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Programa de Educao Continuada a Distncia

Curso de Imunologia Clnica

Aluno: EAD - Educao a Distncia Parceria entre Portal Educao e Sites Associados

Curso de Imunologia Clnica

MDULO I

Ateno: O material deste mdulo est disponvel apenas como parmetro de estudos para este Programa de Educao Continuada, proibida qualquer forma de comercializao do mesmo. Os crditos do contedo aqui contido so dados aos seus respectivos autores descritos na Bibliografia Consultada.

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MDULO I
SUMRIO

PG.
1. Introduo a Imunologia e conceitos fundamentais da imunologia clnica 1.1. Histrico 1.2. Ontogenia e hematopoese
5 6 7 9

1.3. Citocinas
2. O Sistema Imunolgico componentes e organizao funcional 2.1. Resposta imune inata e adaptativa 2.1.1. Complexo de histocompatibilidade principal 2.1.2. Processamento e apresentao de antgenos 2.1.3. Recirculao linfocitria 2.1.4. Ativao dos linfcitos T e linfcitos B 2.2. Sistema complemento 2.2.1. Via Clssica 2.2.2. Via Alternativa 2.2.3. Via das Lectinas 2.2.4. Regulao da ativao do sistema complemento 2.2.5. Funes biolgicas 2.3. Anticorpos 2.3.1. Descrio da estrutura molecular dos anticorpos 2.3.2. Propriedades e funes dos anticorpos 2.3.3. Abordagens sobre a gerao da diversidade dos anticorpos 2.3.4. Definio de afinidade e especificidade 2.3.5. Caractersticas da reao antgeno e anticorpo 3. Principais mtodos imunolgicos utilizados no diagnstico clnico 3.1. Reaes de Precipitao 3.1.1. Meio lquido 3.1.2. Meio Gelificado

11 15 18 19 20 21 24 24 25 25 26 27 29 30 30 31

32 33
33 34 35 36

3.2. Reaes de Aglutinao 3

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3.3. Reao de fixao do complemento

3.4. Reaes de citotoxicidade

3.5. Reaes imunolgicas reveladas com marcadores 3.5.1. Imunofluorescncia 3.5.2. Imunoenzimtica 3.5.3. Radioimunoensaio 3.5.4. Citometria de fluxo

3.6. Avanos tecnolgicos em Imunologia Clnica

3.6.1. "Immunoblotting"

3.6.2. PCR 4 . Determinao da eficincia das provas imunolgicas atravs da sensibilidade e 5 especificidade. 0 5 5 . Caractersticas gerais das infeces causadas por parasitas 2 5 5.1. Imunopatologia de infeces causadas por bactrias extra e intracelulares 4 5 5.1.1. Bactrias extracelulares 5 5 5.1.2. Bactrias intracelulares 8 6 5.2. Imunopatologia de infeces causadas por vrus 1 6 5.3. Imunopatologia de infeces causadas por fungos 7 6 7 . Doenas relacionadas ao sistema do complemento 1 7 7 . Doenas autoimunes 1 8 7 . Doenas imunoproliferativas 5 9 7 . Deficincias imunolgicas 6 7 10. Alergias 6 8 11. Tumores 1

3 8 3 9 3 9 3 9 4 0 4 2 4 2 4 4 4 4 4 7

12. Tolerncia e regulao imunolgica 13. Imunizaes

8 2 8 4

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1. INTRODUO A IMUNOLOGIA E CONCEITOS FUNDAMENTAIS DA IMUNOLOGIA CLNICA

A imunologia surgiu como um ramo da microbiologia e ganhou espao com os estudos das doenas infecciosas e suas respectivas respostas. A nossa capacidade de coexistir com diversos microorganismos de nosso ambiente depende de um conjunto de fatores, e um destes fatores o Sistema Imune. O Sistema Imune um conjunto de clulas de defesa e/ou ataque eficaz que tem a capacidade de distinguir o que trs perigo para o organismo e proteg-lo contra estes patgenos oportunistas. Esta distino ocorre por uma comunicao atravs de sinais mediados por citocinas e receptores. As clulas do sistema imune esto distribudas por todo organismo, sendo encontradas alojadas nos tecidos desempenhando o papel de sentinela e circulando por vasos sangneos e linfticos esperando o sinal de que o organismo foi invadido.

Independente da localizao da clula que compem o Sistema Imune, estas apresentam uma caracterstica comum, que passar uma parte da sua vida na corrente sangnea alm de que todas se originam da medula ssea. Para que o Sistema Imune desempenhe bem o seu papel de defesa e/ou ataque necessrio que seus componentes diferenciem o prprio do no prprio. Desta maneira o que no for comum ao organismo ser controlado e/ou eliminado. Embora as clulas do Sistema Imune interajam entre si ocorre uma classificao em dois grupos, as clulas que compem a imunidade Inata, e clulas que compem a imunidade Adaptativa. Uma vez entendido como os componentes do Sistema Imune interagem fica fcil discernir seu funcionamento na homeostase, bem como sua participao nos processos patogenticos que possam acometer o organismo. No entanto, no h, talvez, situao mais clara que a participao do Sistema Imune na homeostase do organismo durante uma infeco.

