Symonara Karina

 A reação de precipitação ocorre devido a interação

de Ags solúveis e seus anti-soros correspondentes;
 Pode ocorrem em meio gelificado (gel de agar ou
agarose) ou líquido (nefelometria, turbidimetria)
Symonara Karina
 Baseia-se na difusão de substâncias solúveis
por movimentos moleculares ao acaso em meio
gelificado como o ágar ou gel de agarose.
 Enquanto as moléculas estão livres continua
ocorrendo difusão, até que se formam
imunocomplexos de elevado PM, e que devido
ao tamanho, ficam imobilizados no gel,
permitindo a visualização do imunocomplexo
como turvação nítida, que é o
imunoprecipitado.
Precipitação máxima na região de
equivalência
TÉCNICAS DE PRECIPITAÇÃO EM GEL

IMUNODIFUSÃO
Imunodifusão Dupla Radial:
• Coloca-se agarose sobre uma lâmina:

•Faz-se em seguida, pequenos orifícios no gel e são adicionadas as

soluções testes de Ag e Ac, como por exemplo, é mostrado abaixo:

Ac
IMUNODIFUSÃO DUPLA RADIAL
 As soluções sofrem difusão e, quando o Ag e o Ac se
encontram em zona de equivalência, se observa a reação pela
formação de uma linha de precipitação:
 Pode ser visualizada pós lavagem do gel , para remoção das
proteínas solúveis, por coloração dos arcos de precipitação
com corante
Utilização: muito usada em
pesquisa e diagnóstico de
algumas doenças, como
Ag Ag cisticercose

Ac

Ag Ag Ag Ag

Ac Ac

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IMUNODIFUSÃO DUPLA RADIAL
São três os padrões possíveis: A: identidade total
Ag
a a
1)Os arcos de precipitação formados entre
o Ac e os dois antígenos se fundem, Ac
indicando que o Ac está precipitando a
epítopos idênticos.

2) O Ac preparado distingue os dois Ag B: não identidade

diferentes que formam arcos
a b
independentes de precipitação.
a+b
3) Os antígenos compartilham o epítopo a,
mas um deles também possui um epítopo
b. A linha de precipitação indica, então, C: identidade parcial
uma identidade parcial e não total, entre
esporão
as preparações de Ag. a ab

a+b
IMUNODIFUSÃO SIMPLES RADIAL
 A placa se encontra cheia de gel
impregnado com um anticorpo
específico
 Durante a incubação ocorre a difusão
do antígeno na agarose e a formação de
complexos Ag-Ac.,
 O processo continua até ser atingida a
zona de equivalência, com os
complexos precipitando-se em um anel
(halo) em torno do orifício.
IMUNOELETROFORESE
 Combina dois métodos: eletroforese em gel + imunodifusão e precipitação
das proteínas
 As moléculas migram para o pólo negativo, distribuindo-se no gel de acordo
com os seus PM e cargas elétricas.
 Uma canaleta é recortada entre os poços e preenchida com Ac, que se difunde.
 Ag e Ac formam arcos de precipitação.

1- Separação de antígenos 2- Anti-soro na coluna

canaleta

Ag
canaleta
+ -
Ag

3- Difusão e precipitação

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Symonara
 As reações de aglutinação decorrem da ligação
entre o Ac e Ag sendo um deles particulado.

 É o agrupamento de micropartículas ou células que

possibilita a visualização da aglutinação a olho nu.

 Agregação visível de partículas Eritrócitos

ou células Bactérias
Fungos
Látex
o Fatores que influenciam a formação dos agregados

• Classe do anticorpo envolvido.

• Concentração iônica e pH do meio.
• Presença de macromoléculas, íons, enzimas e
conservantes.
• Tempo e temperatura.
• Padronização adequada da suspensão de
micropartículas ou células.
• Concentração ótima de antígeno ou Ac a ser fixado
nas micropartículas ou células.
• Estabilidade da ligação do Ag/Ac e acessibilidade
dessa molécula nas micropartículas ou células.
o Vantagens:
• Baixo custo.
• Boa especificidade.
• Leitura visual.
• Facilidade de execução.

o Desvantagens:
• Baixa sensibilidade.
• Reprodutibilidade dos lotes de reagentes.
• Acessibilidade molecular para interação Ag-Ac.
• Estabilidade da ligação do Ag/Ac no suporte.
Symonara
 Neste teste, o antígeno faz parte naturalmente da célula,
e haverá aglutinação dessas células promovida por anticorpo
contra esses antígenos (antígeno é naturalmente insolúvel).

Anticorpo Antígeno Complexo precipitado

particulado
Ex: Identificação de antígenos eritrocitários na tipagem
sanguínea, reação de Widal (febre tifóide).
 Ag faz parte naturalmente da célula
 Leitura visual e rápida
 Um dos componentes é insolúvel
 Partículas que apresentam determinantes
antigênicos naturais em sua superfície: Hemácias,
bactérias, protozoários, etc;
 Determinação do título - Diluições em série do
anticorpo, frente a uma quantidade constante de
antígeno.
 Pró-zona: excesso de Ac
Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO)
Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO)
Um resultado positivo é indicado por uma
aglutinação visível (aglomeração dos eritrócitos
na placa teste), como ilustrado acima.

Negativo Positivo
Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO)
 Esse método emprega a adsorção de anticorpos ou antígenos
protéicos solúveis na superfície de micropartículas inertes
(suporte).

 Para o teste, as hemácias e as partículas inertes (látex,

leveduras, etc.) podem ser sensibilizadas por:
 Sua aplicação é muito variada: grande diversidade
de Ags que podem se ligar ao látex.

Teste de aglutinação de partículas de

látex: Proteína C reativa (PCR), fator
reumatóide (Látex), anti-estreptolisina O
(ASO)
TITULAÇÃO
Ac do soro

Ag solúvel
adsorvido ao
suporte - Látex

Aglutinação
 Ag solúvel
adsorvido ao
suporte
(hemácia)

Aglutinação Positiva
Negativa
 Urina

NEGATIVO

Anti-HCG Partículas de Látex + HCG

Urina – HCG Solúvel

POSITIVO
 Inibição da Aglutinação

Anti-HCG
Partículas de Látex + HCG
Urina – HCG Solúvel

RESULTADO POSITIVO (GRAVIDEZ) » Presença de hCG na urina »

Não ocorre aglutinação
 Aglutinação
Partículas de Látex + HCG
Anti-HCG

RESULTADO NEGTIVO (GRAVIDEZ) » Ausência de hCG na urina »

Ocorre aglutinação, pois os anticorpos anti-hCG não são bloquedos
na incubação inicial, pq não havia o hormônio na urina. Livres,
podem aglutinar as partículas de látex sensibilizas com hCG.
 • Este teste é empregado na pesquisa de Acs já fixados
às hcias
Usado no diagnóstico doença hemolítica do récem-nascido,
anemia hemolítica adquirida e e em pacientes que
tenham
recebido transfusões incompatíveis

Detecta Ac fixados às hcias revelados diretamente pela adição do Soro de Coombs (Anti-IgG humana)
Detecta Ac fixados às hcias revelados diretamente pela adição do Soro de Coombs (Anti-IgG humana)
Este teste é utilizado na pesquisa de anticorpos
bloqueadores (incompletos), os quais se fixam às
hemácias “in vitro” mas não as aglutinam.
Symonara Karina