UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE CENTRO DE CINCIAS BIOLGICAS E DA SADE DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA LABORATRIO DE BIOQUMICA

RELATRIO SOLUO TAMPO E RESISTNCIA TAMPONANTE

Alunos: Cluber Trindade Emdio e Eduarda Helena Vieira Zuzarte Ferreira. Curso: Farmcia. Turma: C1. Professor: Dr. Humberto Reis Matos. Data do experimento: 15/ 04/ 2010.

So Cristvo/SE 2010

Sumrio 1 Introduo 1.1 Conceitos de pH 1.2 Soluo Tampo 1.3 Equao de Henderson Halssebalch 1.4 Tampes Biolgicos 1.5 O Sistema Tampo Fosfato 2 Objetivos 3 Metodologia 3.1 Materiais e Reagentes 3.2 - Procedimentos 4 Resultados Obtidos 4.1 Tabelas 4.2 Anlise Grfica 4.3 Clculos 5 Discusso 6 Concluso 7 Bibliografia

1 INTRODUO

1.1 Conceitos de pH O pH refere-se a uma medida que indica se uma soluo lquida cida (pH < 7), neutra (pH = 7), ou bsica/alcalina (pH > 7). Uma soluo neutra s tem o valor de pH = 7 a 25 C, o que implica variaes do valor medido conforme a temperatura. Ele o smbolo para a grandeza fsico-qumica 'potencial hidrogeninico'. Essa grandeza indica a acidez, neutralidade ou alcalinidade de uma soluo aquosa. O termo pH foi introduzido, em 1909, pelo bioqumico dinamarqus Sren Peter Lauritz Srensen (1868-1939) com o objetivo de facilitar seus trabalhos no controle de qualidade de cervejas ( poca trabalhava no Laboratrio Carlsberg, da cervejaria homnima). O "p" vem do alemo potenz, que significa poder de concentrao, e o "H" para o on de hidrognio (H+). s vezes referido do latim pondus hydrogenii. Matematicamente, o "p" equivale ao simtrico do logaritmo (cologaritmo) de base 10 da atividade dos ons a que se refere. Para ons H+:

Sendo que

representa a actividade em mol dm3.

Em solues diludas (abaixo de 0,1 mol dm3), os valores da atividade se aproximam dos valores da concentrao, permitindo que a equao anterior seja escrito como abaixo:

Medida de pH O pH pode ser determinado usando um medidor de pH (tambm conhecido como pHmetro) que consiste em um eletrodo acoplado a um potencimetro. O medidor de pH um milivoltmetro com uma escala que converte o valor de potencial do eletrodo em unidades de pH. Este tipo de eltrodo conhecido como eletrodo de vidro, que na verdade, um eletrodo do tipo "on seletivo". O pH pode ser determinado indiretamente pela adio de um indicador de pHna soluo em anlise. A cor do indicador varia conforme o pH da soluo.

Indicadores comuns so a fenolftalena, o alaranjado de metila e o azul de bromofenol. Outro indicador de pH muito usado em laboratrios o chamado
papel de tornassol

(papel de filtro impregnado com tornassol). Este indicador apresenta uma ampla faixa de viragem, servindo para indicar se uma soluo nitidamente cida (quando ele fica vermelho) ou nitidamente bsica (quando ele fica azul). Obs.: Embora o valor do pH compreenda uma faixa de 0 a 14 unidades, estes no so os limites para o pH. possvel valores de pH acima e abaixo desta faixa, como exemplo, uma soluo que fornece pH = -1,00, apresenta matematicamente -log [H+] = -1,00, ou seja, [H+] = 10 mol L1. Este um valor de concentrao facilmente obtido em uma soluo concentrada de um cido forte, como o HCl. Medida de pOH Do mesmo modo pode-se definir o pOH em relao concentrao de ons OH-. A partir da constante de dissociao da gua que tem o valor de 10 14 temperatura de 298 K (25 C), pode-se determinar a relao entre pOH e pH. Assim, pela definio de Kw (produto inico da gua) tem-se a relao entre as duas atividades: Kw = [H+] [OH-] Ao aplicar logaritmos, obtm-se a relao entre pH e pOH: pKw = pH + pOH = 14 - Soluo Tampo

