CENTRO UNIVERSITRIO DO ESTADO DO PAR CURSO DE LICENCIATURA EM CINCIAS BIOLGICAS

Bruno Matheus de Oliveira Martins Carina KaorySasahara de Paiva Jos Clarindo Martins Filho Mauricio Oliveira Coelho Marques

Estruturando uma coleo de fungos no CESUPA

Belm PA 2012

Bruno Matheus de Oliveira Martins Carina KaorySasahara de Paiva Jos Clarindo Martins Filho Mauricio Oliveira Coelho Marques

Estruturando uma coleo de fungos no CESUPA

Trabalho realizado para obteno de nota, referente avaliao parcial do 2 bimestre de 2012.1 da disciplina Fungos ministrada pela professora e e da Patrcia disciplina

Fagundes Populaes Naturais professora

Comunidades pela do

ministrada Adriana Paula

Centro Universitrio do Estado do Par CESUPA.

Belm PA 2012

SUMRIO

RESUMO.....................................................................................................................4 INTRODUO.............................................................................................................4 OBJETIVOS.................................................................................................................5 METODOLOGIA..........................................................................................................6 3.1 reas de coletas ...................................................................................................6 3.2 Procedimentos de coleta ......................................................................................6 3.3 Procedimentos laboratoriais .................................................................................7 3.3.1 Isolamento..........................................................................................................7 3.3.2 Identificao macroscpica................................................................................7 3.3.3 Identificao microscpica.................................................................................7 RESULTADOS E DISCUSSO..................................................................................8 ANEXOS.....................................................................................................................16 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS...........................................................................17

ESTRUTURANDO UMA COLEO DE FUNGOS NO CESUPA

Resumo Este trabalho visa coletar e identificar fungos microscpicos, de diversos habitats, entre eles o aqutico, no lago do parque ambiental Antnio Danbio e no ar, em Belenzinho, Mosqueiro. O delineamento experimental deu-se por meio da semeadura, do isolamento, da montagem de lminacom corante azul de metileno e de micro cultivo (Riddell, 1960), alm da anlise macro e microscpica,a partir da cultura de fungos aquticos e anemfilos. Partindo desses procedimentos foi possvel realizar a identificao (espcie), assim como organizar e identificar a coleo biolgicade fungos, da instituio de ensino superior: CESUPA. Palavras chave: Fungos. Antnio Danbio. Mosqueiro.Identificao. CESUPA.

