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FACULDADE CINCIAS FARMACUTICAS

UNIVERSIDADE DE SO PAULO










APOSTILA DE MICOLOGIA CLNICA












PROF. DR. SANDRO ROGERIO DE ALMEIDA



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INTRODUO

Durante muitos anos a Micologia teve pouca expresso na rea
mdica, possivelmente pela falta de diagnstico adequado. Ultimamente, o
nmero de pacientes suscetveis aos mais variados tipos de infeces tem
aumentado significantemente. Com esse crescimento, as infeces fngicas
vm se tornando mais freqentes.
Com o aparecimento da antibioticoterapia, utilizao de mtodos
imunossupressores, surgimento da AIDS e melhora nos mtodos
diagnsticos observamos aumento no nmero de casos de infeces
fngicas.
O diagnstico de uma infeco fngica tem por base a combinao
de dados clnicos e laboratoriais. O processo laboratorial inclui:
demonstrao do fungo no material examinado por microscopia e cultura,
deteco de anticorpos especficos e deteco de antgenos e metablitos
liberados pelo fungo nos lquidos corpreos ou tecidos.
Tendo em vista a importncia do diagnstico micolgico, a disciplina
objetiva desenvolver no aluno a capacidade de identificao de fungos
filamentosos e leveduriformes assim como introduzir os principais aspectos
da Micologia Mdica. Portanto, torna-se imprescindvel o bom



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conhecimento das principais estruturas fngicas e das tcnicas utilizadas
em sua identificao.
As micoses podem ser divididas em:

Superficiais:

Pitirase versicolor
Piedra branca
Piedra negra


Cutneas:

Dermatofitoses
Candidase

Subcutneas:

Cromomicose,
Esporotricose
Micetoma (eumicetoma e actinomicetoma)
Zigomicose
Rinosporidiose
Doena de Jorge Lobo
Feo-hifomicose
Hialo-hifomicose

Sistmicas:

Paracoccidioidomicose
Histoplasmose

Oportunistas:

Criptococose
Aspergilose



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PARTE I



MICOSES SUPERFICIAIS


Micoses que desenvolvem alteraes apenas na camada mais
superficial do estrato crneo e no induz, na maioria das vezes, qualquer
resposta inflamatria no hospedeiro.
Principais Doenas e agentes etiolgicos:
Pitirase versicolor Malassezia furfur
Piedra negra Piedraia hortae
Piedra branca Trichosporon beiguele

- Pitirase versicolor:

Infeco geralmente assintomtica, mas, em raras ocasies, pode ser
relatado pelo paciente um discreto prurido. Apresenta-se como manchas
hipo ou hiperpigmentada, descamativas geralmente no trax, pescoo e
braos em adultos jovens, sem distino de sexo. Os principais fatores
endgenos para o aparecimento das leses so: Pele gordurosa, elevada
sudorese, fatores hereditrios e uso de terapia imunossupressora.
Ag. Etiolgico: Malassezia furfur

Diagnstico:

Raspado de pele clareado com KOH.

Escamas de Pele com Malassezia Furfur

Coradas pelo P.A.S: Leveduras arredondadas, formando aglomerados em
forma de cachos de uva ou mosaico; hifas curtas e grossas, em forma de Y
ou L, de cor vermelha.

Isolamento: Para isolamento primrio de fungo de material clnico, com
suspeita de petirase versicolor, devemos utilizar um meio especialmente
preparado para o isolamento dessas leveduras, visto que so
lipodependente.



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- Piedra Negra

Micose que se caracteriza clinicamente pelo aparecimento, nos
cabelos e raramente em outros plos do corpo humano, de ndulos
endurecidos e de colorao escura. Doena benigna, baixo contgio, carter
crnico, freqentemente recidivante que afeta ambos os sexos.
Ag. Etiolgico: Piedraia hortae

Diagnstico:

Piedraia hortae

Em plo: Produz a piedra negra. Nmero varivel de ndulos duros,
escuros (marrons e negros), localizados ao longo do plo.
Microscopicamente observam-se hifas, formando um pseudo-tecido (ou
pseudoparnquima), devido a justaposio das mesmas. O aspecto de
mosaico, com reas mais claras, onde se localizam os ascos contendo
ascosporos, s visveis aps esmagamento e clareamento com KOH.

- Piedra Branca:

Ndulos fracamente aderidos aos cabelos ou plos de cor branca-
amarelado. Doena de distribuio geogrfica com predileo por climas
tropicais e temperados, de carter assintomtico, benigno e de baixo
contgio, que acomete indistintamente cabelos e plos das regies axilares,
pubianos, perianal, barba e bigode.
Agente etiolgico: Trichosporon beigelli

Diagnstico:

Trichosporon beigelii

Em plo: Produz a piedra branca, geralmente localizada na extremidade do
pelo. A superfcie homognea, devido massa de leveduras. A cor varia
de branco a amarelo.







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MICOSES CUTNEAS


Dermatofitose
Candidase


Dermatfitos:

Pertencem ao grupo dos fungos denominados de dermatfitos os
fungos filamentosos, hialinos, septados, algumas vezes artroconidiados,
queratinoflicos, passveis de colonizar e causar leses clnicas em plos
e/ou extrato crneo de homens e animais. So divididos em trs gneros:
Trichophyton, Microsporum e Epidermophyton. Em relao ao seu habitat
podem ser divididos em geoflicos- vivem em solos, zooflicos vivem em
animais e antropoflicos vivem no homem.
Os aspectos clnicos das leses dermatofticas so bastante variados e
resultam da combinao de destruio da queratina associada a uma
resposta inflamatria, mais ou menos intensa, na dependncia do binmio
parasito/hospedeiro. Na classificao clnica das dermatofitoses so
utilizadas as denominaes Tinea seguidas do stio anatmico das leses,
exemplo: Tinea capitis (couro cabeludo).

Descrio das principais dermatofitoses e seus agentes mais frequentes:

Tinea pedis (tinha do p): T. rubrum, T. mentagrophytes,
E.floccosum
Tinea ungueum (tinha da unha, onicomicose) : T. rubrum, T.
mentagrophytes
Tinea corporis, Tinea circinada (tinha de pele glaba): T. rubrum, T.
mentagrophytes, M. canis
Tinea barbae (tinha da barba): T. verrucosum, M. canis, T. violaceum
Tinea cruris (tinha da regio inguino-crural): T. rubrum, E.
floccosum
Tinea fvica (tinha alopeciante): T. schoenleinni
Tinea capitis (tinha do couro cabeludo): endotrix: T. mentagrophytes,
T. violaceum, T. tonsurans ectotrix: M. canis, M. gypseum
Obs.: endotrix: parasitismo no interior dos plos ectotrix: parasitismo
fora do plo



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Descrevemos as principais caractersticas diferenciais dos gneros e
espcies mais comuns encontradas parasitando o homem:

Gnero Trichophyton;

Gnero mais freqentemente isolado de material clnico, acometendo tanto
a pele glaba como os cabelos e unhas.