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Tampes so sistemas aquosos que resistem s variaes do pH quando quantidades relativamente pequenas de cidos (H +) ou base (OH-) so adicionadas soluo. Um sistema tampo consiste de um cido fraco (o doador de prtons) e sua base conjugada (o aceptor de prtons). Por exemplo, a mistura de concentraes iguais de cido actico e de on acetato, encontrada no ponto mdio da curva de titulao da figura a seguir, um tampo.

A curva de titulao do cido actico apresenta uma regio relativamente pouco inclinada, estendendo-se por uma unidade de pH em ambos os lados de seu pH mdio 4,76. Nessa zona a adio de uma quantidade de H + ou OH- ao sistema apresenta um pequeno efeito sobre o pH do que aquela na qual a mesma quantidade tenha sido adicionada alm da regio de tamponamento. Essa zona relativamente plana a regio de tamponamento do par cido actico acetato. No ponto mdio da regio tamponante, no qual a concentrao do doador de prtons (cido actico) se iguala exatamente a do aceptor de prtons (acetato), o poder tamponante do sistema mximo, isto , as mudanas no pH provocadas pela adio de H + ou OH- so mnimas. Nesse ponto da curva de titulao do cido actico, o pH igual ao seu pKa. O pH do sistema-tampo acetato varia ligeiramente quando uma pequena quantidade de H+ ou OH- adicionada, porm essa variao muito pequena quando comparada com a variao de pH que resultaria se a mesma quantidade de H+ ou OH- fosse adicionada gua pura ou a uma soluo de um sal de cido forte com a base forte, como o NaCl, que no tem poder tamponante. O tamponamento resulta do equilbrio de duas reaes reversveis que ocorrem em uma soluo que contm quantidades quase iguais de um doador e seu aceptor de prtons conjugado. A figura a seguir, demonstra como um sistema tampo funciona:

Sempre que H+ ou OH- so adicionados a um tampo, o resultado

uma pequena variao na relao das concentraes relativas do cido fraco e seu nion e, consequentemente, uma pequena variao no pH. A diminuio da concentrao de um dos componentes do sistema contrabalanceada exatamente pelo aumento da outra. A soma das concentraes dos componentes do tampo varia, apenas a sua relao. Cada par cido-base conjugado tem uma zona caracterstica de pH na qual ele atua como tampo efetivo. Essa regio denominada regio tamponante equivale a uma unidade a mais e uma a menos do valor do pKa da substncia. - Equao de Henderson Halssebalch

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A forma de titulao de qualquer cido fraco descrita pela equao de HendersonHasselbalch, que importante para a compreenso da ao tamponante e o balano cido-base no sangue e tecidos dos vertebrados. Essa equao simplismente uma maneira til de redefinir a expresso para a constante de dissociao de um cido. Para a dissociao de um cido fraco H em H+ e A-, a equao de Henderson-Hasselbalch pode ser dervada da seguinte maneira:

Resolvendo primeiramente para [H+]:

Aplicando-se o logaritmo negativo dos dois lados da igualdade:

Substituindo log [H+] por pH, e log Ka por pKa:

Invertendo-se a frao log [HA]/[A-], inverte-se o sinal e obtm-se a equao de Henderson-Hasselbalch:

Que pode ser escrita em sua forma genrica: pH = pKa + log [aceptor de prtons]

[doador de prtons] Essa equao descreve as curvas de titulao de todos os cidos fracos e possibilita deduzir um grande nmero de relaes quantitativas importantes. Ela mostra por que o pKa de um cido fraco igual ao pH da soluo no ponto mdio da sua titulao. Nesse ponto [HA] = [A-] e pH = p Ka + log 1,0 = pKa + 0 = pKa