1- INTRODUO

Reino

Fungi

com

aproximadamente

1,5

milho

de

espcies,

representadopor organismo: eucariontes e heterotrficos, apresentando ampla distribuio em vrios ambientes, como: solo, madeira, gua e ambientes extremos e exticos. Dispersam-se na natureza atravs do ar atmosfrico (anemfilos)ou por outras vias, comoinsetos, animais, incluindo o homem e at mesmo por meio dos alimentos, representando um grupo bastante diversificado, ficando atrs apenas dos insetos (ESPOSITO, 2010). Da mesma forma como ocorre entre as bactrias, a distino entre fungos aquticos e terrestres uma tarefa muito difcil. Pegando uma amostra de gua, geralmente, encontram-se espcies aquticas, muitas espcies terrestres e outras que vivem em ambos os meios. Somente aqueles capazes de reproduzirem-se em ambiente aqutico podem ser considerados fungos genuinamente aquticos. Em geral, dois tipos de fungos esto presentes em ambientes aquticos: os zoospricos e os no-zoospricos. Os primeiros possuem estruturas especializadas
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para motilidade, e pertencem diviso Mastigomycota; os ltimos, pertencentes s divises Ascomycota, Basidiomycota e Deuteromycota, geralmente produzem esporos, tornando-se resistentes s variaes ambientais. (ROCHA, 2009) J os fungos anemfilos so encontrados no ar atmosfrico e tem sua incidncia influenciada por fatores como: a localidade, estao de ano, umidade do ambiente, entre outros, e pertencem diversos gneros e espcies e quase todos so contaminantes, isto , podem ser isolados facilmente do ar, utilizando-se meios de cultura adequados (FLORES; ONOFRE, 2010). Os fungos de substrato vegetal (madeira) so agentes biodegradadores, por encontrarem na madeira os nutrientes necessrios para o seu desenvolvimento (LEVY, 1983).E para os fungos do solo, j foram coletados aproximadamente 25 mil espcies isoladas de solos agrcolas, sendo ele o habitat primrio de fungos. Atualmente, as colees cientficas biolgicas das instituies de pesquisa do Brasil, constituem um patrimnio de informao sobre fauna, flora e gentica com importncia para estudos e divulgao das espcies brasileiras e so fundamentais para o desenvolvimento e formao de novas categorias de patrimnio, como o patrimnio gentico. Diferentes processos tm sido utilizados para a preservao de fungos (CMARA, 2008). Segundo RODRIGUEZ; LIRIO; LACAZ, 1992 a escolha do mtodo depende das disponibilidades do laboratrio, longevidade da preservao, estabilidade das culturas e outros fatores. As colees fngicas de referncia podem ser basicamente de dois tipos: (a) colees de espcimes mortos, desidratados, geralmente conservados em herbrios; (b) colees de espcimes vivos em cultura, usualmente preservados em micotecas e que possibilitam investigaes fisiolgicas e bioqumicas. Neste contexto nosso trabalho refere-se aos diferentes mtodos de coleta de fungos microscpicos, da gua e do ar, a fim de se chegar identificao dessas espcies, integrando esses fungos micoteca da instituio de ensino superior, Centro Universitrio do Estado do Par (CESUPA).

2 -OBJETIVOS

Obter conhecimento sobre a diversidade local dos fungos;

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Estruturar e organizar a coleo de fungos do CESUPA; Conhecer os mtodos de coletas dos fungos em diferentes substratos. 3METODOLOGIA 3.1. REAS DE COLETA

A primeira coleta de fungos foi realizada no interior do Parque ambiental Antnio Danbio, uma rea com cerca de 30 mil (m), localizado no municpio de Ananindeua, no Km 5 da BR 316.Essa rea possui diversas rvores de grande porte, que favorece um ambiente com muita luminosidade, ao redor do lago. A segunda coleta ocorreu nas matas do balnerio do Belenzinho, que fica localizado na rodovia PA 191, no Distrito de Mosqueiro. Em uma rea de mata fechada, segundo a classificao de Koppende clima quente e mido, e iluminao baixa devido s rvores de grande porte. A terceira coleta ocorreu no dia 02 em uma rea de vrzea na Baia do Sol Distrito de Mosqueiro, (22 km ao litoral norte da ilha).

3.2. PROCEDIMENTOS DE COLETA

A tcnica utilizada no Parque ambiental Antnio Danbio, no dia 07 de maro 2012, foi metodologia de coleta para fungos em ambientes aquticos, onde se utilizou potes plsticos esterilizados para coletar trs amostras de gua da beira do lago do parque, em pontos distintos. (Figura 1) Em Mosqueiro, no dia 21 de maro 2012, a tcnica utilizada foi metodologia de coleta de fungos anemfilos (Mtodo Gravitacional), na qual se utilizou trs placas de Petri contendo gar Sabouraud com cloranfenicol, que foram expostas ao ambiente da mata por 10 minutos, com cerca de 10 metros acima do solo, cada placa em pontos distintos. A terceira coleta ocorreu no dia 2 de junho, na qualse utilizou tanto a metodologia de coleta de fungos do solo, utilizado uma esptula para cava-lo e um saco plstico para coletar esse substrato, quanto de coleta em substrato vegetal, a qual se retirou lascas de madeira de uma mesa, com o auxilio de uma faca. Em ambas as trs coletas foi utilizado o Garmin GPS 60.
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3.3. PROCEDIMENTOS LABORATORIAIS

