CENTRO EDUCACIONAL

METODOS DE IMUNODIAGNOSTICO

2015

CENTRO EDUCACIONAL

METODOS DE IMUNODIAGNOSTICO

SANTO ANDR
2015

IMUNODIAGNSTICO:

O imunodiagnstico vem crescendo desde sua descoberta, e vrios

mtodos so desenvolvidos e aperfeioados
O imunodiagnstico composto por uma srie e mtodos e tcnicas que
visam detectar e/ou identificar anticorpos, antgenos e qualquer outra
substncia que se comporte como um antgeno durante a reao, como
hormnios, protenas, drogas e citosinas.

AGLUTINAO
caracterizada pela formao de agregados visveis como resultado da
interao de anticorpos especficos e partculas insolveis que contm
determinantes antignicos na superfcie. Teste altamente sensvel, utilizado no
diagnstico de vrus, bactrias, protozorios e fungos; doenas autoimunes;
deteco de hormnios e tipagem de grupos sanguneos. De fcil execuo
(leitura visual) e baixo custo, apresenta boa especificidade e reprodutibilidade.
Tem baixa sensibilidade e pouca estabilidade antgeno - anticorpo.

ENSAIO IMUNOENZIMATICO ELISA

O teste de ELISA foi descrito pela primeira vez em 1971 e, desde ento,
tem sido considerado uma das mais importantes tcnicas de diagnstico para a
sade humana e produo animal. A deteco de um antgeno imobilizado
sobre uma fase slida mediante anticorpos que direta ou indiretamente
produzem uma reao cujo produto, por exemplo, um colorante mensurado por
um espectrofotmetro. Os resultados so interpretados aps a leitura por este
equipamento, com uma absorbncia no comprimento de onda que varia entre
340 e 650nm. Esta absorbncia ser proporcional quantidade do antgeno ou
do anticorpo especfico presente na amostra testada. Seu principio baseia-se
no complexo enzima-substrato, onde no teste teremos (por exemplo, no
necessariamente) o anticorpo, que se ligar ao antgeno presente na amostra
adicionada, e, aps uma lavagem rpida, adiciona-se o anticorpo secundrio,
que ir liberar um composto relativamente estvel em relao ao tempo, e
facilmente detectado.
Dentre as variaes da ELISA (ELISA indireto, ELISA de competio por
anticorpo, ELISA de competio por antgeno e ELISA sanduche), apenas o
ELISA indireto e o ELISA de competio por anticorpo visam a deteco e
titulao do anticorpo.

RADIOIMUNOENSAIO
Baseia-se na competio entre o anticorpo do teste marcado
radioativamente e o antgeno da amostra, pelo anticorpo tambm marcado
radioativamente. O anticorpo e antgeno do teste liberam radiao luminosa
(em quantidade previamente conhecida) que pode ser observada por
espectrofotometria. Quando adicionamos o soro do paciente (positivo para o
teste), seu antgeno se ligar ao anticorpo marcado, diminuindo a radiao
liberada, logo, podemos quantificar com preciso a concentrao de antgeno
presentes na amostra. Este teste altamente sensvel, porm, possui um alto
custo e necessita de medidas especiais causadas pelo uso de radiao, o que
requer muitos cuidados na manipulao e descarte.

TESTE DE HEMAGLUTININA

O mtodo de hemaglutinao utilizado para mensurar anticorpos,

capazes de reagir com antgenos capazes de induzir a aglutinao de
hemcias. Alguns microrganismos possuem, em sua superfcie, estruturas
capazes de se ligar a receptores presente nas hemcias de alguns mamferos,
produzindo o fenmeno da hemaglutinao. Estas estruturas so denominadas
hemaglutininas e so constitudas de glicoproteinas. A ligao da hemaglutinina
do patgeno com o receptor da hemcia regida primariamente pela
especificidade natural. Neste mtodo, a presena de anticorpos capazes de
inibir a reao de hemaglutinao do patgeno determina sua identificao
sorolgica.
Para a execuo do teste de hemaglutina, necessrio antes revelar a
atividade biolgica do agente contra o qual o soro ser testado, efetuando a
constatao da hemaglutinao. Para isto, uma suspenso de hemcias
( geralmente 1%) incubada em repouso com diluies seriadas do agente por
um determinado perodo de tempo. Geralmente utilizam-se placas de mucrotitulao com 96 cavidades em forma de V, o que torna o processo mais
simples e de rpida execuo. Aps a incubao realizada a leitura da
hemaglutinao, As hemcias que aglutinarem por ao do agente, iro
sedimentar no fundo da cavidade. Por outro lado, as hemcias que no
aglutinarem, tambm vo sedimentar, entretanto, formaro um aglomerado de
hemcias que ir se deslocar ao verter suavemente a placa. A recproca da
maior diluio capaz de produzir completa hemaglutinao das hemcias
corresponde ao ttulo do agente testado a uma unidade hemaglutinante em um
teste.

