Nutrio e Crescimento Bacteriano

Caractersticas bsicas das bactrias

10 horas 1 bilho de clulas

Estudos de Biologia Celular

95% do peso seco da clula

Viso geral do metabolismo celular

Crescimento bacteriano + Motilidade, Luminescncia, etc

Nutrio: Fornecimento de substncias nutritivas para o crescimento bacteriano (Energia e Matria Plstica)
Cultura: Propagao do microrganismo em condies adequadas (Exigncias Nutricionais e Ambientais)

FATORES NUTRITIVOS (in vitro = in vivo)

Fatores de Crescimento

NH
Co

Na

Ca Mg

K
Fastidiosos
Ex: Haemophilus influenzae
Zn Mo Se etc

Hemina (fator X), NAD+ (fator V)

OBS. No existe um meio de cultura universal.

Classificao dos Meios de Cultura (Substncias nutritivas Sintticos e Complexos)

Classificao dos Meios de Cultura (Estado fisico) Agar

Lquido (Turvao do meio)

Slido (1,5 a 2,0%) (Colnias)

Semi-Slido (0,5%) (Movimento)

Classificao dos Meios de Cultura (Poder Seletivo e Diferencial)

Agar Sangue

(Enriquecidos)

Agar Chocolate

Lowenstein -Jensen

Classificao dos Meios de Cultura (Poder Seletivo e Diferencial)

(Seletivos)

(MAS Manitol Salt Agar)

(Agar MacConkey)

(Meio seletivo para Bacillus cereus)

Classificao dos Meios de Cultura (Poder Seletivo e Diferencial)

(Seletivos)

(Eosin Methilen Blue (EMB)

Oxoid Chromogenic Listeria Agar (OCLA)

Classificao dos Meios de Cultura (Poder Seletivo e Diferencial)

(Diferencial)

(Agar Sangue) (Padro de Hemlise)

Classificao dos Meios de Cultura (Poder Seletivo e Diferencial)

(Diferencial)
Lac + Lac Lactose (-)

Lactose (-)

(Agar MacConkey) (Fermentao da Lactose)

(Meio Cromognico) (E. coli/coliformes em alimentos e gua)

Classificao dos Meios de Cultura (Poder Seletivo e Diferencial)

(De Enriquecimento)

(Meio de Selenito Cistina)

(Meio de Tetrationato)

Etapas do preparo de um meio slido

FATORES NUTRICIONAIS

GUA - Solvente; Elevado Calor Especfico; Regula Presso Osmtica; Participao em Reaes Qumicas, Estrutura de Macromolculas, etc

FONTE DE ENERGIA = Doadores de Hidrognio

RECEPTORES DE HIDROGNIOS Respirao aerbia O2

Respirao anaerbia receptor inorgnico do O2 (ex: SO42-, NO3-, CO2, S) 4 H2 + SO42- + H+ HS +4 H20 4 H2 + CO2 CH4 + 2 H20

Thiennimitr et al, 2011. Salmonella: the host and its microbiota. Current opinion in Microbiology, v.15, n.02, p.108-114, 2012.
Salmonella, the host and its microbiota. S. Typhimurium uses its virulence factors (flagella, T3SS-1 and T3SS-2) to invade the epithelium and survive in mononuclear cells. The ensuing inflammatory response results in the epithelial release of an antimicrobial (lipocalin-2) that sequesters iron chelators (enterobactin) produced by the microbiota, but not an iron chelator (salmochelin) produced by S. Typhimurium. ROS generated by neutrophils migrating into the intestinal lumen oxidize an endogenous sulfur compound (thiosulfate) to generate a respiratory electron acceptor (tetrathionate) that enables S. Typhimurium to edge out the fermenting microbiota, thereby enhancing transmission of the pathogen.

Fermentao Composto orgnico produzido durante o prprio processo fermentativo.

CARBONO (Composio dos Compostos Orgnicos -Compostos orgnicos - Quimio-heterotrficos. -CO2 (Fotossntetizantes) - Fotoautotrficos.