3.3.1. Isolamento Os materiais coletados da gua, do substrato vegetal e o do solo foram conservados na geladeira, antes de quaisquer procedimentos. Diferente do que ocorreu com os fungos anemfilos que no foram conservados na geladeira. Para o mtodo dos fungos da gua, foi-se realizada a semeadura de 1ml de gua, com o auxilio de uma pipeta, para uma placa de Petri contendo gar Sabouraud com cloranfenicol, onde esperou-se o desenvolvimento da colnia para em seguida realizar o repique dela para tubos de ensaio contendo gar. J as coletas do ar, aps o desenvolvimento fngico na placa de Petri, a partir de sua coleta, foram repicadosem tubos de ensaio contendo gar Sabouraud. Para os fungos do substrato vegetal, foi realizado o isolamento de pequenas amostras de madeira em placas de Petri contendo gar Sabouraud com cloranfenicol e incubadas a temperatura ambiente. A partir de seu crescimento as colniasforam repicadas para tubos de ensaio contendo gar. Os fungos do solo foram submetidos ao mtodo da placa de solo onde consiste em colocar, com o auxilio de uma esptula, quantidades pequenas de solo em uma placa de Petri, evitando os torres de terra , e em seguida foi adicionado o gar liquido, a fim de solidificar o solo, para aps seu desenvolvimento serem repicadas em tubos contendo gar Sabouraud. 3.3.2. Identificao macroscpica

Aps o desenvolvimento fngico dos substratos coletados (gua, ar, madeira e solo),nos tubos de ensaio, foram observadosas principais caractersticas presentes em cada um, tais como o tipo de colnia, aspecto, colorao e o reverso.

3.3.3 Identificao microscpica

Para uma identificao mais elaborada da micro morfologia dos fungos coletados, utilizou-se a tcnica de Riddell 1960, que consiste em transferir um bloco
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de gar para uma lmina montada sobre um suporte de vidro contido dentro de uma placa de Petri, que esta sobre um papel filtro.Em seguida foi retirada pequenas pores da colnia desejada que foi semeada nos quatros lados do gar, onde em seguida foi coberta por uma lamnula. Aps essa montagem foi adicionado gua destilada sobre o papel filtro. Com o crescimento satisfatrio da colnia, a lamnula foi retirada do microcultivo transferindo-a para uma nova lmina contendo o corante azul de metileno em quantidade suficiente para corar o material fngico aderido lamnula. Aps as montagens das lminas seguindo a tcnica de Riddell 1960, foi consultada uma literatura especializada sobre fungos, a fim de auxiliar na identificao dos organismos isolados dos substratoscoletados (gua, ar, madeira e solo). 5 RESULTADOS E DISCUSSO

A partir da coleta dos fungos aquticos, foram isolados trs colnias, referentes aos trs pontos de coleta, em trs tubos de ensaio. Para os fungos anemfilos, foram isolados quatro colnias, referentes ao nico ponto de coleta, pois os outros dois foram perdidos por uma contaminao de larvas de inseto, em quatro tubos de ensaio. Enquanto para o substrato vegetal (madeira), foram isolados seis colnias, referentes ao nico ponto de coleta, em seis tubos de ensaio. J para o substrato solo, foram isolados quatro colnias, referentes ao nico ponto de coleta, em trs tubos de ensaio apenas, pois a colnia quatro no se desenvolveu. O Garmin GPS 60 foi utilizado para melhor delimitar a rea de coleta desses substratos, onde seus resultados seguem abaixo: Tabela 1. Pontos de coleta de Fungos Excurso 1 N do Ponto 030 Data 07/03/2012 Local de Coleta Lago GPS S 012302.0`` e H04824`19,4`` 031 07/03/2012 Lago S 0123`02.2`` e
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H04824`19.0`` 033 07/03/2012 Lago S 0123`02.3`` e H04824`20.5``

