Uma célula eucariótica para operar eficientemente, precisa de segregar os A maioria dos organelos está na célula por ligação
ula por ligação ao citoesqueleto, em especial aos
diferentes processos intracelulares; isto porque, muitos dos processos e reações
químicas que ocorrem na célula são incompatíveis: umas reações fazem glicose,
outras quebram-na; umas sintetizam ligações peptídicas, outras hidrolisam-nas.
Desta forma, as células desenvolveram estratégias para isolar e organizar as suas
reações químicas. Uma estratégia usada por procariontes e eucariontes é agregar
diferentes enzimas usadas para catalisar determinadas reações em grandes
complexos; uma 2ª estratégia, e a que vamos analisar neste capitulo, está mais
desenvolvida nos eucariontes e implica confinar diferentes processos metabólicos
(e as proteínas para eles necessários) em compartimentos fechados por membranas
– a membrana célula forma uma barreira com permeabilidade seletiva. Enquanto
uma célula procariótica consiste num só compartimento, fechado pela membrana
plasmática, as células eucarióticas estão divididas por membranas internas – formam
estruturas chamados (cada um dos quais
contém um conjunto único de moléculas e possui uma função especializada).
Os organelos são rodeados pelo citosol, que está circundado pela membrana
plasmática. O núcleo é, normalmente, o organelo mais proeminente nas células
eucarióticas: é rodeado por uma dupla membrana – envelope nuclear – e comunica
com o citosol através dos poros nucleares (que “furam” o envelope). A membrana
nuclear externa é contínua com a membrana do reticulo endoplasmático – sistema
de sacos e tubos que se prolonga ao longo da célula; o RE é o sitio de maior síntese
de novas membranas celulares; partes do RE têm ribossomas associados, na região
citosólica – RE rugoso. Os ribossomas são proteínas com atividade sintética, inseridos
na membrana do RE ou enviados para o lúmen do RE. O RE liso não contém
ribossomas; é escasso na maioria das células, mas desenvolvido para desempenhar
funções específicas em outras: síntese de hormonas esteroides e libertação e
recaptação de Ca2+ (contração muscular). O aparelho de golgi, situado perto do
núcleo, recebe proteínas e lípidos do RE, modifica-os e envia-os para os seus destinos
na célula. Os lisossomas – sacos com enzimas digestivas – degradam organelos
velhos e macromoléculas que entram na célula por endocitose. No caminho até aos
lisossomas, os materiais endocitados, passam por uma série de compartimentos –
endossomas- que separam as moléculas ingeridas e reciclam algumas de volta à
membrana. Os peroxissomas contêm enzimas que quebram lípidos e destroem
moléculas toxicas, produzindo peróxido de hidrogénio. A mitocôndria e o
cloroplasto têm uma membrana dupla e são os locais onde se dá a fosforilação
oxidativa e fotossíntese, respetivamente – possuem membranas para produção ATP.
microtúbulos; os filamentos do citoesqueleto formam caminhos que permitem
mover os organelos e direcionar as vesiculas entre um organelo e outro: movimentos
são impulsionados por proteínas motoras (usam energia da hidrólise ATP).
Em termos de área e massa, a membrana plasmática é uma membrana pequena na
maioria das células eucarióticas – área da membrana do RE é 20/30x maior. Foi
possível separar os organelos uns dos outros por centrifugação diferencial – com
uma amostra purificada de um organelo é possível identificar as suas proteínas e,
submetê-lo a determinadas condições, permitiu estudar a sua função.
Para entendermos a relação entre os diferentes compartimentos, é importante
considerarmos como eles evoluíram: nas células eucarióticas atuais, por causa do seu
tamanho, não era possível manter todas as funções na membrana plasmática – sem
o desenvolvimento de membranas internas, esta evolução não teria sido possível.
Acredita-se que estes organelos desenvolveram-se em estadios: algumas
membranas originaram-se por invaginações da membrana plasmática – membrana
nuclear, do RE, do aparelho golgi, dos endossomas e lisossomas 
– o interior destes organelos permite-lhes comunicar intensamente
uns com os outros. Já as mitocôndrias e os cloroplastos (têm o seu próprio genoma
e produzem algumas das suas proteínas), acredita-se que foram originados por uma
relação de simbiose de uma célula anaeróbia eucariótica com uma bactéria.
Antes de uma célula eucariótica se dividir, ela aumenta de tamanho: o mesmo
acontece com os organelos, que crescem e são distribuídos pelas 2 células filhas. O
crescimento dos organelos implica um suprimento de lípidos (para formar
membranas) e de proteínas (proteínas da membrana e as que vão ocupar o interior
do organelo). Mesmo em células que não se estão a dividir, a síntese proteica é
contínua – depois precisam de ser enviadas ao organelo apropriado. Fazer chegar ao
organelo certo as proteínas que estão a ser formadas é necessário para a célula
crescer, dividir e funcionar corretamente.
Em alguns organelos (mitocôndrias, cloroplastos e o interior do núcleo) as proteínas
são entregues de forma direta pelo citosol; outros (golgi, lisossomas, endossomas,
m.nuclear interna) as proteínas e os lípidos são entregues indiretamente pelo RE.
