UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ

INSTITUTO DE CIÊNCIAS EXATAS E NATURAIS

FACULDADE DE QUÍMICA

ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS

GABRIEL NONATO BARBOSA REBELO - 201510940007

JAMILE SILVA DA COSTA - 201510940012
MEREZILDA BARRETO GONÇALVES - 201510940018
RENAN CAMPOS E SILVA - 201510940001

BELÉM-PA
2017
GABRIEL NONATO BARBOSA REBELO - 201510940007
JAMILE SILVA DA COSTA - 201510940012
MEREZILDA BARRETO GONÇALVES - 201510940018
RENAN CAMPOS E SILVA - 201510940001

ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS

Relatório técnico-científico referente à

aula prática de Espectrofotometria UV/VIS
da disciplina de Laboratório de Química
Analítica Moderna. Com orientação do
Prof. Dr. Carlos Antônio Neves.

BELÉM-PA
2017
 SUMÁRIO
RESUMO..................................................................................................................... 4
1. INTRODUÇÃO ..................................................................................................... 4
2. OBJETIVOS ......................................................................................................... 6
2.1 Objetivo geral ............................................................................................... 6
2.2 Objetivos específicos .................................................................................. 6
3. MATERIAIS E MÉTODOS .................................................................................... 7
3.1 Equipamento para análise por Espectrofotometria .................................. 7
3.2 Preparo do branco (0 ppm) ......................................................................... 7
3.3 Preparo das curvas de calibração .............................................................. 7
3.4 Preparo das amostras.................................................................................. 7
3.5 Análise do Ferro através de Espectrofotometria....................................... 8
3.6 Tratamentos estatísticos ............................................................................. 8
4. RESULTADOS E DISCUSSÕES ......................................................................... 9
5. CONCLUSÃO ..................................................................................................... 14
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................... 14
 RESUMO

Espectrofotometria é uma ferramenta importante e versátil amplamente utilizada

para a análise em diversas áreas. Sendo que as análises podem ser quantitativas e
qualitativas, já que cada substância irá refletir e absorver a luz de forma diferente.
Esse trabalho teve como objetivo exemplificar uma prática utilizando o método de
espectrofotometria, consequentemente introduzindo tal método aos alunos do sexto
período de Química Industrial. A concentração de ferro calculada a partir do
espectofotômetro Thermo foi 2,23± 0,015 ppm e a partir do espectrofotômetro de
LED foi 2,14 ppm. A técnica de espectrofotometria mostrou-se muito eficiente na
determinação e quantificação de ferro, analito analisado.
Palavras-chave: espectrofotometria, ferro, concentração.
 4

1. INTRODUÇÃO

A espectrofotometria é um método que estuda a interação da luz com a

matéria e a partir desse princípio permite a realização diversas análises. Cada
composto químico absorve, transmite ou reflete luz ao longo de um determinado
intervalo de comprimento de onda. A espectrofotometria pode ser utilizada identificar
e quantificar substâncias químicas a partir da medição da absorção e transmissão
de luz que passa através da amostra [2].
Espectrofotometria é uma ferramenta importante e versátil amplamente
utilizada para a análise em diversas áreas. Dentre as diversas aplicações o
espectrofotômetro é usado para medir determinados ingredientes em uma droga,
medir o crescimento bacteriano, ou diagnosticar um paciente com base na
quantidade de ácido úrico presente em sua urina. Sendo que as análises podem ser
quantitativas (identificação da concentração da substância) e qualitativas
(identificação de uma substância desconhecida), já que cada substância irá refletir e
absorver a luz de forma diferente [2].
A espectrofotometria é fundamentada na lei de Lambert-Beer, que é a base
matemática para medidas de absorção de radiação por amostras no estado sólido,
líquido ou gasoso, nas regiões ultravioleta, visível e infravermelho do espectro
eletromagnético [3].
Os principais componentes de um espectrofotômetro são:
• Fonte de luz: No caso de ter que usar comprimentos de onda na região
UV, as lâmpadas de alta pressão de hidrogénio ou de deuterium são as mais
indicadas, sendo esta última melhor pois é 3x mais intensa. Acima de 375 nm são
usadas lâmpadas de tungsténio de baixa voltagem e de alta intensidade. Atualmente
são muito utilizadas lâmpadas de xenon, que permitem uma gama de comprimentos
de onda entre 280-800 nm, no entanto têm a desvantagem da intensidade oscilar
devido ao arco [1].
• Monocromador: Alguns equipamentos ainda possuem um prisma como
monocromador, porém, os mais modernos possuem dispositivos eletrônicos que
transformam a luz incidida em vários comprimentos de onda em um único
comprimento de onda, ou seja, luz monocromática [2].
• Detector: O sistema de detecção de um espectrofotómetro consiste
num tubo fotomultiplicador sensível à luz. Em instrumentos que permitem trabalhar
 5