T. rubrum;
Espcie antropoflica cosmopolita. Sua transmisso exclusivamente
inter-humana ou por fmites contaminados.
Crescimento em 12-16 dias em agar Sabouraud. Colnias com textura
algodonosa, apresentam tonalidade branca que, com o passar do tempo,
pode tornar-se avermelhada e reverso avermelhado. Apresenta grande
quantidade de microcondeos, regulares e piriformess. Os macroconideos,
quando presentes, podem apresentar-se como clavas alongadas, quase com
um aspecto cilndrico e com duas a nove septaes.

T. rubrum






T.tonsurans:

Parasita antropoflico. Apresentam crescimento intermedirio, com
maturao 12-16 dias aps semeadura primria, colnias bastante variveis
que pode variar do algodonoso ao veludoso. Verso com colorao branco e
reverso apresenta tons variados de castanho-avermelhado. Apresenta
numerosos microcondeos dispostos em acldio e de formas variadas.




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T. tonsurans







T. mentagrophytes:



Pode apresentar variedades : T. mentagrophytes var. mentagrophytes
espcie zooflica em agar Sabourad apresenta textura pulverulenta de
colorao que pode variar do branco-amarelado ao castanho-avermelhado
reverso avermelhado e T. mentagrophytes var. interdigitale espcie
antropoflica colnia veludosa ao algodonosa, de colorao branco-
amarelado, reverso acastanhado ou avermelhado. A diferenciao das
variedades no evidente.
Microscopicamente, as colnias apresentam grande quantidade de
microcondeos arredondados e agrupados, o que lhes confere o aspecto em
cacho. Os macrocondeos, quando presentes, mostram um aspecto
semelhante a um charuto, som um a seis septos transversais. Com
freqncia observam-se estruturas de ornamentao, tais com hifas em
espiral.







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T. mentagrophytes





T. verrucosum:

Trata-se de um fungo cosmopolita que parasita principalmente
bovinos, podendo esporadicamente causar leses em humanos.
Clinicamente pode causar leses bastante inflamatrias do couro cabeludo,
pele glaba, barba e bigode. Crescimento lento que varia de 13-25 dias.
Macroscopicamente, a colnia caracteriza-se por uma textura veludoso,
pigmentao do verso que varia do branco ao amarelo ocre. O reverso
apresenta-se em de amarelo com pigmento no difusvel pelo meio. A
microscopia ptica, de material proveniente de Agar Sabouraud no
apresenta microcondeos nem macrocondeos. O que chama a ateno e a
quantidade de cadeias formadas por clamidoconideos grandes.


T. verrucosum





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T. schoenleinii:

Crescimento lento que varia de 14 a 30 dias. Colnias com textura
veludosa e pigmentao que varia do bege ao castanho escuro. O reverso
segue o mesmo tom do verso no se observa pigmento difusvel no meio.
Na microscopia geralmente no so observados macrocondeos nem
microconseos; entretanto, vem-se numerosas hifas septadas e em
bifurcao, associadas a hifas em forma de candelabro e a hifas em forma
de cabea de prego.



T. schoenleinii






Gnero Microsporum:

M.canis:

um dermatfito zooflico transmitido ao homem por diversos
animais domsticos principalmente felinos jovens. Clinicamente,
responsvel por leses do couro cabeludo, caracterizada por grandes placas
de alopcia, principalmente em crianas. Crescimento rpido de 6-10 dias.
Textura algodonosa de tonalidade branca. O reverso apresenta-se de
colorao amarelo-limo. A microscopia direta da colnia mostra na
maioria das vezes grande quantidade de macrocondeos fusiformes
verrucosos, de paredes grossas e com numerosas septaes, que variam



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de 5 a 7. Os microcondeos sem em quantidade variadas e sem nenhum
valor diagnstico.

M.canis





M. gypseum:

Espcie geoflica, que infecta o homem atravs do contato com o
solo contaminado. Colnia de crescimento rpido 3-5 dias.
Macroscopicamente a colnia possui textura pulverulenta com pigmentao
amarelo-acastanhado. O reverso pode apresentar variaes de cores que vo
do alaranjado ao marrom. Microscopicamente apresentam macrocondeos
simtricos, com 3-7 septos de paredes finas, extremidade arredondada e
superfcie levemente rugosa.




M. gypseum




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Gnero Epidermophyton;

E. floccosum:

Dermatfito antropoflico. Crescimento rpido 7-10 dias.
Macroscopicamente essas colnias apresentam textura algodonosa. A
colorao dos bordos e do verso amarelo-esverdeada. O reverso da
colnia tende a acompanhar a colorao do verso. Pigmento difusvel no
meio. Microscopicamente, caracteriza-se pela presena de macrocondeos
de parede fina, com 2 a 5 septos e agrupados em cachos.



E. floccosum




-Candidases:

Nome de conotao genrica para denominar doenas causadas por
Cndida albicans e outras espcies. O habitat da Candida bastante amplo,
no homem essa levedura habita a mucosa digestiva e por contigidade a
mucosa vaginal. A infeco pode atingir mucosas, tecido cutneo e em
alguns casos pode ser sistmica. As manifestaes clnicas apresentam
grande diversidade de quadros, podendo ser divididas em trs grandes
grupos: Candidase cutneo-mucosa, Candidase sistmica e candidase
alrgica. As principais espcies patognicas so:
C. albicans
C. tropicalis



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C. pseudotropicalis
C. guilliermondi
C. parapsilosis
C. krusei



MICOSES SUBUTNEAS

Micoses subcutneas so infeces causadas por um grupo
diversificados de fungos que ataca o homem e os animais . As leses
aparecem inicialmente a partir de um ponto de inoculao de estruturas
fngicas, atravs de traumatismos diversos. Podem permanecer localizados
ou se espalhar pelos tecidos adjacentes, por via linftica ou hematognica.
As maiorias dos fungos envolvidas so saprbios habituais do solo e
vegetais em decomposio.

As principais micoses subcutneas so; Cromoblastomicose, esporotricose,
micetoma (eumicetoma e actinomicetoma), zigomicose, rinosporidiose,
doena de Jorge Lobo, feo-hifomicose e hialo-hifomicose.



Cromoblastomicose:

Infeco crnica, granulomatosa, caracterizada por leses nodulares,
verrucosas, papilomatosas, por vezes ulceradas, localizadas,
preferencialmente nos membros inferiores, tendo como agente etiolgico
fungos de colorao escura (demaciceos), distribudos por diversas
espcies. Os principais so: Fonsecaea pedrosoi, F. compacta,
Phialophora verrucosa, Clodophialophora carrionii e Rhinocladiella
aquaspersa.
A principal via de contgio se faz atravs de soluo de continuidade
produzida na pele por fragmentos de vegetais ou madeira contaminados.