Neste caso, as proteínas entram no RE pelo citosol: algumas ficam lá retidas, outras
são transportadas por vesiculas até ao golgi e depois até à membrana plasmática ou
outros organelos. Os peroxissomas fazem uso dos 2 caminhos – apesar de adquirirem
as proteínas da membrana através do RE, as suas enzimas digestivas vêm do citosol.
A síntese de quase todas as proteínas começa nos ribossomas, no citosol, à exceção
das poucas proteínas sintetizadas nos ribossomas dentro da mitocôndria e
cloroplasto. Inclusive, muitas das proteínas que as mitocôndrias e os cloroplastos
precisam são feitas no citosol e só depois importadas. O destino de cada proteína
sintetizada no citosol, depende da sua sequência de aminoácidos – possuem um sinal
de triagem/classificação que direciona a proteína ao organelo requerido; proteínas
sem esse sinal, permanecem no citosol. Diferentes sinais direcionam as proteínas
para diferentes organelos. Quando um organelo importa uma proteína, do citosol ou
de outro organelo, surge um problema: a proteína tem de ser transportada através
da membrana (membrana essa normalmente impermeável a macromoléculas
hidrofílicas). A forma como o organelo lida com isso, depende do tipo de organelo:
1) : são transportadas através
dos poros nucleares – funcionam como portões que transportam ativamente
macromoléculas especificas, mas também permitem a passagem livre de algumas
moléculas pequenas.
2) : são
transportadas através da membrana do organelo por translocadores proteicos –
diferente do transporte através dos poros, as proteínas a transportar devem
desdobrar-se para que o translocador as leve através do interior (hidrofóbico) da
membrana. As bactérias usam um mecanismo semelhante para exportar proteínas
do citoplasma para o exterior da célula.
3)
: são transportadas por vesiculas de transporte, que se separam da
membrana de um compartimento e se fundem com a membrana de um outro.
Normalmente, o sinal de classificação de uma proteína é uma sequência de
aminoácidos que, frequentemente (mas não sempre) é removida da proteína assim
que ela tenha sido classificada. Essas sequências de sinal são necessárias e suficiente
para direcionar uma proteína ao seu destino especifico: através de técnicas de
engenharia genética observou-se que excluir a sequência de sinal de uma proteína
do RE, converte-a numa proteína citosólica; da mesma forma, a colocação de uma
sequência de sinal RE numa proteína citosólica, direciona-a para o RE. Sequências de
sinal que especificam o mesmo sítio, podem ser muito diferentes (a hidrofobicidade
ou aminoácidos carregados é, aparentemente, mais importante para a função do
sinal do que a sequência exata dos aminoácidos).
O é formado por 2 membranas: a membrana interna contém
algumas proteínas que atuam como sítios de ligação para os cromossomas, e outras
que servem de ancoragem à lâmina nuclear (uma malha de filamentos proteicos que
reveste a face interna da membrana e fornece suporte estrutural ao envelope
nuclear); a composição da membrana externa é semelhante à do RE (que lhe é
contínua). O envelope é perfurado por poros nucleares – formam portões que
permitem a passagem de moléculas; um poro é uma estrutura grande composta por
cerca de 30 proteínas diferentes, cada uma com várias cópias; muitas das proteínas
que revestem o poro têm regiões não estruturadas, nas quais as cadeias
polipeptídicas estão desordenadas – essas regiões desordenadas formam uma
malha que preenche o centro do canal, impedindo a passagem de moléculas grandes
(mas permite a passagem livre de moléculas pequenas e solúveis).
No entanto, moléculas maiores também precisam de passar pelos poros: RNA’s e
subunidades ribossomais precisam de ser exportadas para o citosol e, proteínas
destinadas ao núcleo precisam de ser importadas do citosol  para que entrem por
um poro, essas moléculas grandes têm que exibir um sinal apropriado. A sequência
de sinal que direciona uma proteína citosol para o núcleo -
: consiste em 1 ou 2 sequências curtas com várias lisinas ou argininas
carregadas positivamente. Esse sinal de localização nuclear, é reconhecido por
proteínas citosólica – ; esses recetores ajudam a
direcionar a proteína recém-sintetizada para o poro nuclear, interagindo com as
fibrilas que se estendem da borda do poro, para o citosol. Quando o poro está vazio,
as sequências repetidas (dentro do emaranhado proteico, que preenche o centro do
poro) ligam-se umas às outras e formam um gel; quando o recetor de importação
penetra no poro, ele agarra-se a essas sequências repetidas, interrompe as
interações entre elas e abre uma passagem – fazem isto até entrarem no núcleo e
entregarem a sua carga. Depois disso, o recetor vazio regressa ao citosol, pelo poro,
para ser reutilizado.
Esta importação de proteínas nucleares é alimentada pela hidrólise do GTP:
mediada por uma GTPase chamada Ran; tal como outras GTPases, a Ran existe em 2
conformações: uma com a molécula de GTP, outra com a de GDP. A Ran-GTP está
em altas concentrações no núcleo, enquanto a Ran-GDP é produzida no citosol. No
núcleo, a Ran-GTP separa a proteína nuclear do seu recetor, permitindo que a
proteína importada seja libertada; o recetor de importação, agora ligado ao Ran-GTP,
retoma ao citosol, onde se dá a hidrólise do GTP em GDP  permite a dissociação
da Ran-GDP com o recetor, deixando o recetor livre para transportar outra proteína
nuclear. A hidrólise do GTP conduz o transporte nuclear na direção apropriada.
