Fernanda Desouza Barbosa

MODELO DE IMPEDNCIA DE ORDEM FRACIONAL PARA A RESPOSTA
INFLAMATRIA CUTNEA

Fernanda de Souza Barbosa

Dissertao de Mestrado apresentada ao
Programa de Ps-graduao em Engenharia
Biomdica, COPPE, da Universidade Federal do
Rio de Janeiro, como parte dos requisitos
necessrios obteno do ttulo de Mestre em
Engenharia Biomdica.

Orientadores: Mrcio Nogueira de Souza
Alexandre Visintainer Pino

Rio de Janeiro
Junho de 2011

INFLAMATRIA CUTNEA


DISSERTAO SUBMETIDA AO CORPO DOCENTE DO INSTITUTO ALBERTO
LUIZ COIMBRA DE PS-GRADUAO E PESQUISA DE ENGENHARIA
(COPPE) DA UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO COMO PARTE
DOS REQUISITOS NECESSRIOS PARA A OBTENO DO GRAU DE MESTRE
EM CINCIAS EM ENGENHARIA BIOMDICA.

Examinada por:

________________________________________________
Prof. Marcio Nogueira de Souza, D.Sc.

________________________________________________
Prof. Antonio Giannella-Neto, D.Sc.

________________________________________________
Prof. Luiz Wagner Pereira Biscainho, D.Sc.

RIO DE JANEIRO, RJ BRASIL
JUNHO DE 2011
iii

Barbosa, Fernanda de Souza
Modelo de impedncia de ordem fracional para a
resposta inflamatria cutnea/ Fernanda de Souza
Barbosa. Rio de Janeiro: UFRJ/COPPE, 2011.
XI, 107 p.: il.; 29,7 cm.
Orientadores: Mrcio Nogueira de Souza
Dissertao (mestrado) UFRJ/ COPPE/ Programa de
Engenharia Biomdica, 2011.
Referncias Bibliogrficas: p. 89-99.
1. Bioimpedncia cutnea. 2. Clculo fracional. 3.
Resposta inflamatria. I. Souza, Mrcio Nogueira de, et
al.. II. Universidade Federal do Rio de Janeiro, COPPE,
Programa de Engenharia Biomdica. III. Ttulo.

iv

Aos meus pais,
por no questionarem,
em momento algum, seu amor

v

Jamais saberei em vida o quanto fui ajudada.
Aos mais prximos e evidentes amigos,
jamais poderia deixar de agradecer.
Aos demais, que venha o tempo e a bonana,
Pois tudo de bom que nasce na terra,
mesmo sem ser notado,
encontra sentido nos suspiros do sonhador,
nos sorrisos desprevenidos,
nas diferenas inseparveis,
nas incoerncias que de longe no se distinguem
da pobreza, do caos, da guerra,
da ganncia, do medo e do rancor,
e nos salva da temvel falta de sentido
e nos orienta ao sabor dos ventos desejosos.

Jamais saberei em vida o quanto fui ajudada
E muito menos o quanto ajudei.
Mas como acredito nas coisas boas que nascem na terra,
que assim seja.

Fernanda de S. Barbosa
(01/06/2009)

vi

Agradecimentos

Houve seguramente diversas camadas de envolvimento com este trabalho. Aos
meus orientadores, Mrcio Nogueira de Souza e Alexandre Visintainer Pino, agradeo a
intensa dedicao ao laboratrio e aos alunos, o que semeou a confiana de ter com
quem contar. Em particular, ao professor Mrcio atribuo boa parte do desejo e
esperana no projeto. E por sua crena no meu potencial para desenvolv-lo, sou grata.
Agradeo ao professor Antonio Giannella-Neto, por ter ponderado questes
cruciais para a fundamentao do estudo e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientfico por torn-lo possvel com a concesso da bolsa.
Para todos os momentos em que no me escapou titubear, algumas pessoas
foram excepcionais no retomar das rdeas. A elas dedico minha alegria: ao amigo
Gustavo, companheiro nos desfechos do dia em que solicitei inmeras vezes por apoio;
Valria Glioche, quem me ensinou a reconhecer meus reais desejos e a caminhar com
prazer; aos meus pais, Aloisio e Nadia, e irmos, Roberta e Gabriel, que de forma
brilhante recolheram as amarguras, deram espao aos novos ares e ao bom gosto da luta,
e assim me influenciaram com o perdo das faltas; s minhas sobrinhas Gabi e Juju,
pela singela beleza de ser criana, espalhando a inocncia das palavras no comedidas e
a arte de rejuvenecer; aos amigos da vela Marcelo, Luiz, Amauri, Renata, Ricardo, Rolf,
Guilherme, Eduardo, Maurcio, Daniel e aos demais velejadores do Iate Clube
Brasileiro, pelas rajadas de acolhimento, carinho e emoo. Aos colegas da residncia
mdica, especialmente ao meu amigo Thiago, e a todos os mdicos que persistem na
rdua tarefa de respirar a medicina dia aps dia. s queridas amigas Leidy e Anglica,
mulheres que estrelaram na minha vida. Ao mais novo vizinho e amigo Eduardo Brum.
Aos amigos do Caminho de Santiago, Lilly, Michael, Hiroki, Lea, Christian e Matthew,
os quais me ajudaram a observar que poucas coisas na vida merecem ser carregadas
conosco e que amizade verdadeira aquece mais do que a brasa, ainda que tudo seja
fugaz. Ao meu instrutor Pedro Aires e a toda turma da escalada, por compartilharem a
incrvel experincia de analisar cada obstculo, acreditar em si mesmo e chegar ao
objetivo.
Aos companheiros do LIB, do PEB, da vida, cada um com seu toque especial,
temperando os dias com risadas e compartilhando os desafios, angstias e superaes.
Agradeo especialmente aos engenheiros Daniel e Fernando, sem eles estaria eu ainda
vii

