Nossos resultados do grupo dois, com etanol 70%, so morfologicamente semelhantes aos desses autores (Figura 2).

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FIGURA 1 - Fotomicrografia mostrando a camada de esfregao dentinrio na superfcie da dentina. Riscos paralelos causados pela broca (), os detritos (D) e irregularidades (*) da camada de esfregao 1.000x de aumento original.

FIGURA 2 - Fotomicrografia mostrando o esfregao dentinrio tratado com etanol 70%. Detritos (D), as irregularidades (*) e riscos causados pela broca (), com aumento original de 1.000x.

Mesmo com a limpeza da cavidade, microorganismos permanecem, principalmente nas camadas mais profundas, sugerindo a necessidade um tratamento qumico3; embora Pashley20 (1984) tenha afirmado que a camada de esfregao dentinrio possa agir como um forrador cavitrio biolgico, reduzindo a permeabilidade dentinria. Em nossos resultados do grupo trs, extrato etanlico de prpolis (EEP) a 10%, observamos uma deposio discreta da soluo sobre a camada de esfregao dentinrio, mantendo os tbulos obstrudos (Figura 3). No grupo quatro, com EEP a 20%, foi observada a presena de partculas com formas esferoidais sobre a camada de esfregao dentinrio, de maneira mais evidente, provavelmente devido ao aumento

da concentrao. Tambm no foram observados tbulos abertos (Figura 4), pelo contrrio, nossos estudos deste grupo mostraram que as partculas da prpolis se depositaram sobre o esfregao e, talvez, auxiliem na manuteno dos tbulos obstrudos. No grupo cinco, EEP a 30%, pode-se observar a deposio de uma camada de partculas de formas esferoidais, em maior nmero que no grupo quatro, e de tamanhos variados sobre o esfregao dentinrio, aparentemente incorporando toda a camada irregular do esfregao e mantendo obstrudos os tbulos dentinrios (Figura 5). Estas partculas de formas esferoidais apresentadas no grupo quatro e cinco, talvez possam ser atribudas composio da prpolis 17, pois Matsuno19(1997) mencionou que na composio da prpolis, 50 a 55% so resinas.

FIGURA 3 - Fotomicrografia mostrando a dentina tratada com extrato etanlico de prpolis 10%, observar os detritos (D), e a superfcie mais regular que os grupos anteriores, com aumento original de 1.000x.

FIGURA 4 - Fotomicrografia mostrando as caractersticas da dentina tratada com extrato etanlico de prpolis 20%. Riscos da broca (), detritos (D) e partculas esferoidais (P), com aumento original de 1.000x.

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FIGURA 5 - Fotomicrografia mostrando as caractersticas da dentina tratada com extrato etanlico de prpolis 30%, notar as partculas esferoidais mais ou menos alongadas sugestivas de prpolis (P), recobrindo quase que toda a camada de esfregao (E) com poucos detritos (D) com aumento original de1.000x.

Estudos futuros devem nos informar se a prpolis tambm penetra at os tbulos dentinrios, e, ainda mais adiante, verificar o poder de eliminar ou no os microorganismos presentes. J um subsdio a avaliao de Ikeno et al.11(1991) das propriedades que a prpolis tem de eliminar alguns microorganismos pertencentes crie, onde confirmaram a atividade antibacteriana da prpolis sobre amostras de S. mutans e S. sobrinus. Ainda, a prpolis apresenta o poder de inibir a aderncia dos microorganismos na superfcie dentinria, como demonstraram o estudo, in vitro, de Gebara et al.9(1996) onde a prpolis foi efetiva na inibio da aderncia de S. mutans e S. sobrinus. Ikeno et al.11(1991), quando analisaram a composio da prpolis em seu experimento observaram a existncia dos cidos cinmico e cafeico, que tiveram atividade contra o S.mutans. O cido cinmico inibiu a atividade da glicosiltransferase, sendo o possvel agente ativo na proteo contra a crie. Observando a literatura, e levando-se em conta que nossos estudos mostraram que houve uma provvel deposio da prpolis sobre a superfcie dentinria, seria muito satisfatrio saber se o esfregao que ficou abaixo das solues com prpolis, no manteria sua atividade bacteriana. Tendo a prpolis as propriedades bactericida e bacteriosttica no combate crie como j foi demonstrado9,11, provvel que os microorganismos presentes no esfregao dentinrio sejam eliminados pela ao antimicrobiana da prpolis. Porm mais estudos seriam necessrios para fazermos esta verificao. A falta de pesquisas nesta rea nos deixa sem subsdios para podermos fazer maiores compara-

es sobre nossos resultados. Scheller et al24(1978), constataram que aplicao de EEP a 5% em cavidades dentinrias de ces reduz a reao inflamatria. Com base nestes dados acreditamos que a prpolis agindo sobre os microrganismos da cavidade dentinria, onde existe uma correlao direta entre a dentina e a polpa, poder levar clinicamente, a uma resposta pulpar favorvel. Nossos estudos sugerem a necessidade de verificar a penetrao doEEP na superfcie dentinria e tambm um estudo in vivo para observar se as solues com EEP interfeririam com uma adeso efetiva dentina.

CONCLUSO
Dentro das condies experimentais deste trabalho podemos concluir que: a) as solues estudadas removeram parte da camada de esfregao dentinrio, sem expor os tbulos dentinrios; b) o extrato etanlico de prpolis 10% apresentou uma camada regular cobrindo quase toda a camada de esfregao; c) o extrato etanlico de prpolis 20%, perma neceu na superfcie dentinria em forma de partculas esferoidais e mantendo abaixo destas uma rea regular; d) o extrato etanlico de prpolis 30% mante ve todas as caractersticas do EEP 20%, ape nas diferenciando no tamanho maior das par tculas, e de quantidade.

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