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- Tampes Biolgicos

Ao Tamponante contra as variaes de pH nos Sistemas Biolgicos. Quase todos os processos biolgicos so dependentes do pH; uma pequena variao no pH produz uma grande variao na velocidade do processo. Isso verdade no apenas para muitas reaes nas quais os ons H + participante direto, mas tambm para aquelas nas quais no h um papel aparente para esses ons. As enzimas que catalisam as reaes celulares e muitas das molculas sobre as quais elas agem possuem grupos ionizveis com valores de p Ka caractersticos. Os grupos amino e os grupos carboxila protonados dos aminocidos e os grupos fosfato dos nucleotdeos, por exemplo, funcionam como cidos fracos; o seu estado inico depende do pH do meio circunvizinho. Como mencionado, as interaes inicas esto entre as foras que estabilizam a molcula de uma protena e permitem que uma enzima reconhea e ligue-se a seu substrato. As clulas e os organismos mantm um pH citoslico constante e especfico, geralmente prximo de pH 7, o que mantm as biomolculas em seu estado inico timo. Em organismos multicelulares, o pH dos fluidos extracelulares tambm precisamente regulado. A constncia do pH conseguida primariamente pelos tampes biolgicos: misturas de cidos fracos e suas bases conjugadas. A ao tamponante biolgica pode ser ilustrada pela descrio do funcionamento dos sistemas-tampo fosfato e carbonato em seres humanos.
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O sistema tampo fosfato atua de maneira quase idntica do bicarbonato; todavia, composto pelos dois elementos: H PO e HPO . Quando se acrescenta 2 4 4 cido forte, como o cido clordrico, mistura dessas duas substancias, ocorre a seguinte reao:

- O Sistema Tampo Fosfato

HCl + Na2HPO4 NaH2PO4 + NaCl O resultado final dessa reao consiste na remoo do cido clordrico, com formao de uma quantidade adicional de NaH2PO4. Como o NaH2PO4 apenas um cido fraco, o cido forte acrescentado imediatamente substitudo por um acido muito fraco, de modo que o pH muda relativamente pouco. Por outro lado, se for adicionada uma base forte, como o NaOH, ao sistema tampo, ocorrer a seguinte reao: NaOH + NaH2PO4 Na2HPO4 + H20 Neste caso, o NaOH decomposto para formar gua e Na 2HPO4. Isto , uma base forte trocada pela base muito fraca, Na 2HPO4, permitindo apenas ligeiro desvio do pH para o lado alcalino. O sistema tampo fosfato possui pK de 6,8, valor que no se afasta muito do pH normal de 7,4 nos lquidos corporais. Isso permite ao sistema fosfato operar prximo de sua capacidade mximo de tamponamento. Todavia, apesar de o sistema tampo operar em faixa razoavelmente boa da curva tampo, sua concentrao no liquido extracelular de apenas 1/12 daquela do tampo bicarbonato. Por conseguinte, sua capacidade de tamponamento total no lquido extracelular bem menor que a do sistema bicarbonato. Por outro lado, o tampo fosfato especialmente importante nos lquidos tubulares dos rins, por duas razes: em primeiro lugar, o fosfato fica ligeiramente muito concentrado nos tbulos, aumentando sobremaneira a capacidade de tamponamento do sistema fosfato. Em segundo lugar, o lquido tubular geralmente mais cido do que o lquido extracelular, trazendo a faixa de operao do tampo mais prximo ao pK do sistema. O tampo fosfato tambm muito importante nos lquidos intracelulares, visto que a concentrao de fosfato nesses lquidos muitas vezes maior que a dos lquidos extracelulares e, tambm, pelo fato de o pH do lquido intracelular estar geralmente mais prximo ao pK do sistema tampo fosfato do que o pH do lquido extracelular.