Os recetores de exportação nuclear funcionam de forma semelhante, mas
direcionam o tráfego de proteínas e RNA do núcleo para o citosol. Estes recetores
reconhecem os sinais de exportação nuclear (diferentes dos que especificam a
importação) e também usam a Ran para acoplar o transporte a uma fonte de energia.
O transporte de proteínas, através dos poros nucleares, é feito com as proteínas na
sua confirmação dobrada – característica que distingue o mecanismo de transporte
nuclear, dos outros mecanismos de transporte de proteínas nos outros organelos (na
maioria, as proteínas têm que se desdobrar para atravessar as membranas).
As mitocôndrias e os cloroplastos, apesar de conterem os seus próprios genomas e
produzirem algumas das suas proteínas, a maioria das proteínas que necessitam têm
de ser importadas do citosol. Essas proteínas têm uma sequência de sinal, no
terminal N, que lhes permite entrar no organelo específico. As proteínas destinadas
a qualquer organelo são translocadas, simultaneamente, através das membranas
interna e externa, em locais especializados onde há justaposição de ambas. À
medida que é translocada, cada proteína é desdobrada e, a sua sequência de sinal é
removida após o processo de translocação estar completo. As proteínas chaperonas,
ajudam a puxar a proteína através das 2 membranas e depois a redobrá-la dentro.
No caso de ser necessário um transporte subsequente dentro do organelo para um
local especifico (membrana interna, externa, tilacoides…) isso requer mais sinais na
proteína – que geralmente só são expostos após a remoção da primeira sequência
de sinal. Além de proteínas, o crescimento e manutenção das mitocôndrias e
cloroplastos exige a importação de lípidos (incorporados nas membranas); a maioria
dos fosfolípidos é importada do RE (principal local de síntese de lípidos). Os
fosfolípidos são transportados por proteínas transportadoras de lípidos que extraem
um fosfolípido de uma membrana e entrega-o noutra – este transporte geralmente
ocorre em junções especificas onde as membranas de diferentes organelos são
mantidas juntas; ao controlar quais lípidos são transportados, as membranas são
capazes de manter diferentes composições lipídicas.
Os peroxissomas contém enzimas que digerem toxinas e sintetizam certos
fosfolípidos – incluindo os presentes na bainha de mielina; os peroxissomas
adquirem a maior parte das suas proteínas via transporte seletivo do citosol. Muitas
das proteínas peroxissomais contêm uma sequência de apenas 3 aminoácidos (sinal
de importação), que é reconhecido por recetores no citosol. Tal como acontece nas
mitocôndrias e cloroplastos, a membrana do peroxissoma contém um transladador
que auxilia no transporte de proteínas; mas, ao contrário do que acontece nestes 2
organelos, as proteínas não precisam de se desdobrar para entrar no peroxissoma.
Embora a maioria das proteínas peroxissomais venham do citosol, há algumas que
chegam por vesicula que brotam do RE: podem-se fundir com peroxissomas pré-
existentes ou, através da importação de proteínas do citosol, formarem novos
peroxissomas. A síndrome de Zellweger demonstra a importância crucial dos
peroxissomas no funcionamento das células e na saúde dos organismos.
O reticulo endoplasmático serve de ponto de entrada para várias proteínas
destinadas a outros organelos, bem como ao próprio RE; proteínas destinadas ao
golgi, endossomas, lisossomas e membrana plasmática entram no RE (a partir do
citosol) e são transportadas por vesiculas de transporte de organelo em organelo
dentro do sistema endomembranar. Há 2 tipos de proteínas que são transferidas do
citosol para o RE: 1) proteínas solúveis em água, que são completamente
translocadas através da membrana do RE e são libertadas no lúmen do mesmo; e 2)
proteínas transmembranares que são apenas parcialmente translocadas através da
membrana do RE e ficam incorporadas nela. Proteínas hidrossolúveis destinam-se a
ser secretadas ou ficam no lúmen de um organelo do sistema endomembranar. As
proteínas transmembranares destinam-se a residir na membrana de um desses
organelos ou na membrana plasmática.
Todas as proteínas são primeiro direcionadas ao RE por uma sequência de sinal de
RE (8 aminoácidos hidrofóbicos); ao contrário do que acontece nos organelos que
vimos até agora, a maioria das proteínas que entram no RE começam a ser lá enfiadas
antes que a cadeia polipeptídica tenha sido completamente sintetizada – isto implica
que o ribossoma que sintetiza a proteína, esteja ligado à membrana do RE (RE
Rugoso). Logo, há 2 tipos de ribossomas: os que estão ligados ao lado citosólico da
membrana do RE (e membrana externa núcleo) que produzem proteínas que estão
a ser translocadas para o RE; e os ribossomas livres, não ligados a nenhuma
membrana, estão a produzir todas as outras proteínas codificadas por DNA nuclear.
Em termos de estrutura e funcionalmente, ambos os ribossomas são idênticos;
diferem apenas nas proteínas que produzem.
