Colorao de Gram

A colorao de Gram recebeu este nome em homenagem a seu descobridor, o mdico

dinamarqus Hans Cristian Joaquim Gram. Em 1884, Gram observou que as bactrias
adquiriram cores diferentes, quando tratadas com diferentes corantes. Isso permitiu
classific-las em dois grupos distintos: as que ficavam roxas, que foram chamadas de
Gram-positivas, e as que ficavam vermelhas, chamadas de Gram-negativas. Aps
descrio do mtodo, inmeras propostas de modificao foram feitas.
O mtodo tintorial predominante utilizado em bacteriologia o mtodo de Gram. A
bacterioscopia, aps colorao pelo mtodo de Gram com diagnstico presuntivo, de
triagem, ou at mesmo confirmatrio em alguns casos, constituindo-se uma pea
importante e fundamental. Essa tcnica simples, rpida e tem capacidade de resoluo,
permitindo o correto diagnstico em cerca de 80% dos pacientes em carter de pronto
atendimento em nvel local.
Os custos com investimento e manuteno so consideravelmente baixos diante da
eficcia alcanada com os resultados imediatos dos testes. Essa tcnica requer instalao
simples, necessitando apenas de uma sala pequena com disponibilidade de gua e gs,
onde dever ser instalado um balco com pia e um bico de Bunsen, eventualmente
substitudo por uma lamparina ou espiriteira. So ainda necessrios: microscpio com
objetiva de imerso e bateria para a colorao de Gram. Os corantes devem ser
preparados pelo prprio laboratrio ou por um laboratrio habitado que assegure a
qualidade do produto. Finalmente, e mais importante, so necessrios tcnicos de
laboratrio treinados, responsveis e conscientes do valor do seu trabalho.
Princpio
Nas bactrias Gram-positivas a parede celular formada principalmente por cidos
teicicos e nas bactrias Gram-negativas, formada principalmente por lipdeos. Por
possurem grande quantidade de cidos teicicos, aps a colorao, as Gram-positivas
formam um complexo corado azul intenso, que no removido facilmente com lcoolacetona. As Gram-negativas no retm a colorao aps o tratamento com lcoolacetona e so reveladas posteriormente com soluo de fucsina ou safranina,
apresentando-se na colorao avermelhada.

Variaes
A tcnica de colorao de Gram geralmente respeita um protocolo de aes que a
padroniza. Contudo, h variantes nesse procedimento relacionadas aos tempos de
execuo da colorao e utilizao de lavagem com gua em dadas etapas que podem
ou no interferir na visualizao das estruturas coradas.
Como exemplo, o mtodo original utiliza violeta-de-genciana. Hoje se utiliza um outro
tipo de cristal violeta, a violeta-de-metila. importante ressaltar que a soluo de
violeta-de-metila, em sua preparao, j contm fixador qumico. Entretanto, a
modificao mais importante foi a do corante secundrio, tambm chamado de corante
de fundo. A fucsina fenicada de Gram foi substituda pela safranina baseado no espectro

de cores, j que esta ltima mantm-se mais distante da violeta no espectro de cor,
diferenciando com maior nitidez as bactrias Gram-negativas.
Procedimento
1. Cubra o esfregao com cristal violeta e deixe por aproximadamente 1 minuto;
2. Escorra o corante e lave em um filete de gua corrente;
3. Cubra a lmina com lugol e deixe agir por aproximadamente 1 minuto;
4. Escorra o lugol e lave em um filete de gua corrente;
5. Adicione lcool-acetona sobre a lmina; descorando-a, at que no desprenda mais
corante;
6. Lave em um filete de gua corrente;
7. Cubra a lmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;
8. Lave em um filete de gua corrente;
9. Deixe secar ao ar livre;
10. Coloque uma gota de leo de imerso sobre o esfregao;
11. Leia em objetiva de imerso (100 X).