Diagnstico:

Exame direto: Material proveniente das leses (escamas, crostas ou pus)
ou pequeno fragmento de bipsias clarificado com KOH. Observam-se



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clulas arredondadas de contornos bem ntidos, acastanhados, algumas se
mostrando em processo de reproduo binria (clulas esclerticas).



Cultura: Em gar Sabouraud crescimento em torno de 7 a 15 dias de
colnias escuras. O aspecto microscpico da cultura no o mesmo em
todos os casos, sofrendo variaes na morfologia, fato que leva a
identificao das espcies.





Esporotricose:

A esporotricose uma infeco de evoluo sub-aguda ou crnica,
caracterizada por pequenos tumores subcutneos (gomas), que tendem
supurao e ulcerao. O agente etiolgico o Sporothrix schenckii, fungo
dimrfico, que se introduz nos tecidos orgnicos atravs de traumatismo
ou, raramente, por inalao. Esse fungo encontrado em vida saproftica
em vegetais, solo, guas contaminadas e animais. A forma clnica mais
freqente da micose a linfangite nodular ascendente, que se inicia pela
inoculao do agente, geralmente nas extremidades (cancro de inoculao),
atingindo os glnglios linfticos.


Diagnstico:




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Exame direto: A fresco no revela nenhuma forma conclusiva do S.
schenckii. Esfregaos de pus corados pelo Gram, PAS ou Gomori,
raramente permitem a visualizao do fungo. As clulas fngicas
observadas nas leses so raras, e quando presentes so vistas pequenas
leveduras com ou sem brotamento em forma de navete, ou sob a forma de
corpo asteride.

Cultura:

Macromorfologia: Culturas de crescimento rpido (4 dias). Apresentam
dimorfismo trmico. A 25-30 C, colnias inicialmente lisas e brancas, que
se tornam midas, enrugadas ou aveludadas, e, com frequncia, escurecem
apresentando colorao marrom ou preta. Alguns isolados so inicialmente
escuros. A 35- 37C colnias de cor creme ou bronzeada, lisas, macias e
leveduriformes.

Micromorfologia: 25-30C - Hifas septadas, delgadas, conidiforo
verticilado, sessil ou pedunculado, com condios alongados, afilados nas
duas extremidades, pequenos e unicelulares. Fracamente ligados s hifas,
tendo uma disposio com aspecto de margarida.






Micetomas:

Definio: Micetoma uma sndrome clnica, de evoluo crnica,
caracterizada pelo aumento de volume de uma regio ou rgo, com a
presena ou no de fstulas que drenam um material seroso ou sero-
purulento no qual podem ser encontrados gros. A trade de tumefao,
fstulas que drenam e a presena de gros usada no sentido restrito para
definir o termo micetoma. O Gro um aglomerado de microrganismos.



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O micetoma pode ser provocado tanto por bactrias como por fungo
verdadeiro.
Os micetomas so classificados em dois grupos: actinomicticos ou
actinomicose e maduromicticos ou maduromicose. O primeiro grupo,
mais numeroso, esto os micetomas produzidos por bactrias, os
actinomicetos. No segundo esto os micetomas provocados por fungos
verdadeiros, ou eumicetos.
Ainda os micetomas actinomicticos (de origem bacteriana) podem
ser divididos em dois grupos, segundo a origem endgena ou exgena do
agente:
- Actinomicose, de origem endgena, provocada por actinomicetos
anaerbicos, sendo os mais freqentes o Actinomyces israelli, e
Arachnia propionica.
- Nocardiose, de origem exgena, provocada por actinomicetos
aerbios, sendo os mais freqentes a Nocardia asterides, N.
brasiliensis e vrias espcies do gnero Streptomyces,
principalmente o S. somaliensis.
Os micetomas maduromicticos, causados pelos eumicetos so
provocados principalmente pelo Madurella grisea, M. mycetomatis e
Pyrenochaeta romeroi.

Diagnstico:

O diagnstico laboratorial dos micetomas baseado na observao
dos gros, que drenam espontaneamente das leses, ou que so
extrados atravs de puno ou biopsia.


Gro de actinomiceto

Em corte de tecido: O gro aparece no meio de uma rea com grande
infiltrao linfocitria, sem forma regular e sem estrutura interna bem
definida. constitudo de massas de finssimos filamentos. Nas bordas
freqentemente formam-se massas irregulares ou expanses com forma de
clava . A cor varia muito devido diversidade dos agentes causais (desde
azul a vermelho claro), variando tambm conforme a tcnica de colorao.

Gro maduromictico

Em corte de tecido: Gros grandes, de forma irregular, contorno bem



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ntido, com estrutura interna constituda de hifas cortadas em diversas
posies, dando um aspecto do mosaico irregular. No apresentam clavas e
a colorao varia de marrom a preto.


Zigomicose:

Zigomicose so infeces causadas por fungos pertencentes classe
dos Zygomycetes. Em sua maioria, esses organismos so saprofticos,
vivendo no solo, gua e nos vegetais em decomposio. So fungos
filamentosos constitudos de hifas largas e sem septo. A zigomicose
dividida em duas entidades clnicas distintas: a mucormicose, tambm
conhecida apenas como zigomicose; e a entomoftoromicose, cujos agentes
etiolgicos pertencem s ordens dos Mucorales e Entomophtorales,
respectivamente.
A mucormicose uma infeco, em geral, de evoluo rpida e
fulminante. Os agentes etiolgicos mais freqentemente isolados nos
quadros de mucormicose so os seguintes: Mucor sp., Rhizopus sp.,
Rhizomucor sp. e Absidia sp.. As principais formas clnicas dessa doena
so: Zigomicose cutnea (trauma mecnico), zigomicose pulmonar (bola
fngica), zigomicose rinocerebral (forma clnica mais comum- inicia-se nos
seios paranasais e evolui para o celebro) e zigomicose sistmica (est
relacionada com a forma primria pulmonar).

Diagnstico:

Exame direto: KOH, observam-se hifas largas, no septadas, irregulares.
Cultura; Meio Sabouraud No usar meio com cicloeximida pois impede o
crescimento do fungo.

Rhizopus sp

Macromorfologia: Colnia de crescimento rpido, cotonosa, inicialmente
branca, passando para acinzentada ou amarronzada, recoberta de pontos
negros.

Micromorfologia: Hifas vegetativas largas, cenocticas (septos ausentes),
hialinas. Esporangiforos ligados por estolones que conectam as bases das
estipes (hastes) nos pontos de fixao sobre a superfcie. As estipes podem
ser nicas ou faciculadas (formando feixes), sem ramificao, tendo na



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base os rizides ou rizomorfas que so rgos com aspecto de raiz e tm
por funo fixar sobre superfcies e absorver alimentos. A extremidade da
estipe alarga-se como guarda chuva(columela) de onde sai a membrana
formadora do esporngio. Este globoso, inicialmente incolor, passando a
preto com a idade da cultura. No interior do esporngio formam-se os
esporangisporos que , quando maduros, so liberados em grande nmero
aps a ruptura da membrana.