em frente ao computador. Pela dedicao e camaradagem no estudo do Clculo
Fracional e da Bioimpedncia, agradeo doutoranda Andrea e ao ps-doutor Weber.
Dentre os mestrandos, pela doura e gentileza, agradeo Giulia e Nrrima e pelas
noites e fins de semana exaustivos de estudo, aos colegas Marcelo, Igor e Junior. A
todos os amigos de Sade e de Exatas dedico algumas palavras: no tarefa fcil
embrenhar-se no campo de especialidades alheias e necessria muita coragem para
discordar na terra do estrangeiro. Levamos nas costas bagagem pesada, com saberes
importantes e outros pouco importantes. No entanto, convivendo com o inesperado
que se desenvolve a capacidade de desafiar. O senso de coletividade anima a caminhada
e sem vocs nada disso teria graa.
Ao meu querido Luigui, por toda a alegria que me traz, sua lealdadade,
dedicao, carinho e amor.
A Deus, por inmeras vezes me permitir enxergar alm do que os olhos
permitem.
E ao leitor, a est o meu propsito. Sou grata por me acompanhar.

viii

Resumo da Dissertao apresentada COPPE/UFRJ como parte dos requisitos
necessrios para a obteno do grau de Mestre em Cincias (M.Sc.)

INFLAMATRIA CUTNEA


Junho/2011

Orientadores: Marcio Nogueira de Souza

Programa: Engenharia Biomdica

Dados experimentais de bioimpedncia da pele no so bem ajustados por
modelos eltricos clssicos, sendo normalmente necessrio o uso de elementos de
ordem fracional, os quais so capazes de melhor descrever as disperses dieltricas da
pele. Neste estudo, para avaliar os efeitos da irritao produzida experimentalmente na
pele de coelhos e almejando-se aumentar o poder diagnstico da tcnica de
bioimpedncia, foi utilizado um modelo que inclui um fractor, cuja soluo envolve
derivadas de ordem fracional. Foram analisados dados anteriormente coletados pelo
grupo, onde a pele de coelhos foi sensibilizada com lauril sulfato de sdio em diferentes
concentraes durante 5 dias consecutivos. A tcnica de espectroscopia de
bioimpedncia foi baseada na resposta da corrente a um degrau de tenso aplicado
regio irritada. No que concerne aos resultados, nenhum dos parmetros do circuito
eltrico (R
, R
c
, o), com relevncia na interpretao do fenmeno inflamatrio, sofreu
alteraes de significncia estatstica compatveis com a expectativa clnica da
inflamao. Em decorrncia das limitaes do trabalho, no possvel afirmar-se que o
modelo fracional aumentou o poder diagnstico da tcnica de bioimpedncia cutnea.

ix

Abstract of Dissertation presented to COPPE/UFRJ as a partial fulfillment of the
requirements for the degree of Master of Science (M.Sc.)

FRACTIONAL ORDER IMPEDANCE MODEL FOR THE CUTANEUS
INFLAMATORY RESPONSE


June/2011

Advisors: Marcio Nogueira de Souza

Department: Biomedical Engineering

Experimental data of bioimpedance of the skin are not well adjusted by classic electric
models, and is usually necessary to use fractional-order elements, which are able to
better describe the dispersions of dielectric skin. In this study, to evaluate the effects of
experimentally produced irritation in the skin of rabbits and aiming to increase the
diagnostic power of the bioimpedance technique, it was used a model that includes a
fractor, whose solution involves fractional order derivatives. We analyzed data
previously collected by the group, where the skin of rabbits were sensitized with sodium
lauryl sulfate at different concentrations for 5 consecutive days. The bioimpedance
spectroscopy technique was based on the response of current to a voltage step applied to
the irritated area. Regarding the results, none of the parameters of the electrical circuit
(R
, R
c
, o), with relevance in the interpretation of the inflammatory phenomenon,
experienced statistically significant changes consistent with the expectation of clinical
inflammation. Due to the limitations of this work, we cannot say that the fractional
model increased the diagnostic power of the technique of cutaneous bioimpedance.

x

SUMRIO

Captulo 1
INTRODUO .............................................................................................................. 1
Captulo 2
A PELE ............................................................................................................................ 6
2.1 Histologia cutnea ............................................................................................... 7
2.2 Leses por contato com agentes externos ......................................................... 12
2.2.1 Fisiopatologia ................................................................................................ 12
2.2.2 Eczemas ......................................................................................................... 14
2.2.2.1 Dermatite de contato alrgica ..................................................................... 15
2.2.2.2 Dermatite de contato por irritante primrio ................................................ 16
Captulo 3
BIOENGENHARIA CUTNEA................................................................................. 19
3.1 Tcnicas subjetivas ........................................................................................... 19
3.2 Tcnicas de bioengenharia cutnea ................................................................... 20
3.1.1 Perda de gua transepidrmica (Transepidermal water loss - TEWL) .......... 20
3.2.2 Corneometria (CM): Capacitncia eltrica e condutncia ............................ 23
3.2.3 Fluxometria por Doppler a laser (Laser Doppler Flowmetry LDF) ........... 24
3.2.4 Mtodo colorimtrico .................................................................................... 26
3.2.5 Outras tcnicas .............................................................................................. 27
3.2.6 Tcnicas de bioengenharia cutnea: reviso de literatura ............................. 29
3.2.7 Bioimpedncia ............................................................................................... 32
3.3 Impedncia eltrica ........................................................................................... 33
3.3.1 Conceitos ....................................................................................................... 33
3.3.2 Modelos ......................................................................................................... 42
3.3.3 Bioimpedncia cutnea: reviso de literatura ................................................ 43
Captulo 4
O CLCULO FRACIONAL ....................................................................................... 49
4.1 Histrico ............................................................................................................ 49
4.2 Funo Gamma ................................................................................................. 51
4.3 Funo de Mittag-Leffler .................................................................................. 53
4.4 Definies de derivadas e integrais fracionais .................................................. 56
4.4.1 Definio de Grnwald-Letnikov .................................................................. 56
4.4.2 Definio de Riemann-Liouville ................................................................... 56
4.4.3 Definio de Caputo ...................................................................................... 56
4.4.4 Derivada da funo de Mittag-Leffler ........................................................... 57
4.5 Transformada de Laplace e convoluo ............................................................ 57
4.6 Funo de Green ............................................................................................... 58
Captulo 5
MATERIAIS E MTODOS ........................................................................................ 62
5.1 Modelos eltricos e soluo analtica ................................................................ 62
5.2 Banco de dados e tcnicas de medio ............................................................. 68
5.3 Algoritmo e anlise estatstica .......................................................................... 69
Captulo 6
RESULTADOS ............................................................................................................. 71
Captulo 7
DISCUSSO ................................................................................................................. 80
xi