Sendo assim, ao entendermos os mecanismos de interao entre o hospedeiro e o patgeno fica clara a definio da Imunologia Clnica que tem o papel de investigar e orientar o clnico no diagnstico das patogenicidades atravs de resultados de

exames

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laboratoriais. O clnico precisa conhecer as estratgias traadas pelo Sistema Imune para controlar e/ou eliminar os diferentes patgenos, alm de saber as estratgias de evaso utilizadas pelos patgenos para driblar a defesa e o ataque do Sistema Imune. Obviamente, do ponto de vista imunolgico, um determinado agente infeccioso no precisa se restringir a uma nica estratgia patognica, de modo que a resposta imune eficiente contra o determinado microorganismo pode incluir diversos mecanismos.
O objetivo desta apostila fundamentar a base imunolgica do estudante interagindo os possveis resultados laboratoriais ps-infeco mediante ativao do

Sistema Imune com as estratgias de evaso dos eventuais efeitos patogenticos.

1.1. HISTRICO O conflito sade versus enfermidade sempre existiu para todo tipo de espcie de ser vivo. E desde pr-histria comum encontrar em pinturas rupestres, de homens das cavernas lambendo suas feridas, tomando muita gua e ficando prximos a fogueiras quando se tinha febre. No sculo XV ocorre o primeiro relato de que chineses e turcos tentaram introduzir imunidade atravs da variolao. E em 1546, Girolamo Frascatoro observou que o contgio de uma infeco, que passa de um para outro, se origina de partculas muito pequenas (imperceptveis). Edward Jenner, em 1798 descreve o primeiro relato de uma transferncia de imunidade com sucesso. Jenner imunizou uma criana com varola bovina que adquiriu proteo contra varola humana. Este dado conferiu a Edward Jenner o ttulo de Pai da Imunologia. Em 1879 Louis Pasteur d outro grande passo para a histria da imunologia atravs do uso das vacinas atenuadas, quando estudava as bactrias causadoras da clera. Elie Metchnikoff, em 1883 observou a fagocitose de esporos de fungos por leuccitos e antecipou que imunidade era devido s clulas brancas do sangue. Emil Von Behring e Kitasato, em 1890 estudando a toxina bactria causadora da

difteria mostraram que a transferncia de soro de animais imunes poderia conferir 6

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proteo a animais no imunizados. Este fato era devido, a componentes como antitoxinas presentes no soro dos animais imunes que eram capazes de neutralizar e precipitar as toxinas e ainda capaz de aglutinar e lisar as bactrias. Depois deste primeiro relato da proteo mediada por anticorpos outros nomes importantes surgiram nesta linha de pesquisa como Paul Ehrlich, com a teoria seletiva da especificidade dos anticorpos e Niels Jerne, com a teoria da seleo clonal. At que em 1978, Susumu Tonegawa descobre o mecanismo gentico de recombinao somtica que produz a imensa variabilidade das imunoglobulinas. Estes so alguns dos muitos nomes da histria dentro da imunologia e muitos nomes ainda esto por vir.

1.2. ONTOGENIA E HEMATOPOESE O Sistema imune nos vertebrados composto por dois sistemas, um fagocitrio e outro linfide, e tambm composto por componentes proticos que esto envolvidos na ativao enzimtica e ativao do sistema complemento. O sistema fagocitrio e os componentes do sistema complemento so filogenticamente mais antigos que o sistema linfide. Sendo que, os fagcitos esto descritos em toda a escala filogentica e os linfcitos aparecem nos vertebrados. O sistema linfide surge pela primeira vez nos peixes cartilaginosos e o mais interessante que, com o surgimento do sistema linfide surgem juntos: o timo, o bao e uma diversidade de molculas da superfamlia das imunoglobulinas (anticorpos) (Figura 1). Este um dado que intriga os pesquisadores e gera muitas discusses, j que o sistema linfide surge de repente e praticamente completo como conhecido at hoje. Do ponto de vista embriolgico, podemos observar que os trs folhetos germinativos do origem a trs sistemas distintos, do ectoderma origina o sistema nervoso, do mesoderma origina o Sistema Imunohematolgico e do endoderma origina o sistema endcrino. Estes trs sistemas guardam semelhanas no seu modo de operao e influenciam-se mutuamente, constituindo um supersistema denominado sistema neuroimuno-endcrino que , atualmente, um foco de pesquisa intensa. As clulas do Sistema Imune surgem no mesoderma nas duas primeiras semanas de vida embrionria e so denominadas clulas-tronco hematopoticas (ou do ingls hematopoietic stem cells). Estas clulas migram para o

fgado fetal, onde ocorre a 7

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maior produo durante o desenvolvimento do feto. No incio so produzidas hemcias e plaquetas, e os leuccitos aparecem a partir do quinto ms de gestao. Posteriormente as clulas-tronco hematopoticas migram para a medula ssea em desenvolvimento e na ocasio do nascimento praticamente todo o espao medular j est preenchido pelas clulas-tronco hematopoticas. A atividade hematopotica da maioria dos ossos comea a declinar, e aps a puberdade a atividade restringe-se apenas aos ossos chatos.

Invertebrados

Peixes

Vertebrados

Peixes

Cartilaginosos

Cartilaginosos

Bao Fig. 1.

