Curso CG Final

Cromatografia Gasosa
da teoria bsica ao desenvolvimento de mtodos
Bruno Carius Garrido

Pesquisador-tecnologista em Metrologia e Qualidade
Gnese da cromatografia
Primeiros trabalhos por Runge em 1834 (spot tests), mais tarde Goppelsroeder e Schnbein Day (1897-1903) anlises de petrleo por fluxo ascendente em colunas empacotadas Tswett (1906-1907) Separao de pigmentos vegetais em coluna aberta com fase estacionria Kuhn (1931), Tiselius (1940), Wilson (1940), Tiselius (1941), Martin & Synge (1941) Martin e cols. - 1944 Cromatografia em papel Cremer (1951) - Cromatografia gs-slido James & Martin (1952) Cromatografia gs-lquido Glueckauf (1955) Primeira equao para a relao entre HETP e tamanho de partcula e difuso Van Deemter e cols. Desenvolveu a teoria cintica pela simplificao do trabalho de Lapidus e Ammundson para uma funo Gaussiana
O que cromatografia?
Tcnica de separao de componentes de uma mistura baseada em diferentes graus de interao dos componentes da mistura com uma fase estacionria e uma fase mvel
Classificao das tcnicas cromatogrficas

Pela natureza das fases:
Cromatografia Gasosa (CG) Lquida (CL) Supercrtica (CS)
Fase Mvel Gs Lquido Fluido supercrtico
Fase Estacionria Lquido Slido Lquido Slido Lquido Slido
Tipo* Gs-lquido Gs-slido Lquido-lquido Lquido-slido
* Denominaes ultrapassadas

Pelo suporte da fase estacionria: - Planar: Em camada delgada (CCD) Em papel (CP) - Coluna
Pelo fluxo da fase mvel: - Unidimensional - Bidimensional - Radial Pela natureza da fase mvel (Cromatografia Lquida) - Fase normal - Fase reversa

Pelo tipo de interao responsvel pela separao: - Adsoro - Partio - Excluso - Complexao (troca inica) - Afinidade (imunoafinidade (CIA), bioafinidade) Pela presso (Cromatografia em coluna): - Normal - Mdia presso - Mdia presso (tipo flash) - Alta presso (CLAE) Pelo objetivo da separao: - Analtica - Preparativa (ou semi-preparativa) - Extrativa ou para pr-tratamento da amostra (EFS)
Cromatografia Gasosa (CG)

- A cromatografia gasosa com o emprego de colunas capilares pode ser denominada cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR)
Pergunta
Eletroforese um tipo de cromatografia?
Parmetros cromatogrficos e seus smbolos
Principais parmetros cromatogrficos e seus smbolos
Principais parmetros cromatogrficos e seus smbolos
A resoluo cromatogrfica
A resoluo cromatogrfica o parmetro cromatogrfico de maior importncia
Uma resoluo igual a 1,5 ou maior garante a separao em linha de base de dois sinais cromatogrficos, permitindo boas medidas de rea e altura dos sinais.
O desafio da cromatografia:
Ter a resoluo adequada no menor tempo possvel!
Equao fundamental da resoluo cromatogrfica
Eficincia Seletividade
Principal parmetro para uma separao na cromatografia gasosa devido a ser intrinsecamente grande
Reteno
Sem reteno no h separao!
Principal parmetro para uma separao na cromatografia lquida
Importncia da eficincia em CG
- A cromatografia gasosa de alta resoluo produz bandas muito estreitas e de volume muito baixo Alta eficincia! - Isso permite a separao de muitos componentes em tempos de corrida relativamente baixos - De maneira geral, a resoluo cromatogrfica em CG depende menos da seletividade do que a cromatografia lquida
- Parmetros que influenciam a seletividade em CG: qumica da fase estacionria e temperatura

- Parmetros que influenciam a seletividade em HPLC: qumica da fase estacionria, solvente orgnico na fase mvel, pH da fase mvel, tipo e concentrao do tampo na fase mvel, presena e tipo de reagente de pareamento inico
Bandas em azul com mesma seletividade e fator de reteno similar
HPLC
CG
Bandas em azul com mesma seletividade e fator de reteno similar
HPLC
CG
Se a seletividade e a reteno so to semelhantes, porque a resoluo resultante to diferente nesses cromatogramas?
Sinais em azul com mesma seletividade e fator de reteno similar
HPLC
CG
A eficincia determinante nessa separao!

Mas o que a eficincia???
Teoria cintica da cromatografia gasosa
Toda separao cromatogrfica resulta na separao de molculas de compostos diferentes, mas o efeito colateral uma leve separao entre molculas do mesmo composto Fenmeno de alargamento de bandas
A eficincia a medida do alargamento das bandas, estamos lembrados?
Alargamento de bandas em cromatografia gasosa

O alargamento das bandas cromatogrficas em cromatografia gasosa se deve principalmente a trs efeitos: - Difuso longitudinal (Ordinary diffusion): Refere-se difuso que ocorre sempre que h uma regio de alta concentrao adjacente a uma regio de baixa concentrao. A difuso ocorre no nvel molecular, resultando do movimento de molculas aps a coliso. - Difuso por turbilhonamento (difuso de eddy): Efeito dos caminhos mltiplos. - Desequilbrio local (Local nonequilibrium) : Desequilbrio que ocorre na coluna devido ao perfil de concentrao varivel ao qual cada diferente rea da coluna est exposta.
Difuso de eddy
Efeito de desequilbrio local
Alargamento de bandas
O primeiro como Conhecida termoequao corresponde de Van geometria Deemter, onde: do empacotamento, o segundo difuso longitudinal na fase gasosa e o terceiro ao processo de resistncia =transferncia constante adimensional de massa. caracterstica do empacotamento, sendo menor que 1 para empacotamentos regulares dp = dimetro das partculas em centmetros = fator de correo para padres irregulares de difuso Dg = difusividade molecular real u = velocidade linear aparente k = fator de capacidade df = dimetro efetivo de filme na fase lquida Dl = difusibilidade do soluto na fase lquida
O termo A caracterstico do tamanho de partcula e da qualidade do empacotamento de uma coluna e s pode ser reduzido alterando-se o empacotamento. As colunas capilares permitem a eliminao do termo A, visto que no possuem mltiplos caminhos para que ocorra a difuso de eddy
-
O termo B uma medida da difuso molecular

Pode ser reduzido pela reduo da difusividade molecular. Difusividade molecular - depende da natureza do vapor e da temperatura e presso do sistema. Maior em gases de baixa massa molecular (H2, He) do que em gases de massa molecular mais elevada (N2, CO2). Considerando apenas isso, escolheramos esses gases (N2, CO2) para CG. H outros efeitos a considerar Tipo de detector, viscosidade do gs
Alm disso, esse termo dividido por u na equao aumentamos u para reduzir o seu efeito
O aumento de u d mais peso ao termo C considerar o balano depende do tipo de coluna maior ou menor resistncia transferncia de massa!
A grande vantagem da CGAR

O que faz da CGAR a tcnica analtica mais utilizada em qumica?
Sua altssima eficincia intrnseca mencionada anteriormente conseguida pela eliminao do termo A da equao de van Deemter pelo uso de colunas capilares!
A grande vantagem da CGAR
FE lquida
SUPORTE Slido inerte poroso Tubo capilar de material inerte
Separao de C14, C15 e C16 (1, 2 e 3) em coluna empacotada (esquerda) e coluna capilar (direita)
CGAR como Mtodo Analtico
Vantagens Excelente poder de resoluo; Anlise de dezenas de substncias em uma nica amostra; Alta sensibilidade (1012 g); Injeo de pequena quantidade de amostra;
Excelente tcnica quantitativa.