Captulo 8
CONCLUSES ............................................................................................................. 87
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ....................................................................... 89
ANEXO I ..................................................................................................................... 100

xii

LISTA DE ABREVIATURAS

SIGLA SIGNIFICADO

CM Corneometria
CPE Constant Phase Element
DCA Dermatite de contato alrgica
DCIP Dermatite de contato por irritante primrio
ESCD European Society of Contact Dermatitis
IFN-g Interferon-gama
IL Interleucina
IP-10 Protena induzida por interferon-10
LDF Laser Doppler Flowmetry
LIB Laboratrio de Instrumentao Biomdica
MIP-2 Protena inflamatria de macrfago-2
SLS Sodium Lauryl Sulphate
TEWL Transepidermal Water Loss
TNF-a Fator de necrose tumoral alfa

1

CAPTULO 1

INTRODUO

Por ser um sistema sofisticado, a pele envolve processos fsico-qumicos
bastante elaborados, principalmente quando submetida ao de agressores externos.
Seu papel se estende alm das propriedades de revestimento e proteo do corpo. Ela
possui uma relao singular com os demais rgos e est integrada aos sistemas de
maneira que permite o equilbrio dinmico de todo o organismo e o equilbrio deste com
o ambiente externo. Fenmenos simples como sudorese e piloereo, por exemplo,
esto relacionados com a regulao trmica de forma central. A pele e as mucosas
estabelecem limite at mesmo entre o que permitido ou no interagir com o
organismo. Quando detectam agentes agressores, so responsveis por desencadear
inmeros fenmenos biolgicos envolvidos com a ativao do sistema imune, liberao
de mediadores qumicos, mudanas estruturais do tecido e diversas interaes celulares
e moleculares. Juntas estas reaes contm danos expressivos. No entanto, se o dano
persistente, ocorre o comprometimento do tecido, especialmente do estrato crneo, a
mais externa de todas as camadas. A durao e a intensidade dos mecanismos de defesa
podem comprometer as prprias funes da pele e determinar desde pequenas mudanas
em sua histologia at estgios patolgicos com sinais e sintomas clnicos evidentes.
Reao (ou resposta) inflamatria o nome dado resposta geral e inespecfica
do tecido vascularizado agresso externa. No caso do contato da pele com substncias
nocivas que desencadeiam uma reao inflamatria, a condio patolgica produzida
2

denominada dermatite de contato. As manifestaes ocorrem de forma particular e as
alteraes visualmente perceptveis podem variar de edema e eritema leves exsudao,
descamao e formao de crostas. Algumas substncias podem produzir inflamao
em qualquer pele, so os irritantes primrios. Outras desencadeiam fenmenos
imunolgicos especficos quanto ao agente, produzindo a dermatite de contato alrgica.
A dermatite de contato pelos irritantes primrios causa comum de doena ocupacional.
Os trabalhadores mais acometidos so aqueles que mantm contato frequente com
lquidos (DICKEL et al., 2002). gua e detergentes so os principais irritantes
(SLODOWNIK et al., 2008) e a maior incidncia est entre cabeleireiros e barbeiros
(46,9 para cada 10.000 profissionais por ano) (DICKEL et al., 2002). A exposio pode
ocorrer ainda pelo uso de cosmticos e produtos de higiene e limpeza. Uma das
substncias com potencial irritativo acrescida a muitos destes produtos o surfactante
lauril sulfato de sdio, conhecido como SLS (Sodium Lauryl Sulphate). O SLS tambm
empregado habitualmente em estudos que avaliam o grau de irritao da pele de
humanos e de animais. Os estudos utilizam formas variadas de medida da resposta
tecidual ao irritante. Uma delas a avaliao clnica (visual), bastante utilizada em
testes de contato e ensaios toxicolgicos de cosmticos em coelhos, cuja sensibilidade
ao irritante maior do que em humanos. Apresenta, no entanto, desvantagens quanto
subjetividade, necessidade de treinamento ostensivo, e impossibilidade de quantificao
contnua (KUZMINA et al., 2003a, GOON et al., 2004). Alm disto, em estgios
inflamatrios subclnicos ou de evoluo recente as mudanas podem ser indetectveis
por este mtodo, pois mesmo os sinais iniciais como edema e eritema so relativamente
tardios.
Em alternativa leitura visual, foram desenvolvidos vrios mtodos no
invasivos de bioengenharia para avaliar a resposta cutnea ao irritante. Estes mtodos
diferenciam-se pela tcnica de quantificao e o fenmeno fisiolgico analisado, tal
como: funo de barreira (perda transepidrmica de gua), hidratao (corneometria),
fluxo sanguneo (fluxometria por Doppler a laser), cor (colorimetria), espessura
(avaliao ecogrfica), contedo lipdico superficial (sebumetria) e o pH superficial.
Cada tcnica resulta em vantagens e desvantagens que devem ser ponderadas de acordo
com os objetivos de estudo. As interferncias mais comuns advm de fatores biolgicos,
psquicos e ambientais, alm das variaes intra-individuais. Em geral, a combinao de
duas ou mais tcnicas e mltiplas aferies pode conferir respostas mais fidedignas.
3