Timo

Anticorpos

Os fagcitos esto representados em praticamente toda escala filogentica enquanto que os linfcitos aparecem somente a partir dos peixes cartilaginosos. Junto com o surgimento dos linfcitos surgem bao, timo e anticorpos

As

clulas-tronco

hematopoticas

do

origem

dois

precursores

(progenitores) um mielide e outro linfide. O precursor mielide responsvel pela produo e renovao das hemcias, das plaquetas, dos basfilos, dos mastcitos, dos eosinfilos, dos neutrfilos, dos moncitos e das clulas dendrticas. Enquanto que o precursor

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linfide est responsvel pela produo e renovao dos linfcitos T, dos linfcitos B e das clulas Natural Killer (NK) (Figura 2).

Clula pluripotente

Progenitor linfide

Progenitor mielide

Linfcito B

Linfcito T

Clula NK

Mastcito Basfilo

Eosinfilo

Moncit o

Neutrfi lo

Plasmcito

Clula dendrtica

Macrfago

Fig. 2. Hematopoese. Formao das diferentes linhagens celulares sangneas a partir de um precursor linfide e um precursor mielide.

1.3. CITOCINAS As citocinas so protenas secretadas por clulas no imunes, e principalmente por clulas imunes, os leuccitos. Estes mediadores so responsveis pelas respostas biolgicas das clulas imunes e esto envolvidos no crescimento, na

motilidade, na diferenciao e principalmente na funo desempenhada pela clula. As citocinas recebem outra denominao, interleucinas (IL), que se define pelo fato dos leuccitos a produzirem e a sua ao ser sobre outros leuccitos. Com o passar dos anos e o aprimoramento no estudo destes mediadores observou-se que algumas interleucinas produzidas por leuccitos tambm agiam sobre outras clulas que no os leuccitos. Este

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termo se tornou inadequado, mas por razes histricas o nome permaneceu e a cada descoberta de uma nova citocina acrescenta-se um nmero a sigla IL (por exemplo, IL-1, IL-2 e assim sucessivamente). As citocinas medeiam e regulam as reaes imunes e inflamatrias. Embora elas sejam diferentes, algumas citocinas podem compartilhar das mesmas propriedades. A produo de uma determinada citocina um evento breve e autolimitado, j que as citocinas no so armazenadas como molculas prformadas e a sua sntese somente ocorre na presena do fator patogentico. A ao de uma citocina normalmente pleiotrpica, por apresentar a habilidade de agir sobre diferentes tipos celulares. Esta propriedade permite que a citocina medeie diferentes efeitos biolgicos. Outra propriedade importante destes mediadores a sua redundncia, j que duas ou mais citocinas possuem os mesmos efeitos funcionais. Alm disso, a produo de uma citocina pode inibir a produo de outra (antagonismo). Em determinada situao a produo de uma citocina intensifica a ao de outra, efeito denominado de sinergismo. A ao de uma citocina pode ser local ou sistmica, mas a maioria das citocinas tem ao local. Esta ao pode ser exercida sobre a prpria clula secretora (ao autcrina) e/ou atuar sobre uma clula adjacente (ao parcrina) e ainda quando produzidas em grandes quantidades podem agir sobre clulas que esto distante do local da infeco (ao endcrina).

As citocinas podem ser dividas em trs categorias bsicas de funcionalidade. Estas aes iniciam-se aps a ligao das citocinas aos seus receptores especficos localizados nas membranas das clulas alvo. Deste modo as citocinas podem mediar e regular a imunidade inata ou mediar e regular a imunidade adaptativa ou ainda estimular a hematopoese.

Dentre as citocinas que medeiam a imunidade inata esto o Fator de Necrose

Tumoral alfa (TNF- a principal mediador da resposta inflamatria aguda frente a bactrias gram positivas), IL-1 (funo semelhante a do TNF- a), IL-12 (principal mediador da resposta imune inicial frente a patgenos intracelulares e o indutor essencial da imunidade mediada por clulas) e Interferons Tipo I (IFNs a e , so os principais mediadores da resposta imune inicial frente a vrus) e a IL-10 (principal citocina inibidora de macrfagos e clulas dendrticas ativadas).

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Podemos tambm citar dentro deste grupo de citocinas da imunidade inata as quimiocinas, uma grande famlia de citocinas que estimulam o movimento dos leuccitos e regulam a migrao dos leuccitos do sangue para o tecido. As duas principais famlias de quimiocinas so as CXC e CC. As principais citocinas que medeiam e regulam a imunidade adaptativa esto relacionadas com a proliferao e a diferenciao dos linfcitos aps reconhecimento do antgeno na fase de ativao. Dentre estas citocinas podemos citar a IL-2 (fator de crescimento para linfcitos T), IL-4 (responsvel pela produo de anticorpos da classe IgE e linfcitos T helper auxiliador - do tipo TH2), IL-5 (responsvel pela ativao de eosinfilos), Interferon-gama (IFN- principal citocina ativadora de macrfagos) e o Fator de Crescimento e Transformao-beta (TGF- , responsvel pela inibio da proliferao e ativao dos linfcitos).

