Mini-curso

Micropipetas: Funcionamento, Uso Correto e Manuteno

Amlia Gesa Gama Juliana Ap. Ferreira Mrio H. Gonzalez
Maro de 2009

Sumrio
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11.

Tipos de amostras Tipos de micropipetas (deslocamento positivo e deslocamento de ar) princpios de funcionamento Adequao da micropipeta ao tipo de amostra Dicas para melhor performance na pipetagem Procedimentos de pipetagem Uso correto da micropipeta Fontes de erro na pipetagem Problemas Limpeza Externa Limpeza Interna Cuidados

Tipos de Amostras
Aquosas Quantidade Preciso Viscosas Reprodutibilidade Lquidos mais volteis e densos Amostras Radioativas e Corrosivas Especificidade Menor dano ao usurio e ao instrumento DNA, RNA, Amostras Biolgicas Filtros autoclavados Capilares e pistes esterilizados Preciso e menores contaminaes

Tipos de Micropipetas
Deslocamento Positivo

Deslocamento Positivo
Haste

1. Amostras problemticas (viscosas, densas, volteis, radioativas, corrosivas) 2. Contato direto entre o pisto e a amostra 3. Pisto descartvel ( no faz parte permanente da pipeta)

Pisto descartvel Capilar descartvel

Lacre do pisto

Amostra

1. Contato entre o pisto amostra. No h volume morto, facilita amostras densas e volteis 2. Volume aspirado completamente A vedao do pisto previne contaminaes do usurio 3. Durante a disperso o pisto limpa as paredes do capilar, aumentando a preciso 4. O pisto e capilar devem ser trocados, depois de cada amostra So ejetados automaticamente

Tipos de Micropipetas
Deslocamento de Ar

Deslocamento de Ar
1. Recomendvel para amostras aquosas e para trabalhos em geral 2. Volume morto entre o pisto e a ponteira (amostra) 3. O pisto parte permanente da pipeta
Ar Pisto Haste

Ponteira

Amostra

Uso e aplicaes
NO RECOMENDVEL PARA:

Materiais volteis - presso interna e faz gotejar 1 saturar a atmosfera interna da pipeta 2 utilizar o modo reverso Materiais viscosos deslocamento da amostra mais lento e adeso parede interna da ponteira perda 1 utilizar o modo reverso rea de contato perda

Uso e aplicaes

Dicas para melhor performance na pipetagem

Encaixe da ponteira

Pressione com movimento de rotao

Evite penetrar a ponteira como se a pipeta fosse uma faca

Dicas para melhor performance na pipetagem

Melhorar reprodutibilidade: finalize o ajuste de volume sempre no sentido horrio! Volume: gire vagarosamente at obter o volume desejado, NO ultrapasse a posio desejada Volume: rotacione 1/3 de volta acima do volume desejado e retorne vagarosamente posio correta

Dicas para melhor performance na pipetagem

Melhorar exatido

Alinhamento INCORRETO: Erro

Alinhamento CORRETO: Leitura exata

Dicas para melhor performance na pipetagem

Melhorar preciso: pr-lavagem da ponteira A pr-lavagem necessria toda vez que: mudar a ponteira ajustar para um volume maior

Dicas para melhor performance na pipetagem

Pressionar o boto de modo lento e constante; Enquanto aspirar, mantenha a ponteira a uma
profundidade constante abaixo da superfcie do lquido;
Volume da micropipeta ( L) Profundidade de imerso (mm) Tempo de espera (s)

2 e 10 20 100 1000 5000

1 2-3 2-4 2-4 3-6

1 1 1 2-3 4-5

Procedimento de Pipetagem
Uso do segundo estgio
1) 2) 3) 4) 5) 6) 7)

Encaixe da ponteira Ajuste do volume Pr-lavagem da ponteira Preparo para aspirao Aspirao Dispensa Descarte da ponteira

Procedimento de Pipetagem
Uso do segundo estgio
Preparao
Posio de repouso 1 estgio 2 estgio

Aspirao

Distribuio

Dispensa

Repouso

Procedimento de Pipetagem
Modo reverso
1) 2) 3) 4) 5) 6) 7)