Tabela 2. Pontos de coleta de Fungos Excurso 2 N do ponto 026 Data 21/03/2012 Local de Coleta Mata GPS S 01 08`26.0 e H04821`30.0`` 040 21/03/2012 Mata S 0108`34.4`` e H04821`27.2`` 050 21/03/2012 Beira do lago S 0108`45.7`` e H04821`25.3`` Tabela 3. Pontos de coleta de Fungos Excurso 3 Ponto 35 Data 02/06/2012 Local de coleta Sitio/mata aberta GPS S 01 04` 30.4`` e H048 19` 45.9``

J os resultados da analise macroscpica e da identificao microscpica dos fungos coletados (gua, ar, madeira e do solo) seguem abaixo:

Tabela 4. Resultados macroscpicos. Coletas/ar, gua e substrato madeira e terra. CSP 30 / gua Colnia filamentosa, aspecto algodonosa, de colorao verde e reverso branco. CSP 31/ gua Colnia filamentosa, de aspecto algodonosa, colorao verde e de reverso branco. CSP 32/ gua Colnia filamentosa, de aspecto aveludada, colorao cinza e de reverso branco. CSP 33/ ar Colnia filamentosa, aspecto aveludada, colorao e de reverso vermelho escuro.
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Descrio macroscpica.

CSP 34/ ar

Colnia filamentosa, aspecto aveludada, colorao branco e de reverso branco.

CSP 35/ ar

Colnia filamentosa, aspecto aveludada, colorao branco e reverso branco.

CSP 36/ ar

Colnia filamentosa, aspecto aveludada, colorao branco e de reverso branco.

CSP 37/substrato 1

Colnia filamentosa, aspecto aveludada e de colorao branca e verde.

CSP 38 substrato 1

Colnia filamentosa, aspecto algodonosa e de colorao branca e verde.

CSP 39 substrato 1

Colnia filamentosa, aspecto aveludada e com colorao verde e preta.

CSP 40 substrato 1

Colnia filamentosa, aspecto aveludada e de colorao verde e preta.

CSP 41 substrato 2

Colnia filamentosa, aspecto algodonosa e de colorao branca e verde.

CSP 42 substrato 2

Colnia filamentosa, aspecto aveludada e de colorao branca e amarela.

CSP 43 terra CSP 44 terra CSP 45 terra

Colnia filamentosa, aspecto aveludada e de colorao verde. Colnia filamentosa, aspecto aveludada e de colorao verde. Colnia filamentosa, aspecto aveludada e de colorao verde e cinza.

CSP 46 terra

Sem crescimento.

Tabela 5. Identificao microscpica. Coletas/ gua, ar e substrato vegetal e solo. CSP 30/gua Tricoderma sp. Colnias de crescimento lento, inicialmente brancas e, mais tarde, amarelas, verdes a cinzentas. Conidiforos ramificados, com filides em forma de frasco. Condios
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Gnero

Descrio macroscpica e microscpica.

dispostosem

aglomerados, de paredes lisas ou

rugosas, dispostos nas extremidades das filides.

Colnias de crescimento lento, brancas a amareladas, tornando-se Verticillium sp. acinzentadas, vermelhas, verdes e amarelas; reverso amarelo a vermelho acinzentado. Conidiforos eretos, bem diferenciados em ramos, portadores de filides que vo se divergindo em filides com a forma de nave. Condios hialinos, unicelulares, unidos por substncia mucilaginosa (gliocondios).

Colnias geralmente em tons de verde, s vezes branco, comconidiforo que surge de um miclio simples ou de um sinnio. O pice do conidiforo ramificado e no final do conidiforo apresenta clulas conidiognicas agrupadas e ramificadas na forma de filides. Os condios so fialsporos, hialinos ou CSP 31/ gua Penicillium sp. coloridos quando agrupados, so unicelulares muitas vezes, agrupados, globosos ou ovides, sendo

produzidos em uma cadeia basipetal. Conidiforos longos ramificados-se na parte terminal. Condios esfricos e catenulados produzidos em filides