A hematopoese controlada pelas citocinas: Fator de Clula-tronco (responsvel em tornar as clulas-tronco respondedoras a outros fatores estimuladores de colnia), a IL-7 (responsvel pela sobrevivncia e expanso de precursores imaturos de linfcitos B e T) e o Fator Estimulador de Colnias de Granulcitos e Moncitos (GM-CSF, responsvel em aumentar a produo de leuccitos inflamatrios).

2. O SISTEMA IMUNOLGICO COMPONENTES E ORGANIZAO FUNCIONAL O Sistema Imune consiste em barreiras naturais, clulas e protenas circulantes que reconhecem patgenos ou substncias produzidas em infeces e iniciam as respostas que eliminam esses patgenos. Um patgeno quando rompe as barreiras naturais que podem ser classificadas em barreiras fsicas e barreiras qumicas (que so representadas pela pele, mucosa e substncias antimicrobianas) e entra no tecido ou na circulao estimula uma resposta mediada por clulas e por fatores solveis. Esta resposta chamada de inflamao que o recrutamento de leuccitos e o extravasamento de vrias protenas solveis no local da infeco. Consiste tambm na ativao de linfcitos B e T para eliminarem o agente infeccioso.

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As clulas do Sistema Imune esto presentes no sangue e na linfa como clulas circulantes, nos rgos linfides e esto disseminadas pelos tecidos. A organizao anatmica dessas clulas e a sua habilidade para circular e se transferir entre o sangue, linfa e os tecidos so muito importantes para a gerao da resposta imune (Figura 3). As caractersticas mais importantes do Sistema Imune so especificidade e memria. A especificidade a capacidade de reconhecer e reagir com determinada molcula e a memria a capacidade de voltar a reconhecer e reagir rapidamente a esta mesma molcula (quando reintroduzida no organismo). As molculas que so reconhecidas pelo sistema imune so denominadas de antgenos (definido por substncias estranhas ao organismo capaz de gerar uma resposta imune). O Sistema Imune formado por rgos linfides primrios, ou centrais (timo e medula ssea) e rgos linfides secundrios {bao, linfonodos, tecido linfide associado s mucosas aparelho digestivo (placas de peyer), aparelho respiratrio (tonsilas e adenides)} como mostra a Figura 3. Na medula ssea as clulas sangneas so produzidas no compartimento hematopotico. Ou seja, no h um compartimento ou microrregies delimitadas para a gerao das linhagens celulares. Assim encontram-se agrupados os precursores das plaquetas, das hemcias, dos mononucleares e polinucleares. Uma vez diferenciadas, estas clulas alcanam os seios vasculares e atravessam as aberturas encontradas no endotlio, posteriormente caem na circulao venosa e so distribudas por todo o organismo.

Em especial, os linfcitos B durante seu processo de maturao ganham receptores de membrana (do ingls, BCR B Cell Receptor) e passam por uma etapa denominada de seleo negativa. Durante a seleo negativa os linfcitos B entraro em contato com antgenos prprios. Aqueles linfcitos B que interagirem com alta afinidade seus receptores com os antgenos prprios passaro por um processo de morte celular programada denominado por apoptose. E aqueles que no interagirem terminaro seu processo de maturao e migraro para os rgos linfides secundrios.

No timo ocorre a proliferao e diferenciao das clulas precursoras em linfcitos T. As clulas precursoras chamadas de pr T so geradas na medula ssea,

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migram para o timo e ganham receptores e molculas. O principal receptor denominado de receptor de clula T (do ingls, TCR T Cell Receptor) e as principais molculas so CD4 (T helper) e CD8 (do ingls, CD cluster of differentiation). Por apresentarem as duas molculas expressas na sua membrana (CD4 e CD8) os linfcitos T passam a ser denominados duplo positivo.

Fig. 3.

Localizao dos rgos linfides primrios Medula ssea/Timo (cor amarela) - e rgos linfides secundrios linfonodos/bao (cor azul).

Os linfcitos T passam por um processo de seleo natural durante a sua maturao no timo que envolve duas etapas. Uma destas etapas chamada de seleo
positiv a,

ond e

linfcito os s

reconhece precisam r 13

se o u

ligant e

na s

clula s

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apresentadoras de antgenos (do ingls, APC Antigen Presentation Cell). O ligante do TCR chamado complexo de histocompatibilidade principal (do ingls, MHC Major Histocompatibity complex). O MHC tambm conhecido como antgenos leucocitrios humano (do ingls, HLA Human Leucocitary Antigen).
Aqueles linfcitos T que reconhecerem, atravs de seus TCRs, os MHCs das

APCs continuaro seu processo de maturao. Os linfcitos T que no foram capazes de reconhecer entraro em apoptose. Outro dado importante durante esta fase de maturao que os marcadores CD4 e CD8 dos linfcitos T so restritos aos seus respectivos MHCs classe II e classe I, como veremos a seguir. E ao final da maturao estes linfcitos se tornam simples positivo aleatoriamente (CD4 ou CD8). A outra etapa necessria para a maturao dos linfcitos T a seleo negativa, que determinar a sua maturao final. Nesta seleo os MHCs de classe II e de classe I apresentaro peptdeos prprios aos TCRs dos linfcitos. Aqueles linfcitos T CD4 ou CD8 que interagirem com alta afinidade sofrero a apoptose. Enquanto que, aqueles que no interagirem seus TCRs com os MHCs das APCs terminaro seu processo de maturao.

