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Eletroforese 2007
Eletroforese 2007
Eletroforese para separar e s vezes purificar macromolculas protenas e cidos nuclicos diferentes tamanhos, carga ou conformao
Quando molculas so colocadas em um campo eltrico, migram para o plo positivo ou negativo. Protenas (carga lquida negativa ou positiva) e DNA sempre negativa (fosfato)
Eletroforese ocorre dentro de uma matriz ou gel O gel submerso em um tampo que possui ons para a corrente passar E tambm para manter o pH mais ou menos constante.
Gis de Agarose possuem ampla capacidade de separao mas baixa resoluo Dependendo da concentrao podem separar fragmentos de DNA de 200 a 50.000 bp, via eletroforese.
Poliacrilamida um polmero de ligao cruzada de acrilamida. Comprimento das cadeias do polmero dependem da concentrao usada (3,5 a 20%). So mais difceis de preparar. Como oxignio inibe a polimerizao precisam ser montados entre placas de vidro.
Acrilamida: potente neurotxico e deve ser manipulado com cuidado!!! Luvas e mscaras devem ser usadas para pesar o p. A poliacrilamida considerada no txica mas luvas devem ser usadas pela possvel presena de acrilamida livre
Gis de poliacrilamida possuem baixa capacidade de separao mas alta capacidade de resoluo. Para DNA a poliacrilamida usada para separar fragmentos de menos de 500 bp. s vezes podem ser separados fragmentos com tamanho de apenas uma base de diferena. Tambm usados para separao de protenas.
http://www.stolaf.edu/people/muth/7-16-04%20007.jpg
Tampo de amostra
http://en.wikipedia.org/wiki/Agarose_gel_electrophoresis
Eletroforese Vertical
Coomassie Blue Coomassie Brilliant Blue R250, se liga inespecificamente a praticamente todas as protenas. menos sensvel que corar com a prata mas efetivo tambm, alm de ser fcil de corar.
http://www.theses.ulaval.ca/2005/22772/22772049.jpg
Mtodo da Prata
A maior vantagem a sensibilidade sobre os outros mtodos. Tipicamente 50X maior que com Coomassie* Brilliant Blue R-250. Sensibilidade maior oferece vantagens como menos amostra no gel e anlise de amostra diluda. A prata pode detectar tambm cidos nuclicos, glicoprotenas e lipoprotenas.