num grande espectro, são necessários dois fotomultiplicadores diferentes: um mais

sensível para a gama de comprimentos de onda entre 200-600 nm, e outro mais
sensível aos comprimentos de onda 600-1000 nm. O tubo fotomultiplicador converte
os sinais de luz em sinais elétricos o dispositivo que detecta a fração de luz que
passou pela amostra e transfere para o visor e para o computador acoplado ao
aparelho [1].
• Amostras: só podem ser analisados por espectrofotometria de
absorção compostos que absorvem luz. Em caso de soluções fortemente coloridas
como permanganato, dicromatos, cromatos e outros compostos com cores
altamente acentuadas deverão ser feitas, no mínimo, 5 diluições [2].
• Cubeta / Recipiente: As cubetas são um ponto importante do
espectrofotômetro, pois para se trabalhar em determinadas gramas de comprimento
de onda são necessárias cubetas de materiais especiais. Para medições na gama
visível, (400-800 nm) cuvetes de vidro são suficientes, podendo ainda ser usadas
cuvetes de plástico preparadas para o efeito. No entanto para gamas de
comprimento de onda inferiores a 375 nm (região UV), o vidro absorve muita
radiação e por isso é necessário usar cuvetes de quartzo ou de sílica fundida.
Actualmente existem também plásticos que permitem a utilização de cuvetes em
determinadas gamas da região UV [1].
 6

2. OBJETIVOS

2.1 Objetivo geral

Exemplificar uma prática utilizando o método de espectrofotometria,
consequentemente introduzindo tal método aos alunos do sexto período de Química
Industrial.

2.2 Objetivo específico

Analisar uma solução de Fe (II) com um espectrofotômetro de UV/visível
interligado a um software adequado no computador.
 7

3. MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 Equipamento para análise por

Espectrofotometria
Espectrofotômetro UV/visível
da marca Thermo, Genesys 10s
UV/vis;
À esquerda um Espectrofotômetro UV/vis da marca Thermo,
Espectrofotômetro UV/visível de Genesys 10s. À direita um espectrofotômetro UV/vis de LED.
Fotos de autoria própria.
LED. Ilustrados na figura ao lado.

3.2 Preparo do Branco (0ppm)

O branco analítico para este procedimento
foi uma solução de água do banheiro. 20mL de
amostra em um balão de 50mL, com fator de
diluição de 0,4. Adição de 1mL de HCl 37%.
Solução de Branco. Foto de autoria própria.

3.3 Preparo das Curvas de Calibração

Para a calibração, foi construída uma

curva analítica utilizando-se cinco
concentrações de Ferro (1; 2; 2,5; 3 e 3,5ppm)
a partir de uma solução de 100ppm de Fe (II).

Soluções de Ferro e suas respectivas

concentrações. Foto de autoria própria.
3.4 Preparo das Amostras
Uma solução de 1000ppm de Ferro II foi acidificada com HCl e colocada na
bureta para dispensar volumes na preparação.
Foram preparadas soluções de 1ppm, 2ppm, 2,5ppm, 3ppm e 3,5ppm e
armazenadas em balões volumétricos de 50mL.
Reduziu de Fe (III) para Fe (II) pela adição de 1mL de Cloridrato de
Hidroxilamina. Adicionou-se 6mL de solução tampão Acetato. Adicionou-se,
posteriormente, 1000ppm orto-fenantrolina.
 8

3.5 Análise do Ferro através de Espectrofotometria

As soluções foram
transferidas às cubetas até o
volume adequado. A partir disso
fizeram análise tanto da solução
branco quanto das demais
concentrações de Ferro II. O
processo foi efetuado tanto no
Espetrofotômetro da Thermo,
Genesys, quanto no
À esquerda, no computador, o software VISIONlite sendo
Espectrofotômetro de LED. utilizado em conjunto com o Espectrofotômetro UV/vis da
Thermo, Genesys. Foto de autoria própria.