O estudo da resposta da pele aplicao tpica de SLS tambm foi um dos temas
iniciais de pesquisas na rea de bioimpedncia cutnea (OLLMAR, EMTESTAM,
1992). Como cada reao tecidual composta por alteraes qumicas ou estruturais
que levam a mudanas significativas nas propriedades eltricas celulares (NYRN et
al., 1999), as medidas de impedncia eltrica podem ser usadas para quantificar
alteraes decorrentes da inflamao, como o edema (NICANDER et al.,1995). Para
descrever o comportamento da corrente no tecido biolgico, so ento utilizados
modelos eltricos. Em tais modelos, resistores e capacitores normalmente compem os
circuitos que modelam a pele e so dispostos de maneira a fornecer o maior grau de
compatibilidade possvel com os fenmenos bioeltricos em estudo.
Existe nos sistemas biolgicos uma diversidade de padres, estruturas, formatos
e interaes que desafia a rea de modelagem matemtica e da bioengenharia. Os
fenmenos envolvidos na dinmica de um organismo vivo ou deste com os demais, e
at mesmo com o ambiente, atingem elevados nveis de complexidade. O maior desafio
uma modelagem realstica capaz de captar as principais caractersticas do sistema. Em
engenharia, comum o uso de equaes diferenciais e certas transformadas para
descrever eventos fsicos; porm, quando se trata da anlise da resposta de um
organismo vivo a estmulos eltricos, qumicos ou mecnicos, as ferramentas usuais
eventualmente encontram algumas limitaes. Quando a soluo de equaes que
descrevem o comportamento do sistema encontra derivadas de ordem no inteira, dois
caminhos podem ser seguidos, o uso de aproximaes ou a soluo analtica
propriamente dita. O clculo fracional se destina soluo de equaes integro-
diferenciais com expoentes arbitrrios e, por isto, parece adequar-se melhor dinmica
dos processos biolgicos.
Na elaborao do modelo matemtico necessrio identificar o problema
especfico em anlise e o conjunto dos componentes envolvidos no sistema. As
expresses matemticas envolvidas neste modelo tero como base o sinal de entrada e o
sinal de sada. Aps o equacionamento do sistema, criam-se algoritmos computacionais
para a soluo das equaes matemticas relacionadas. Tais algoritmos permitem, entre
outras possibilidades, a estimao dos valores numricos dos parmetros da equao de
modo que esta melhor se ajuste a determinados dados experimentais.
Um exemplo a representao da resposta inflamatria cutnea a partir de
medidas bioeltricas do tecido. O comportamento da impedncia eltrica da pele pode
ser traduzido em um sistema eltrico cujas entrada e sada so sinais que envolvem
4

medidas de corrente. Aplicando-se um degrau de tenso pele, ser captado um sinal de
corrente que ter uma variao de acordo com o grau de inflamao. Esta descrio
simples corresponde base da tcnica de espectroscopia por bioimpedncia em uso no
Laboratrio de Instrumentao Biomdica (LIB) do Programa de Engenharia Biomdica
da COPPE/UFRJ. O mtodo de resposta de corrente ao degrau de tenso foi
desenvolvido por NEVES e SOUZA (2000) e vem sendo aplicado no estudo de sistemas
biolgicos nos ltimos anos (NEVES et al., 1999, NEVES, 2000, NEVES, SOUZA,
2001, MENDONA et al., 2001, MENDONA, 2002, ALVARENGA, SOUZA, 2003,
MENDONA, SOUZA, 2003, FERREIRA, SOUZA, 2004, NEVES, 2006,
ALVARENGA, SOUZA, 2006, FERREIRA, 2006, 2007). Os estudos do grupo na rea
de dermatologia foram iniciados em 2006 por Ferreira e foram motivados pelo crescente
interesse da bioengenharia na fisiopatologia do tecido cutneo. Nos ltimos trabalhos do
grupo (FERREIRA, 2006, 2007), devido ao carter heterogneo da pele, lanou-se mo
de uma modelagem com um elemento de fase constante, ou CPE (Constant Phase
Element) (GRIMNES, MARTINSEN, 2005, SOSA et al., 2005). Uma vez que o uso de
tais elementos de fase constante leva a equaes caractersticas com expoentes
fracionais, a impedncia do modelo foi aproximada no domnio de Laplace. Com isto,
foi possvel realizar estimativas dos parmetros dos modelos eltricos preconizados para
a pele.
O uso do clculo fracional para a resoluo analtica de equaes diferenciais
no inteiras, ou sua forma equivalente no domnio de Laplace (KILBAS et al., 2006),
tem-se difundido recentemente. A impedncia eltrica da pele que utiliza o CPE parece
um campo promissor para a aplicao do clculo fracional, j que a pele composta por
estruturas que se modificam progressivamente na medida em que atingem planos mais
profundos. A resposta inflamatria cutnea um exemplo de como uma ferramenta
matemtica que valorize as mincias do processo pode ser til na formao de um
modelo comportamental. A abordagem do clculo fracional neste campo uma proposta
inovadora e pode ser til na interpretao fisiolgica do processo, j que permite
ressaltar propriedades do sistema que seriam negligenciadas por modelos oriundos de
equaes aproximadas.
A criao do modelo matemtico inicia-se com a anlise do sistema em estudo,
das possveis tcnicas de medio do fenmeno, das ferramentas matemticas
disponveis para o equacionamento do modelo, elaborao do algoritmo, obteno dos
valores numricos dos parmetros da equao e interpretao dos resultados. Estes
5

