PROPOSTAS PARA DESENVOLVER EM SALA DE AULA 1

Neste nmero sugerimos a simulao de experimentos nos

quais amostras de DNA de diferentes pessoas so tratadas
com uma enzima de restrio hipottica, que corta as mol-
culas onde houver dois pares de bases C-G/C-G em seqncia.
O preenchimento dos grficos, onde os fragmentos do
DNA cortado so dispostos por ordem de tamanho, simula a
separao eletrofortica.
Apresentamos, ainda, um processo simples e prtico para
extrair DNA de uma amostra, no caso, de clulas de cebola.
TEMR5 0E BlULUlR
PROPOSTAS PARA DESENVOLVER EM SALA DE AULA
NMERO 1 JULHO DE 1995 EDITORA MODERNA
J. M. Amabis
*
e G. R. Martho
IDENTIFICANDO PESSOAS PELO DNA: UMA SIMULAO
As tcnicas da Engenharia Gentica permitem identificar
pessoas pela anlise de suas molculas de DNA (cido desoxir-
ribonuclico), a substncia que constitui os genes. Com exce-
o dos gmeos univitelinos, cada pessoa possui um conjunto
de genes, e portanto de molculas de DNA, nico e particular.
O processo mais simples para caracterizar um DNA
consiste em cortar as molculas dessa substncia com o auxlio
de "tesouras moleculares", as chamadas enzimas de restrio,
analisando em seguida o tamanho dos fragmentos que se for-
maram. Uma enzima de restrio corta a molcula de DNA
em pontos especficos, somente onde ocorre determinada
seqncia de bases nitrogenadas. Como cada pessoa tem
seqncias tpicas de bases nitrogenadas, o nmero e os
tamanhos dos fragmentos obtidos pelo corte enzimtico acaba
por caracterizar seu DNA.
O tamanho dos "fragmentos de restrio", como so chama-
dos os fragmentos obtidos aps o corte enzimtico, determi-
nado atravs da tcnica de eletroforese. A mistura de frag-
mentos de DNA aplicada em uma camada de gelatina (gel)
e submetida a um campo eltrico. Nessas condies, os frag-
mentos se movem a velocidades inversamente proporcionais
ao seu tamanho, isto , os fragmentos menores deslocam-se
mais rapidamente que os maiores.
Quando o campo eltrico desligado, fragmentos de mes-
mo tamanho estacionam juntos em determinada posio do
gel, formando uma faixa. O padro de faixas que surge
caracterstico para cada pessoa, e corresponde sua
"impresso digital" gentica.
Foto de um gel de eletroforese iluminado com luz ultravio-
leta. Sob essa luz, o DNA previamente tratado fluoresce,
revelando um padro de faixas tpico do DNA analisado.
O primeiro caso de identificao criminal atravs de ex-
ames de DNA ocorreu em 1985, na Inglaterra. Em um pequeno
condado, rodeado de montanhas e com uma nica estrada de
acesso, uma mulher foi estuprada e assassinada.
"L havia um geneticista, Alec Jeffreys, que colheu o esper-
ma encontrado na vtima e fez o exame de DNA. Mais tarde houve
outro crime similar. Novamente Jeffreys analisou o smen encon-
trado na vtima. Era do mesmo homem que cometera o primeiro
crime", conta Jos Maria Marlet, professor de medicina legal da
USP.
As autoridades locais forjaram uma campanha de doao
de sangue cuja finalidade era identificar o agressor. Todos os
habitantes foram doar sangue, mas nenhum deles possua DNA
igual ao do estuprador.
"A polcia prosseguiu com as investigaes e descobriu que
havia um viajante no condado. Quando o sujeito voltou, foi con-
vidado a doar sangue. Feito o teste de DNA no sangue colhido,
Jeffreys concluiu que o cdigo gentico do viajante era o mes-
mo do estuprador", conta Marlet.
1
a.
identificao foi na Inglaterra
Fonte: Folha de So Paulo 28/05/95
E
m maio de 1995, nos Estados Unidos, os promotores do
julgamento de O. J. Simpson, ex-astro do futebol americano
acusado de assassinar a esposa, pediram bioqumica Robin
Cotton que desse aos jurados uma aula sobre DNA, o material
hereditrio dos seres vivos. A anlise do sangue encontrado no
local do crime havia revelado a presena de DNA supostamente
pertencente a Simpson.
O exemplo acima ilustra como conhecimentos antes restritos aos
especialistas tornam-se hoje acessveis ao grande pblico. As
pessoas querem saber o que DNA e por que ele comparvel a
uma impresso digital que identifica seu portador.
Desenvolver e aproveitar temas como esse pode tornar mais
interessante e produtivo o trabalho do professor em sala de aula. Neste
nmero apresentamos uma proposta de atividade cujo principal
objetivo levar os estudantes a compreender a importncia prtica
da Engenharia Gentica na identificao de pessoas.
*
Professor do Departamento de Biologia do Instituto de Biocincias da Universidade de So Paulo
2 PROPOSTAS PARA DESENVOLVER EM SALA DE AULA
Na pgina direita apresentamos um modelo para a folha de
atividades dirigida ao estudante. Nela se encontram todas as
informaes objetivas para resolver s duas questes formuladas:
"Quem o criminoso? Quem o pai da criana?". As respostas a
essas questes encontram-se no verso da folha de atividades.
Sugerimos que o professor oriente verbalmente o estudante
sobre a diferena de procedimentos entre a deteco do crimi-
noso e a do pai da criana. No primeiro caso basta encontrar,
entre os suspeitos, um padro eletrofortico idntico ao da
amostra de pele sob as unhas da vtima. J no segundo caso
preciso, inicialmente, identificar na criana as faixas eletrofo-
rticas correspondentes me, para em seguida procurar, nos
pretendentes a pai, aquele que possui as faixas que faltam.
Essas faixas devem estar necessariamente presentes no pai,
uma vez que a criana recebe um cromossomo materno e um
homlogo paterno.
No quadro abaixo fornecemos informaes prticas
para executar, na prpria sala de aula, um experimento simples
de extrao de DNA. Apesar de simplificados, os procedi-
mentos so muito parecidos aos utilizados nos laboratrios
SUGESTES E PR-REQUISITOS
AMABIS, J. M. & MARTHO, G. R. Fundamentos da Biologia moderna,
So Paulo, Ed. Moderna, 1997:
Estrutura dos cidos nuclicos (pgs. 102-103);
Genes: estrutura qumica e duplicao (pgs. 152-153);
Engenharia gentica (pgs. 540-545).