No caso de o ribossoma estar a produzir uma proteína com sequência de sinal de RE,
essa sequência direciona o ribossoma para a membrana do RE – proteínas são
translocadas à medida que são produzidas, sem gasto de energia adicional para os
eu transporte – o alongamento da cadeia polipeptídica fornece o impulso necessário
para empurrar a cadeia em crescimento através da membrana do RE. Quando um
mRNA é traduzido, ligam-se a ela vários ribossomas – polirribossoma; quando esse
mRNA dirige a síntese de uma proteína com sinal RE, o polirribossoma fica ancorado
à membrana do RE.
Há 2 componentes que ajudam a guiar as sequências de sinal RE, para a membrana
do RE: 1) (SRP- signal recognition particule) que
se liga ao ribossoma e à sequência de sinal do RE à medida que esta emerge do
ribossoma; e 2) um , que está embutido na membrana do RE e reconhece
a SRP. A ligação de uma SRP a um ribossoma – que tem a sequência de sinal RE –
atrasa a síntese proteica, até que a SRP interaja com um recetor SRP no RE. Uma vez
ligados (SRP + recetor SRP) a SRP é libertada, e o ribossoma passa do recetor para
um translocador proteico, na membrana do RE, e a síntese proteica recomeça  o
polipéptido é enfiado através da membrana do RE, através de um canal no
translocador. No fundo, a SRP e o recetor SRP funcionam como casamenteiros,
reunindo os ribossomas (que sintetizam proteínas com sequência sinal RE) e os
translocadores de proteínas dentro da membrana do RE.
Além de direcionar as proteínas para o RE, as sequências de sinal (terminal N),
funcionam para abrir o translocador de proteínas; esta sequência fica ligada ao
translocador, enquanto o resto do polipéptido é enfiado através da membrana como
uma alça; a sequência de sinal é depois removida por uma peptidase de sinal e,
depois de clivada é libertada do translocador para a bicamada e rapidamente
degradada. Depois que o terminal C da proteína passou pelo translocador, a proteína
é libertada no lúmen do RE.
Nem todas as proteínas produzidas pelos ribossomas ligados ao RE, vão ser
libertadas no lúmen do RE – algumas vão permanecer embutidas na membrana do
RE como . O processo de translocação destas é
diferente: partes da cadeia polipeptídica têm de ser completamente translocadas,
outras têm de ficar fixas dentro da membrana. No caso da proteína transmembranar
ter apenas 1 único segmento que atravessa a membrana, a sequência de sinal N-
terminal inicia a translocação (como fazia no caso acima); mas o processo de
transferência é interrompido por uma sequência adicional – sequência de paragem
de transferência – mais à frente na cadeia polipeptídica. Nesse ponto, o translocador
liberta lateralmente a cadeia polipeptídica em crescimento; a sequência N-terminal
é clivada, e a sequência de paragem de transferência permanece na bicamada – onde
forma um segmento x-helicoidal com a membrana, ancorando a proteína na
membrana. Assim, a proteína termina como proteína transmembranar de passagem
única inserida na membrana e com orientação definida (terminal N no lado lúmen,
e o terminal C no lado citosólico).
Em algumas proteínas transmembranares, é usada uma sequência de sinal de início,
em vez da N-terminal e, nestes casos essa sequência nunca é removida do
polipéptido – isto acontece com proteínas transmembranares que atravessam a
bicamada várias vezes. Nestes casos, acredita-se que as sequências de sinal
funcionem em pares: uma sequência de sinal de início, serve para iniciar a
translocação, que continua até encontrar uma sequência de paragem – as duas
sequências são libertadas na bicamada (onde formam x-hélices que atravessam a
membrana). Em proteínas com múltiplas passagens complexas, há muitas x-hélices
que atravessam a bicamada, há pares adicionais de sequências de inicio e de
paragem (uma sequência reinicia a translocação mais abaixo na cadeia e a outra
interrompe a translocação e causa a libertação de polipéptidos, e por aí em diante).
Entrar no lúmen ou na membrana do RE, normalmente é apenas o primeiro passo
para chegar noutro destino; pelo menos inicialmente, esse destino passa pelo golgi
– proteínas são lá modificadas e classificadas para serem enviadas a outros locais. O
transporte REGolgioutros organelos sistema endomembranar é feito por
. Esse transporte vesicular fornece rotas de comunicação
entre o interior e exterior célula. Uma via de secreção externa começa com a síntese
de proteínas na membrana RE lúmen RE  Golgi  superfície célula (através dos
endossomas e lisossomas – exocitose); a via endocítica interna move materiais da
membrana, através dos endossomas até aos lisossomas (endocitose).
Cada vesicula deve levar consigo apenas as proteínas apropriadas ao destino e deve
apenas fundir-se com a membrana alvo apropriada. As vesiculas têm um
revestimento proteico distinto na sua superfície citosólica- vesiculas revestidas;
depois de sair do organelo de origem, as vesiculas perdem esse revestimento,
permitindo que a sua membrana interaja com a membrana à qual se vão fundir. O
revestimento tem como função ajudar a moldar a membrana e ajuda a capturar
moléculas para um transporte posterior. Há vários tipos de vesiculas, com diferentes
revestimentos, mas as mais estudadas são as
, que tanto saem do aparelho de golgi (via secretora) como da membrana
plasmática (via endocítica); na membrana plasmática, cada vesicula começa como
um poço revestido de clatrina – as moléculas da clatrina agrupam-se em rede, tipo
“cesta” na superfície citosólica da membrana, começando a moldá-la em vesicula.