Esta seleo que ocorre durante a maturao dos linfcitos se faz necessria para que os linfcitos saibam diferenciar o prprio do no prprio. Desta forma a resposta imune ocorre frente a estruturas no comuns ao organismo. Qualquer disfuno no sistema imune, este poder reconhecer suas prprias estruturas como no prprias e montar uma resposta imune.

Os linfonodos tambm chamados gnglios linfticos se encontram distribudos ao longo dos vasos linfticos que drenam as diversas regies do organismo. A linfa formada pelo lquido absorvido dos tecidos conjuntivos que servem de sustentao aos vrios epitlios de revestimento e aos diversos rgos. Esta rede linftica capta as eventuais molculas estranhas quando presentes no organismo e levam para os linfonodos para promover o encontro do antgeno com os linfcitos T e B imunocompetentes da imunidade adaptativa. O bao um rgo localizado na regio abdominal esquerda superior. Alm da eliminao de clulas sangneas lesadas e senescentes, o bao importante no controle das infeces sistmicas. Assim todos os antgenos que estejam na corrente sangnea

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so captados pelo bao e apresentados para os linfcitos T e B, onde se desenvolve uma vigorosa resposta imune. Existe uma grande quantidade de tecido linfide distribudo pelo organismo apresentando variados graus de organizao.

2.1. RESPOSTA IMUNE INATA E ADAPTATIVA. O que determina a resistncia ou susceptibilidade s infeces a eficincia da resposta imune contra um determinado patgeno. Assim um determinado indivduo pode ser resistente a uma determinada doena e susceptvel a outra. Por muito tempo a resposta imune inata, ou natural, foi determinada por mecanismos inespecficos, enquanto que a imunidade adaptativa era determinada por mecanismos especficos. Hoje sabemos que a imunidade inata tambm determinada por mecanismos especficos capazes de reconhecer padres moleculares dos diferentes patgenos.

As clulas que fazem parte da imunidade inata tm a caracterstica de ter receptores para vrias estruturas, apresentando uma especificidade ampla e um repertrio restrito. Enquanto que as clulas que participam da imunidade adaptativa tm a caracterstica de que cada clula tem receptores para uma nica estrutura, apresentando assim sua especificidade mais restrita e um amplo repertrio.

Durante a imunidade inata quando o tecido invadido por um patgeno uma srie de eventos biolgicos iniciais a reao inflamatria ocorrem na microcirculao, principalmente alteraes nos calibres das arterolas e alteraes de permeabilidade das vnulas causadas por mediadores inflamatrios produzidos por mastcitos e macrfagos. Aps um trauma ou leso os mastcitos (Figura 4) que esto presentes ao redor dos vasos sanguneos desgranulam e conseqentemente liberam a histamina, que induz a contrao das clulas endoteliais e aumenta a permeabilidade celular. A ativao de mastcitos e macrfagos ainda induzem a sntese de mediadores lipdicos, como prostaglandinas, leucotrienos e fator ativador e plaquetas (do ingls, PAF Platelet Activating factor).

As prostaglandinas ajudam na induo de febre, hiperalgesia, vasodilatao com conseqente potencializao do edema. Os leucotrienos atuam na vasoconstrio,

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aumento da permeabilidade vascular, contrao de brnquios e produo de muco. E o ltimo dos mediadores lipdicos, o PAF tem sua ao inflamatria sobre a vasodilatao, aumento da permeabilidade vascular, migrao de neutrfilos, mobilizao de macrfagos/neutrfilos/endotlio, migrao de ativao de eosinfilos e contrao de brnquios.

Fig. 4.

Mastcito. Localizado em todos os tecidos. Dentre as principais funes esto a liberao de grnulos contendo histamina e outros agentes vasoativos

Um outro fator a bradicinina que faz parte da famlia e peptdeos gerados no plasma por ao dos cininognios. A conseqncia da ao da bradicinina mediar a permeabilidade vascular, aumentar o fluxo sangneo, broncoconstrio e estimulao de receptores algsicos. Dos neuropeptdeos, a substncia P tem o efeito pr-inflamatrio mais bem

descrito, que atua aumentando o fluxo sangneo aps aumentar a permeabilidade vascular e ainda age sobre mastcitos fazendo com liberem mais mediadores lipdicos. O evento seguinte sada de leuccitos dos vasos e seu acmulo no foco inflamatrio. Este influxo de clulas um evento central que contribui no s para eliminao do agente infeccioso, mas tambm para a resoluo do processo inflamatrio como a cicatrizao e regenerao do tecido. Durante a migrao transendotelial dos leuccitos esto envolvidas molculas de adeso, que pertencem famlia das selectinas, integrinas e superfamlia das imunoglobulinas. Dentre as selectinas esto s molculas P e E- selectinas (expressas no endotlio) e as L-selectinas (expressas na membrana dos leuccitos). As integrinas representadas pelos antgenos associados funo do leuccito-1 (do ingls, LFA1