assuntos so abordados em sequncia nos prximos captulos. O estudo da pele e da
resposta inflamatria cutnea iniciado no Captulo 2. O Captulo 3 composto pelas
tcnicas utilizadas na medio da inflamao cutnea. No Captulo 4 ser abordado o
clculo fracional como ferramenta chave na resoluo das equaes diferenciais com
coeficientes arbitrrios. A metodologia utilizada, incluindo a confeco do algoritmo
computacional, est disposta no Captulo 5. Por fim, sero apresentados os resultados, a
discusso e a concluso nos Captulos 6, 7 e 8.

Objetivo Geral
A proposta deste estudo foi a de investigar a abordagem do clculo fracional na
modelagem de um sistema biolgico, ou, mais especificamente, no estudo da reao
inflamatria cutnea produzida de forma experimental em coelhos, por meio da
estimao de parmetros relacionados tcnica de bioimpedncia. As etapas mais
relevantes do trabalho dizem respeito ao equacionamento da resposta da corrente ao
degrau de tenso para um modelo de bioimpedncia cutnea contendo o CPE; a
conseqente obteno de uma soluo analtica com as ferramentas do clculo fracional;
e a implementao de ferramentas computacionais que permitiram a estimao de
parmetros a partir de tal soluo.

Objetivos Especficos

- Aprendizado dos novos conceitos e ferramentas matemticas aplicadas ao campo do
Clculo Fracional.
- Aplicao das ferramentas de resoluo do Clculo Fracional ao modelo de
bioimpedncia da pele desenvolvido por FERREIRA (2006) e obteno de uma
equao analtica que pudesse ser implementada computacionalmente.
- Adaptao da soluo analtica ao programa de otimizao multiparamtrica para
obteno de estimativas dos parmetros do modelo eltrico de biompedncia da
pele.
- Re-anlise do banco de dados de resposta de corrente ao degrau de tenso coletados
por FERREIRA (2006) e comparao dos resultados daquele trabalho com os
obtidos pela soluo analtica.
- Interpretao fisiolgica e discusso dos resultados.
6

CAPTULO 2

A PELE

H mais de 150 anos, a pele foi descrita por Virchow como um envoltrio com
funo de revestimento e proteo a rgos mais complexos (VIRCHOW, 1860).
Durante os ltimos anos, no entanto, estudos tm demonstrado que a pele tambm um
rgo funcionalmente sofisticado. Suas interaes celulares e moleculares so
complexas e ocorre renovao e reparo de seus componentes a todo o momento. um
tecido altamente dinmico, capaz de responder a alteraes no ambiente externo e
interno e isto permite que muitas das manifestaes do organismo se expressem por
alteraes cutneas. O controle hemodinmico, o equilbrio hidro-eletroltico, a
termorregulao, o metabolismo energtico, o sistema sensorial e a defesa contra
agresses externas dependem da sua viabilidade.
A pele desempenha funes especficas em cada regio do corpo e as estruturas
que a compem variam de acordo com o stio anatmico. As regies palmo-plantares,
por exemplo, possuem uma maior queratinizao e ausncia de plos, e esto mais
adaptadas abraso. As extremidades das falanges distais possuem grande nmero de
receptores sensoriais, o que determina uma elaborada funo ttil. As regies ungueais
adquirem uma espessa camada de queratina durante a diferenciao celular,
caracterizando a rigidez das unhas. Alm disto, as mudanas que acometem uma
determinada regio da pele envolvem mecanismos os quais englobam uma srie de
componentes celulares e segmentos cutneos. necessrio, portanto, conhecer os
7

principais elementos que constituem este tecido e os principais sistemas a ele
correlacionados.

2.1 Histologia cutnea

O padro histolgico da pele pode ser definido a partir das trs camadas que a
compem: epiderme, derme e hipoderme. A epiderme um epitlio de revestimento e
encontra-se firmemente acoplada ao tecido conjuntivo subadjacente do qual recebe
suporte, a derme. Abaixo da derme reside um tecido conjuntivo frouxo, a hipoderme,
que contm gordura (Figura 1).

Figura 1 Principais estruturas e camadas da pele. Adaptado de HUNTER et al. (2002).

A epiderme formada por camadas de clulas diferenciadas pela morfologia,
grau de maturao e profundidade. As mais superficiais so justapostas umas as outras e
cobertas por queratina. Da segue a sua denominao histolgica: tecido epitelial
pavimentoso (ou escamoso) estratificado queratinizado. As clulas da camada mais
8

profunda da epiderme, a camada basal, dividem-se continuamente. Durante um perodo
de 60 dias estas clulas sofrem mitose e seu contedo modificado na medida em que
atravessam as camadas superiores at chegarem a mais superficial, onde morrem (Figura
2 e Figura 3). A camada queratinizada de clulas mortas varia desde as regies mais
delicadas como as plpebras, at as mais espessas como as plantas dos ps.

(a) (b)
Figura 2 Camadas da epiderme. (a) imagem por microscopia ptica; (b) imagem por microscopia
eletrnica. Extrado de HUNTER et al. (2002).