Limitaes
Anlise de substncias volteis e termicamente estveis;

Uso de derivados para obteno de volatilidade.
Radler & Nunes, 2003
Sistema cromatogrfico S capaz de promover separao!

Voltando:
Tcnicas de introduo de amostras em CG
Em cromatografia gasosa o corao (ou calcanhar de Aquiles) a injeo da amostra pois aps a entrada da amostra na coluna, s possvel separ-la No se junta molculas em um sistema cromatogrfico! Requisitos iniciais:
Compostos volteis Termicamente estveis O que fazer se meus compostos de interesse no so volteis e/ou termicamente estveis?
Injeo na coluna a frio (cold on-column) PTV Derivatizao
Relembrando volatilidade:
Massa molecular - Quanto maior a massa, menor a presso de vapor Interaes intermoleculares - Interaes carga-carga > carga-dipolo > ligao hidrognio > dipolo-dipolo > dipolo-dipolo induzido > van der Waals - Lembrar da estereoqumica (E- e Z-) e seu efeito duplo dependendo do tamanho da molcula.
Derivatizao pode aumentar dramaticamente a volatilidade e a estabilidade de compostos

A derivatizao mais comum a sililao Reagentes mais comuns: MSTFA e BSTFA Existem diversas outras reaes de derivatizao: Acilao, alquilao, formao de derivados cclicos, derivatizaes quirais. Na prtica, o procedimento de derivatizao deve visar a substituio de grupos funcionais mais polares por outros de menor polaridade, reduzindo a fora das interaes intermoleculares Ateno para a massa!
Uma boa reviso sobre as principais derivatizaes usadas em CG est em: Segura et al., 1998 J. Chromatogr. B.
Amostragem em CG
As amostras de interesse podem ser gasosas, lquidas ou slidas Em todos os casos, deve-se garantir uma amostragem representativa e homognea
A coluna suporta apenas amostras gasosas converso para lquidos e slidos
Amostragem em CG - Gases
Existem diversas formas de se introduzir uma amostra gasosa em CG: cilindros, bolsas hermticas, seringas hermticas e vlvulas A amostra pode ser inserida diretamente na coluna ou via injetor convencional (p.ex.: split/splitless) A amostragem de Headspace tambm usada para anlise do gs sobre uma amostra lquida ou slida (volteis)
Amostragem em CG - Slidos
Muito rara - mais comum: solubilizao da amostra slida em solvente adequado para posterior anlise A amostragem de slidos se limita basicamente anlise dos seus volteis Headspace ou anlise por vaporizao trmica programada
Amostragem em CG - Lquidos
Forma mais comum de amostragem em CG Uso de seringa Manual ou automaticamente Aplica uma pequena alquota de amostra na forma lquida para posterior vaporizao Idealmente: Lquidos volteis Lquidos menos volteis podem ser usados on-column e PTV A expanso dos lquidos ao passar para o estado gasoso deve ser considerada O aquecimento necessrio em muitos injetores tambm deve ser levado em conta degradao trmica da amostra
Amostragem em CG Lquidos Injeo Manual

Consiste literalmente na injeo manual com uma seringa Duas tcnicas principais podem ser usadas: Injeo com agulha fria e injeo com agulha aquecida Basicamente a injeo consiste dos seguintes passos:
Limpeza da seringa Retirada de amostra com volume cuidadosamente medido Injeo
Amostragem em CG Lquidos Injeo Manual com agulha fria

Inserir a agulha at o fim no injetor Rapidamente pressionar o mbolo da seringa para injetar o lquido Retirar a seringa Vantagem: Injeo rpida Desvantagem: Discriminao de substratos pouco volteis (condensao na agulha) e baixa repetitividade.
Analito pouco voltil Analito voltil
Amostragem em CG Lquidos Injeo Manual com agulha aquecida

Inserir a agulha at o fim no injetor Permitir tempo suficiente para que a agulha seja aquecida (3 5 s) Rapidamente pressionar o mbolo da seringa para injetar o lquido
Analito pouco voltil Analito voltil
Aguardar cerca de 15 20 s e retirar a seringa

Vantagens: Injeo muito reprodutvel e praticamente sem discriminao dos pouco volteis Desvantagem: Injeo demorada
Amostragem em CG Lquidos Tcnica de Air Gap ou lacuna de ar

Usada para evitar a discriminao de substratos pouco volteis Sugar amostra acima do volume pretendido e devolver at o mesmo Aps retirar a alquota de amostra do vial, preenchemos a seringa com ar (2 vezes o volume de amostra) Promover a injeo com agulha fria ou aquecida Vantagens: Evita a perda de volteis antes da injeo, evita a discriminao e ajuda a promover a transferncia completa de amostra: repetitividade melhorada
Amostragem em CG Lquidos Tcnica de Solvent flushing ou lavagem com solvente

Usada para evitar a discriminao de substratos polares Sugar solvente, ar, amostra e mais ar Promover a injeo com agulha fria ou aquecida Vantagens: Todas da injeo com lacuna de ar. Evita discriminao de substratos polares que estejam adsorvidos no vidro ou na agulha.
Sistemas de Injeo
Promover propriamente a introduo da amostra na coluna O tipo mais antigo de injeo em CGAR a injeo com diviso de fluxo (Split) Outro tipo muito comum (geralmente associado) a vaporizao sem diviso de fluxo (Splitless)
Outros tipos tambm muito comuns so a vaporizao com temperatura programada (PTV) e a injeo na coluna a frio (cool on-column)
O injetor split/splitless
Bloco metlico aquecido com 3 entradas e 3 sadas (basicamente) Revestido com um tubo de vidro chamado encamisamento de vidro (liner) proteger a amostra de degradao em contato com o metal aquecido
Entrada de Gs
Sada do divisor de fluxo Coluna
Seringa
Cmara de vaporizao
Septo
Purga do septo
Encamisamento de vidro
O injetor split/splitless
Permite fazer injees com diviso de fluxo (Split) e sem diviso de fluxo (Splitless) O que determina o tipo de injeo a ser feita a natureza da amostra
A injeo com diviso de fluxo (Split)

a forma mais antiga de introduo de amostras em colunas capilares Volume de vapor gerado no injetor geralmente da ordem de 0,5 a 1 mL
Divisor de fluxo
Fluxo na coluna da ordem de 1 mL/min

Efeito de alargamento no tempo Usa-se a diviso de fluxo para evitar esse alargamento
Coluna 1 minuto para esvaziar o injetor
Divisor de fluxo (10 mL/min)
5,45 segundos para esvaziar o injetor!
Coluna (1 mL/min)
Pergunta: Um equipamento de CG sabe medir fluxo de gs? Resposta:
No!