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Lymphocyte Function-Associated Antigen) so expressas constitutivamente na membrana dos leuccitos. E a superfamlia das imunoglobulinas representadas pelas molculas de adeso intercelular 1 e 2 (do ingls, ICAMs 1 e 2 intercellular adhesion molecule ) expressas constitutivamente no endotlio. A expresso destas molculas de adeso so aumentadas pela ao das citocinas TNF-a e IL-1 principalmente, bem como pela ao de leucotrienos e PAF. As quimiocinas tambm so importantes na inflamao porque funcionam como um sinal para que as clulas migrem para o local da infeco. As principais clulas que esto presentes neste momento da infeco para dar combate ao patgeno so os neutrfilos e os macrfagos. Os neutrfilos so fagcitos polimorfonucleares (Figura 5) presentes em grande quantidade no sangue e com vida mdia curta. Eles ao considerados a primeira linha de defesa do organismo contra infeces. Dispem de mecanismos microbicidas eficientes, porm morrem aps a fagocitose, ao contrrio dos macrfagos.

Fig. 5. Neutrfilo. Localizado na corrente sangunea (migra para os tecidos). Dentre as principais funes esto a fagocitose e a citotoxicidade mediada por anticorpos.

Os macrfagos (Figura 6A) esto presentes em todos os tecidos e podem ter denominaes especficas dependendo do tecido que se encontra (por exemplo clulas de Kupffer no tecido heptico, osteoclastos no tecido sseo, microglia no tecido cerebral). Estas clulas fagocitam e matam um grande nmero de patgenos, alm de removerem restos celulares. Ainda so consideradas as pontes entre a imunidade inata e imunidade adaptativa junto com as clulas dendrticas (Figura 6B).

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A ao destas clulas inicia-se com a fagocitose e/ou internalizao dos patgenos ou produtos destes. As clulas dendrticas so as apresentadoras profissionais de antgeno para os linfcitos, embora os macrfagos tambm desempenhem bem este papel.

B
tecido Dentre as nos s. funes esto a fagocitose e apresentao de antgenos. principa is

Fig. 6. Macrfago (A). Localizado

Clula Dendrtica (B). Localizada nos tecidos e rgos linfides. Dentre as principais funes esto a apresentao de antgenos.

As protenas do sistema complemento tambm ajudam na potencializao da atividade microbicida dos macrfagos e clulas dendrticas. Assim como os anticorpos produzidos pelos plasmcitos (linfcitos B ativados).

2.1.1. COMPLEXO DE HISTOCOMPATIBILIDADE PRINCIPAL - MHC O MHC uma regio cromossmica que compreende um conjunto de genes interligados e interdependentes localizados nos cromossomos 6, 17 e 20 de humanos, camundongos e ratos, respectivamente. O MHC dividido em quatro subconjuntos de genes, ou classes. As principais classes so: classe I e classe II, que participam das respostas a transplantes, tumores e da apresentao de antgeno. As outras duas so as classes III e IV, sendo que a classe III a mais estuda e sabe-se que ela codifica algumas molculas importantes, como molculas do sistema complemento.

As molculas de MHC classe I so glicoprotenas expressas na membrana celular da maioria das clulas nucleadas dos vertebrados. E a sua estrutura formada por uma cadeia a e uma cadeia 2 microglobulina (Figura 7A).

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As molculas de MHC classe II tambm so glicoprotenas de membrana, mas diferentemente das molculas de classe I esto expressas apenas nos linfcitos B, macrfagos e clulas dendrticas (ou melhor, as clulas que participam da apresentao de antgenos).So constitudas por duas cadeias uma a e uma (Figura 7B).

2
microglobulina

Fig. 6. (A) MHC classe I e (B) MHC classe II

2.1.2. PROCESSAMENTO E APRESENTAO DE ANTGENOS. A principal funo do MHC facilitar a apresentao de fragmentos de molculas na superfcie das clulas em um arranjo especfico que permite o reconhecimento pelos linfcitos T. Os antgenos apresentados no MHC de classe I so na maioria das vezes fragmentos gerados dentro da clula. Estes fragmentos so peptdeos de protenas que se encontram no citoplasma da clula e foram degradados por um sistema complexo multiproteoltico chamado proteassoma.
O peptdeo, uma vez ligado ao MHC de classe I e expresso na membrana da clula que o sintetizou, pode ser reconhecido apenas por linfcitos T CD8. Assim

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podemos concluir que o MHC de classe I est restrito ao reconhecimento dos linfcitos T CD8. No entanto, os peptdeos ligados ao MHC de classe II foram sintetizados aps a ao da protelise de enzima que atuam sobre molculas ou antgenos fagocitados, sendo referido como peptdeos ou antgenos exgenos. O reconhecimento dos peptdeos presentes na membrana das APCs feito pelos linfcitos T CD4. Assim podemos tambm concluir que o MHC de classe II est restrito ao reconhecimento dos linfcitos T CD4. A ligao entre as molculas de CD8 e CD4 com as molculas de MHC de classe I e classe II, respectivamente, aumenta a adeso entre os linfcitos e as clulas apresentadoras permitindo sinais de ativao, ou desativao.