Biologia das clulas (vol. 1), So Paulo, Ed. Moderna, 1994:

A estrutura dos cromossomos (pgs. 178-180);
Cromossomos e genes (pgs. 182-185);
A estrutura do gene (pgs. 311-313).

Biologia das populaes (vol. 3), So Paulo, Ed. Moderna, 1995:

A base celular da hereditariedade (pgs. 7-9).
bioqumicos, e permitem ao estudante visualizar, ainda que
macroscopicamente, o aspecto do material hereditrio.
O tema ser mais bem aproveitado se o estudante j
dominar os conceitos bsicos relativos s estruturas do DNA
e dos cromossomos. Em nossas obras de Biologia esses
assuntos podem ser encontrados nos seguintes volumes:
EXTRAINDO DNA EM SALA DE AULA
1. Pique a cebola em pedaos de 0,5 cm.
2. Coloque quatro colheres de sopa de detergente e uma colher das de ch de sal em meio copo d'gua, mexendo bem at dissolver
completamente.
3. Coloque a cebola picada no copo com a soluo de detergente e sal, e leve ao banho-maria por cerca de 15 minutos.
4. Retire a mistura do banho-maria e resfrie-a rapidamente, colocando o copo no gelo durante cerca de 5 minutos.
5. Coe a mistura no coador de caf, recolhendo o filtrado em um copo limpo.
6. Adicione ao filtrado cerca de meio copo de lcool gelado, deixando-o escorrer vagarosamente pela borda. Formam-se duas fases, a
superior, alcolica, e a inferior, aquosa.
7. Mergulhe o basto no copo e, com movimentos circulares, misture as fases. Formam-se fios esbranquiados, que so aglomerados
de molculas de DNA.
PROCEDIMENTOS
uma cebola grande ( 200 g)
faca de cozinha
dois copos tipo americano
banho-maria ( 60C)
gua filtrada
sal de cozinha
detergente para louas
lcool etlico 95% gelado (a cerca
de 10C)
basto fino de vidro ou madeira
coador de caf, de papel
gelo modo
MATERIAL
A extrao de DNA de clulas eucariontes consta fundamentalmente de trs etapas:
a) ruptura das clulas para liberao dos ncleos; b) desmembramento dos cromossomos
em seus componentes bsicos, DNA e protenas; c) separao do DNA dos demais
componentes celulares.
O bulbo de cebola foi usado por apresentar clulas grandes, que se rompem
facilmente quando a cebola picada.
O detergente desintegra os ncleos e os cromossomos das clulas da cebola, liberando
o DNA. Um dos componentes do detergente, o dodecil (ou lauril) sulfato de sdio, desnatura
as protenas, separando-as do DNA cromossmico.
O lcool gelado, em ambiente salino, faz com que as molculas de DNA se
aglutinem, formando uma massa filamentosa e esbranquiada.
INFORMAES TCNICAS
Tcnica modificada de J. Schollar e D. Madden
Centro de Educao Biotecnolgica da Universi-
dade de Reading Inglaterra
PROPOSTAS PARA DESENVOLVER EM SALA DE AULA 3