O que determina o fluxo de gs de arraste na coluna a diferena de presso entre a cabea da coluna (no injetor) e o detector Importante informar o detector e dimenses da coluna corretamente!
Ex.: Coluna de 0,25 mm DI e 30 m para fluxo 1 mL/min a 140C, P = 16,5 psi Coluna de 0,32 mm DI e 30 m para fluxo de 1 mL/min a 140C, P = 7,6 psi
Se uso uma coluna de 0,32 mm DI e informo para o equipamento que uma 0,25 mm DI, tento colocar 1 mL/min na coluna mas terei 2,7 mL/min!
A mesma considerao vale para o comprimento da coluna Medir! Como medir a coluna: lembrar da geometria! Circunferncia = 2..r

Desvantagem imediata: Perda de sensibilidade Joga mais amostra pra fora do que pra dentro do sistema Necessidade de pr-concentrao da amostra
A princpio esse tipo de injeo no recomendado para anlise de traos

Vantagem imediata: Forma mais rpida de transferncia de uma amostra para a coluna em CGAR Sinais mais estreitos
Discriminao e diviso no linear Sempre manter o injetor extremamente limpo!

Troca de septos a cada 30-50 injees, liner a cada 100 injees e limpeza do corpo do injetor a cada 200 injees (sempre que abaixar a temperatura liner e septo)
A injeo sem diviso de fluxo (Splitless)

Desenvolvida por acaso por Grob em 1969 Anlise de uma mistura de esterides em split Grob esqueceu-se de abrir a vlvula no momento da injeo e abriu mais tarde Cromatograma com sinais grandes e bem formados para uma amostra muito diluda

A estrutura do injetor exatamente a mesma do split A injeo feita com o divisor de fluxo totalmente fechado A amostra s pode ir para a coluna
Aps um curto perodo (chamado de tempo de amostragem; geralmente de 30-60 s), a vlvula totalmente aberta limpar o injetor
Alargamento no tempo vai acontecer Alargamento no espao pode acontecer
Divisor de fluxo
Coluna

Alargamento no tempo Devido simplesmente ao grande tempo que se leva para transferir a amostra do injetor para a coluna Alargamento no espao Efeito de alagamento com amostra lquida de uma parte da coluna analitos se espalham no solvente
A injeo em splitless requer o uso de um mecanismo de reconcentrao (focalizao) de amostra

Os mais usuais: Efeito de solvente e captura a frio a tcnica de injeo mais comum para anlise de traos em matrizes complexas
Tcnicas de reconcentrao Captura a frio

A tcnica da captura a frio usada para analitos pouco volteis
Temperatura do forno ~ 90C abaixo do PE do analito e ~ 40C acima do PE do solvente

Na coluna o solvente permanecer no estado gasoso, sendo carreado O analito passar para o estado lquido sendo capturado pela fase mvel Aps algum tempo (1,5 2 min) inicia-se a rampa de temperatura do forno para eluio dos analitos
Tcnicas de reconcentrao Efeito de solvente

Requer o uso de uma lacuna de reteno (retention gap)
Temperatura do forno ~ 30C abaixo do PE da amostra (solvente + analitos)

Toda a amostra ser condensada rapidamente na sada do injetor alargamento no espao Reduo drstica de volume cerca de 100 x menor Acelera a sada da amostra do injetor Nunca fazer isso na coluna! Usar lacuna de reteno
Tcnicas de reconcentrao Efeito de solvente

Assim como na captura a frio, comea-se a programao de temperatura
Amostra
Lacuna Coluna
Gs de arraste
FE
O solvente comea a evaporar, concentrando os analitos

Ao chegar na fase estacionria, os analitos esto concentrados e prontos para serem eludos
Gs de arraste
Gs de arraste
Gs de arraste
Tcnicas de injeo - Splitless

Tanto na injeo com diviso de fluxo quanto na injeo sem diviso possvel realizar uma injeo pulsada (pulsed split ou pulsed splitless) Aplica-se um pulso de presso (cerca de 3 x a presso normal) durante a injeo a fim de acelerar a sada da amostra do injetor
Essa tcnica aumenta a sensibilidade da anlise e gera picos muito mais estreitos e simtricos
O efeito sentido muito mais fortemente na injeo em splitless pois no split a sada da amostra do injetor j rpida
Tcnicas de injeo Liners para split e splitless
Tcnicas de injeo Cool on column Injeo na coluna a frio

Apesar de serem os mais utilizados, os injetores split/splitless possuem a desvantagem de necessitarem da volatilizao da amostra em alta temperatura Degradao trmica das amostras Para os casos de analitos termolbeis, pode-se utilizar a injeo na coluna a frio (cool on-column) o nico tipo de injetor onde a amostra no precisa passar por uma cmara adicional, sendo depositada diretamente na poro inicial da coluna Alm da degradao, evita problemas de discriminao Toda a amostra atinge a coluna Principal vantagem, mas tambm principal desvantagem

Os injetores on-column podem ter um septo ou uma vlvula de isolamento Abaixo, encontra-se a coluna A seringa especial com agulha de pequeno dimetro inserida pelo guia de agulha, at a parte interna da coluna As seringas com agulha de metal podem ser usadas manualmente ou com autoamostradores para colunas com DI de 0,53; 0,32 ou 0,25 mm

A injeo na coluna a frio a mais repetitiva e reprodutiva entre as diferentes injees para CG
Geralmente a temperatura do injetor controlada juntamente com a temperatura do forno

Por ser uma injeo que no sofre de discriminao, pode ser usada como controle na otimizao de outras tcnicas Assim como na injeo em splitless, necessrio que se use um mecanismo de reconcentrao da amostra devido ao alargamento no espao
Tcnicas de injeo Vaporizao com temperatura programada - PTV

Desenvolvido no fim da dcada de 1970, baseado no injetor splitless O injetor splitless apresenta suas maiores desvantagens devido ao fato de ser um injetor aquecido
O injetor PTV permite a injeo de amostras em split ou splitless com o corpo do injetor resfriado
considerado o mais verstil dos injetores em CG
Permite a injeo de grandes volumes de amostra (at 100 L)

A estrutura do injetor muito semelhante de um split/splitless, exceto pela entrada adicional de gs de resfriamento (Ar, CO2 ou N2(l)) O corpo do injetor, assim como os liners tem massa menor, para permitir seu rpido resfriamento/ aquecimento O injetor pode operar nos modos de split/splitless a quente, split/splitless a frio ou splitless a frio para grandes volumes