A camada crnea, a mais superficial, plana e repleta de queratina (stratum
corneum). formada por cerca de quinze fileiras de clulas mortas empilhadas, os
cornecios. Os cornecitos so clulas anucleadas ricas em protenas, delimitadas por
um envelope protico e um envelope lipdico, unidas por corneodesmossomos e
circundadas por lipdeos intercelulares. O revestimento do cornecito e a matriz
hidrofbica previnem a perda de lquido pela pele e agem como barreira contra a
penetrao de substncias externas potencialmente nocivas; porm seu carter apolar
permite que a penetrao de compostos orgnicos ocorra facilmente. Em condies
normais, esta camada ligeiramente permevel gua e a substncias polares, e
relativamente impermevel aos ons sdio e potssio e a outras substncias como
glicose e uria. Sua hidratao baixa (cerca de 20% de gua) em relao aos estratos
inferiores (70%) (PLIQUETT, PLIQUETT, 1996) e, com isto, possui a maior oposio
ao fluxo de corrente eltrica.
A camada crnea constitui a principal barreira contra substncias qumicas e
microrganismos e est envolvida na regulao da perda de gua do organismo para a
atmosfera, conhecida como perda de gua transepidrmica.
9

Figura 3 Mudanas durante a queratinizao. Adaptado de HUNTER et al. (2002).

A camada granulosa (stratum granulosum) localiza-se entre a camada crnea e a
espinhosa. Possui morfologia intermediria a ambas e sua denominao advm dos
grnulos de querato-hialina e grnulos lamelares que a compem. O contedo dos
grnulos lamelares abrange glicoprotenas, glicosilceramidas, cidos graxos,
fosfolipdeos e colesterol. Na transio para a camada crnea, o contedo destes
grnulos liberado para o espao intercelular e sofre modificao pelas hidrolases. Por
fim, depositam-se sobre as clulas e na matriz extracelular em uma bainha dupla
formando a barreira lipdica semipermevel da camada crnea com predomnio de
ceramidas, colesterol e cidos graxos.
Logo abaixo da camada granulosa encontra-se a camada espinhosa (stratum
spinosum), composta pelas clulas de Malpighi. Estas clulas so queratincitos
histologicamente diferenciados e unidos por pequenos processos citoplasmticos, por
abundantes desmossomos e por um cimento intercelular de glicoprotenas e
lipoprotenas.
A camada granulosa repousa sobre a camada basal (stratum basale), cuja
composio de queratincitos e clulas tronco epidermais dispostos lado a lado sem
espao entre os mesmos, formando uma fileira nica de aspecto colunar. A continuidade
entre os queratincitos ocorre por junes comunicantes conhecidas como gap
junctions, por onde h passagem de elementos intracelulares. Alm da queratina, os
10

queratincitos produzem citocinas que participam das reaes inflamatrias e
imunolgicas da pele (ALBANESI et al., 2005).
H ainda outras clulas que compem a epiderme. So elas: os melancitos da
camada basal, que estendem seus prolongamentos dendrticos superiormente at as
outras clulas epidrmicas e contm pigmentos de melanina com ao protetora contra a
radiao ultra-violeta (Figura 4); as clulas de Langerhans suprabasais, que reconhecem
e processam sinais antignicos e os comunicam s clulas linfides, tambm possuem
morfologia dendrtica (Figura 4); e as clulas de Merkel basais, que so clulas
neuroendcrinas as quais atuam na proliferao de queratincitos e parecem ter papel na
regulao de doenas cutneas (BOULAIS et al., 2009).

Figura 4 Camadas e outras estruturas da epiderme. Adaptado de GAWKRODGER (2002).

Os anexos cutneos incluem os plos, cabelos, msculo eretor do plo, unhas,
glndulas sebceas e glndulas sudorparas (Figura 4). Os folculos pilosos contm
reservatrios de clulas tronco epiteliais que participam do processo de reparao
tecidual. Exceto pela unha, todos estes apndices possuem seu leito na derme.
A epiderme no possui vascularizao, ela recebe seus nutrientes por
contiguidade com a derme. A derme, por sua vez, definida como uma rgida matriz
de tecido conjuntivo de suporte, contendo estruturas especializadas dispostas
imediatamente abaixo e intimamente conectadas epiderme (GAWKRODGER, 2002).
A adeso da epiderme derme ocorre pela projeo de cristas epidrmicas, enquanto a
derme se projeta superiormente pelas papilas drmicas. A interface entre estas camadas
conhecida como juno dermoepidrmica ou zona da membrana basal. Os
componentes da matriz de tecido conjuntivo so as fibras, os filamentos e a substncia
amorfa, as quais acomodam vasos, nervos e anexos epidrmicos. Os elementos celulares
deste tecido so as clulas mesenquimais primitivas, os fibroblastos, os macrfagos, as
clulas dentrticas, os mastcitos e os linfcitos, cujas funes esto resumidas na
11

Tabela 1. A maior parte destes elementos tambm se apresenta de forma transitria. Os
polimorfonucleares, por exemplo, so clulas de origem vascular e so vistos durante a
inflamao. Isto possvel devido ampla rede vascular e linftica que supre a derme.
A inervao desta camada tambm rica, determinando sensibilidades tteis, dolorosas
e trmicas.

