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Capitulo 1 Vol2 PDF
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Captulo 1
Biologia celular e ultraestrutura
Helene Santos Barbosa
Suzana Crte-Real
istrico
1. H
Histrico
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a) fagocitose quando ocorre a captao de molculas maiores, partculas ou microrganismos. Neste processo, a partcula a ser ingerida toca
na membrana celular, formando projees chamadas de filopdios;
b) pinocitose processo utilizado pela clula para englobar pores
de fluidos extracelulares e pequenas molculas. Neste caso, a membrana sofre um processo de invaginao, ocorrendo a formao de
pequenas vesculas. Estas so direcionadas para o citoplasma para que
ocorra a absoro dos nutrientes. Por outro lado, para eliminar substncias residuais, a clula utiliza o processo de exocitose, no qual uma
vescula, vinda do citoplasma contendo material que deve ser eliminado, se funde membrana plasmtica, lanando o seu contedo no
meio extracelular.
2.1.1. Especializaes da membrana plasmtica
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2.2. Citoplasma
(B)
2.6. Lisossomos
2.8. Peroxissomos
2.10. Glicognio
2.11. Citoesqueleto
O citoesqueleto confere s clulas eucariticas a manuteno da diversidade de formas, a realizao de movimentos coordenados e direcionados e
sua estruturao interna. Esse citoesqueleto depende de uma complexa rede
de filamentos de protenas que se estende por todo o citoplasma, sendo
constitudo por trs principais tipos de estruturas: os microtbulos, os filamentos
intermedirios e os filamentos de actina.
Os microtbulos so formados por subunidades: b-tubulina e a-tubulina,
as quais se associam uma s outras, conferindo-lhe assim uma forma cilndrica,
com o dimetro de 25 mm. Os microtbulos direcionam o deslocamento de
vesculas, participam da diviso celular com a formao do fuso mittico para o
deslocamento dos cromossomos e esto presentes na manuteno da estrutura
celular e na morfologia dos clios e flagelos.
Os filamentos intermedirios recebem esta denominao por apresentarem um dimetro intermedirio entre filamentos de actina e microtbulos (10
mm de dimetro). Sua composio proteica, formando uma rede estrutural
por toda a clula.
Os filamentos de actina (Figura 9) esto distribudos por todo o citoplasma
das clulas eucariticas e apresentam dimetro de 5 mm. Eles so formados por
uma protena globular, a actina, que apresenta as isoformas: a, b e g. Estes
filamentos, nas clulas epiteliais, esto concentrados nos prolongamentos
citoplasmticos, participando, juntamente com os desmossomos, do contato
com outras clulas e com a membrana basal, mantendo, assim, a integridade
organizacional do epitlio. Nos miofibroblastos, importantes clulas do tecido
muscular, os filamentos de actina esto organizados paralelamente membrana
plasmtica, mantendo estas clulas tensionadas ao substrato e so, ento,
denominados fibras de estresse.
Figura 9. Fibra estresse (asterisco) localizada abaixo da membrana, formada por
microfilamentos de actina.
2.12. Centrossomo
O centrossomo, principal centro organizador de microtbulos, est localizado prximo ao ncleo da clula em intrfase e contm um par de formaes cilndricas e curtas dispostas perpendicularmente entre si e envolvidas por
material pericentriolar, denominadas centrolos. Estas estruturas so formadas
por nove triplex de microtbulos, semelhantes aos corpos basais de flagelos e
clios. Esto presentes na maioria das clulas animais, porm ausentes nas
clulas vegetais.
3. Tcnicas para visualizao das organelas celulares
3.1. Protocolos para revelao do ncleo
O RE pode ser observado por microscopia de fluorescncia pela utilizao de marcador fluorescente especfico, o ER-Tracker. E, por microscopia
eletrnica de transmisso, utilizando-se citoqumica ultraestrutural, revelando a
enzima glicose-6-fosfato.
3.2.1. ER-Tracker
Preparao de reagentes
O ER-Tracker Green fornecido liofilizado em 100 mg. Preparar uma
soluo estoque de 1mM. Para isso, deve-se diluir todo o contedo do frasco
liofilizado em 128 mL de DMSO. recomendado que esta soluo seja
separada em alquotas e estocada em freezer com dessecante.
Preparo da soluo de marcao
Diluir a soluo estoque de ER-Tracker a 1 mm para a concentrao
recomendada de 500 mm em meio simples;
Para clulas aderidas, remover o meio da cultura, lavar trs vezes com
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Mitocndrias podem ser reveladas com marcadores fluorescentes especficos, como MitoTracker e Rhodamine 123, os quais so visualizados por
microscopia de fluorescncia. Graas sua morfologia tpica, so facilmente
identificadas durante as anlises por microscopia eletrnica.
3.3.1. Mito-Tracker
Preparando a soluo estoque
priadas para cada tipo celular. Substituir o meio com marcador por meio
pr-aquecido e observar as clulas em microscpio de fluorescncia,
utilizando o filtro adequado. Para fixar as clulas, deve-se retirar o meio
com marcador e lav-las com meio simples. Fixar com PFA 4% por 20
minutos em temperatura ambiente, lavar trs vezes com PBS e montar
entre lmina e lamnula com DBCO.
3.4. Protocolo de marcao de grnulos de glicognio
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