Para split/splitless a quente, a operao exatamente igual do injetor clssico A injeo split/splitless a frio pode ser vantajosa para transferncia de compostos termicamente instveis Nesse caso, a amostra depositada no liner como um lquido, evitando a evaporao imediata do solvente, sendo ento aquecida em uma taxa programada para sua transferncia para a coluna de maneira similar ao split/splitless clssico Essa injeo reduz/elimina os problemas de discriminao na agulha O aquecimento controlado da amostra reduz os problemas de degradao trmica

A injeo splitless a frio para grandes volumes a grande inovao do PTV Nesse tipo de injeo, um grande volume (at 100 L) inserido no injetor (todo de uma vez ou em vrias pequenas injees) a frio com a purga do split aberta Geralmente se utiliza um liner empacotado a fim de suportar melhor a grande quantidade de lquido Utiliza-se uma temperatura na qual haja evaporao do solvente, mas no dos analitos Aps a evaporao de cerca de 95% do solvente a purga do split fechada para promover a transferncia do material para a coluna em temperatura programada Assim como no splitless, aps algum tempo a purga aberta novamente para limpar o injetor As mesmas consideraes de alargamento e reconcentrao que se aplicam ao sless

Como o PTV promove uma injeo a frio que tambm utiliza um liner, oferece vrias vantagens: ideal para misturas com ampla faixa de ebulio, injeo de grandes volumes e grande versatilidade A grande versatilidade tambm a maior desvantagem: o PTV de longe o injetor mais complexo para CG Existe menos informao na literatura sobre o uso do PTV e o equipamento tem maior custo
Colunas capilares em CG fases estacionrias e outros parmetros
Colunas capilares em CG
Marcel Golay considerado o inventor das colunas capilares, aps seus trabalhos nas dcadas de 1950 e 1960. As colunas propostas por ele foram chamadas de WCOT (Wall Coated Open Tubular) As colunas capilares (ou tubulares abertas) de slica fundida (FSOT) foram introduzidas em 1979 Esse desenvolvimento, em conjunto com a criao de novas fases estacionrias quimicamente ligadas especficas para colunas de slica contriburam para sua larga aceitao Aps a introduo das mesmas, houve um rpido declnio no uso de colunas empacotadas em CG
Diversas so as vantagens das colunas capilares: separaes com resoluo muito maior, tempo de anlise reduzido, necessidade de menor volume de amostra e menores limites de deteco
As colunas capilares modernas so capazes de resolver misturas de mais de 1000 componentes A escolha da coluna ideal para o trabalho a ser realizado deve levar em conta os seguintes fatores: fase estacionria, dimetro interno, espessura de fase e comprimento da coluna Quanto menor o dimetro interno, maior a eficincia da coluna
A considerao prtica para escolha do dimetro interno que a capacidade da coluna diminui com a diminuio do dimetro, ou seja, amostras muito concentradas necessitam de colunas de maior dimetro Para amostras complexas usar sempre o menor dimetro possvel Ao usar colunas de grande dimetro com EM, ateno ao fluxo As colunas de 0,10 mm DI podem gerar a mesma resoluo em um tempo muito menor a presso ser muito maior
Quanto espessura de filme:
Maior espessura, aumenta a capacidade da coluna e a reteno maior tempo de anlise Quanto maior a espessura de filme, menor a eficincia da coluna Exceo, compostos muito volteis podem ter baixa resoluo com filmes muito finos
Quanto menor a espessura do filme, menor ser a temperatura de eluio dos compostos, logo filmes finos se aplicam bem a compostos pouco volteis
Quanto ao comprimento da coluna
Deve-se ter em mente que a resoluo proporcional raiz quadrada do nmero de pratos tericos (ou tamanho) da coluna Dobrar o tamanho de uma coluna aumenta em 1,4 x a resoluo, mas dobra o tempo de anlise
Seleo da fase mvel:
O nitrognio o gs de arraste que pode, teoricamente, gerar a melhor eficincia cromatogrfica O uso do nitrognio, entretanto requer velocidades lineares muito baixas, sacrificando o tempo de anlise O gs com a melhor relao velocidade/eficincia o hidrognio
Por ser um gs muito perigoso e, no passado, incompatvel com EM, o gs mais utilizado o He
Escolha da fase estacionria A escolha da fase estacionria muito menos importante em CG (existem menos de 100 fases diferentes) do que em CLAE (centenas de fases) Ainda assim, a escolha da fase estacionria um dos principais fatores que influenciam a seletividade em CG Para a separao em CG, deve-se usar a regra semelhante dissolve semelhante, ou seja, escolhemos uma fase que dissolva os analitos Importante: Muita interao em CG ruim! Importante 2: Fases polares em geral tm menor eficincia e estabilidade
Usar sempre a fase estacionria mais apolar capaz de promover a separao desejada
Fases apolares so mais resistentes a gua, oxignio e outros oxidantes Fases apolares so mais inertes, sangram menos e tm melhor eficincia Nas fases apolares a separao ocorre basicamente pelos pontos de ebulio. Aumentar o contedo de fases triuoropropil, cianopropil ou fenil gera mais interaes dipolares As separaes de compostos que tm diferentes foras para realizar ligaes hidrognio como os lcoois, aldedos, aminas e cidos geralmente so melhores em colunas com fase estacionria de poli-etilenoglicol ou semelhantes
Na prtica, cerca de 90% das anlises em CG podem ser feitas utilizando-se uma coluna 100% poli-dimetilsiloxano ou 5% fenil, 95% poli-dimetilsiloxano
Os polisiloxanos so as fases estacionrias mais utilizadas em CG, devido sua alta estabilidade qumica e trmica e por oferecerem excelente difusividade aos solutos Estrutura do 100% poli-dimetilsiloxano:
- Os polisiloxanos substitudos podem ser representados: - Onde os Rs podem ser CH3, fenil, CH2CH2CF3 ou CH2CH2CH2CN e x e y representam o percentual de uma unidade de repetio no polmero
- Ex: DB-1301 (6% cianopropilfenil94% dimetilpolisiloxano, R1 = CH2CH2CH2CN, R2 = fenil, R3 e R4 so metilas; X = 6% e Y = 94%
Aps os polisiloxanos, as fases mais comuns so os polietilenoglicis de estrutura geral:
Disponveis em diversas massas moleculares com denominaes como Carbowax, FFAP, etc. So as fases ideias quando se necessita de uma seletividade alternativa, alm de ideais para separao de lcoois, aminas, cidos etc.
Sua principal desvantagem a instabilidade trmica temperaturas mximas na faixa de 225C

Alm disso, gua e oxignio podem ser prejudiciais
Fases recomendadas para diferentes aplicaes:
Detectores em CG
Detectores em CG Propriedades iniciais