Tabela 1 Funes de algumas clulas residentes da derme. Adaptado de HUNTER et al. (2002).
1

Clula Funo
Fibroblasto
Sntese de colgeno, reticulina, elastina, fibronectina,
glicosaminoglicanos, colagenase
Fagcito mononuclear
Mvel: fagocita e destri bactrias
Secreta citocinas
Linfcito Vigilncia imunolgica
Clula de Langerhans e
Clula dentrtica drmica
Em trnsito entre linfonodos locais e epiderme
Apresentao de antgenos
Mastcito
Estimulados por antgenos, complementos e outras substncias a liberar
mediadores inflamatrios como histamina, heparina, prostaglandinas,
leucotrienos, triptase e fatores quimiotticos para eosinfilos e neutrfilos

As fibras colgenas perfazem cerca de 70% da derme e so responsveis pela
rigidez e fora desta camada. Alm disto, a fisiologia e a reparao da pele dependem
da sntese e da degradao do colgeno (AZULAY, AZULAY, 1999a). As fibras
elsticas conferem elasticidade ao tecido. Elas formam uma rede que se estende desde a
juno dermo-epidrmica at a hipoderme. Tambm esto dispostas ao longo dos
folculos pilosos e do endotlio vascular.
A substncia fundamental amorfa da pele constituda basicamente por
glicosaminoglicanos (cido hialurnico, sulfato de dermatan ou condroitino sulfato B,
sulfato de heparana, sulfato de condroitina e sulfato de queranato). Esta substncia
permite a adeso de diversos componentes do meio extracelular.
Por fim, abaixo da derme encontra-se a camada mais profunda da pele, a
hipoderme. Tambm conhecida como panculo adiposo, pois se constitui de adipcitos
separados por delicados septos de colgeno com estruturas nervosas, vasculares e
linfticas. Sua participao no metabolismo energtico est relacionada degradao de

1
Traduo do autor.
12

cidos graxos e preveno da perda de calor (isolamento trmico). Desempenha ainda
proteo contra traumas, pela mobilidade que confere pele.

2.2 Leses por contato com agentes externos

2.2.1 Fisiopatologia

A pele constitui uma importante barreira contra agressores fsico-qumicos
(abraso, corroso etc.) e biolgicos (microorganismos, protenas estranhas e outros).
Os mecanismos de defesa variam desde a secreo sebcea, com ao protetora e
antimicrobiana, at as mais especficas e complexas funes imunolgicas.
O agente agressor externo representa um estmulo nocivo capaz de ativar vrios
mecanismos de adaptao celular. Quando as mudanas adaptativas no so possveis,
ou ocorrem em excesso, instalam-se danos celulares que, dependendo do estgio, podem
ou no ser revertidos. Caso o estmulo seja severo ou persistente, sucedem danos
celulares irreversveis e morte celular. Estmulos exgenos por danos qumicos, em
particular, geram morte celular por necrose, que se manifesta pela tumefao ou ruptura
das clulas, desnaturao e coagulao das protenas citoplasmticas e falncia das
organelas celulares (MAJNO, JORIS, 1995). Os estmulos tambm podem provocar
reaes complexas da vasculatura do tecido conjuntivo (derme), fenmeno conhecido
como inflamao. A resposta inflamatria um mecanismo de proteo do organismo,
uma resposta imunolgica geral e inespecfica de tecidos vascularizados. O objetivo
livr-lo das causas e consequncias dos danos celulares pela destruio, diluio ou
confinamento do agente (MITCHELL, COTRAN, 2003a).
Durante a inflamao tambm ocorre reconstituio do tecido lesado. O reparo
promovido pela regenerao das clulas do parnquima e pelo preenchimento com
tecido conjuntivo fibroso (cicatrizao). A inflamao e o reparo, no entanto, podem ser
potencialmente nocivos, como ao produzirem reaes extremas de hipersensibilidade e
cicatrizes desfigurantes.
As reaes inflamatrias podem ser agudas ou crnicas. Quando agudas tm
durao de no mximo alguns dias. Suas caractersticas principais so a presena de
exudato (lquido inflamatrio extravascular com concentrao protica elevada e grande
quantidade de restos celulares) e migrao de leuccitos.
13

Nas dermatoses inflamatrias agudas os fatores produzidos pela inflamao
podem coexistir com danos epiderme, derme e vasculatura. Na inflamao crnica a
durao prolongada, o que permite o surgimento de um novo padro histolgico com
neovascularizao, fibrose, necrose tecidual e a presena de linfcitos e macrfagos.
Nas leses crnicas de pele a camada epidrmica sofre hipertrofia (aumento do tamanho
das clulas) e hiperplasia (aumento do nmero de clulas), enquanto na derme
transcorre fibrose.
Sob o contato com agentes irritativos exgenos a pele desenvolve um padro
histolgico chamado dermatite espongitica. A espongiose corresponde ao acmulo de
fluidos no espao intercelular da camada espinhosa. Ocorre separao dos stios de
adeso intercelular (desmossomos) e das membranas celulares, deslocando os
queratincitos da camada espinhosa e formando vesculas na epiderme
(histopatolgicas), que lhe conferem o aspecto esponjoso (Figura 5).

Figura 5 Histologia da espongiose. As setas indicam as vesculas espongiticas na camada espinhosa.
Extrado de WILKEL (2007).

