Outros métodos de preparo

de amostras

Camila Muniz
Izabella Araujo
Guilherme
Maria Adriana
Tatiana Vieira
Vinicius Rodrigues
 Fases de acesso restrito (RAM)
• Promovem a exclusão não adsortiva de
macromoléculas com retenção das
micromoléculas de interesse
• As fases estacionárias combinam os princípios
da Cromatografia de Exclusão e da
Cromatografia de Fase Reversa, uma vez que
sua superfície hidrofílica impede a adsorção
de macromoléculas da matriz biológica na fase
estacionária e suas propriedades hidrofóbicas
são responsáveis pela retenção das
micromoléculas
As fases RAM podem ser utilizadas de dois
modos :
• A amostra biológica não tratada é injetada
diretamente na coluna e, após exclusão das
macromoléculas, os xenobióticos são
analisados por eluição gradiente1.
Desvantagem : intensa absorção dos
componentes da matriz, flutuação da linha de
base
• Na cromatografia multidimensional, a coluna
RAM é usada como pré-coluna e, após a
eluição das macromoléculas, os analitos são
transferidos para uma coluna analítica,
utilizando-se uma válvula de comutação, onde
são separados e analisados
Classificação
Presença de regiao interna hidrofilica
e regiao externa hidrofobica.
Superfície Ex: IRSP (Internal SurfaceReversed
Bimodal Phase), ADS (Alkyl-Diol-Silica) e as
SPS (Semi-Permeable-Surface)

Ambas as superficies são de silica

com características hidrofobicas e
Superfície hidrofilicas
unimodal Ex: fases MMP /MFP (Mixed-Mode-
Phase /Mixed -Function Phase) e as
SHP(Shielded Hidrophobic Phase)
Polimeros de impressão molecular
• Anticorpos são ligados covalentemente a um
sorvente apropriado (silica porosa),
originando os imunossorventes,
posteriormente colocados em cartuchos de
extração em fase solida ou em colunas
cromatrograficas
• Vantagens dos MIP em relação aos materiais
biológicos (enzimas e anticorpos): fácil preparo,
baixo custo; possibilidade de síntese em situações
onde nenhuma biomolécula (receptor ou enzima)
se encontra disponível ou quando elas possuem
um alto preço e, resistência a ambientes adversos,
nos quais biomoléculas naturais não resistiriam,
como na presença de ácidos, bases, íons
metálicos, solventes orgânicos, altas temperaturas
e alta pressão. 2,3. Podem ser armazenados a seco
em temperatura ambiente por longos períodos de
tempo, sem perda do desempenho inicial.
Vantagens dos MIP em relação aos materiais
biológicos (enzimas e anticorpos):

Baixo custo
 Referencias
• 1 - Cortes, H. J.; Multidimensional
Chromatography: Techniques and
Applications, Marcel Dekker: New York, 1990. 
• 2. Haupt, K.; Mosbach, K.; Biochem. Soc. Trans.
1999, 27, 344.        [ Links ]
• 3. Piletsky, S.; Alcock, S.; Turner A. P. F.; Trends
Biotechnol. 2001, 19, 9.