Caractersticas de rudo Rudo qumico, rudo eltrico O rudo calculado como a mdia entre o ponto mais baixo e mais alto da linha de base em um perodo de tempo H diferentes tipos de rudo: rudo rpido (curta durao), rudo de longa durao e deriva
O rudo rpido de alta frequncia (maior do que quela do sinal de interesse), enquanto o rudo de longa durao exatamente o oposto A deriva a inclinao do envelope de rudo em funo do tempo, sendo normalmente causada por sangramentos e outros problemas semelhantes

Uma das caractersticas mais observadas na deteco cromatogrfica a relao sinal-rudo Representa a probabilidade de que um pico em uma linha de base ruidosa represente um sinal de analito Uma razo sinal-rudo de 2 indica probabilidade de 95%, enquanto uma relao S/R = 2,65 indica probabilidade de 99%

- Como estimar a relao S/R: 1 Definir o envelope de rudo (entre L1 e L2) 2 Identificar o rudo mdio (C) 3 Medir a altura do pico (S2: de C a D2) 4 Calcular a relao
Para um sinal ruidoso (S1), deve-se calcular uma altura mdia (D1)

Sensibilidade: quanto o sinal varia para dada variao de massa Geralmente dada pela inclinao da curva de calibrao No confundir com capacidade de deteco Tem a unidade da resposta do detector por unidade de concentrao ou massa (ex: mV/pg) Limite de deteco Expressa a capacidade de deteco Geralmente corresponde concentrao capaz de gerar um sinal com relao S/R = 3, ou seja, a concentrao na qual o detector capaz de dar uma resposta com 99% de probabilidade de um pico representar um sinal da amostra
Faixa dinmica Faixa que vai do LD at a concentrao na qual um aumento na concentrao no promove aumento de sinal Sua faixa mais relevante a faixa linear que a faixa na qual a sensibilidade (inclinao) constante Detectores universais, seletivos e especficos
Detectores em CG Detector de condutividade trmica (DCT ou TCD)

Detector universal e no destrutivo Baseia-se na medio de diferena na condutividade trmica entre uma clula analtica e uma clula de referncia
A passagem de um composto pela clula de referncia causa uma alterao na condutividade trmica, desbalanceando a ponte de Wheatstone
Um potencimetro refaz o balanceamento da ponte e a corrente necessria ser traada no cromatograma, gerando um sinal
Detectores em CG Detector de condutividade trmica

Caractersticas: Detectabilidade mnima (LD): 10-9 g (1 ng) Resposta: Universal
Linearidade: 104 (limitada)

Estabilidade: Moderada
Limite de temperatura: ~400C

Gases: Carreador (geralmente Hlio) e Makeup: O mesmo do carreador
Detectores em CG Detector de ionizao por chamas (DIC ou FID)

Detector seletivo e destrutivo Baseia-se na criao de ons pela queima de um composto hidrocarbnico em uma chama neutra
A criao dos ons permite a passagem de corrente eltrica entre dois eletrodos (o Jet e o eletrodo coletor), gerando um sinal eltrico que traado no cromatograma
o detector mais usado em CG
Detectores em CG Detector de ionizao por chamas

Caractersticas: Detectabilidade mnima (LD): 10-11 g (10 pg) Resposta: Somente para compostos contendo carbono orgnico (o sinal reduzido de acordo com a presena de tomos eletronegativos) Linearidade: 107 (faixa linear muito ampla) Estabilidade: Excelente Limite de temperatura: ~400C Gases: Carreador (Hlio ou Hidrognio), mistura combustvel e comburente (ar e hidrognio) e Makeup: (hlio ou nitrognio)
Detectores em CG Detector de ionizao por chamas (DIC ou FID)

Compostos que geram pouca ou nenhuma resposta no FID: A otimizao dos fluxos de gs importante:
- Makeup deve ser aproximadamente igual a hidrognio + carreador
Detectores em CG Detector de captura de eltrons (DCE ou ECD)

Detector seletivo e destrutivo Uma fonte radioativa (63Ni) emite partculas :
Esses eltrons de baixa energia colidem com o gs de arraste, liberando eltrons de mais alta energia:
Esse fluxo de eltrons gera uma corrente entre o corpo do detector e eletrodo coletor A passagem de um analito muito eletronegativo (com poder de capturar eltrons halogenado) gera uma reduo nessa corrente produzindo um sinal negativo que invertido para a sada em forma de cromatograma
Detectores em CG Detector de captura de eltrons (DCE ou ECD)

Caractersticas: Detectabilidade mnima (LD): 10-13 g (0,1 pg) Resposta: Altamente seletivo para compostos contendo tomos eletronegativos (especialmente halogenados) Linearidade: 103 - 104 (faixa linear bem limitada) Estabilidade: Razovel Suscetvel a vazamentos no corpo do detector e a impurezas nos gases Limite de temperatura: ~400 C (com emissor 63Ni) ou 220 C (com 3H)
Gases: Carreador (Hlio ou Hidrognio), Makeup: (nitrognio ou 5% de metano em argnio) Todos os gases devem ser ultrapuros
Detectores em CG Detector de nitrognio e fsforo (DNP ou NPD)

- - Detector Esse plasma, seletivo em e destrutivo contato com a prola aquecida, promove a combusto parcial dos efluentes da - Construo coluna muito similar ao DIC Tambm pode ser chamado de TSD (ou DTE) - Os produtos de combusto parcial contendo - Acima nitrognio do jet e fsforo colocada souma adsorvidos prola de na rubdio prola, silicato fazendo envolta com que em uma aumente resistncia a densidade de eltrons produzidos pela mesma, gerando o sinal - Quando cromatogrfico aquecida, essa prola emite eltrons termo-inicos que formam o sinal de fundo O fluxo de H2 usado muito menor do que em um FID e insuficiente para sustentar uma chama, o que se forma na verdade um plasma que passa pela prola aquecida
Detectores em CG Detector de nitrognio e fsforo (DNP ou NPD)

Caractersticas: Detectabilidade mnima (LD): 10-11 g (10 pg) Resposta: Seletivo para nitrognio e fsforo
Linearidade: 106 (faixa linear ampla)

Estabilidade: Excelente, desde que as temperaturas e fluxos de gases sejam bem controlados. A prola tende a se degradar com o tempo e o sinal ser reduzido Limite de temperatura: ~400 C Gases: Carreador (Hlio ou Hidrognio), mistura combustvel e comburente (ar e hidrognio) e Makeup: (hlio ou nitrognio)
Detectores em CG Espectrmetro de massas

O espectrmetro de massas opera sob vcuo Existem diferentes fontes de ionizao (EI, CI, APGC) e diferentes analisadores (Quadrupolo, setor magntico, TdV, ion trap 3D, QqQ...) Cada combinao fonte-analisador um sistema diferente O EM no somente um detector para cromatografia, sendo a prpria espectrometria de massas uma rea muito ampla
Nesse curso: abordagem extremamente simples limitada a caractersticas simples

Usado como detector para CG pode ser universal ou seletivo e destrutivo
Detectores em CG Espectrmetro de massas