Uma proteína de ligação ao GTP – dinamina – coloca-se ao redor dos poços
invaginados de clatrina; juntamente com outras proteínas, a dinamina faz com esses
poços se contraiam, separando a vesicula da sua membrana original.
A clatrina não desempenha nenhum papel em escolher a carga que as vesiculas
transportam; essa é função de uma outra classe de proteínas de revestimento –
adaptinas – que fixam o revestimento de clatrina e ajudam a selecionar as moléculas
para transporte. As moléculas de transporte têm sinais específicos, reconhecidos por
recetores no golgi ou na membrana; as adaptinas ajudam a capturar moléculas
especificas, prendendo os recetores que as ligam – ficamos com um conjunto
selecionado de moléculas, ligadas aos seus recetores, são incorporadas no lúmen da
vesícula revestida de clatrina. Há diferentes tipos de adaptinas: as que se ligam aos
recetores de carga no golgi não são as mesmas que se ligam aos recetores de carga
na membrana  reflete as diferenças nas moléculas que vão ser transportadas por
cada uma delas. Outra classe de vesiculas – , estão
envolvidas no transporte de moléculas entre REgolgi e dentro do próprio golgi.
Depois disto, a vesícula tem de encontrar o caminho certo para chegar ao seu destino
e entregar o conteúdo (transportada por proteínas motoras ao longo citoesqueleto).
Uma vez atingido o alvo, a vesícula deve reconhecer o organelo em questão para
que haja fusão com a membrana alvo. O transporte vesicular é impressionantemente
especifico, tanto é que cada tipo de vesicula apresenta marcadores moleculares na
sua superfície que identificam a vesicula de acordo com a sua origem e carga. Esses
marcadores devem ser reconhecidos por recetores (que lhe são complementares) na
membrana alvo. Esse processo de identificação depende de uma família de GTPases
chamadas proteínas Rab. Essas proteínas Rab na superfície de cada vesicula, são
reconhecidas por proteínas de ancoragem – que lhe são correspondentes na
superfície citosólica da membrana alvo. Cada organelo e cada vesicula carrega uma
combinação única de proteínas Rab – servem de marcadores moleculares; o sistema
de correspondência entre proteínas Rab e as de ancoragem, ajuda a garantir que as
vesiculas se fundem apenas com a membrana certa.
Um reconhecimento adicional é fornecido por uma família de proteínas
transmembranares: SNAREs; uma vez que a proteína de ancoragem capte a vesicula
(com a proteína Rab), os SNAREs na vesicula – v-SNAREs – interagem com os SNARES
complementares na membrana alvo – t-SNAREs – ancorando a vesicula no sítio
certo. Os SNAREs envolvidos nessa ancoragem, também têm um papel central em
catalisar a fusão da membrana  essa fusão implica que a vesicula entregue o seu
conteúdo solúvel e adicione a sua membrana à membrada do organelo.
O encaixe requer apenas que as 2 membranas se aproximem o suficiente para que
as SNAREs interajam; já a fusão da vesicula com a membrana alvo requer uma
aproximação muito maior (para que os lípidos das 2 camadas se misturem): essa
aproximação é conseguida pela força das SNAREs, que provoca uma deslocação da
água que está entre as 2 membrana/espremem a água que está presa entre as 2
membranas (processo altamente desfavorável a nível energético). Quando a fusão é
desencadeada, os v-SNAREs e t-SNAREs envolvem-se firmemente, atuando com um
gancho que junta as 2 bicamadas.
O tráfego vesicular não se limita ao interior da célula, mas estende-se para lá da
membrana plasmática; proteínas, lípidos vão desde o RE-Golgi-superfície célula, em
vesiculas de transporte . Cada molécula que passa ao longo desta via
secretora, passa por uma sequência fixa de organelos e, é monitorizada para verificar
se foi adequadamente dobrada de forma a garantir que apenas moléculas com
qualidade chegam à superfície da célula.
A maioria das proteínas que entram no RE são quimicamente modificadas lá: as
ligações dissulfeto são formadas pela oxidação de pares das cadeias laterais da
cisteína – reação catalisada por uma enzima que está no lúmen do RE; estas ligações
não se formam no citosol porque o ambiente lá é reduzido. Estas ligações dissulfeto
ajudam a estabilizar a estrutura das proteínas, que vão encontrar enzimas
degradativas e mudanças de pH fora da célula.
Muitas das proteínas que entram no lúmen ou na membrana do RE são convertidas
em no RE, pela ligação covalente de cadeias laterais de
oligossacarideos  glicosilação. Este processo é realizado por enzimas glicosilantes
presentes no RE, mas não no citosol (as poucas proteínas glicosiladas do citosol só
têm 1 açúcar a elas ligado). Os oligossacarideos ligados às proteínas exercem várias
funções: protegem proteínas de degradação; mantém-nas no RE até que estejam
devidamente dobradas; e servem de sinal de transporte, ajudando a guiar as
proteínas até ao organelo apropriado. Quando os oligossacarideos são exibidos na
superfície da célula, eles fazem parte do glicocálice – ajuda no reconhecimento
célula-célula.