Entomoftoromicose:

uma infeco crnica do tecido subcutneo e mucosa, causada por
fungos que vivem saprofiticamente no solo , vegetais em decomposio e
fezes de rpteis e anfbios. A infeco ocorre com maior freqncia atravs
da inalao ou inoculao de esporos. Os principais agentes etiolgicos
so; Delacroixia coronata e o Basidiobolus ranarum.


Feo-hifomicose:

A designao feo-hifomicose foi proposta por Ajello, em 1974, para
denominar infeces cutneas, subcutneas e profundas, agudas ou
crnicas, causadas por uma grande variedade de fungos escuros com
exceo dos agentes da cromoblastomicose. Os principais agentes
etiolgicos so; Bipolaris oregonensis, Cladosporium bantianum e
Exophiala jeanselmei.




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Exophiala jeanselmei. Bipolaris oregonensis



Cladosporium bantianum



Hialo-hifomicose:

Esse termo foi proposto por Ajello, 1982, para agrupar as infeces
ocasionadas por fungos filamentosos hialinos, septados, no formadores de
estruturas especficas (como os gros dos eumicetomas) e que, at ento,
no eram patgenos clssicos. A maioria dos fungos produtores dessa
micose so saprofticas habituais do solo, parasitas de vegetais e
degradadores de materiais orgnicos. Grande parte desses fungos
oportunista, com limitado poder patognico. Os principais so;
Acremonium falciforme, Penicillium marneffei, Scedosporim apiospermum
e Scopulariopsis brevicaulis.







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Penicillium sp Scopulariopsis


Scedosporium Acremonium





Rinosporidiose:

uma infeco mictica submucosa, crnica, de evoluo lenta e
granulomatosa, causada pelo Rinosporidium seeberii. Essa infeco
caracterizada pela formao de plipos vegetantes localizados,
principalmente nas mucosas nasal e conjuntival. O fungo um provvel
habitante de guas estagnadas, poos e audes, sendo uma das possveis
vias de aquisio da infeco.

Diagnstico:

Exame direto: KOH do material biolgico (plipos) observa-se clulas
arredondadas (esporngio) de parede espessura variando de 10 a 100 m



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de dimetro. Nos cortes histolgicos corado por HE PAS e Gomori
observa-se grande quantidade de esporngio com numerosos ndosporos em
seu interior.


-Doena de Jorge Lobo


uma doena crnica, localizada, caracterizada pela presena de
leses semelhantes a um queloide, leses verrucosas ou vegetantes,
nodulares ou tumorais. O agente etiolgico da micose o fungo
denominado de Loboa loboi. A contaminao acredita-se que seja atravs
da inoculao acidental do parasita por traumatismo.

Diagnstico:

realizado basicamente pelo exame direto e histopatolgico.
No exame direto com KOH observa-se clula globosa leveduriforme de
tamanho uniforme com incluses lipdicas em seu citoplasma e com parede
espessa. No exame histopatolgico observa-se clulas arredondadas, de
parede espessa, isoladas em cadeias com intensa reao inflamatria.
No possvel cultivar o fungo.








MICOSES PROFUNDAS


Paracoccidioidomicose (PCM):

Trata-se de infeco granulomatosa de evoluo crnica, com grande
polimorfismo crlnico, onde as formas pulmonares e cutneo-mucosas
predominam, seguindo-se outros rgos, como gnglios linfticos, supra-
renal, bao fgado, intestinos, ossos, etc. Na grande maioria dos casos, os
pulmes esto comprometidos e, em geral, tal localizao acompanhada



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de leses em outros locais. A paracoccidioidomicose de distribuio
geogrfica restrita aos pases latino-americanos. Atinge freqentemente
indivduos do sexo masculino entre 30-40 anos. Quanto ao modo de
contgio da doena, admite-se, atualmente, que adquirida pela inalao de
esporos que vivem na natureza, no solo, vegetais ou na gua, determinando
leses primrias pulmonares.
A classificao clnica na paracoccidioidomicose pode ser:

PCM-infeco: estgios assintomticos e subclnicos. Contatos com o
fungo sem desenvolver sintomas. Testes intradermico positivos.
PCM-doena; Doena clnica sintomtica
Aguda ou juvenil: Evoluo rpida, dissemina-se para rgos e sistemas
Crnica: Origina-se da PCM-infeco, leva muitos anos para se manifestar.
Pode disseminar para outros rgos.
Agente etiolgico: Paracoccidioides brasiliensis. Fungo dimrfico trmico
a 25
o
C forma micelial 37
o
C forma de levedura.

Diagnstico laboratorial;

realizado pela pesquisa direta do agente em escarro, biopsia de
leso, pus de linfonodos ou pesquisa de anticorpos no soro.

Exame direto: Material da leso ou escarro com KOH. So encontradas
formas caractersticas de leveduras com parede dupla e mltiplos
brotamentos (em roda de leme).

Em pus: Clulas arredondadas (na sua maioria), ovaladas, com parede
grossa bem refringente. Tamanho varivel. Formao de brotos nicos,
duplos ou mltiplos (em roda de leme). Disposio catenulada ou
aglomerada. Pequenos vacolos aparecem no citoplasma.

Em material corado pela hematoxilina-eosina: Apresenta-se como
formas arredondadas, de 1 a 20 m, com parede grossa e refringente,
isoladas ou agrupadas, com brotamento nico ou mltiplo (em roda de
leme). A colorao do citoplasma varia de levemente azulada e levemente
avermelhada, podendo ser incolor. Com frequncia, aparecem fagocitadas
por clulas gigantes (Langhans).


Em material corado pela prata: O aspecto o mesmo da preparao



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anterior, mas a colorao das clulas fngicas varia de amarelo claro
passando pelo marrom, at preto. Observa-se com maior nitidez as formas
com brotamentos mltiplos.

Cultura: Cultivo em agar Sabouraud e agar Mycosel a 25
o
C. Aps 20-30
dias, crescimento de colnias brancas que anlise micromorfolgica
apresentam clamidsporos intercalados ou terminais nas hifas. O
diagnstico pode ser feito se observado a converso da forma micelial para
leveduriforme cultivando-se a 37
o
C.






Histoplasmose:


uma doena granulomatosa, tendo como agente etiolgico o fungo
Histoplasma capsulatum, que apresenta especial afinidade pelo sistema
retculo endotelial, produzindo diversas manifestaes clnicas.