Caractersticas: Detectabilidade mnima (LD): 10-12 g (1 pg) em SIM e 10-9 (1 ng) em SCAN (quadrupolo simples detectabilidade pode ser menor com outro analisador) Resposta: Universal (podendo ser seletivo com SIM) Linearidade: 106 (Faixa linear ampla) Estabilidade: Excelente Limite de temperatura: ~350 C na linha de transferncia e na fonte Gases: Para EI nenhum; CI metano ou amnia
Detectores em CG
Temperatura do detector: A temperatura de qualquer detector sempre deve ser cerca de 15-20 C acima da temperatura mxima de coluna usada no mtodo evitar a condensao A chama de um FID nunca deve ser acesa em temperaturas menores que 100 C (recomendvel 150 C) evitar formao de vapor dgua no detector
Anlise de dados e tcnicas de quantificao em CG
Tcnicas de anlise e quantificao em CG

Tcnicas gerais da qumica analtica e outras mais especficas: Padronizao externa Padronizao interna
Diluio isotpica
Normalizao de reas
Normalizao de reas com fator de resposta

Adio padro
Normalizao de reas
a tcnica de quantificao mais simples usada em cromatografia No requer o uso de padres Pode ser usada com quantidade de amostra desconhecida resultado relativo
Resultados pouco dependentes das condies de CG

Desvantagens: No aplicvel a todas as amostras, deve ser checada por anlises independentes, todos os componentes tm que dar picos, e todos teriam que ter o mesmo fator de resposta
Normalizao de reas com fator de resposta

Na verdade como uma correo da normalizao de reas simples com melhor exatido No requer o uso de padres caso os Rw sejam conhecidos se desconhecidos ser necessria uma calibrao
Pode ser usada com quantidade de amostra desconhecida resultado relativo

Resultados pouco dependentes das condies de CG inclusive fatores de resposta
Desvantagens: No aplicvel a todas as amostras, deve ser checada por anlises independentes, todos os componentes tm que dar picos.
Padronizao externa
Consiste na comparao de uma amostra problema com uma amostra controle com concentrao conhecida Requer o uso de um padro para preparo do controle pode ser feita uma curva de calibrao recomendado!
A quantidade de amostra deve ser conhecida

Resultados totalmente dependentes das condies de CG Amostra e controles devem ser analisados em sequncia exatido muito melhor do que normalizao S o pico do composto de interesse necessrio Desvantagens: massa (ou volume) de amostra deve ser conhecida, calibrao recomendada para maior exatido, condies de CG devem ser constantes e se houverem muitos componentes a calibrao pode ser cara e trabalhosa
Padronizao externa
Clculos com padronizao simples (admitindo volume ou massa igual entre amostra e controle):
- Clculos usando curva de calibrao Considerando o modelo de regresso: y = b0 + b 1x
Padronizao interna
Consiste na comparao da resposta de um componente de interesse com um padro adicionado prpria amostra Requer o uso de um padro para preparo padro interno tambm pode ser usado como correo do preparo da amostra
A quantidade de amostra no precisa ser conhecida

Resultados independentes das condies de CG
S o pico do composto de interesse e do PI so necessrios

Pode ser associada a uma calibrao um dos melhores mtodos de quantificao em CG Desvantagens: Padro interno deve ter propriedades particulares, pode ter custo elevado para muitas amostras
Padronizao interna
Clculos com padronizao simples:
Associada calibrao construir uma curva de calibrao conforme feito para a padronizao externa e adicionar o padro interno na mesma concentrao em todos os pontos da curva e nas amostras problema A curva de calibrao deve ser construda com concentrao do analito no eixo x e razo de reas do analito/padro interno no eixo y
Para interpolar a amostra problema, usar a sua razo analito/padro interno O padro interno corrige pequenos desvios ocorridos no preparo de amostras
Padronizao interna
Ex.: Anlise de soro: Alquota de soro adio de padro interno adio de solvente para precipitao de protenas centrifugao separao do sobrenadante evaporao derivatizao anlise por CG-EM Imaginando uma curva de calibrao:
Dados:
Conc. A/PI Aanalito API 5 1450 2000 0,73 10 2110 1800 1,17 15 3400 2000 1,70 20 1980 1000 1,98 30 5880 1900 3,09
Diluio isotpica
Considerada um caso especial da padronizao interna na qual o padro interno um isotopmero do analito
Pode ser usada exatamente como a padronizao interna: de forma simples ou associada calibrao
Resultados muito mais exatos S pode ser usada com EM Pode ser usada na abordagem da correspondncia exata (Exact Matching Approach) Nessa abordagem, preparam-se amostras controle fortificadas com o analito e o padro interno e estima-se a concentrao da amostra problema Repete-se o preparo das amostras controle aproximando-se cada vez mais a sua concentrao da concentrao da amostra problema at que se tornem indistinguveis
Diluio isotpica
Diluio isotpica
Para controles a amostras problema indistinguveis aplica-se a seguinte equao:
Diluio isotpica
Principais cuidados: O padro interno deve ter tempo de equilibrar-se com a amostra Avaliar a interferncia (seletividade) de ambos compostos (nativo e marcado) entre si
Testosterone in Serum - 2.4 ng/g Spike

14 13 12 11 10 9 8
1 - Matrix Standards Isotopic Internal Standardisation 2 - Matrix Standards Non-isotopic Internal Standardisation 3 - Matrix Standards External Calibration 4 - Solvent Standards Isotopic Internal Standardisation 5 - Solvent Standards Non-isotopic Internal Standardisation 6 - Solvent Standards External Calibration
ng/g
7 6 5 4 3 2 1 0
0.5 1.5 2.5 3.5 4.5 5.5
2 1
3 4
Gravimetric Value
17%U
6
6.5
Work undertaken by Chris Mussell and Anna Pardos-Pardos
Dados de OConnor et al., 2012
Adio Padro
Mtodo de quantificao usado quando h necessidade de preparo dos controles em matriz e no h matriz branca disponvel Ex.: Quantificao de testosterona em urina
Prepara-se uma curva de calibrao com a adio de concentraes conhecidas do analito incluindo o ponto zero sem adio
necessrio que a faixa de concentraes estudadas exiba resposta linear Aps a construo da curva, determina-se a concentrao original por extrapolao
Adio Padro
A extrapolao feita at a intercesso da curva com o eixo x Matematicamente, define-se y = 0 Obtm-se um resultado negativo inverte-se o sinal = concentrao original na matriz
Consideraes importantes: Anlises quantitativas devem sempre que possvel usar replicatas verdadeiras (3 ou mais)
Ao construir qualquer curva de calibrao, deve-se colocar todas as replicatas de cada nvel de concentrao na curva, NUNCA usar o valor mdio
Nunca forar uma curva de calibrao a passar pela origem
Anlise qualitativa
O tempo de reteno simplesmente no pode ser usado como critrio para a concluso da identidade de uma substncia em cromatografia Para dar suporte a esse tipo de concluso: anlise em diferentes fases estacionrias (pelo menos 2)
Anlise com co-eluio