NITROGNIO (Protenas, cidos Nuclicos, Coenzimas) Orgnica - Aminocidos, Sais Orgnicos de Amnia. Inorgnica - NH3, NO3-, N2

ENXOFRE (Aminocidos Sulfurados, Vitaminas) -Forma orgnica (Radicais sulfidrilas); -Forma inorgnica ( SO4- , H2S) -Forma elementar FSFORO (ATP, cidos Nuclicos, Fosfolipdeos, Coenzimas) -Fosfato inorgnico (PO42- )

-Ca++

ATIVADORES DE ENZIMAS Minerais na forma de sais: -Mg++e K+ (Ribossomos) -Fe++ (citocromos e peroxidases) (Parede celular de Gram positivas e esporulao)

ELEMENTOS TRAOS - Cobalto, Zinco (Atividade de Enzimas), Molibdnio

FATORES DE CRESCIMENTO - Ex: Vitaminas, Aminocidos, Bases Nitrogenadas, cidos Graxos, etc.

(Mutantes Auxotrficos)

FATORES AMBIENTAIS
pH Temperatura Aerao (O2) Osmolaridade

pH - Estrutura e funes das protenas

Valores mnimos, timos e mximos de pH durante o cultivo para algumas bactrias

Organismo Thiobacillus thiooxidans Sulfolobus acidocaldarius Bacillus acidocaldarius Zymomonas lindneri Lactobacillus acidophilus Staphylococcus aureus Escherichia coli Clostridium sporogenes Erwinia caratovora Pseudomonas aeruginosa Thiobacillus novellus Streptococcus pneumoniae Nitrobacter sp Mnimo 0,5 1,0 2,0 3,5 4,0-4,6 4,2 4,4 5,0-5,8 5,6 5,6 5,7 6,5 6,6 timo 2,0-2,8 2,0-3,0 4,0 5,5-6,0 5,8-6,6 7,0-7,5 6,0-7,0 6,0-7,6 7,1 6,6-7,0 7,0 7,8 7,6-8,6 Mximo 4,0-6,0 5,0 6,0 7,5 6,8 9,3 9,0 8,5-9,0 9,3 8,0 9,0 8,3 10,0
Acidoflicas

Neutroflicas

Alcalinoflicas

Temperatura - Velocidade das reaes qumicas

Concentrao elevada de cidos graxos insaturados garante fluidez da membrana plasmtica

Patognicas ao homem e animais)

Organizao tridimensional das protenas permite a manuteno da estrutura adequada para sua ao em elevadas temperaturas

Aerao - Metabolismo energtico

Facultativo Aerbio estrito Anaerbio estrito (<0.5-21%) (18-21% ) (<0,5%) P. aeruginosa, C.haemolyticum Enterobactrias Mycobacterium

Microaerfilo aerbio (1-5%) Campylobacter, Neisseria

Microaerfilo anaerbio (Aerotolerante) (2-8%) Bacteroides, Clostridium

Bactrias aerbias e facultativas

O2

Metabolismo

Produtos txicos

Sistema de desintoxicao

Produtos no txicos

O2 + 2 e- + 2 H+ H2O2 O2 + e- O-2 O2 + H2O2 OH* O-2 + H2O2 O2 + OH2- + OH* H2O2 + e- + H+ H2O + OH*

Ao das enzimas superxido dismutase, catalase e peroxidase. Estas enzimas eliminam radicais txicos do oxignio que so inevitavelmente gerados em sistemas vivos na presena de O2. A distribuio destas enzimas nas clulas determina a capacidade destas clulas existirem na presena de O2 .

Bactrias anaerbias estritas

O2

Metabolismo

Produtos txicos

O2 + 2 e- + 2 H+ H2O2 O2 + e- O-2 O2 + H2O2 OH* O-2 + H2O2 O2 + OH2- + OH* H2O2 + e- + H+ H2O + OH*

Ausncia do sistema de desintoxicao

Morte bacteriana

Mtodo da vela acesa (microaerofilia)

Jarra de anaerobiose (Sistema GasPak)

Tampa com anel selador Envelope contendo bicarbonado de sdio e boroidreto de sdio Grampo de rosca Catalisador de paldio em pastilha

Indicador de anaerobiose (azul de metileno)

Placas de Petri

Cmara de anaerobiose (Glove Box)