Classificao das formas clnicas;
Assintomtica: Indivduos que entram em contato com o fungo mais no
desenvolvem sintomas. Algumas vezes podem aparecer sintomas que se
assemelham desde uma tuberculose a um resfriado. Os glnglios
mediastinais podem estar envolvidos. Quando no ocorre a cura
espontnea, evolui para a forma generalizada.

Generalizada: Ocorre por disseminao pulmonar apresentando sintomas
de acordo com o rgo afetado principalmente os que fazem parte do
sistema retculo endotelial como fgado, bao e linfonodos.

O contgio atravs da inalao de esporos do fungo.



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O Histoplasma capsulatum tambm um fungo dimrfico trmico.



Diagnstico;

Exame direto: Material biolgico com KOH as formas de leveduras
dificilmente so encontradas por este mtodo.

Em corte de tecido corado pela H.E.: Clulas parasitrias arredondadas,
aparecendo como elementos intracelulares, de parede grossa e citoplasma
retrado. Observa-se uma zona clara entre a parede e o citoplasma, o que
simula uma cpsula.








MICOSES OPORTUNISTAS


Criptococose:

Infeco subaguda ou crnica, de comprometimento pulmonar, sistmico e
do sistema nervoso central, causado pelo Cryptococcus neoformans. A
infeco primria no homem sempre pulmonar, devido a inalao do
fungo da natureza. A infeco pulmonar quase sempre subclnica e
transitria; entretanto, pode emergir ao lado de outras doenas que
debilitem o indivduo, tornar-se rapidamente sistmica e fatal. Portanto
conhecida como infeco oportunista. O fungo possui forte



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neurotropismo.

Diagnstico:

Materiais biolgicos: lquor, escarro, pus ganglionar, exudatos de leses
cutneas e mucosas, urina e sangue.

Exame direto: A fresco com tinta nanquim. O fungo visualizado como
uma clula arredondada.

Macromorfologia: Culturas de crescimento rpido (3 dias). Colnia plana
ou levemente elevada, brilhante, mida, com frequncia mucide. Cor
inicialmente creme tornando-se bronzeada.

Micromorfologia: Clulas arredondadas ou ovalada, isoladas ou com
brotamento nico; parede grossa, bem refringente e vacolos no
citoplasma. Cpsula bem ntida em preparaes com tinta nanquim.



Aspergilose:

A arpergilose no seu sentido amplo definida como um grupo de doenas
na qual fungos do gnero Aspergillus esto envolvidos. Esses fungos so
cosmopolitas e extremamente presentes na natureza, sendo encontrados em
restos orgnicos, no solo, no ar e sobre a superfcie de seres vivos, etc. Por
essas razes, representa no laboratrio de micologia, uma fonte freqente
de contaminao dos meios de cultura e de espcimes clnicos a serem
analisados. No homem a doena depende do estado fisiolgico geral ou
local do hospedeiro.
As principais manifestaes clnicas so:
Aspergilose pulmonar: Aspergiloma (bola fngica), Aspergilose invasiva,
Aspergilose alrgica, Aspergilose bronco-pulmonar
Aspergilose disseminada
Otomicose
Onicomicose

Diagnstico:

Exame direto: Em KOH hifas hialinas



26



Cultura:
Macromorfologia: Colnia de crescimento rpido, inicialmente branca,
passando a azul, verde, amarela ou preta. Reverso incolor, amarelo ou
preto. Pulvurulenta ou granulosa, com borda franjada e contorno circular
ou lobado, mas limitado.

Micromorfologia: Hifas vegetativas, ramificadas, septadas, incolores e
refringentes. Conidiforo, com haste simples, saindo de uma clula base, e
extremidade globlosa (vescula). Da superfcie da vescula saem filides ou
esterigmas, em forma de garrafas e disposio radiada no seu conjunto. Na
extremidade de cada filide forma-se uma cadeia de esporos basipetos
(condio ou fialosporo), globosos, de cor varivel.





















27



PARTE II
Tcnicas para identificao de fungos


Tcnicas para identificao de fungos filamentosos

1- Tcnica de esgaramento:

Utilizada como primeira tentativa (mais rpida) para identificao de
colnias filamentosas. As estruturas fngicas so quebradas, tornando-se
mais difcil a identificao.

Com ala de platina em L, retirar um pedao da colnia de bolor
crescida no gar.
Colocar 1 a 2 gotas de Lactofenol azul-algodo. Cobrir com
lamnula, comprimindo levemente. Observar em microscpio com
aumento de 400X.


2- Microcultivo em lmina:

No microcultivo em lmina, as estruturas permanecem ntegras alm
de ser utilizado um meio de cultura (gar batata), que estimula a
produo de macro e microcondeos, que na maioria das vezes
identificam o fungo. Estimula, tambm, a formao de pigmento.




28



Esterilizar placas de Petri com 3 lminas no interior (duas servem
para suporte e a outra para realizar o microcultivo).
Preparar gar batata em placa
Cortar em quadradinhos
Colocar um pedao de gar batata no centro da lmina do
microcultivo
Com a ala em L, cortar pedaos bem pequenos da colnia do
bolor, crescidos no gar e colocar nos quatro lados do pedao de
gar batata
Cobrir com lamnula estril, pressionando levemente
Colocar um pouco de gua destilada estril e deixar `a 25
o
C,
repondo a gua estril, sempre que necessrio. Deixar por 10-15
dias, dependendo da velocidade do crescimento do fungo.
Para montar, retirar a lamnula com pina estril. Fixar o fungo na
lamnula colocando 1 a 2 gotas de lcool e esperar secar. Montar
essa lamnula em lmina limpa, com 1 gota de Lactofenol azul-
algodo.
A lamnula pode ser vedada com esmalte de unha ou Entellan
para conservar por mais tempo.





29




Reagentes e meios de cultura:

Lactofenol azul-algodo:
Fenol cristalizado 20g
cido lctico 20ml
Glicerina 40ml
gua destilada 20ml
Azul-algodo 0,05g

Fundir o fenol separadamente. Misturar o cido lctico, glicerina e
gua com o fenol. Colocar o corante e filtrar em papel.

gar Batata:
Batata 10g
Glicose 5g
gar 10g



30


gua 500ml
Ferver bem a batata cortada em pedacinhos e descascadas. Amassar
bem e completar o volume para 500ml. Adicionar a glicose e o gar e
deixar em Banho-Maria at dissolver completamente.
Colocar em frascos com aproximadamente 20ml.
Autoclavar a 121
o
C por 15 minutos.


IDENTIFICAO DE LEVEDURAS


1- PROVA DO TUBO GERMINATIVO:

A prova do tubo germinativo um teste que caracteriza rpida e
presuntivamente a levedura da espcie Candida albicans.
A tcnica muito simples e baseia-se, fundamentalmente, na
semeadura de um pequeno inculo dessa levedura em soro, que pode ser
de vrias espcies animais. Os soros recomendados so o humano, o
fetal bovino ou de cavalo, podendo-se, ainda, utilizar albumina de ovo.