No RE, os açúcares não são adicionados um a um para formar a cadeia lateral de
oligossacarideos; em vez disso, um oligossacarideo pré-formado com 14 açúcares é
ligado em bloco a todas as proteínas que possuam um local apropriado para a
glicosilação. Esse oligossacarideo está, inicialmente, ligado a um lípido – dolicol – na
membrana do RE; assim que a cadeia lateral de uma asparagina (Asn) surja no lúmen
do RE, quando a proteína ainda está a ser translocada, o oligossacarideo é então
transferido para o grupo amina NH2 da cadeia lateral da asparagina. Essa adição dá-
se numa única etapa, catalisada por uma enzima que está ligada à membrana –
oligossacaril transferase – que tem o seu sitio ativo exposto apenas no lado luminal
da membrana do RE (explica porque as proteínas citosólicas não são glicosiladas
desta forma).
Uma sequência de 3 aminoácidos – (1 dos quais sempre a asparagina:
asparagina+X+serina ou asparagina+X+treonina, com X podendo ser quase qualquer
aminoácido) – é que define em que locais a proteína recebe o oligossacarideo. As
cadeias laterais dos oligossacarideos ligados a um grupo amina da asparagina, são
chamadas N-ligadas (tipo mais comum de ligação encontrado em glicoproteínas). A
ligação deste oligossacarideo de 14 açúcares é apenas o início de uma série de
modificações adicionais antes que a glicoproteína madura atinja a superfície celular;
este processamento de oligossacarídeos começa no RE e continua no aparelho de
golgi.
Algumas proteínas, no entanto, são feitas para funcionar no RE e, como tal, são lá
retidas porque possuem uma sequência C-terminal de 4 aminoácidos chamada sinal
de retenção do RE. Esse sinal de retenção é reconhecido por um recetor que está
ligado à membrana do RE e do golgi. Contudo, a maioria das proteínas são destinadas
a outros locais que não o RE e, neste caso, são empacotadas em vesiculas que saem
do RE e se fundem com o golgi - esta saída do RE é altamente seletiva: proteínas
incorretamente dobradas ou complexos proteicos mal montados, são retidos no RE
pela ligação de proteínas chaperonas. As chaperonas mantêm essas proteínas no RE
até que se dobrem e montem de forma adequada; as chaperonas orientam as
proteínas no caminho certo, mas se mesmo assim não forem capazes de se dobrarem
corretamente, são exportadas para o citosol, onde são degradadas por um
proteossoma. No caso dos anticorpos (molécula com 4 cadeias polipeptídicas) são
montadas no RE, mas são lá retidos até que todas a 4 cadeias estejam montadas – se
a montagem não é adequada, são degradados. Este mecanismo de controlo de
qualidade das proteínas que são exportadas para o golgi é bastante eficiente;
exemplo disso é a doença fibrose cística, em que os portadores produzem uma
proteína ligeiramente mal dobrada, mas que poderia funcionar corretamente, mas é
retida no RE e depois degradada. Neste caso, a doença não ocorre porque uma
mutação inativa uma proteína importante, mas sim porque a proteína ativa é
descartada pelas células, antes de ter oportunidade de funcionar.
Embora as chaperonas ajudem as proteínas no RE a se dobrarem corretamente e
retêm as que não o fazem, este sistema de controlo de qualidade pode ficar
sobrecarregado; quando isso acontece, acumulam-se proteínas mal dobradas no RE.
Se esse acumulo for grande o suficiente, aciona um programa chamado resposta da
proteína desdobrada (UPR) – estimula a célula a produzir mais RE e mais
chaperonas; o UPR permite que a célula ajuste o tamanho do RE para lidar com o
volume de proteínas que entram na via secretora. No entanto, algumas vezes,
mesmo um RE expandido não é o suficiente para acompanhar a demanda e, neste
caso a UPR direciona a célula para apoptose. Na diabetes adulta, os tecidos tornam-
se resistentes à insulina; para compensar essa resistência, as células do pâncreas
produzem cada vez mais insulina; chega a um ponto que o RE atinge a sua capacidade
máxima e a UPR desencadeia a morte celular; as células secretoras de insulina vão
ser eliminadas – diabetes.
O aparelho de golgi está localizado próximo ao núcleo e, nas células animais está
próximo ao centrossoma; o golgi consiste numa coleção de sacos/cisternas
empilhados em formas de pilhas; cada pilha contém 3 a 20 cisternas e o nº de pilhas
depende muito do tipo de célula. Cada pilha tem 2 faces: uma face de entrada (cis)
e uma face de saída (trans). A cis é adjacente ao RE, enquanto a trans aponta para a
membrana plasmática. As proteínas solúveis entram na zona cis através de vesiculas
de transporte vindas do RE e, percorrem as cisternas de 2 maneiras: por meio de
vesiculas que brotam de uma cisterna e se fundem com a próxima; e por um processo
de maturação em que as próprias cisternas migram através das pilhas. Depois disso,
as proteínas saem da zona trans em vesiculas destinadas à superfície celular ou a
outro organelo. Muitas das cadeias de oligossacarídeos que são adicionados às
proteínas do RE sofrem modificações adicionais no golgi.