2.1.3. RECIRCULAO LINFOCITRIA. Os linfcitos se movem continuamente pela corrente sangnea e pelos vasos linfticos, de um tecido linfide perifrico (secundrio) para outro e para locais perifricos onde ocorra inflamao. O movimento dos linfcitos entre estes locais chamado de recirculao linfocitria e o processo pelo qual determinada populao de linfcitos entra em um tecido ou rgo linfide chamado de homing (endereamento linfocitrio). Esta migrao para determinados tecidos mediada por molculas de adeso nos linfcitos, nas clulas endoteliais, na matriz extracelular e por quimiocinas produzidas no endotlio e nos tecidos (Figura 7). Atravs desta recirculao o sistema imune mantm-se em constante viglia, j que, os linfcitos T naives (no primados ou inativos) circulando por todos os rgos linfides perifricos aumentam a chance de reconhecer antgenos estranhos.

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Fig. 7. Migrao celular. A seta preta esquematiza a passagem de uma clula dendrtica pelo endotlio (saindo da corrente sangnea e entrando no tecido). Bolinhas

pretas representam as molculas de adeso estrelinhas azuis representam as quimiocinas.

as

2.1.4. ATIVAO DOS LINFCITOS T E LINFCITOS B. Na fase de ativao dos linfcitos T participam os linfcitos T CD4, CD8 e APCs. Embora a interao entre linfcitos e APCs possa ocorrer nos tecidos, ela fundamentalmente ocorre nos rgos linfides secundrios. Isto se d porque a probabilidade de que um linfcito reconhea um antgeno nos rgos linfides secundrios maior do que em algum tecido do organismo. Para que ocorra a ativao do linfcito T CD4 e CD8 necessrio que a APC carregue o antgeno at o rgo linfide secundrio. Em seguida o linfcito T interage o seu TCR com o MHC da APC (primeiro sinal de ativao). Caso o antgeno tenha sido processado no citoplasma da APC, se ligando as molculas de classe I, o linfcito T CD8 ser ativado. Agora, se o antgeno foi fagocitado e foi processado dentro de um vacolo fagoctico, se ligando a molculas de classe II, o linfcito TCD4 ser ativado (Figura 8).

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Entretanto, para completar a ativao dos linfcitos T, tanto CD4 como CD8, necessrio um segundo sinal de ativao. Este segundo sinal mediado por molculas coestimuladoras, como a molcula CD28 (linfcito T) e CD80/CD86 (APCs). Embora tambm no podemos esquecer que as citocinas participam intimamente na direo da ativao dos linfcitos T.

CD8

CD4

Fig. 8. Ativao de linfcitos T CD8 (direita) antgenos provenientes do citoplasma. E ativao de linfcitos T CD4 (esquerda) antgenos fagocitados.

O processo de ativao dos linfcitos B se inicia pela interao das imunoglobulinas de superfcie com as molculas imunognicas ou antgenos, seguindo uma srie de etapas que levam os linfcitos B a expanso, formao de clones e diferenciao em plasmcitos. A ligao do antgeno com um ou mais receptores das clulas B medeiam uma srie de sinais intracelulares levando a sua ativao e produo de anticorpos da classe IgM (ativao independente de linfcitos T) (Figura 9). A ligao do antgeno aos receptores do linfcito B tambm pode levar a interiorizao, processamento e apresentao do antgeno para os linfcitos TCD4 (helper 22
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 Th CD4) em MHC de classe II (primeiro sinal de ativao). O linfcito Th CD4 ajuda o linfcito B a proliferar, formando clones de clulas especficas para o antgeno indutor da resposta (ativao dependente de linfcitos T). Um segundo sinal necessrio para completar a ativao do linfcito B, dependente das molculas CD28 (linfcito T) e CD80/CD86 (linfcito B) e molculas CD40 ligantes (linfcito T) e CD40 (linfcito B).

Expanso clonal Antgeno

Linfcito B IgM

Plasm cito

Fig. 9. Ativao de linfcitos B independente de linfcito T.

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sIg
1

classe II

Fig. 10.Ativao de linfcitos B dependente de linfcito Th CD4.

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2.2. SISTEMA COMPLEMENTO O sistema complemento composto por mais de 30 protenas que podem ser encontradas solveis no plasma ou ligadas a superfcies de certos tipos celulares. A ativao deste sistema ocorre de maneira seqencial onde uma primeira protena participa da ativao de uma segunda protena. Esta por sua vez participa da ativao de uma terceira protena e assim por diante.

Quando h ativao protica, duas possibilidades podem ocorrer, a fragmentao proteoltica e/ou mudanas conformacionais. A ativao do sistema complemento pode ser iniciada por 3 vias diferentes: i) via alternativa, ii) via das lectinas e iii) via clssica. A ativao pelas vias alternativa e das lectinas no h participao de molculas de anticorpos, enquanto que a via clssica para ser desencadeada necessita geralmente de uma molcula de IgM e/ou duas ou mais molculas de IgG.

Desta maneira, o sistema complemento pode ser acionado logo aps o estmulo antignico ter adentrado o organismo, contribuindo assim com as mais diversas funes efetoras.