Tcnica:

a. Com a ponta de uma pipeta Pasteur estril, ou ainda, com uma ala
de platina calibrada (0,001ml), retirar uma pequena poro de uma
colnia de levedura e emulsion-la de forma assptica em 0,5 ml de
soro. Evitar, se possvel, o uso de soro humano, que pode ter
anticorpos ou ainda antifngicos.



31


b. Incubar a 37
o
C por um perodo de 1,5-2 horas, em banho-maria, ou
at 3 horas em estufa bacteriolgica.
c. Findo este perodo, deve-se remover uma gota da suspenso e montar
uma preparao do tipo lmina-lamnula, para observao
microscpica. O tubo germinativo, quando o teste for positivo,
aparecer como filamento fino e cilndrico, originado do
blastocondio da levedura, no qual no se observa nenhuma zona de
constrico, quer na base ou ao longo de sua extenso.


2- MICROCULTIVO DE LEVEDURAS

Esta tcnica baseia-se no princpio de que leveduras, quando
incubadas num meio com Tween-80 apresentam a capacidade de
filamentar, formando pseudo-hifas e/ou hifas verdadeiras. Assim, pelas
caractersticas morfolgicas diferenciadas das estruturas filamentosas,
pode-se sugerir a espcie de levedura implicada na identificao.

Tcnica:

Preparar gar Fub e colocar 3 ml de meio, ainda lquido, sobre a
lmina do microcultivo, com pipeta estril. Esperar solidificar. Com
ala de platina, pegar um pouco da colnia de levedura crescida no gar
e semear em estria no gar Fub. Cobrir com lamnula estril. Deixar 2 a
3 dias 25
o
C e observar a preparao, da forma como est, em
microscpio com aumento de 400x.




32




Material:

gar Fub:

Farinha de milho amarela 6,25g
gua 150 ml
gar 1,9 g
Tween 80 1,5 ml

Aquecer em banho-maria 60
o
C por 1 hora a farinha de milho e a
gua. Filtrar. Completar o volume, com gua, para 150 ml. Acrescentar
o gar e o Tween e deixar em banho-maria fervendo at dissolver.
Colocar em frascos com aproximadamente 3-5 ml.
Autoclavar 121
o
C por 15 minutos.











33



Filamentao de Candida sp em gar fub com Tween-80:


3- Auxanograma (Assimilao de Carboidratos e Nitrognio)

Assimilao de Carbiodratos:

Esta tcnica baseia-se na capacidade que as leveduras apresentam de
utilizar determinado carboidrato como nica fonte de carbono, para sua
viabilidade celular. Desta forma utiliza-se, nesta tcnica, um meio basal
destitudo de qualquer fonte de carbono (sem o qual a clula fngica no
pode crescer), onde ser semeada a levedura que se deseja identificar.



34


Aps a semeadura, adiciona-se ao cultivo um carboidrato e observa-se a
capacidade de utilizao deste como fonte de carbono. Quando o
carboidrato assimilado pela levedura, observa-se crescimento desta ao
redor da fonte de carbono.

Tcnica:

Preparar o meio Yeast Nitrogen Base de acordo com as normas
preconizadas pelo fabricante.
Simultaneamente, preparar uma suspenso de leveduras com turvao
equivalente ao tubo nmero 5 da escala de MacFarland
Toma-se uma alquota de 1 ml da suspenso de leveduras e adiciona-se
a 20 ml de meio basal fundido e resfriado. Transfere-se esta suspenso
para uma placa de Petri homogeneizando suavemente.
Aguarda-se a solidificao do meio e adiciona-se pequenas quantidades
de acares em posies previamente demarcadas.
Incubar as placas a 30
o
C por 24-48 horas.
Observar regies opacas ao redor dos acares adicionados




35


Assimilao de Nitrognio:

A assimilao de nitrognio demonstra a capacidade que algumas
leveduras apresentam de assimilar nitrato de potssio (nitrognio
inorgnico), como nica fonte de nitrognio utilizado na sua viabilidade
biolgica.

Tcnica:

Prepara-se o meio Yeast Carbon Base, de acordo com as indicaes do
fabricante.
Aps a preparao e autoclavao, o meio deve ser estocado em
geladeira, at o momento do uso.
No momento do uso, fundem-se 20 ml do meio, e aps resfriar a uma
temperatura de 45-50
o
C acrescenta-se a este 1 ml da suspenso de
levedura previamente preparada (com uma turvao correspondente ao
tubo 5 da escala de MacFarland)
Aps movimentos no muito bruscos de agitao para homogeneizar o
inculo, despeja-se o meio numa placa de Petri
Aps solidificao do meio, distribuir pequenas quantidades de
compostos nitrogenados (nitrato de potssio e peptona)
A peptona aqui empregada como controle da viabilidade do inculo,
visto que todas as leveduras a utilizam como fonte nitrogenada.




36




4- FERMENTAO DE CARBOIDRATOS:

A capacidade de uma levedura fermentar determinado carboidrato
est diretamente ligada habilidade desta de possuir sistemas enzimticos
eficientes, capazes de permitir, em baixas tenses de oxignio, degradar
acares para produo de energia, formando, entre outros metablitos,
etanol e gs carbnico.
Assim, utiliza-se tambm na identificao das leveduras essa
caracterstica fenotpica, onde se investiga a habilidade que uma
determinada levedura possui de fermentar um acar, atravs da
demonstrao da produo de CO
2
.

Tcnica:

Prepara-se o meio basal para fermentao e distribudos em tubos de
ensaio, contendo um tubo de Durham invertido em seu interior, em
alquotas de 3 ml.



37


Os tubos so autoclavados e estocados na geladeira por at um ms.
No momento da execuo do teste, adiciona-se ao meio basal, 1,5 ml da
soluo de acares (6% em gua destilada), mantendo sempre a relao
de da soluo de acares para meio basal.
Adiciona-se 0,2 ml da suspenso de levedura (escala 5 MacFarland),
no meio basal e incubam-se os tubos a 37
o
C por 10-14 dias.



Material:

Meio de cultura

Azul de bromotimol 0,03 g
Extrato de levedura 2,7 g
Peptona 4,5 g
gua destilada 600 ml
Etanol a 95% 1,8 ml

Dissolver o extrato de levedura e a peptona em gua destilada.



38


Separadamente dissolver completamente o azul de bromotimol em etanol.
Adicionar o azul de bromotimol dissolvido mistura inicial e
homogeneizar. Distribuir 3 ml do meio em tubos de ensaio com tampa
roscvel contendo um tubo de Durhan na posio invertida. Autoclavar a
121
o
C, por 15 minutos. Deixar resfriar. Adicionar a cada tudo, 1,5 ml de
uma das solues de acares. Estocar a 4
o
C.