Osmolaridade - Concentrao de solutos no meio Disponibilidade de gua

Controle da Osmolaridade Transporte ativo de K+ para interior da clula e eliminao de PUTRESCINA

CRESCIMENTO BACTERIANO
Aumento no nmero de clulas no meio de cultivo Aps inoculao no meio de cultura (= semeadura) em condies timas Meio lquido Turvao do meio de cultivo; Meio Slido Formao de colnias

Concentrao Celular = Nm. Cel. / Vol. meio

Densidade Celular = Massa Cel./ Vol. meio

Contagem bacteriana (Plaqueamento)

Densidade ptica = Absorbncia

Absorbncia = 2 - Log de % de Transmisso

NMP (Nmero Mais provvel)

Combinao de tubos positivos

ndice de NMP/100mL

Limites com 95% de confiabilidade Inferior Superior

Volume de inculo Tubos de meio para cada grupo de nutriente (grupo de cinco tubos cinco tubos

Nmero de tubos positivos por grupo

Fases do crescimento bacteriano

Fisiologicamente ativas

Progresso geomtrica

(Crescimento << Morte) (Crescimento Morte)

Tempo de gerao

Formas de involuo

Taxa de Crescimento x Tempo de Gerao

Semeadura = Inocular (transferir o microrganismo a um meio de cultura)

SEMEADURA POR ESGOTAMENTO

SEMEADURA EM QUADRANTES

Semeadura Correta

Semeadura Errada

Princpios de Alguns Testes Bioqumicos

Catalase
Comum em bactrias aerbias e anaerbias facultativas Staphylococcus, Bacillus (+) e Streptococcus (-)
2 H2O2 2 H2O + O2

Oxidase (Citocromo oxidase)

Oxidao do Citocromo C pelo O2
Para fenilenodiamina oxidado pela enzima adquirindo cor vermelha Neisseria (+), Pseudomonas (+), Enterobactrias (-)

Prova de OF
(Oxidao - Fermentao)
(Carboidrato cido)

Azul de Bromotimol: pH Alcalino (Azul), pH cido (Amarelo) Glicose Enterobactrias, Staphylococcus (Fermentam), Pseudomonas, Micrococcus (Oxidam)

Fermentao de Acares
Produo de cido ou cido mais gs
Acar a ser estudado + indicador de Andrade (vermelho em pH cido) Enterobactrias Glicose (Todas), Lactose (Algumas espcies apenas)

Glicose

Lactose

Famlia Enterobacteriaceae

Lactose
Agar MacConkey

Gneros Shigella

Gneros Escherichia Klebsiella Enterobacter Serratia

Salmonella
Proteus

Providncia
Morganella

Vermelho de Metila (VM): Fermentao Mista

(Glicose Acidos Orgnicos)

Vermelho de Metila em pH cido (4,5) fica Vermelho

1

E.coli (+), Enterobacter (-)

Voges-Proskauer (VP) Fermentao

Butilenogliclica
Glicose Acetilmetilcarbinol (= Acetoina) 2,3 butilenoglicol

Acetoina + Creatinina composto vermelho

E. coli (-), Klebsiella pneumoniae (+), Enterobacter (+)

Indol
Triptofanase

Triptofano

Indol

Para Dimetilaminobenzaldedo = Reativo de Kovacs + indol Composto vermelho.

E. coli (+), Klebsiella-Enterobacter (-)

No inoculado

Citrato de Simnons
Citrato de Sdio como nica fonte de C

Se bactria usa (Cresce) Alcaliniza o meio Azul (Azul de Bromotimol)

Klebsiella - Enterobacter (+), E. coli (-)

Uria (Urease)

Amnia
Alcalinizao do meio (Vermelho Fenol Vermelho)

E. coli (-), K. pneumoniae (+)

Fenil-Alanina
Desaminao da Fenil-alanina cido Fenilpirvico
Ac. Fenilpirvico + Cloreto Frrico Hidrazina (Cor verde-garrafa) Caracterstica de todas espcies de Proteus

Movimento
Crescimento em meio semi-slido (0,5% de gar)

Imvel - Cresce s no local da picada: K. pneumoniae

Mvel - Cresce alm da picada: E. coli

EPM, MILI

Trplice Acar com ferro TSI

Mtodos Miniaturizados

Muito obrigado.