Todas as células eucarióticas têm um fluxo constante de vesiculas que saem da rede
trans do golgi e se fundem com a membrana plasmática, pelo processo de exocitose;
essa supre a membrana com lípidos e proteínas
permitindo que esta se expanda antes da divisão celular e se renove. A via
constitutiva também transporta proteínas para a superfície celular para serem
libertadas para o exterior, num processo chamado secreção. Algumas dessas
proteínas ficam na superfície da célula, outras são incorporadas na matriz
extracelular e outras ainda difundem-se no liquido extracelular para nutrir ou
sinalizar outras células. Esta entrada na via construtiva não requer uma sequência de
sinal – como aquela que direciona proteínas para endossomas ou para RE.
Além da via de exocitose constitutiva (opera continuamente na célula), a
opera apenas em células especializadas em secreção: a célula
secretora produz grandes quantidades de um produto especifico – hormonas,
enzimas digestivas… - que são armazenadas em vesiculas para libertação posterior.
Essas vesiculas brotam da rede trans do golgi, acumulam-se perto da membrana
plasmática e lá aguardam por um sinal extracelular que os estimula a se fundirem
com a membrana, de forma a libertar o seu conteúdo para o exterior da célula por
exocitose ( glicose sangue, sinaliza as células produtoras de insulina a libertarem
esta hormona).
No caso de proteínas destinadas à secreção regulada são classificadas e empacotadas
na rede trans do golgi: estas proteínas têm propriedades especiais na sua superfície
que as fazem agregar-se uma às outras sob condições iónicas que prevalecem na
rede trans do golgi (pH ácido, alto nível Ca2+). Estas proteínas agregadas são
empacotadas em vesiculas, separam-se da rede trans e aguardam o sinal para se
fundirem com a membrana plasmática. Já as proteínas secretadas pela via
constitutiva não se agregam e são transportadas automaticamente para a
membrana pelas vesiculas. A agregação seletiva permite que as proteínas secretoras
sejam empacotadas em vesiculas em concentrações muito maiores do que as
concentrações das proteínas não agregadas, no lúmen do golgi  permite libertação
de grandes quantidades de uma proteína quando acionada esta necessidade.
Quando a vesicula se funde com a membrana, descarrega o seu conteúdo e a sua
membrana passa a fazer parte da membrana plasmática – isto não aumenta muito a
área de superfície porque os componentes são removidos de outras regiões por
endocitose quase tao rápido quanto são adicionados por exocitose. Esta remoção
leva lípidos e proteínas de volta ao golgi para serem usados novamente.
As células eucarióticas estão constantemente a absorver fluido e moléculas (grandes
e pequenas) pelo processo de endocitose; o material a ser ingerido é
progressivamente envolto por uma pequena porção da membrana que se separa
para formar uma vesicula endocítica intracelular. Os materiais ingeridos são
entregues aos endossomas – que os podem reciclar para a membrana ou enviá-los
aos lisossomas para digestão.
A endocitose, dependendo do conteúdo e do tamanho das vesiculas formadas pode
ser: pinocitose: envolve ingestão de líquido e moléculas através de vesiculas
pequenas (<150nm) ou fagocitose: envolve a ingestão de partículas grandes, como
microrganismos e restos celulares, através de vesiculas grandes (fagossomas,
>250nm). Todas as células ingerem continuamente fluidos por pinocitose, mas só as
células fagocíticas especializadas ingerem partículas grandes por fagocitose.
A fagocitose é usada pelos protozoários como forma de alimentação: esses seres
ingerem partículas grandes e levam-nos para os fagossomas, que se fundem com os
lisossomas onde as partículas de alimento são digeridas. Poucas células são capazes
de ingerir partículas grandes de forma eficiente. Ainda assim, a fagocitose é
importante para outros fins que não só a nutrição: os macrófagos defendem-nos
contra infeções por ingestão de microrganismos invasores. Para serem absorvidas
por macrófagos, as partículas devem primeiro ligar-se à superfície da célula fagocítica
e ativar um dos vários recetores de superfície. Alguns desses recetores reconhecem
anticorpos (proteínas que nos ajudam a proteger contra infeções) unindo-se à
superfície dos microrganismos. A ligação de bactérias, revestidas com anticorpos, a
esses recetores, induz a célula fagocítica a estender projeções – pseudópodes – que
englobam a bactéria; esses pseudópodes fundem as suas pontas para formar um
fagossoma, que se funde com um lisossoma onde a bactéria é destruída. Algumas
bactérias desenvolveram mecanismos para contrariar este sistema: o agente
responsável pela tuberculose (Mycobacterium tuberculosis) impede a fusão da
membrana que une o fagossoma ao lisossoma – em vez de destruído, o patogénio
sobrevive e multiplica-se dentro do macrófago. Além destas funções, as células
fagocíticas também desempenham papel na eliminação de células mortas e
danificadas e detritos celulares.
As células eucarióticas ingerem continuamente pequenos pedaços da membrana,
juntamente com liquido extracelular, pelo processo de pinocitose. A taxa no qual a
membrana é capturada nestas vesículas varia entre os tipos celulares. No entanto, a
área e o volume total da célula permanecem inalterados, a quantidade de membrana
adicionada à superfície por exocitose é semelhante à removida por endocitose. A
pinocitose é realizada pelas vesículas revestidas de clatrina que, depois de se
soltarem da membrana plasmática, perdem o seu revestimento e fundem-se com
um endossoma. O conteúdo que estas vesículas carregam também contém fluido
extracelular – essa ingestão de liquido pelas vesiculas pinociticas revestidas de
clatrina é equilibrada pela perda de liquido durante a exocitose.