Encaixe da ponteira Ajuste do volume Pr-lavagem da ponteira Preparo para aspirao Aspirao Dispensa Re-aspirao

Modo reverso
Modo Normal Modo Reverso

Mesmo volume, mas com menor rea de contato com as paredes da ponteira

Volume no dispensado

Procedimento de Pipetagem
Modo reverso
Preparao Aspirao Distribuio Re-aspirao Dispensa completa

Uso correto da micropipeta

Trocar a ponteira antes de aspirar lquido, amostra ou reagente diferente; Pressione e solte o boto de modo lento e constante; NUNCA pipete lquidos onde T > 70C ou T < 4 C; NUNCA vire a pipeta de cabea para baixo NUNCA deite a pipeta enquanto houver lquido na ponteira; NUNCA utilize graxa ou silicone no pisto ou selos NUNCA tente ajustar o volume acima da especificao

Fontes de erro na pipetagem

Parmetro Profundidade de imerso da ponteira Variao da temperatura (pipeta, ambiente e ou lquido) Ponteiras vazando e mal encaixadas Reutilizao das ponteiras Ponteiras tortas Vazamento devido ao Pisto Efeito (% Vol. Nominal) At 1,0 % Influenciado por: Segurar a pipeta na posio vertical Manter a pipeta e o lquido a ser pipetado na mesma temperatura da sala Utilizar ponteiras originais e recomendadas Utilize as ponteiras uma nica vez Utilizar as ponteiras uma nica vez Verificao regular da pipeta

At 0,3 % / C De 0,5 % at 50,0 % At 4,0 % At 10,0 % De 1,0 % at 50 %

Problemas
Problema Amostra aspirada est vazando Causa do problema Ao Corretiva o Selo e oring gastos; o Trocar as duas peas; o Pisto danificado; o Enviar pipeta para reparo; o Encaixe da ponteira o Ejetar e encaixar a ponteira; inadequado; o Selo e oring gastos; o Porta-cone frouxo entupido; ou oTrocas as duas peas; o Apertar a porca de conexo ou limpar a pea; oTrocar o porta-cone; o Enviar pipeta para reparo; o Apertar a porca de conexo;

Pipeta no est aspirando

Pipeta est inexata

oPorta-cone danificado; o Pisto danificado; o Porca de conexo frouxa; o Erro na mostagem da pipeta;

Problemas
Problema Causa do problema o Porta-cone frouxo; o Porca de conexo frouxa; o Tcnica de operao incorreta; o Selo e oring gastos; o Pisto danificado; oPorta-cone danificado; oPonteiras de baixas qualidades; o Porta-cone danificado; o Ejetor de ponteiras frouxo; o Ejetor de ponteiras danificado; Ao Corretiva o Apertar a porca de conexo; o Apertar a porca de conexo; o Treinamento para o operador; o Trocar as duas peas; o Enviar a pipeta para reparo ; oTrocar o porta-cone; oUtilizar ponteiras corretas; o Trocar porta-cone; o encaixar o ejetor corretamente; o Trocar o ejetor de ponteiras;

Pipeta est imprecisa

Ponteiras caem ou no encaixam

Limpeza Externa
Remover o ejetor de ponteiras; Limpar o ejetor de ponteiras com um pano embebido em soluo de detergente; Limpar a parte externa da pipeta; Passar um pano embebido com gua destilada para enxaguar o ejetor de ponteiras e no corpo da pipeta; Recolocar

Limpeza Interna
Desmontar a pipeta; Deixar o corpo da pipeta em um local seco; Limpar as peas da parte inferior utilizando um banho de ultrasson por 20 min; Enxaguar as peas com bastante gua corrente, o ltimo enxage deve ser feito com bastante gua destilada; Deixar secar em temperatura ambiente; Montar a pipeta, para um novo uso.

Depois de pipetar lquidos cidos ou corrosivos, remova o porta-cone e lave o pisto, o selo, oring e o interior do portacone com gua destilada. Este procedimento no altera a calibrao nem prejudica o desempenho de sua pipeta!

Referncias Bibliogrficas
http://www.analiticaweb.com.br/pipetas Harris, D. C. Anlise qumica quantitativa, LTC, 6 ed, 2005.