2.2.1. VIA CLSSICA O primeiro componente a participar desta via o C1, formado pelas subunidades C1q, C1r e C1s. Com a ligao do C1q a molcula do anticorpo complexado ao antgeno, ocorre provavelmente uma mudana conformacional em C1q, que ativa C1r. C1r ativa C1s. C1s exibe um stio serino-protease que cliva as protenas C4 e C2. Com a clivagem de C4 em C4a e C4b segue-se ativao da cascata. C1s complexado a C4b na superfcie do antgeno cliva C2 em C2a e C2b. O fragmento C2a permanece aderido ao complexo C1sC4b, formando agora o complexo C1sC4bC2a. Este novo complexo tem atividade C3 convertase, de maneira que acaba clivando a protena C3 em C3a e C3b. C3b se une a C3 convertase (C1sC4bC2a) e forma a C5 convertase que responsvel pela clivagem da C5 em C5a e C5b.
O fragmento C5b adere a superfcie celular e a ele se liga o componente

C6,formando assim o complexo C5b6. Este complexo associa-se a molcula C7,

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formando agora o complexo C5b67. O prximo componente a se juntar a este complexo o componente C8 (C5b678), que apresenta atividade ltica sobre certos microorganismos. Esta atividade ltica aumenta com a anexao de 1 a 18 molculas de C9 que se polimeriza e forma um canal transmembrnico, responsvel pelo desequilbrio osmtico e pela lise da clula.

Este processo chamado de complexo de ataque a membrana - C5b678(9) n, ou simplificadamente C5b-9.

2.2.2. VIA ALTERNATIVA Esta a via de mais utilizada pelo nosso organismo. A ativao desta via se inicia pela hidrlise espontnea de uma ligao de tioster, localizada no componente C3, gerando uma espcie de C3(H 2O).
Esta hidrlise que ocorre freqentemente cliva o fator B em Ba e Bb. O fragmento Bb se une ao complexo C3(H 2O) e se torna a C3 convertase {C3(H 2O)Bb}. Esta C3 convertase cliva C3 em C3a e C3b. C3b se une agora ao complexo C3(H 2O)Bb, formando

C3(H2O)Bb3b que se torna a C5 convertase que cliva C5 em C5a e C5b. O fragmento C5b adere a superfcie celular e a ele se liga o componente C6, formando assim o complexo C5b6. Este complexo associa-se a molcula C7, formando agora o complexo C5b67. O prximo componente a se juntar a este complexo o componente C8 (C5b678), que apresenta atividade ltica sobre certos microorganismos. Esta atividade ltica aumenta com a anexao de 1 a 18 molculas de C9 que se polimeriza e forma um canal transmembrnico, responsvel pelo desequilbrio osmtico e pela lise da clula. Este processo chamado de complexo de ataque a membrana - C5b678(9) n, ou simplificadamente C5b-9.

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2.2.3. VIA DAS LECTINAS Esta via pode ser acionada a partir da ligao de lectinas, que so protenas que se ligam a aucares. A lectina ligante de manose (MBL do ingls Mannose Binding Lectin ou MBP Mannose Binding Protein) tem uma estrutura qumica semelhante a C1q. As MBL ativam protenas serino-proteases que clivam C4 em C4a e C4b. E clivam C2 em C2a e C2b. Este complexo formado C4bC2a funciona como C3 convertase, que cliva C3 em C3a e C3b. C3b se une a C3 convertase (C4bC2a) e forma a C5 convertase que responsvel pela clivagem da C5 em C5a e C5b. O fragmento C5b adere a superfcie celular e a ele se liga o componente C6, formando assim o complexo C5b6. Este complexo associa-se a molcula C7, formando agora o complexo C5b67. O prximo componente a se juntar a este complexo o componente C8 (C5b678), que apresenta atividade ltica sobre certos microorganismos. Esta atividade ltica aumenta com a anexao de 1 a 18 molculas de C9 que se polimeriza e forma um canal transmembrnico, responsvel pelo desequilbrio osmtico e pela lise da clula.

Este processo chamado de complexo de ataque a membrana - C5b678(9) n, ou simplificadamente C5b-9.

2.2.4. REGULAO DA ATIVAO DO SISTEMA COMPLEMENTO A ativao do sistema complemento precisa ser regulada de maneira precisa para evitar que ocorra consumo desnecessrio de seus componentes. Alm disso, necessrio que no haja a formao de complexo de ataque membrana sobre as prprias clulas do indivduo. Assim, algumas protenas de regulao encontram-se solveis no plasma ou aderidas sobre as membranas das clulas.

As protenas reguladoras solveis so: inibidor de C1, Fator I, Fator H, protena ligante de C4b (C4BP do ingls C4b Binding Protein ), Vitronectina, Clusterina, Properdina e Inibidor de anafilatoxinas. J as protenas reguladoras aderidas na membrana celular so: protena cofator de membrana (MCP do ingls Membrane Cofactor Protein), fator acelerado de decaimento (DAF do ingls Decay Accelerating

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Factor), receptor de complemento 1 (CR1 do ingls Complement Recptor-1), fator de restrio homlogo (HRF do ingls Homologous Restriction Factor) e CD59.

2.2.5. FUNES BIOLGICAS As principais funes biolgicas atribudas ao sistema complemento so: lise celular, opsonizao, quimiotaxia, solubilizao de imunocomplexos, remoo de imunocomplexos do fgado, ativao de linfcitos B e anafilatoxinas.

------------------ - FIM DO MDULO I ------------------- -

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