dispostas em numero varivel na ramificao terminal do conidiforo (conjunto lembra uma vassoura). Colnias geralmente em tons de verde, s vezes branco, comconidiforo que surge de um miclio CSP 32/ gua Penicillium sp simples ou de um sinnio. O pice do conidiforo ramificado e no final do conidiforo apresenta clulas conidiognicas agrupadas e ramificadas na forma de filides. Os condios so fialsporos, hialinos ou
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coloridos quando agrupados, so unicelulares muitas vezes, agrupados, globosos ou ovides, sendo

produzidos em uma cadeia basipetal. Conidiforos longos ramificados-se na parte terminal. Condios esfricos e catenulados produzidos em filides

dispostas em numero varivel na ramificao terminal do conidiforo (conjunto lembra uma vassoura). Colnias geralmente de crescimento lento, muitas vezes, compacto e mido no incio, tornando-se p, CSP 33/ ar Acremonium sp. camura e pode ser branco, cinza, rosa, rosa ou cor de laranja. Os condios so geralmente unicelulares, hialinos ou pigmentados, globosos a cilndrico, e principalmente agregados em cabeas viscosasno pice de cada filide. CSP 34/ ar Tricoderma sp. Colnias de crescimento lento, inicialmente brancas e, mais tarde, amarelas, verdes a cinzentas. Conidiforos ramificados, com filides em forma de frasco. Condios dispostosem aglomerados, de paredes lisas ou

rugosas, dispostos nas extremidades das filides. Colnias geralmente de crescimento rpido, em tons de verde, s vezes branco, comconidiforo que surge de um miclio simples ou de um sinnio. O pice do conidiforo ramificado e no final do conidiforo apresenta clulas conidiognicas agrupadas e

ramificadas na forma de filides. Os condios so CSP 35/ ar Penicillium sp. fialsporos, hialinos ou coloridos quando agrupados, so unicelulares muitas vezes, agrupados, globosos ou ovides, sendo produzidos em uma cadeia basipetal. Conidiforos longos ramificados-se na parte terminal. Condios esfricos e catenulados produzidos em filides dispostas em numero varivel na

ramificao terminal do conidiforo (conjunto lembra uma vassoura).

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CSP 36/ ar

Sem estrutura de reproduo.

Hifa septada e hialina.

CSP 37/ substrato 1

Penicillium sp.

Colnias so geralmente de crescimento rpido, em tons de verde, s vezes branco, comconidiforo que surge de um miclio simples ou de um sinnio. O pice do conidiforo ramificado e no final do conidiforo apresenta clulas conidiognicas

agrupadas e ramificadas na forma de filides. Os condios so fialsporos, hialinos ou coloridos quando agrupados, so unicelulares muitas vezes, agrupados, globosos ou ovides, sendo produzidos em uma cadeia basipetal. Conidiforos longos ramificados-se na parte terminal. Condios esfricos e catenulados produzidos em filides dispostas em numero varivel na ramificao terminal do conidiforo (conjunto lembra uma vassoura). Condios CSP 38/ substrato 1 Gliocladium sp. unicelulares, ovides, aglomerados em

cachos, unidos por substncia mucilaginosa. Colnias em gar-Sabouraud, de vermelhas a verde-escuras. Conidiforos peniciliados. Aglomerados de condios na extremidade de conidiforos.

CSP 39/ substrato 1

Sem estrutura de reproduo.

Hifa septada.

Colnias de crescimento rpido, de colorao branca CSP 40/ substrato 1 Mucor sp. para o amarelo, tornando-se cinza-escuro, com o desenvolvimento de esporngios. Os esporangiforos so eretos, simples ou ramificados e os

esporangisporos so hialinos, cinza ou marrom, globosa a elipside, e lisas e ou finamente

ornamentados. Colnias de crescimento lento, inicialmente brancas e, mais tarde, amarelas, verdes a cinzentas. Conidiforos CSP 41/substrato 2 Tricoderma sp. ramificados, com filides em forma de frasco. Condios
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dispostosem