3.6 Tratamento Estatístico

O tratamento dos dados estatísticos foi feito com auxílio do software
VISIONlite, utilizado para auxiliar análises com espectrofotômetro UV/visível.
 9

4. RESULTADOS E DISCUSSÕES

A partir do experimento realizado no espectrofotômetro Thermo foram obtidos

os dados ilustrados nas Tabelas 1.
Tabela 1 – Dados obtidos a partir do espectrofotômetro Thermo.
Concentração (ppm) Absorbância
1 0,264
1,5 0,378
2 0,444
2,5 0,588
3,5 0,881
Fonte: Os autores.

Curva de calibração
A partir dos dados da Tabela 1 foi possível construir a curva de calibração
(Gráfico 1), com a respectiva equação da reta de calibração e coeficiente de
correlação.
Gráfico 1- Curva de calibração (Espectofotômetro Thermo).
1 (3,5; 0,881)
0,9
0,8 y = 0,2451x - 0,0038
0,7 R² = 0,9837
Absorvância

0,6 (2,5; 0,588)

0,5
0,4 (2; 0,444)
(1; 0,264)
0,3 (1,5; 0,378)
0,2
0,1
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4
Concentração (ppm)

Fonte: Os autores.

A partir da regressão linear foi possível determinar a concentração da

amostra, essas estão ilustradas na Tabela 2.
Tabela 2 - Concentração da amostra obtida a partir do Espectofotômetro Thermo
Replicata Absorbância Concentração
1 0,547 2,247246022
2 0,541 2,222766218
3 0,54 2,218686251
Média 0,543 2,229566163
Desvio padrão 0,00379 0,015446507
Fonte: Os autores.
 10

O coeficiente angular da curva de calibração corresponde à sensibilidade de

calibração (m), assim:

m = 0,2451

A sensibilidade analítica (D) é calculada a partir da seguinte equação

m
D= (1)
sa

Onde m é a sensibilidade de calibração e sa o desvio padrão do sinal analítico

(Tabela 2) a uma dada concentração do analito.
Daí obteve-se,

0,2451
D= = 64,67
0,00379

Não foi possível calcular os limites de detecção e quantificação por

insuficiência de dados.
Para as leituras realizadas no espectofotômetro de LED, cujos dados estão
expressos na tabela 3, foram calculadas as transmitâncias e absorbâncias de acordo
com as equações 2 e 3.
𝑃
𝑇=𝑃 (2)
0

𝐴 = −𝑙𝑜𝑔𝑇 (3)

Onde P é o sinal elétrico da amostra ou do padrão e P0 é o sinal elétrico do branco.

Tabela 3 - Sinais elétricos obtidos pelo fotômetro de LED.

Branco Padrões Amostra
0 ppm 1ppm 2ppm 2,5ppm 3ppm 3,5ppm
0,38V 0,25V 0,17V 0.13V 0,10V 0,08V 0,15V
0,38V 0,24V 0,16V 0.13V 0.10V 0.08V 0,15V
0,39V 0,24V 0.16V 0.12V 0.11V 0.09V
Fonte:Os autores.

Os valores calculados de transmitância são expressos na tabela 4.

Tabela 4 – Transmitâncias calculadas a partir das medidas do Espectofotômetro de

LED.
Transmitâncias
1ppm 2ppm 2,5ppm 3ppm 3,5ppm Amostra
0,658 0,447 0,342 0,263 0,211 0,395
0,632 0,421 0,342 0,263 0,211 0,395
0,632 0,421 0,316 0,289 0,236
Fonte: Os autores.
 11

Os valores calculados de absorbância são expressos na tabela 5.

Tabela 5 - Absorbâncias calculadas a partir das medidas do Espectrofotômetro de

LED.
Absorbâncias
1ppm 2ppm 2,5ppm 3ppm 3,5ppm Amostra
0,181774 0,349692 0,46597389 0,580044 0,675718 0,40303
0,199283 0,375718 0,46597389 0,580044 0,675718 0,40303
0,199283 0,375718 0,50031292 0,539102 0,627088
Média
0,193447 0,367043 0,47742024 0,566397 0,659508 0,40303
Fonte: Os autores.