IMPORTANTE: Observar na Parte IV desta apostila o
Protocolo para identificao de leveduras.




ISOLAMENTO DE FUNGOS DO AR


A. Finalidade: O isolamento de fungos anemfilos importante na
determinao da flora do ar de uma rea, nos estudos sobre alergia a
fungos, na determinao do grau de contaminao de ambientes, para
obteno de amostras de interesse industrial, etc.

B. Fundamento: Usando-se a tcnica de exposio de placas com meio de
cultura durante tempos pr-fixados, os esporos em flutuao no ar
sedimentam sobre o meio e ai germinam.

C. Material:
a. Placa com gar Sabouraud ou gar batata dextrose.
b. Lactofenol azul algodo
c. Lminas, lamnulas, alas, etc.
d. Tubos com gar-Sabouraud ou gar batata inclinado.

D.Execuo da tcnica:
1. Abrir a placa e expor durante 20 minutos
2. Fechar, identificar e incubar temperatura ambiente



39


3. Acompanhar o desenvolvimento das culturas
4. Examinar ao microscpio
5. Repicar em tubos

E. Resultado

PESQUISA MICROSCPICA DE DERMATFITOS EM PLO

A. Finalidade: Diagnstico das tinhas do couro cabeludo.

B. Fundamento: O diagnstico laboratorial das tinhas do couro cabeludo
baseia-se no exame microscpico de plos e cultura dos mesmos em gar
Sabouraud. Os plos com microsporia apresentam esporos ectotrix na base
e os plos com tricofcia apresentam parasitismo endotrix e/ou ectotrix em
formas artrosporadas.

C. Material:
1. Lmina, pina, microscpio, etc.
2. Soluo de KOH a 20%

D. Execuo:
1. Colher, com uma pina de ponta chata (pina de depilao), plos
danificados das bordas da leso.
2. Colocar os plos entre 2 lminas de vidro bem limpas (ou em placa
esterilizada em caso de transporte).
3. Pingar uma gota de soluo de KOH sobre os plos em uma lmina e
cobrir com lamnula.
4. Aquecer levemente, passando a lmina vrias vezes sobre a chama,
evitando-se rigorosamente a fervura do lquido.
5. Examinar ao microscpio.

a. Os plos parasitados por Microsporum apresentam bainha externa de
esporos pequenos ao redor do mesmo na regio do folculo.

b. Os plos parasitados por Trichophyton apresentam formas filamentosas e
artrosporadas externa e internamente.


E. Resultado




40


A. Exame direto B. Cultura







PESQUISA MICROSCPICA DE DERMATFITOS EM PELE E
UNHA


A. Finalidade: Diagnstico de dermatofitoses de pele e unha: tinea
corporis, tinea cruris, tinea manum, tinea ungueum e tinea imbricata.

B. Fundamento: O exame microscpico baseia-se no encontro de
filamentos septados e ramificados, muitas vezes artrosporados, em escamas
de pele e unha clareados com KOH.

C. Material:
1. Escamas de pele
2. Lminas, lamnulas, ala, etc.
3. Soluo de KOH a 20%
4. Bisturi ou lmina de barbear
5. gar Sabouraud-cloranfenicol

D. Execuo:
1. Raspar a pele ou a unha com bisturi ou lmina.
2. Misturar uma parte das escamas com KOH sobre uma lmina de
microscpio e cobrir com lamnula.
3. Aquecer levemente evitando a fervura.
4. Comprimir levemente a lamnula.
5. Retirar o excesso de KOH.
6. Examinar ao microscpio.

F. Resultado:




41




DEMONSTRAO DO DIMORFISMO DOS FUNGOS
(Transformao M - Y)


A. Finalidade: caracterstica de alguns fungos patognicos, servindo
para sua identificao e para estudos morfolgicos ou de atividade
antignica, bioqumica etc.

B. Fundamento: A transformao M - Y ocorre com a mudana na
composio do meio e na temperatura (ou apenas na temperatura).

C. Material:
1. gar Sabouraud e gar BHI
2. Cultura de Sporothrix schenckii ou Paracoccidioides brasiliensis
3. Ala de platina, lmina e lamnula etc.

D. Execuo:
1. Repicar a cultura filamentosa no meio gar BHI
2. Incubar a 37C, durante perodo suficiente para crescimento, mantendo
mido o meio com pequeno volume de caldo Sabouraud (ou colocar
vasilha com gua na estufa).
3. Examinar ao microscpio.
4. Repicar, em gar Sabouraud, a cultura da fase levedufirorme
5. Incubar temperatura ambiente por perodo suficiente para crescimento
6. Examinar macro e microscopicamente.



42



PESQUISA DE LEVEDURAS EM PELE E UNHA

A. Finalidade: Diagnstico das leveduroses de pele e unha.

B. Fundamento: O exame microscpico realizado pesquisando-se em
escamas de pele e unha, clareadas com KOH, as formas arredondadas ou
ovaladas, formando, s vezes, aglomerados e filamentos. Isola-se o agente
em gar Sabouraud.

C. Material:
1. Escamas de pele e unha
2. Soluo de KOH a 20 ou 30%
3. Lminas, lamnulas, etc.
4. gar Sabouraud-cloranfenicol

D. Execuo:
1. Raspar a pele ou a unha para obter escamas
2. Colocar uma gota de KOH sobre a lmina
3. Misturar uma parte das escamas com KOH
4. Cobrir com lamnula
5. Aquecer levemente
6. Examinar ao microscpio
7. Cultivar a outra parte do material em gar Sabouraud-cloranfenicol.
8. Fazer as provas de tubo germinativo, clamidosporo (clamidocondio) e
bioqumicas.

E. Resultado
a. Exame direto b. Cultura




E. Resultado: anotar, conforme tabela:









43



PESQUISA DE Malassezia furfur

A. Finalidade: Diagnstico da pitirase versicolor

B. Fundamento: O diagnstico da pitirase versicolor realizado pela
pesquisa microscpica de aglomerados de esporos, em forma de cacho de
uva, ao lado de filamentos grossos, septados, curtos, com ramificaes
tendo aspecto de Y ou L.

C. Material necessrio:
1. Fita adesiva transparente
2. Soluo de KOH a 20%
3. Lminas, lamnulas, microscpio, etc.

D. Execuo:
1. Pesquisa com fita adesiva:
a. Colocar a face colante da fita sobre a pele em descamao
b. Retirar e colar a face colante da fita sobre a lmina
c. Examinar ao microscpio, procurando retirar e colar principalmente os
esporos arredondados formando aglomerados em mosaico ou cacho de
uvas.

2. Pesquisa aps clareamento com KOH:
a. Raspar a pele em rea com descamao, usando bisturi ou lmina de
vidro.
b. Misturar parte das escamas com KOH e cobrir com lamnula.
c. Aquecer levemente a lmina, evitando fervura.
d. Examinar ao microscpio, procurando os esporos aglomerados em forma
de mosaico e os filamentos.