O processo de pinocitose pode ser mais seletivo (do que simplesmente capturar
quaisquer moléculas presentes no líquido extracelular); macromoléculas especificas
podem ser capturadas através destas vesículas revestidas de clatrina. As
macromoléculas ligam-se a recetores na superfície da celular e entram na célula
como complexos recetor-macromolécula em vesiculas revestidas de clatrina 
. Este processo fornece um mecanismo de
concentração seletiva que aumenta a eficiência com que as macromoléculas
especificas são capturadas.
Exemplo disto é o colesterol, que precisa de ser capturado para fazer uma nova
membrana: o colesterol circula na corrente sanguínea ligado a proteínas, formando
lipoproteínas LDL. Essas LDL ligam-se a recetores da superfície celular formando
complexos recetor-LDL; esses complexos são ingeridos pela célula por endocitose
mediada por recetor e entregue aos endossomas; o interior dos endossomas é mais
ácido e faz com que o LDL se dissocie do seu recetor – LDL é libertado nos lisossomas,
já sem o recetor (que vai ser devolvido à membrana para reutilização). Nos
lisossomas, o LDL é decomposto por enzimas hidrolíticas e o colesterol escapa para
o citosol onde pode ser usado para sintetizar membranas. No caso de indivíduos com
defeitos no gene que codifica o recetor de LDL, as células não são capazes de
absorver LDL, logo o colesterol acumula-se no sangue.
Também outros metabolitos como vit B12 e o ferro, são captados por endocitose
mediada por recetor; estas substâncias entram nas hemácias imaturas como parte
de um complexo com os seus respetivos recetores. Infelizmente, a endocitose
mediada por recetor também é explorada por vírus como o da gripe e o HIV, que
entram nas células desta maneira.
Quando se marca com fluorescência o fluido extracelular com células vivas, é possível
observar em ação o compartimento endossomal – isto revelou que este
compartimento é composto por um conjunto conectado de tubos membranares a
vesiculas grandes. Há 2 tipos de endossomas que podemos distinguir: os
endossomas iniciais (aparecem primeiro) e os endossomas tardios. No caso dos
endossomas iniciais, eles amadurecem gradualmente até se transformarem em
tardios à medida que se fundem entre si ou com um endossoma tardio pré-existente.
O interior do endossoma é mantido ácido (pH 5-6) através de uma bomba de H+
acionada por ATP na membrana do endossoma, que bombeia H+ para o seu lúmen a
partir do citosol. O compartimento endossomal atua como estacão de triagem na via
endocítica interna, tal como na via secretora atuavam as redes do golgi; o ambiente
ácido do endossoma desempenha um papel importante na classificação porque faz
com que alguns dos recetores libertem a carga a que estão ligados. O caminho que
os recetores fazem, depois de entrarem nos endossomas diferem de acordo com o
tipo de recetor: a maioria retoma ao domínio da membrana da qual vieram (como o
recetor LDL); outros vão até aos lisossomas onde são degradados; e outros
prosseguem para um domínio diferentes da membrana, transferindo as moléculas
de carga às quais estão ligadas, através do espaço extracelular até outro local pelo
processo de transcitose. A carga que continua ligada aos recetores, partilha o destino
dos próprios recetores; os que se dissociam serão destruídos nos lisossomas. Esta
digestão inicia-se logo no endossoma tardio que possui algumas enzimas
lisossómicas.
Muitas partículas e moléculas extracelulares acabam nos lisossomas, que contêm
enzimas hidrolíticas que realizam a digestão intracelular controlada. Enzimas essas
que estão ativas nas condições ácidas, como o pH 5 mantidos dentro dos lisossomas.
A membrana do lisossoma mantém essas enzimas destrutivas fora do citosol (que
tem um pH 7,2) mas como as enzimas precisam de um sítio ácido, o conteúdo do
citosol está protegido de danos, caso algumas destas enzimas escape dos lisossomas.
A membrana dos lisossomas contém transportadores que permitem que os
produtos da digestão – aminoácidos, açúcares, nucleótidos – sejam transferidos para
o citosol. A membrana possui uma bomba de H+ acionada por ATP, que bombeia H+
para o lisossoma, mantendo o seu interior com pH ácido (semelhante ao que
acontece nos endossomas). A maioria das proteínas da membrana do lisossoma são
glicosiladas – os açúcares cobrem grande parte da superfície das proteínas voltadas
para o lúmen do lisossoma, protegendo as proteínas da digestão pelas protéases
lisossomais.
Os materiais que chegam aos lisossomas podem vir de partículas extracelulares
absorvidas por fagossomas, que se fundem com os lisossomas e, o fluido extracelular
e as macromoléculas são absorvidos por vesiculas que entregam o seu conteúdo aos
endossomas que depois entregam aos lisossomas. No entanto, também uma outra
via fornece materiais aos lisossomas – autofagia: usada para degradar partes
obsoletas da célula. Neste caso, se for autofagia de mitocôndria velha, esse organelo
é fechado por uma membrana dupla, criando um autofagossoma, que se funde com
um lisossoma. A autofagia (muitas vezes de proteínas marcadas com ubiquitina) é
maior quando há fome ou necessidade de renovação extensa.