TESTE TE ANTIGLOBULINA COOMBS

Teste da Antiglobulina Direto (Coombs Direto): A principal finalidade

deste teste a deteco de hemcias revestidas de anticorpos, ou seja,
hemcias sensibilizadas "in vivo". muito utilizado na investigao de reaes
transfusionais, no diagnstico de doena hemoltica perinatal e de anemias
hemolticas autoimunes. O Coombs Direto considerado um mtodo simples e
detecta a sensibilizao in vivo de hemcias com IgG e/ou componentes do
complemento, de acordo com o soro de antiglobulina humana utilizado. Pode
ser realizado pela tcnica em tubo ou gel. Pelo mtodo em tubo, realizado
adicionando-se o soro de AGH s hemcias em teste, lavadas previamente
com soluo salina. Pela tcnica em gel, no necessrio lavar as hemcias,
apenas adiciona-se as hemcias diludas ao carto gel contendo o soro de
AGH.

Teste da Antiglobulina Indireto (Coombs Indireto): Consiste na

Pesquisa de Anticorpos Irregulares(P.A.I.), onde iremos determinar a ausncia
ou a presena de anticorpos livres no soro ou plasma de doadores e pacientes.
Quando obtivermos um P.A.I. positivo, ser indicativo da presena de um
anticorpo irregular no plasma deste paciente ou doador de sangue, o que nos
levar a realizao de um outro teste denominado de Identificao de
Anticorpos Irregulares(I.A.I.), onde iremos determinar a especificidade deste
anticorpo, ou seja, contra que aglutingeno especfico este anticorpo voltado.
A deteco da sensibilizao das hemcias in vitro determinada pela tcnica
de antiglobulina indireta ou Coombs indireto, podendo ser aplicada para os
testes de compatibilidade, triagem de anticorpos irregulares, identificao de
anticorpos irregulares, fenotipagem eritrocitria e estudos de titulao de
anticorpos. Tem seu princpio baseado em colocar as hemcias fenotipadas em
contato com soro do indivduo (o plasma pode ser utilizado, no caso da
metodologia em gel centrifugao), buscando evidenciar a presena de
anticorpos na amostra analisada. No mtodo em tubo, a tcnica deve incluir
trs fases:Temperatura ambiente (fase salina); Incubao 37; e Antiglobulina
humana (fase de AGH). Pequenas variaes da tcnica em tubo podem
ocorrer, dependendo do emprego de substncias potencializadoras, como a
adio de albumina, polietilenoglicol (PEG) ou enzimas proteolticas. Na
metodologia em gel centrifugao, a leitura realizada diretamente na fase
antiglobulina humana. A presena de aglutinao em qualquer uma das fases
pelo mtodo em tubo, ou na fase de antiglobulina pelo mtodo em gel
centrifugao, revela a presena de anticorpos irregulares. Uma vez detectada
a presena de anticorpos irregulares, o mesmo dever ser identificado.

QUIMIOLUMINESCENCIA

Na quimioluminescncia, o principio do mtodo baseia-se na energia

luminosa qumica liberada durante a ligao entre antgeno e anticorpo, onde
um deles ser marcado com um cromgeno que, quando ativado, libere
energia. Este cromgeno pode ser um dos derivados de luminol, ou steres de
acridina. A reao entre antgeno e anticorpo marcada com fosfatase alcalina,
o que hidrolisa o substrato quimioluminescente, gerando um produto instvel o
qual aps a estabilizao gera a emisso de ftons de luz medida por um
fotomultiplicador, que tem a funo de transformar a luz emitida pelos ftons
em impulsos eltricos, que sero traduzidos de acordo com sua intensidade
para obtermos o resultado.
Este teste altamente sensvel, e foi desenvolvido a fim de substituir o
mtodo de Radioimunoensaio, e seus princpios so prximos, entretanto, o
mtodo de quimioluminescncia no utiliza um cromgeno radioativo, e sim um
substrato luminescente, o que aumente em aproximadamente dez vezes sua
sensibilidade e diminui o custo e os riscos operacionais.

PMT- Fotomultiplicador

NEFELOMETRIA

O principio do teste de nefelometria se baseia em medir e reflexo da luz

pela disperso de um feixe. Utiliza-se uma soluo diluda, que ir conter
antgenos e anticorpos. Essa reao entre antgeno e anticorpo ir precipitar, e
por causa da soluo diluda e das partculas em suspenso, ser possvel
captar a refrao da luz incidida. A nefelometria serve para quantificar
anticorpos e as concentraes das protenas plasmticas de uma amostra. O
aparelho mede a turbidez medindo a difrao (desvio) da luz ao passar por
uma soluo contendo complexos imunolgicos. A nefelometria, tambm,
usada para estudos da poluio do ar, observando a disperso da radiao nos
aerossis poluentes.

Nefelmetro

BIBLIOGRAFIA

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%20sorol%F3gicas.pdf
https://www.portaleducacao.com.br/farmacia/artigos/54437/imunoensaiosensaios-de-aglutinacao
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http://www.revista.universo.edu.br/index.php?
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anti_humano_nov2009.pdf
http://pt.slideshare.net/labimuno/quimioluminescencia-3540384
http://www.famema.br/hemocentro/hematologia.htm
http://www.controllab.com.br/pdf/201110_quest_ih_TXT_complementar.pdf
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http://www.microbiologybook.org/Portuguese/immuno-port-chapter7.htm