2 OBJETIVOS

Descrever os efeitos do pH sobre a soluo tampo [Na 2HPO4-/ NaH2PO4] e defini-lo. Observar, relatando a eficincia tamponante da soluo [Na2HPO4-/ NaH2PO4]. Utilizando um pHmetro, conhecer os valores de pH quando h adio de ons H+ e ons OH- . Demonstrar atravs de esboos grficos a variao de pH a cada pequena quantidade de ons H+ e ons OH- adicionados e a eficincia do sistema tampo. Atravs da reao de Henderson Hasselbalch, calcular as variaes de pH na soluo tampo analisada.

3 METODOLOGIA

3.1 MATERIAIS E REAGENTES - Erlenmeyer - 1 pipeta graduada 2 mL - 1 pipeta graduada 5 mL - 1 pipeta graduada 10 mL - 1 bomba de suco (pra) - pHmetro - Reagentes: Fosfato Monobsico (NaH2PO4) e Fosfato Dibsico (Na2HPO4) - NaOH a 0,1 M - gua destilada 3.2 PROCEDIMENTOS

Com uma pipeta graduada de 10 mL, foi retirado 10 mL de Na 2HPO4 (Fosfato Dibsico) e colocado em um erlenmeyer. Como o valor total da base a ser adicionado era de 15 mL, foi retirado mais 5 mL do Na 2HPO4, novamente com uma pipeta graduada de 10 mL. Logo aps, com uma pipeta graduada de 5 mL foi retirado 5 mL de NaH 2PO4 (Fosfato Monobsico) e colocado no erlenmeyer juntamente com os 15 mL da base (Na2HPO4), o procedimento no precisou ser repetido, pois o volume de cido a ser adicionado era de 5 mL. No erlenmeyer, estava preparado um tampo Na2HPO4-/ NaH2PO4 no ideal, com 20 mL. Com o auxlio de um pHmetro, foi medido o valor do pH inicial do tampo.

Com uma pipeta graduada de 2 mL, foi retirado 0,5 mL de NaOH e colocado no erlenmeyer, onde se encontrava o tampo no ideal Na2HPO4-/ NaH2PO4 . Aps esse procedimento, foi medido o valor de pH para testar a resistncia tamponante com a adio de ons OH - .

O procedimento descrito acima foi repetido, adicionando 1,0 mL 1,5 mL 2,0 mL de NaOH ao tampo no ideal. Sempre medindo o pH aps a adio de cada volume individualmente.

Aps a obteno de todos os pH necessrios com a adio de ons OH ao tampo no ideal, foi testado a ao tamponante da gua destilada. Em um erlenmeyer vazio foi colocado 20 mL de gua destilada e medido o valor do seu pH inicial. Depois, com uma pipeta graduada de 2 mL foi adicionado 0,5 mL de NaOH. Ao final, foi medido o valor do pH, ficando evidenciado que a gua destilada no forma tampo, devido ao aumento brusco no valor de pH.

4 RESULTADOS 4.1 TABELAS

Tabela com os valores de pH obtidos em laboratrio com o auxlio do pHmetro: 20 mL do tampo [Na2HPO4-/NaH2PO4] Vol. de NaOH a Variao do pH pH inicial 0,1 M aps a adio dos adicionado ons OH0,5 mL 7,18 1,0 mL 7,33 7,11 1,5 mL 7,67 2,0 mL 9,8

Tabela com os resultados obtidos a partir dos clculos tericos: 20 mL do tampo [Na2HPO4-/NaH2PO4] pH inicial Vol. de NaOH a 0,1 M adicionado 0,5 mL 7,67 1,0 mL 1,5 mL 2,0 mL Variao do pH aps a adio dos ons OH7,7 7,8 7,87 7,94