A partir dos valores médios de absorbância expostos na tabela 3, foi traçada a

curva de calibração dos padrões medidos no fotômetro de LED, mostrado no gráfico
2.
Gráfico 2 - Curva de calibração (Espectrofotômetro LED)
0,7
y = 0,1879x + 0,0017
0,6
R² = 0,9988
0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4

Fonte: Os autores

A partir das equações das retas de calibração foram calculadas as

concentrações para as amostras medidas no espectrofotômetro de LED (Tabela 6).

Tabela 6 - Concentração da amostra obtida a partir do Espectofotômetro LED.

Replicata Absorbância Concentração (ppm)
1 0,40303 2,13587
2 0,40303 2,13587
Fonte: Os autores
 12

Intervalo de confiança

Os intervalos de confiança foram calculados para as absorbâncias medidas

no espectrofotômetro Thermo. Para as absorbâncias medidas no fotômetro de LED
não foi possível calcular os intervalos em razão da insuficiência de dados.
Para cálculo do intervalo de confiança usamos a seguinte equação
t.s
μ=x̅+ (4)
√n

a) Nível de confiança 70%

0,62x0,015447
IC=2,2296±
√3

IC = 2,2295±0,0055 ppm

b) Nível de confiança 95%

4,30x0,015447
IC=2,2296±
√3
IC=2,2296±0,038 ppm
c) Nível de confiança 99%
9,92x0,015447
IC=2,2296±
√3
IC=2,2296±0,088 ppm

Não foi possível calcular o teste F e o teste T pois as medidas realizadas no

fotômetro de LED foram insuficientes, impossibilitando a realização de tais
procedimentos.
Grande parte das espécies inorgânicas, orgânicas e bioquímicas absorvem na
região do ultravioleta e no visível e assim são suscetíveis a determinação
quantitativa direta, isso mostra a larga aplicabilidade da espectrofotometria (Skoog et
al., 2013).
A técnica apresenta alta sensibilidade, tendo limites de deteção que alcança
entre 10-4 a 10-5 M. Estes limites podem ser frequentemente estendidos para 10 -6 a
10-7 com modificações no procedimento. Esta técnica também é rápida e
conveniente utilizando equipamentos modernos (Skoog et al., 2013). Além disso, a
técnica também é de baixo custo quando comparada a outras técnicas analíticas
(Harvey, 2009).
 13

A seletividade raramente é um problema em espectrometria de absorção

molecular, em muitos casos é possível encontrar um comprimento de onda onde
apenas o analito absorve (Skoog et al., 2013; Harvey 2009).
 14

5. CONCLUSÃO
A espectrofotometria de absorção molecular UV-VIS é um dos métodos mais
amplos para realizar-se a determinação de espécies moleculares em solução, haja
visto que grande parte das moléculas absorve nessa região espectral
eletromagnética. A técnica de espectrofotometria mostrou-se muito eficiente na
determinação e quantificação de ferro, analito analisado.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. CRISTÓVÃO, Armando. Como funciona um espectrofotómetro. 2017.

Disponível em:
<http://cnc.cj.uc.pt/disciplina/biol_mol_cel_DHI/protocol/pt_espectofotometro.pdf>.
Acesso em: 13 nov. 2017.

2. KASVI. Espectrofotometria – Princípios e aplicações. 2016. Disponível em:

<http://www.kasvi.com.br/espectrofotometria-principios-aplicacoes/>. Acesso em: 13
nov. 2017.

3. ROCHA, Fábio R. P.; TEIXEIRA, Leonardo S. G.. Estratégias para aumento de

sensibilidade em espectrofotometria UV-VIS. Química Nova, [s.l.], v. 27, n. 5, p.807-
812, out. 2004. FapUNIFESP (SciELO). http://dx.doi.org/10.1590/s0100-
40422004000500021.

4. SKOOG, D. A. et al. Fundamentals of analytical chemistry. 9 ed. Belmont:

Cengage Learning, 2013. 1090 p.

5. HARVEY, David. Analytical chemistry 2.0. 1 ed. Quebec: McGraw-Hill, 2000.

1106 p.