aglomerados, de paredes lisas ou

rugosas, dispostos nas extremidades das filides. CSP 42/substrato 2 Tricoderma sp Colnias de crescimento lento, inicialmente brancas e, mais tarde, amarelas, verdes a cinzentas. Conidiforos ramificados, com filides em forma de frasco. Condios dispostosem aglomerados, de paredes lisas ou

rugosas, dispostos nas extremidades das filides. Colnia com superfcie inicialmente branca e com o tempo fica amarelada, verde, castanha ou preta, dependendo da espcie. A textura aveludada. As hifas so septadas e contm as cabeas aspergilares CSP 43/ substrato terra Aspergillus sp. que so as vesculas na extremidade dos conidiforos que do origem aos esporos externos alongados (filides), que por sua vez do origem aos condios.

Colnia com superfcie inicialmente branca e com o tempo fica amarelada, verde, castanha ou preta,

dependendo da espcie. A textura aveludada. As hifas so septadas e contm as cabeas aspergilares que so as vesculas na extremidade dos conidiforos CSP 44/ substrato terra Aspergillus sp. que do origem aos esporos externos alongados (filides), que por sua vez do origem aos condios.

Colnia com superfcie inicialmente branca e com o tempo fica amarelada, verde, castanha ou preta,

dependendo da espcie. A textura aveludada. As hifas so septadas e contm as cabeas aspergilares CSP 45/ substrato terra Aspergilus sp. que so as vesculas na extremidade dos conidiforos que do origem aos esporos externos alongados (filides), que por sua vez do origem aos condios.

CSP 46/ substrato terra

No cresceu

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J em relao identificao dos 17 fungos coletados, os gneros Penicillium sp., Aspergillus sp., Gliocladium sp.Tricoderma sp. , Acremonium sp. E Verticillium sp.fazem parte do Filo Deuteromycota, que tem como caracterstica fundamental a reproduo assexuada atravs da produo de conidiforos e condios, que podem estar espalhados no miclio ou agrupados em outras estruturas. Os deuteromicetos produzem inmeras estruturas assexuadas e, portanto, de origem mittica; assim, o grupo tambm denominado Fungos Mitospricos, que so encontrados em ambientes terrestres e aquticos, no ar, no prprio homem, sobre substratos vegetais e animais vivos ou mortos. O gnero Mucorsp.faz parte do Filo Zygomycota, famlia Mucoraceae, ordem Mucorales, encontrado comumente no solo, onde ele pode ser disseminado pela ao da enxurrada das chuvas, e tambm por ao dos ventos. Podem ser encontrado nos mais variados substratos, de restos de comida a frutos e sucos. Existem outras tcnicas para a coleta de fungos aquticos, como a iscagem com substratos orgnicos, porm utilizamos a metodologia de coleta para fungos em ambientes aquticos, pois os fungos coletados no so necessariamente aquticos, j que a gua um meio de disperso para os esporos. Para os fungos anemfilos, tambm existe outras tcnicas de coleta, como o amostrador de ar por impactao, porm a metodologia aplicada foi a do mtodo gravitacional, por ser uma tcnica mais acessvel. Para os fungos do solo e da madeira, a metodologia escolhida foi a de coleta de fungos do solo e em substrato vegetal, respectivamente, pois so as metodologias mais comuns de coletas desses substratos. Sendo assim cada substrato, possui sua determinada metodologia de coleta, que melhor se adequa ao tipo de mtodo utilizado para ele.

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6- ANEXOS

Figura 1: rea da primeira coleta (gua).

Figura 2: coleta de fungos aquticos.

Figura 3: coleta de fungos aquticos.

Figura 4: coleta de fungos anemfilos.

Figura 5: coleta de fungos anemfilos.

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7 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

CMARA, Roberta. A patrimonializao de material gentico Brasileiro: O estudo de caso da coleo de cultura de fungos filamentosos do Instituto Oswaldo Cruz. UNIRIO/MAST - RJ, Abril de 2008.

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