Tabela com os resultados obtidos em laboratrio, referente gua destilada: 20 mL de gua Destilada pH inicial 7,0 Vol. de NaOH a 0,1 M Variao do pH aps a adicionado adio dos ons OH- medido pelo pHmetro 10,6 0,5 mL

4.2 Anlises Grficas

Grfico com os valores de pH obtidos em laboratrio com o auxlio do pHmetro:

Grfico com os resultados obtidos a partir dos clculos tericos:

 Grfico com os resultados obtidos em laboratrio, referente gua destilada:

Utilizao da equao de Henderson-Hasselbalch para calcular o pH do tampo no-ideal de [Na2HPO4-/NaH2PO4]

4.3 Clculos

- Considerando o pKa do cido, NaH2PO4, temos : Clculo do pH inicial : 1000 mL -- 0,1 M 15 mL -- x x = 0,0015 M pH = pKa + log [B] [A] pH = pKa + log [0,0015] [0,0005] pH = 7,2 + log 3 pH = 7,2 + 0,47 pH = 7,67

1000 mL -- 0,1 M 5 mL -- x x = 0,0005 M

Clculo do pH quando adicionado 0,5 mL de NaOH : 1000 mL 0,1 M 0,5 mL -- x x = 0,00005 M

pH = pKa + log [0,0015+0,0005] [0,0005-0,00005] pH = pKa + log [0,00155] [0,00045] pH = 7,2 + log 3,4 pH = 7,2 + 0,5 pH = 7,7 Clculo do pH quando adicionado 1 mL de NaOH : 1000 mL 0,1 M 1 mL -- x x = 0,0001 M pH = pKa + log [0,0015+0,0001] [0,0005-0,0001] pH = pKa + log [0,0016] [0,0004] pH = 7,2 + log 4 pH = 7,2 + 0,6 pH = 7,8

Clculo do pH quando adicionado 1,5 mL de NaOH : 1000 mL 0,1 M 1,5 mL -- x x = 0,00015 M pH = pKa + log [0,0015+0,00015] [0,0005-0,00015] pH = pKa + log [0,00165] [0,00035] pH = 7,2 + log 4,7 pH = 7,2 + 0,67 pH = 7,87

Clculo do pH quando adicionado 2 mL de NaOH : 1000 mL 0,1 M 2 mL -- x x = 0,0002 M

pH = pKa + log [0,0015+0,0002] [0,0005-0,0002] pH = pKa + log [0,0017] [0,0003] pH = 7,2 + log 5,6 pH = 7,2 + 0,74 pH = 7,94 Clculo do pH na soluo de NaOH com a gua destilada : Volume de NaOH = 0,5 mL Volume da gua destilada = 20 mL [H+] = Kw = 10-14 = 2x10-11 [OH-] 5x10-4 pH = log 1 = log 1 [H+] 2x10-11 pH = log 0,5 + 11 pH = -0,3 + 11 pH = 10,7

5 Discusso
A ao tamponante simplesmente a consequncia de duas reaes reversveis que ocorrem simultaneamente e atingem seus pontos de equilbrio de acordo com suas constantes de equilbrio. Sempre que H+ ou OH- so adicionados a um tampo, o resultado uma pequena variao na relao das concentraes relativas do cido fraco e do ser nion e, consequentemente, uma pequena variao do pH. O sistema tampo fosfato tem sua efetividade mxima em pH prximo do seu pKa de 6,86 e, portanto, resiste s variaes de pH na regio entre 5,8 e 7,8. Destarte, ele um tampo efetivo nos fluidos biolgicos. Na experincia realizada com o tampo ideal de Na2HPO4-/ NaH2PO4 verificamos, primeiramente, que 10 mL de NaH2PO4, o pH medido pelo pHmetro foi de 6,64. Como as concentraes eram iguais, ento pKa = pH = 6,64, mostrando que o tampo estava prximo da sua efetividade mxima. Em seguida, fizemos adies sucessivas de HCl 0,1M com uma pipeta graduada de 2 mL. Houve ento a remoo do cido clordrico, com formao de uma quantidade adicional de NaH 2PO4 A seguir, a tabela abaixo mostra os resultados obtidos quando calculados e quando medidos pelo pHmetro: Volume PH (medido no PH calculado pHmetro) inicial Adio de 0,5 mL Adio de 1mL Adio de 1,5 mL Adio de 2 mL 6,64 6,71 6,68 6,65 6,58 7,2 7,16 7,07 6,94 6,73