'
&
%
$
#
"
!

'
&
%
$
#
!

m
e
r
o

d
e

p
a
r
e
s

d
e

b
a
s
e
s

p
o
r

f
r
a
g
m
e
n
t
o
Nesta atividade voc aplicar os princpi-
os da identificao de pessoas pelo DNA na
soluo de duas questes judiciais. Em uma
delas identificar um criminoso entre trs sus-
peitos, e em outra descobrir quem o pai de
uma criana.
Ao lado esto representados segmentos
de DNA de cinco pessoas (P-1 a P-5). Cada
uma tem dois segmentos, correspondentes a
um par de cromossomos homlogos (CA e CB).
As seqncias de bases dos homlogos
podem ser ligeiramente diferentes em funo
da diferena entre os genes alelos.
O primeiro passo para a anlise do DNA
cort-lo com uma enzima de restrio hipo-
ttica que, neste exemplo, reconhece a se-
qncia de dois pares de bases C-G adja-
centes (dois C em uma cadeia e dois G na
outra). Para facilitar, essas "seqncias de
corte" esto destacadas no DNA. Localize,
nos dois segmentos de DNA de cada pessoa,
todas as seqncias de corte. Marque-as
lpis com um trao horizontal, de modo a se-
parar um par C-G do par C-G adjacente.
O passo seguinte organizar os fragmen-
tos obtidos por ordem de tamanho. Para isso,
conte o nmero de pares de bases de cada
fragmento e complete o preenchimento do
grfico localizado na parte inferior esquerda
da figura. Cada coluna do grfico simula o
padro eletrofortico de uma pessoa, onde os
fragmentos de DNA se distribuem em faixas
por ordem de tamanho. A ttulo de exemplo, a
coluna correspondente ao padro da pessoa
P-5 j est preenchida.
A seguir, responda s questes abaixo.
1 1
10 18
21
17
4
12 12
19 4
15
1 1
"
P-1 P-2 P-3 P-4 P-5
CA CB CA CB CA CB CA CB CA CB
Nome: Srie:
ATIVIDADE: IDENTIFICANDO PESSOAS PELO DNA
+/
+/
)6
6)
6)
)6
)6
)6
6)
+/
/+
+/
6)
)6
/+
6)
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
/+
)6
)6
6)
)6
)6
/+
6)
+/
+/
)6
6)
/+
)6
)6
/+
)6
6)
+/
/+
)6
)6
6)
/+
)6
+/
+/
)6
6)
/+
+/
)6
6)
+/
6)
6)
)6
+/
6)
/+
+/
)6
6)
/+
/+
+/
+/
)6
6)
6)
)6
)6
)6
6)
+/
/+
+/
6)
)6
/+
+/
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
/+
)6
)6
6)
)6
)6
/+
6)
+/
+/
)6
6)
/+
/+
)6
/+
)6
6)
+/
/+
)6
)6
6)
/+
)6
6)
+/
)6
6)
/+
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
+/
6)
/+
+/
)6
6)
/+
/+
+/
+/
)6
6)
6)
)6
)6
)6
6)
+/
/+
+/
6)
)6
/+
+/
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
/+
)6
)6
6)
)6
)6
/+
6)
+/
6)
)6
6)
/+
/+
)6
/+
)6
6)
+/
/+
)6
)6
6)
/+
)6
6)
+/
)6
6)
/+
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
+/
6)
/+
+/
)6
6)
/+
/+
+/
+/
)6
6)
6)
)6
)6
)6
6)
+/
/+
+/
6)
)6
/+
+/
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
/+
)6
/+
6)
)6
)6
/+
+/
+/
6)
)6
6)
/+
/+
)6
/+
)6
6)
+/
/+
)6
)6
6)
/+
)6
+/
+/
)6
6)
/+
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
+/
6)
)6
+/
)6
6)
/+
/+
+/
+/
)6
6)
6)
)6
)6
)6
6)
+/
/+
+/
6)
)6
/+
+/