Combinao de ambos
Emprego de detectores seletivos

Emprego de detectores que produzam informao estrutural (EM; EM-EM quanto mais seletivo, melhor)
Anlise qualitativa
Importante: Lembrar-se sempre da qumica bsica enantimeros s podem ser separados em meio quiral espectros de massas so idnticos Exemplos de critrios de identificao qualitativa de um composto Controle de dopagem: tR na amostra no pode diferenciar em mais do que 0,01 min ou 2% de urina de referncia
Tambm pode ser usada a massa acurada para dar suporte s concluses
Anlise qualitativa
Para anlises de alimentos e outras no mbito da 2002/657/CE Pontos de identificao mnimo para um positivo = 4 pontos
Guia prtico para o desenvolvimento de mtodos

Principal objetivo do desenvolvimento de mtodos em CG: obter a resoluo adequada no menor tempo possvel O procedimento aqui apresentado parte do princpio que a amostra totalmente desconhecida
Protocolo disponvel em Radler & Cardoso Qumica Nova 11(2) 1988

Condies preliminares: Recomendvel usar uma lacuna de reteno (amostra totalmente desconhecida) focalizao da amostra, mas principalmente proteger a coluna de compostos no volteis

Condies preliminares: Usar injeo com diviso de fluxo:
Apesar de no ser o mtodo de injeo mais recomendado para anlise de traos e para substncias termolbeis, evita a sobrecarga da coluna e sua contaminao com susbtncias pouco volteis - Usar fase estacionria apolar: Reduz a possibilidade de reteno de compostos muito funcionalizados, alm de permitir relacionar a ordem de eluio ao ponto de ebulio dos compostos. Tambm so fases mais estveis termicamente preferncia por polimetilsiloxanas imobilizadas

Condies preliminares: Comprimento, dimetro interno e espessura de filme da coluna: Comprimento de 10 a 20 m Dimetro interno entre 0,25 e 0,35 mm (usual 0,25 ou 0,32 mm) Espessura de filme entre 0,1 e 0,5 m (depende da concentrao esperada) Para uma amostra totalmente desconhecida, usar coluna curta (10 ou 15 m), com dimetro 0,25 mm e espessura de filme de 0,15 m ou mais minimizar a reteno anlise rpida deteco de compostos pouco volteis

Condies preliminares:
- Usar detector de ionizao por chamas o detector mais adequado para anlise exploratria de amostras orgnicas No h problemas com relao a concentraes elevadas um detector bastante sensvel
- Condies de anlise: Temperatura inicial baixa para observao dos compostos volteis pequena reteno da coluna com temperatura mais alta pode levar perda dos mesmos Programao rpida: 10 C/min Taxa 15 C/min Temperatura final prxima da Tmax da coluna Tempo final infinito interromper a corrida com tempo = 2 x tR do ltimo pico

No h picos no cromatograma? Causas:
A amostra no tem componentes volatilizveis
As substncias presentes se degradaram e seus produtos ficaram absorvidos no sistema

O detector por ionizao em chamas no responde aos compostos Amostra muito diluda ou deteco com pouca sensibilidade

No h picos no cromatograma? Solues:
Usar colunas com menor reteno (reduzir L, dc e E.F.)
Usar injeo na coluna a frio para evitar a degradao no injetor

Combinar os dois
CLSSICO: Caso haja suspeita de que o DIC no seja adequado, realizar testes para a presena de enxofre ou halognios na amostra lembrar que polihalogenados no produzem sinal aprecivel no DIC Certificar-se de que a amostra constituda de substncias orgnicas e que a quantidade injetada est de acordo com a sensibilidade do detector

No h picos no cromatograma? Solues:
Caso ainda no apaream picos, selecionar outro mtodo de anlise cromatografia lquida

H picos no cromatograma? Iniciar a otimizao da separao
Reduzir a velocidade de programao e observar se h melhoria da resoluo
Se tR for muito pequeno aumentar comprimento e espessura de fase da coluna

tR continua reduzido aumentar a polaridade da fase estacionria (OV-31-OH; Carbowax; cianopropilsiloxana) O uso dessas fases polares tambm sugerido se houver suspeita de coeluio Observar o espalhamento dos picos com separao razovel entre eles se houver separao razovel, seguir para prxima etapa

H separao preliminar? Aprimorar o resultado
Se no for necessrio aprimorar pular esta etapa
Se for necessrio seguir o diagrama

H resoluo adequada? Otimizar o tempo de anlise
Aumentar a taxa de programao para aproximar todos os picos tentar um mtodo com rampas mltiplas Aumentar a temperatura inicial at que ela comece a prejudicar a resoluo que se considera adequada
Aumentar a vazo do gs de arraste (velocidade linear mdia) especialemente se as substncias elurem na isoterma final
Alterar as caractersticas da coluna, reduzindo o comprimento e espessura de filme

H muitos outros recursos que podem ser usados para otimizar um mtodo, baseados em outros aspectos j abordados no curso Esse guia visa ajudar no desenvolvimento inicial para amostras totalmente desconhecidas Leituras recomendadas:

- Dicas prticas de utilizao de CG Substituir septos regularmente a cada 50 injees sempre que resfriar o equipamento Se no tem ideia da temperatura do injetor a usar, comece em 250 C Use sempre gases, reguladores e tubulaes adequadas Sempre verificar vazamentos nas linhas de gases e trocar os cilindros quando a presso atingir 200 psi Sempre que possvel, purgar a coluna com gs carreador (15 30 min) antes de aquec-la Usar sempre a coluna mais apolar possvel para a separao desejada
Sempre que possvel utilize colunas de baixo sangramento

- Dicas prticas de utilizao de CG Sempre corte as pontas da coluna aps passar por anilhas de grafite
Se os picos iniciais forem muito largos tente usar uma coluna com espessura de fase maior
Inspecione e troque sempre os liners liners sujos levam a picos deformados Use o liner correto para o tipo de injeo Se os picos estiverem deformados troque o septo, liner e corte 0,5 m da cabea da coluna Sempre marque qual a cabea da coluna Sempre use anilhas novas