Constatamos, portanto, que o tampo resistiu as variaes de pH e mostrou-se efetivo, j que permaneceu na regio tamponante. Na experincia realizada com o tampo no ideal de Na2HPO4-/ NaH2PO4, verificamos, primeiramente, que com 5 mL de NaH2PO4 e 10 mL de Na2HPO4, o pH medido pelo pHmetro foi de 7,11. Como as concentraes eram diferentes, pelo fato de os volumes serem diferentes o pH foi um pouco maior que o pKa, mas ainda ficou prximo da sua efetividade mxima. Em seguida, fizemos adies sucessivas de NaOH 0,1M com uma pipeta graduada de 2 mL. A seguir, a tabela abaixo mostra os resultados obtidos quando calculados e quando medidos pelo pHmetro: Volume PH (medido no PH calculado pHmetro) inicial Adio de 0,5 mL Adio de 1 mL Adio de 1,5 mL 7,11 7,18 7,33 7,67 7,67 7,7 7,8 7,87

Adio de 2 mL 9,8 7,94 Houve remoo do hidrxido de sdio, com a formao de uma quantidade adicional de Na2HPO4. Percebemos que na adio de 2 mL de NaOH o pH variou bruscamente, experimentalmente, mostrando que alm ter passado da regio tamponante o tampo foi rompido. Constatando, assim, que o tampo no foi efetivo. A gua destilada comportou-se de maneira diferente, quando a ela foi adicionado ions de OH , devido a sua alta concentrao molar e reduzida dissociao + para formar H . Deixando, desse modo, de formar tampo. As diferenas obtidas entre os pH nas medies experimentais e as obtidas pelos clculos podem ser justificadas pela falta de preciso do pHmetro ou at mesmo pela no troca da gua destilada em que os eletrodos se encontravam, pois as medies eram feitas por outras pessoas e com sistemas de espcies distintas.

6 Concluso
Uma das propriedades de qualquer sistema biolgico de ser dependente do pH. Se

uma soluo tamponada resiste a mudanas de pH quando cidos e bases so adicionados ou quando uma diluio ocorre, podemos concluir, portanto, que uma soluo tamponante ideal do tampo Na2HPO4-/ NaH2PO4 resiste de maneira mais eficiente que uma soluo tamponante no ideal do mesmo, pois este no haje de modo efetivo. Esse resultado foi obtido aps verificarmos que o tampo Na2HPO4-/ NaH2PO4 ideal conseguiu resistir sucessivas adies do cido (HCl 0,1 M) e permaneceu na regio tamponante, com pouca variao de pH. J no tampo Na2HPO4-/ NaH2PO4 no-ideal tiveram sucessivas adies da base (NaOH 0,1M) e na ltima adio (2mL), o sistema no resistiu e variou bruscamente o pH, ou seja, o sistema tamponante foi rompido. notvel, na gua destilada, a fragilidade do equilbrio das cargas. Quando os + ons H e OH vo sendo add, observada variaes bruscas no pH, mesmo quando essas quantidades add so pequenas. Fato esse, que acontece devido a sua pequena dissociao para a formao dos ons H+ e OH-, que resulta na ausncia de capacidade tamponante.

7 Bibliografia Florucci, Antnio; Soares, Mrlon; Cavalheiro, der. Artigo sobre O Conceito de Soluo Tampo. Lehninger, A. Princpios de Bioqumica, 3 edio, So Paulo, Servier, 2000.