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
/+
)6
)6
6)
)6
)6
/+
6)
+/
+/
)6
6)
/+
/+
)6
/+
)6
6)
+/
/+
)6
)6
6)
/+
)6
6)
+/
)6
6)
/+
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
+/
6)
/+
+/
)6
6)
/+
/+
+/
+/
)6
6)
6)
)6
)6
)6
6)
+/
/+
+/
6)
)6
/+
6)
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
/+
)6
/+
6)
)6
)6
/+
6)
+/
+/
)6
6)
/+
)6
)6
/+
)6
6)
+/
/+
)6
)6
6)
/+
)6
+/
+/
)6
6)
/+
+/
)6
6)
+/
6)
6)
)6
+/
6)
)6
+/
)6
6)
/+
/+
+/
+/
)6
6)
6)
)6
)6
)6
6)
+/
/+
+/
6)
)6
/+
6)
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
/+
)6
)6
6)
)6
/+
/+
6)
+/
6)
)6
6)
/+
/+
)6
/+
)6
6)
+/
/+
)6
)6
6)
/+
)6
6)
+/
)6
6)
/+
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
+/
6)
/+
+/
)6
6)
/+
/+
+/
+/
)6
6)
6)
)6
)6
)6
6)
+/
/+
+/
6)
)6
/+
6)
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
/+
)6
/+
6)
)6
)6
/+
6)
+/
+/
)6
6)
/+
/+
)6
/+
)6
6)
+/
/+
)6
)6
6)
/+
)6
+/
+/
)6
6)
/+
+/
)6
6)
+/
6)
6)
)6
+/
6)
/+
+/
)6
6)
/+
/+
+/
+/
)6
6)
6)
)6
)6
)6
6)
+/
/+
+/
6)
)6
/+
6)
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
/+
)6
)6
6)
)6
)6
/+
6)
+/
+/
)6
6)
/+
/+
)6
/+
)6
6)
+/
/+
)6
)6
6)
/+
)6
+/
+/
)6
6)
/+
+/
)6
6)
+/
6)
6)
)6
+/
6)
/+
+/
)6
6)
/+
/+
+/
+/
)6
6)
6)
)6
)6
)6
6)
+/
/+
+/
6)
)6
/+
+/
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
/+
)6
)6
6)
)6
)6
/+
+/
+/
6)
)6
6)
/+
/+
)6
/+
)6
6)
+/
/+
)6
)6
6)
/+
)6
+/
+/
)6
6)
/+
+/
)6
6)
+/
+/
6)
)6
+/
6)
)6
+/
)6
6)
/+
/+
P-1 P-2 P-3 P-4 P-5
Restos de pele encontrados sob as unhas de uma pessoa assassinada foram
submetidos ao teste de DNA, revelando o padro eletrofortico P-5.
Trs pessoas, P-1, P-2 e P-3, suspeitas do crime, tambm foram
submetidas ao teste de DNA. Qual delas a provvel culpada?
Quem o criminoso?
Quem o pai da criana?
Dois homens, P-1 e P-2, disputam a paternidade de uma criana, P-4, filha
da mulher P-3. Com base no teste de DNA dos quatro implicados, quem
o provvel pai da criana?

4 PROPOSTAS PARA DESENVOLVER EM SALA DE AULA

'
&
%
$
#
"
!

'
&
%
$
#
!
"
N

m
e
r
o

d
e

p
a
r
e
s

d
e

b
a
s
e
s

p
o
r

f
r
a
g
m
e
n
t
o

Quem o pai da criana?

A identificao positiva do DNA de um suspeito pela tcnica mostrada na atividade, particular-
mente se forem utilizados diferentes tipos de enzimas de restrio, atinge a mais de 99% de acerto.
H uma probabilidade nfima de duas pessoas no-gmeas idnticas apresentarem o mesmo padro
eletrofortico do DNA.
Quem o criminoso?
RESPOSTAS
P-2. O padro eletrofortico do DNA deste suspeito idntico ao da
amostra de pele encontrada sob as unhas da vtima (P-5).
P-1. A criana P-4 pode ter recebido da me (P-3) DNA relativo s
faixas de nmeros 1, 4, 10, 12, 13, 18 e 19. As faixas 5, 8, 11 e 15 de P-
4 provm necessariamente do pai. P-2, o outro postulante, no apresen-
ta as faixas 5, 8 e 11.
P-1 P-2 P-3 P-4 P-5