Princípio dos métodos

A espectrofotometria é um método de análise que estuda a interação qualitativa e quantitativa de

observância da radiação electromagnética com a matéria; cada composto química absorve, transmite ou
reflete luz ao longo de um determinado intervalo de comprimento de onda. Ela tem como principal
objectivo quantificar e identificar a concentração dos compostos em uma solução, sendo muito usada
em laboratórios de análises técnicas.

Material e Métodos

• Tubos de ensaio;

• Copo de vidro;

• Funil;

• Frasco volumétrico de 100ml;

• Balança analítica;

• Pipeta graduada (5ml);

• Tubos de ensaio (5ml);

• Suportes de tubos;

• Espectrofotometro;

• Água destilada;

• Azul brilhante, ponceau 1g/ml(100ml).

Procedimento

• Pesa-se corante suficiente para preparar 100ml numa concentração 0,1%.

• Dissolve-se o corante num balão volumétrico.

• Mede-se o espectro de absorção da solução na luz visível em intervalos de 400nm a 600nm;

• Prepara-se a série de diluições segundo a tabela:

Número de 1 2 3 4 5 6
tubo

Solução - 1 2 3 4 5
padrão (ml)

Água 5 4 3 2 1 -
destilada (ml)

5. Mede-se a absorbância das diluições no cumprimento de onda mais adequado.

6. Representa-se graficamente a absorbância vs concentração.

7. Determina-se a concentração de cada componente duma mistura desconhecida preparada pelo

monitor.

Experiência I

Para a observação da absorbância da luz em diferentes cores do aspectro visível (comprimentos de onda
entre 40nm a 600nm para o corante ponceau e comprimento de 440nm a 700nm para o azul brilhante),
utilizou-se um fotocolorímetro-aparelho que possui uma fonte de luz branca e um prisma de difração
capaz de filtrar determinados comprimentos de onda e transforma-los em corrente eléctrica. Em
conjunto, foram preparadas 5 soluções de água destilada e solução padrão, transferidas para 5 tubos de
ensaio, como também um tubo de ensaio com água destilada sem adição de cor.

O fotocolorímetro foi calibrado colocando-se o tubo com água destilada até atingir a marca zero (ponto
zero de absorbância); em seguida, as soluções foram colocadas nos tubos de ensaio e aplicadas no
fotocolorímetro para a medição da absorbância em diferentes filtros de comprimento de onda: 400nm,
420nm, 440nm, 460nm, 480nm, 500nm, 520nm, 540nm, 560nm, 580nm a 600nm; sendo cada um deles
calibrado com um tubo branco antes da análise, bem como os tubos foram limpos com guardanapo
antes de serem colocados na máquina para que não houvesse interferência na medição.

Pipetou-se 5ml de solução estoque de ponceau de concentração 1g/ml (100ml), transferindo-a para um
balão volumétrico de 100ml, completou-se o volume com água destilada até o menisco e a solução foi
homogeneizada. A solução foi colocada na cubeta até 1cm da borda e levada para análise no
espectrofotómetro. Anotou-se os valores de comprimento de onda com a maior absorção para construir
um único gráfico, exibindo a absorbância em função do comprimento de onda, mostrando os conjuntos
de pontos experimentais.

Tabela I: Concentração vs comprimento

Comprimento ABSORBÂNCIA Comprimento ABSORBÂNCIA

420nm 0,095 460nm 0,023

440nm 0,115 480nm 0,030

460nm 0,199 500nm 0,05

480nm 0,324 520nm 0,105

500nm 0,451 540nm 0,184

520nm 0,494 560nm 0,209

540nm 0,421 580nm 0,0,182

560nm 0,216 600nm 0,156

620nm 0,110

580nm 0,049 640nm 0,068

660nm 0,041

600nm 0,009 680nm 0,028

700nm 0,021

Interpretação e discussão dos resultados da experiência I

• O princípio fundamental da fotocolorímetro ou espectrofotometria se baseia nas cores

complementares; ou seja, as cores são determinadas pelo comprimento de onda que é refletido pelo
composto em questão, já a cor complementar é a que apresenta comprimento de onda mais absorvido
(pico de absorção)

• No tubo 6, o pico de absorção foi no cumprimento de onda de 520, o qual se equivale a cor violeta. O
resultado esperado seria de se observar uma mudança de cor, mas devido a factores como o tempo e
condições de armazenamento e outros factores devem ter influenciado na redução do poder absorvente
do corante, e no que diz respeito ao espectrofotómetro houve uma certa dificuldade de determinar a
absorbância, porém por um mau funcionamento do aparelho ou um erro de leitura esse valor não foi
alcançado por exemplo no comprimento 400nm.

Experiência II

A partir da solução estoque foram preparadas soluções padrões, utilizando uma pipeta graduada,
pipetando os volumes de 1ml, 2ml, 3ml, 4ml e 5ml, em balões volumétricos de 100ml completando o
volume com água destilada até o menisco e homogeneizou-se a solução. A solução foi colocada na
cubeta até 1cm da borda e levada para análise no espectrofotómetro. Com base no espectro obtido
anteriormente escolheu-se o valor de comprimento de onda referente a onda ocorreu o máximo de
absorção do composto e anotou-se os resultados na tabela 2.

Resultados

Os resultados obtidos foram calculados pela equação de diluição: C1XV1=CfxV2; pois trata-se de
soluções.

Cálculos

Corante=0,1%=1g/ml

T1: Cf=0g/ml

T2: C1XV1=C2XV2; 1×1/5XCf; Cf=0,2g/ml

T3: 1×2=5×Cf; Cf=0,4g/ml

T4: 1×3=5×Cf; Cf =0,6

T5: 1×4=5×Cf; Cf=0,8

T6: 1×5=5×Cf; Cf=1

Interpretação e discussão dos resultados da experiência

• Os resultados obtidos demonstram uma clara aplicação da lei de Lambert-Berr, pois a relação de
proporcionalidade existente entre a concentração e a absorbância facilmente visível no gráfico,
formando uma linha recta, que nos fornece um sistema do primeiro grau.

• Os resultados obtidos nos permitem afirmar que não houve uma certa precisão na determinação das
absorbâncias, o que se nota pelo fator angular do gráfico, pois os pontos não estão bem alinhados.

Gráfico 1(ponceau) e gráfico 2(azul brilhante): Concentração vs Absorbância

Conclusão

Através dos testes realizados com as cores do espectro visível de luz, conclui-se que o método
fotocolorímetro ou espectrofotometria é confiável para medir a absorbância de radiação
electromagnética por apresentar resultados esperados na maioria das soluções; porém, talvez por um
erro do aparelho ou por uma má leitura do mesmo, os dados não foram todos coerentes coma a teoria.
Por ser um método sensível e preciso, pode ser usada na identificação de componentes desconhecidos
em uma solução, por exemplo, pela concentração da substância que absorve a luz.