- Dicas prticas de utilizao de CG Ateno ao corte da coluna
Reaperte todas as conexes de uma coluna recm colocada cerca de a volta aps os primeiros ciclos de aquecimento do equipamento
Sempre use anilhas de grafite/vespel para a interface com EM No desconecte uma coluna em temperatura ou presso elevada deixe atingir a temperatura e presso ambientes antes Antes do uso sempre condicione as colunas na temperatura mxima recomendada pelo fabricante por cerca de 1 2 h Quando guardar uma coluna, feche suas pontas com septos lembre de cortar pelo menos 3 cm antes de reutiliz-las
gua em CG Molhar a coluna, pode?
gua em CG
A gua considerada um solvente menos que ideal em CG
Problemas: grande volume de expanso de vapor, molhabilidade e solubilidade baixas na fase estacionria, problemas em detectores como o DIC, danos qumicos fase estacionria ...
Mas... Em alguns casos injetar gua inevitvel (como usando um purge-and-trap) ou mais conveniente do que fazer uma longa extrao com solvente
gua em CG
Os problemas com a introduo de gua em CG comeam no injetor grande volume de expanso facilmente pode causar backflash
Na coluna - baixa molhabilidade na fase estacionria Grob e cols.: no h uma fase estacionria que possa ser molhada pela gua e, ao mesmo tempo, suficientemente desativada para uma boa cromatografia uma parte da gua pode passar como lquido pela coluna alargamento e diviso de bandas
Usando temperaturas iniciais do forno acima de 100 C bons resultados Muita gua sendo eluda pode apagar a chama do DIC, reduzir a sensibilidade do DCE Nota de aplicao Agilent fases quimicamente ligadas (tipo DB) - testes antes e aps 1000 injees de gua
gua em CG
Injeo em split A injeo sem diviso de fluxo iria levar a um backflash elevado Foram testadas 2 temperaturas para a corrida: 60 C e 130 C
Aps 1000 injees em cada temperatura, nenhuma das fases quimicamente ligadas sofreu danos testes de Grob repetidos e resultados idnticos
Uma fase no ligada foi gradualmente perdida no recomendvel o uso com gua
Testes de avaliao de colunas capilares
Avaliao de colunas capilares

As colunas capilares modernas possuem alta inrcia e eficincia A pequena quantidade de fase estacionria, no entanto, pode fazer com que essas caractersticas se percam rapidamente Pequenas quantidades de impureza presentes nas amostras ou no gs carreador Quaisquer alteraes no desempenho da coluna s podem ser percebidas (a tempo de uma ao corretiva) com testes de desempenho Os testes existentes consistem em uma injeo de padres selecionados com caractersticas especficas e avaliao do cromatograma resultante

As colunas capilares modernas possuem alta inrcia e eficincia A pequena quantidade de fase estacionria, no entanto, pode fazer com que essas caractersticas se percam rapidamente Pequenas quantidades de impureza presentes nas amostras ou no gs carreador Quaisquer alteraes no desempenho da coluna s podem ser percebidas (a tempo de uma ao corretiva) com testes de desempenho Os testes existentes consistem em uma injeo de padres selecionados com caractersticas especficas e avaliao do cromatograma resultante Existem diferentes misturas-teste para uso nesses testes que tambm podem ser feitos em diferentes condies experimentais

Informaes que se deseja (com um nico teste): caractersticas de adsoro, eficincia de separao, comportamento cido-base e espessura de filme lquido A metodologia apresentada aqui foi extrada de Cardoso & Radler Qumica Nova, 1986 por sua vez extrada basicamente dos trabalhos de Grob A mistura-teste inclui componentes cidos, bsicos, neutros, hidroxilados e carbonilados a fim de avaliar a interao da coluna com diferentes grupos funcionais
Avaliao de colunas capilares Composio da mistura-teste
Ordem de eluio da mistura-teste em diferentes fases estacionrias
Ordem de eluio da mistura-teste em diferentes fases estacionrias
Diferentes pares com a mesma funo (ver A e am)
H casos em que a reduo de um sinal no indica um problema ne desempenho da coluna

Ex: cido 2-etil-hexanico (S) em colunas apolares e C10-C12 em fases polares com filmes delgados (<0,1 m) Esses picos sero deformados problema causado pela insolubilidade dos compostos na fase estacionria na concentrao usada Nem todas colunas conseguem nota dez em todo o teste, mas isso no as desqualifica Uma coluna com caracterstica cida pode ser usada para separao de alcanos, steres, aldedos, cetonas etc. Cuidado com a neutralidade aparente de uma coluna!
Para uso dirio, se os problemas esto concentrados nos indicadores mais sensveis: D, S e am provavelmente no haver problemas na maioria das situaes Quanto mais inerte for a coluna, maior ser a sua vida til e melhor ela ser para anlises quantitativas, garantido repetitividade
Outra informao retirada do teste a eficincia da coluna

Medida pelo nmero de separao (Trenzahl Tz)
Sendo tR a diferena de tempo de reteno entre dois picos e W1/2 as larguras em meia altura No teste, calcula-se o Tz para dois pares de picos: E10/E11 e E11/E12 e tira-se a mdia
Valores tpicos de Tz:
Por fim, o teste permite o clculo da espessura de filme da coluna

Esse clculo importante no diagnstico de possveis problemas ocorrendo na coluna sangramento, oxidao das extremidades, redistribuio da fase etc. Mede-se a temperatura de eluio do E12 e ento calcula-se a diferena entre essa temperatura e a temperatura padronizada para aquela fase (dada nas tabelas anteriores) Medir a temperatura de deteco e subtrair o tempo morto Usa-se o normograma para o clculo
Normograma:
Procedimento prtico:
1 Colocar a coluna em equipamento com injetor split e detector de ionizao por chama e resfriar o forno a uma temperatura menor que 40 C (ou colocar 40 C como temperatura inicial do forno) 2 Ajustar a presso de entrada e a razo de split para obter para o metano um tR = 3,5 s/m (ou ajustar o sistema para uma velocidade linear mdia de 28,5 cm/s) +/- 5% 3 Configurar a programao de temperatura em funo do tamanho da coluna: 10 m: 2,5 C/min e 50 m: 0,5 C/min 4 Injetar a mistura padro de modo que aproximadamente 2 ng de cada componente cheguem coluna (ex: 1L com split 1:20) 5 Na faixa provvel de sada de E12 (110-140 C), fazer duas aotaes com a temperatura medida naqueles instantes
Procedimento prtico:
6 Ao final da cromatografia inter- ou extrapolar a temperatura de eluio do E12
7 Desenhar a linha dos 100% que passa pelos picos dos dois n-alcanos e dos trs steres
8 Expressar a altura dos demais picos como uma porcentagem da distncia entre a linha de base e a linha dos 100% 9 Determinar o TZ mdia de E10/E11 e E11/E12 10 Determinar a espessura do filme comparando a temperatura determinada na etapa 6 com os valores de referncia da tabela e usar a diferena no normograma para clculo da espessura de filme.
Dvidas? Questes prticas, tericas, aplicaes especficas...
Obrigado! Bruno
R: 3095

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Cromatografia Gasosa

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Fase Estacionria Lquido Slido Lquido Slido Lquido Slido

Tipo* Gs-lquido Gs-slido Lquido-lquido Lquido-slido

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Amostragem em CG Lquidos Tcnica de Solvent flushing ou lavagem com solvente

Sada do divisor de fluxo Coluna

A injeo com diviso de fluxo (Split)

Fluxo na coluna da ordem de 1 mL/min

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A injeo com diviso de fluxo (Split)

Divisor de fluxo (10 mL/min)

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A injeo com diviso de fluxo (Split)

Pergunta: Um equipamento de CG sabe medir fluxo de gs? Resposta:

A injeo com diviso de fluxo (Split)

A injeo com diviso de fluxo (Split)

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A injeo sem diviso de fluxo (Splitless)