E. Resultado:





44


PRODUO DE UREASE

A. Finalidade: Identificao de C.neoformans.

B. Fundamento: Produzindo urease, C. neoformans decompe a uria
com formao de amnia que alcaliniza o meio, provocando a viragem do
indicador.

C. Material:
1. Meio de Christensen
2. Amostra de levedura

D. Preparo do material:
Meio de Christensen:
Uria gar base (Difco).................... 29 g
gua destilada................................. 100 ml
Esterilizar por filtrao
gar............................................... 15 g
gua destilada................................ 900 ml
Autoclavar 115C - 15 minutos.
Esfriar at 50 - 55C, misturar a base e distribuir esterilmente em tubos.
Solidificar inclinado.

E. Execuo da tcnica:
1. Semear na superfcie
2. Incubar a 37C
3. Observar a viragem do indicador (hidrlise da uria= viragem para
vermelho)


F. Resultado:












45



DIFERENCIAO DE Trichophyton rubrum e Trichophytom
mentagrophytes PELO TESTE DA UREASE E PERFURAO EM
PELO

Meio de cultura utilizado:

Peptona 1g
NaCl 5g
KH2PO4 2g
Glicose 5g
Agar 15g
gua destilada 1000ml

Procedimento: Adicionar 6ml de soluo de vermelho de fenol (0,2% em
etanol-50%). Autoclavar a 115
o
C por 15 minutos. Esfriar a 50
o
C e
adicionar 100ml de soluo aquosa a 20% de uria esterilizada por filtrao
e inclinar.

Resultado:

Trichophyton rubrum: Urease fraca ou ausente (no h mudana antes de
14 dias)

Trichophyton mentagrophytes: Pulverulento fortemente positivo (antes de
7 dias)

TESTE DE PERFURAO:

Usar cabelo pr-pbere e colocar em placas de Petri
Esterilizar o cabelo por autoclavegem a 120
o
C por 10 minutos
Colocar 25 ml de gua destilada estril
Adicionar 2 a 3 gotas de estrato de levedura
Fazer leitura em 4 semanas

Resultado:

O T. mentagrophytes penetra perpendicularmente dentro do pelo, formando
orifcios em forma de cunha. O T. rubrum no perfura o pelo.




46


MEIOS DE CULTURA E CORANTE MAIS COMUNS EM
MICOLOGIA

gar Sabouraud (AS)
Peptona......................................... 10 g
Dextrose....................................... 20 g
gar............................................. 15 g
gua destilada.............................. 1000 ml

Dissolver o gar em gua fervente e acrescentar os outros componentes .
Distribuir e autoclavar a 115C por 15 minutos.

gar Sabouraud + Antibiticos
Gentamicina.................................. 25 mg
Cloranfenicol................................. 140 mg
lcool........................................... 10 ml
AS ou ASD fundido..................... 1000 ml
Dissolver o cloranfenicol no lcool e depois misturar com AS ou ASD gar
fundido. Distribuir e autoclavar a 115C por 15 minutos.

Corante
Lactofenol azul algodo (Lactofenol de Aman)
Fenol............................................. 20 g
cido lctico................................. 20 ml
Glicerina....................................... 40 ml
gua destilada.............................. 20 ml
Cotton blue (azul algodo)........... 0,05 g

a. Misturar: cido lctico, glicerina e gua.
b.Acrescentar fenol e dissolver com calor uniforme.
c. Acrescentar azul algodo.
d. Filtrar em papel.

KOH

Hidrxido de Potssio diludo a 10 ou 20% em gua destilada

KOH + tinta
Hidrxido de Potssio 10 ou 20%, adicionado de Tinta Parker Permanente,
na proporo de 2:1.



47




PARTE III
FLUXOGRAMAS





48





49





50


PARTE IV

UNIVERSIDADE SO PAULO
FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS
LABORATORIO DE MICOLOGIA CLNICA


PROTOCOLO PARA IDENTIFICAO DE LEVEDURAS



No. de entrada da cepa:______________Data:_______________
Iniciais do paciente:_____________________
Material biolgico:_____________________________________
Exame direto:_________________________________________
Cultura:______________________________________________



1 MORFOLOGIA


a) Macroscpia:

ASD: Cor:_________________Textura:___________________


b) Microscpia:

Agar Fub: Data:____________________

Pseudomiclio ( ) Miclio verdadeiro ( ) Clamidsporo ( )

Arranjo dos Blastocomidios ( ) Artrocondios ( )

Tubo germinativo:____________________________

Outras caracteristicas:___________________________






51


2 PROVAS BIOQUMICAS



a) Auxonograma: Data:________________


1 G Glicose ( ) 16 RIB Ribitol ( )
2 GA Galactose ( ) 17 GAL Galactiol ou Ducitol ( )
3 SOR L Sorbose ( ) 18 MAN D Manitol ( )
4 SU Sacarose ( ) 19 GLU D Glucitol ou Sorbitol ( )
5 MA Maltose ( ) 20 LAC cido Ltico ( )
6 CE Celobiose ( ) 21 CIT cido Ctrico ( )
7 TR Trealose ( ) 22 SUC cido Succinico ( )
8 LA Lactose ( ) 23 I Inositol ( )
9 ME Melibiose ( ) 24 MZ Melezitose ( )
10 RA Rafinose ( ) 25 X L Arabinose ( )
11 ST Amido solvel ( ) 26 DAR D Arabinose ( )
12 LAR L Arabinose ( ) 27 RH Raminose ( )
13 RI D Ribose ( ) 28 AS Salicina ( )
14 GL Glicerol ( ) 29 Peptona ( )
15 ER Eritritol ( ) 30 NO3 Nitrato ( )




b) Zimograma: Data:________________


Controle ( ) Sacarose ( )
Glicose ( ) Maltose ( )
Lactose ( ) Trealose ( )
Rafinose ( ) Celobiose ( )
Galactose ( ) Melibiose ( )











52


c) Provas complementares: Data:__________________

Presena de cpsula:_____________________________

Crescimento a 37

C _____________________________

Alta produo de cido:___________________________

Urease:_________________

Resistncia cicloheximida:______________________

Ascsporos ( Forma e Nmero):___________________




3 - Interpretao das provas do Zimograma e Auxonograma




Resultados Aspecto tubo de durhan Formao do halo
+ Forte Repleto de gs Rpida e halo forte
+ W Fraco Gs pela metade do tubo Halo fraco
+ VW Muito fraco Somente uma bolha gs Lento ou latente
+ S Lento Formao de gs aps 3 dias Negativo
- Negativo Sem gs Muitas cepas (+)
V Varivel Algumas cepas (+) e outras (-) Poucas (-)
+/- ----------------




4 A identificao deve ser feita de acordo com Kreger Van Rij, 1984.




53



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