Todas estas alteraes teciduais somadas a outros mecanismos adaptativos
determinam um novo padro morfolgico e esto diretamente relacionados aos sinais e
sintomas clnicos da doena, seu curso e prognstico (MITCHELL, COTRAN, 2003b).
As vesculas histopatolgicas podem exterioriza-se formando vesculas clnicas. A
ruptura destas libera o exudato que, ao secar, formar crostas. O edema intercelular
altera a queratinizao pela manuteno dos ncleos nas clulas da camada crnea
(paraceratose). Ocorre o espessamento da camada crnea (hiperceratose) resultando na
clnica de descamao. Alm disto, a vasodilatao produz o eritema e, na fase crnica,
pode haver espessamento da camada espinhosa (acantose) e de todas as camadas da
epiderme, o que d origem liquenificao (espessamento da pele).
14

2.2.2 Eczemas

Quando o contato da pele com um agente externo desencadeia uma reao
inflamatria, produz-se uma condio patolgica denominada dermatite de contato. A
manifestao clnica majoritria da dermatite de contato o eczema e, por isto, tambm
conhecida como eczema de contato. Historicamente, em 1894 Jadassohn
(FOUSSERAUX, 1984) observou e replicou uma reao eczematosa devido ao contato
da pele com o iodofrmio. Este achado deu incio caracterizao de diversos agentes
externos como fontes de eczema. WILSON (1865), j havia admitido que elementos
irritantes pudessem causar eczema.
Eczema um termo que abrange doenas cutneas de diversas etiologias. O
termo deriva do grego ekzein significa entrar em ebulio. Equivale ao termo
erupo, ou seja, brotar para fora. O termo grego, no entanto, mais fidedigno, pois
sugere o estado de ebulio da gua, as bolhas que surgem em sua superfcie so
anlogas s vesculas do eczema. O eczema um estado inflamatrio caracterizado por
eritema, prurido, espessamento intersticial e s vezes subcutneo, exsudao,
papulao, vesiculao, incrostao e descamao (WILSON, 1865). Cada caso de
eczema, no entanto, manifesta-se de forma particular e as alteraes visualmente
perceptveis podem variar de uma a vrias caractersticas dentre as mencionadas acima.
Eritema e edema costumam apresentar-se inicialmente de forma discreta.
Eventualmente evoluem para vesculas e exsudao e, em seguida, ocorre descamao e
formao de crostas (Figura 6).

Figura 6 Eczema de contato. Extrado de WILKEL (2007).

15

Algumas substncias podem causar eczema em qualquer pele, so os irritantes
primrios. Outras dependem de condies especficas do indivduo e a fisiopatologia se
d por mecanismos alrgicos que sucedem precocemente ou pela exposio prolongada.
O contato com estas substncias classifica os eczemas de origem exgena como: (1)
alrgico e (2) por irritante primrio. No segundo, alm da espongiose do estgio inicial,
ocorre hiperplasia em perodos mais avanados. Ambos os tipos no possuem padro
morfolgico especfico, mas os hbitos do paciente, a localizao e a distribuio das
leses ajudam a apontar os agentes etiolgicos provveis, como cosmticos, acessrios
de metal e causas ocupacionais. H outros fatores predisponentes que devem ser
observados como idade, sexo, raa, histrico de dermatite atpica e ocupao. A
susceptibilidade a irritantes parece decrescer com o avano da idade e a intensidade das
reaes parece estar aumentada nas mulheres, as quais possivelmente se expem mais
que os homens (BELSITO, 2005). O contedo lipdico do estrato crneo parece reduzir
a sensibilidade ao irritante nas descendncias africanas, a atopia aumentaria o risco para
o eczema e a ocupao outro fator de extrema relevncia, pois influencia no grau de
exposio a gua, solventes, materiais custicos e microtraumas (BELSITO, 2005).

2.2.2.1 Dermatite de contato alrgica

Na dermatite de contato alrgica (DCA), a exposio repetida da pele a
substncias qumicas no-proticas, denominadas haptenos, sensibiliza a epiderme e
induz inflamao cutnea. O mecanismo chamado hipersensibilidade de contato do
tipo IV. Nele ocorre ativao da imunidade adquirida antgeno-especfica e o
desenvolvimento de mediadores da inflamao, as clulas T efetoras. Quando a
substncia qumica aplicada topicamente, so formadas ligaes covalentes entre os
haptenos e as protenas da pele. Este complexo (o antgeno) liga-se aos carreadores da
membrana plasmtica das clulas de Langerhans e de outras clulas dendrticas
cutneas, as quais migram da epiderme para linfonodos de drenagem paracorticais, onde
apresentam o antgeno aos precursores de clulas T hapteno-especficas. A
sensibilizao ocorre quando o hapteno permanece em contato com a pele por 18 a 24
horas.
Segundo DUARTE et al. (2000), os haptenos so substncias de baixo peso
molecular, com reatividade qumica e solubilidade lipdica capaz de promover sua
penetrao no extrato crneo e reagir com componentes do sistema imune. Os
16

haptenos podem ser metais como cromo, nquel, mercrio; antibiticos como penicilina
e neomicina; objetos plsticos como polietileno, acrlicos e polivinil e cosmticos como
fenol, formol e eosina.
Um grupo de clulas T se diferencia em clulas de memria que sofrem
expanso clonal em resposta ao encontro com os antgenos especficos (imunidade
adquirida). Aps o contato subsequente da pele com o mesmo hapteno, as clulas T
especficas interagem com as clulas apresentadoras do antgeno, liberam vrias
citocinas e desencadeiam reao inflamatria. A inflamao persiste por vrios dias e
diminui progressivamente pela regulao fisiolgica negativa.
O prurido o sintoma caracterstico da DCA e as manifestaes clnicas so
classificadas em agudas (eritema, vesculas, exudao e crostas), subagudas (eritema,
ppulas, escamas e crostas) e crnicas (liquenificao) (AZULAY, AZULAY, 1999b).

2.2.2.2 Dermatite de contato por irritante primrio

A dermatite de contato por irritante primrio (DCIP) mais comum do que a
dermatite de contato alrgica; porm, seus mecanismos so menos conhecidos.
causada por xenobiticos, substncias capazes de ativar a imunidade inata da pele
devido a seus efeitos txicos e pr-inflamatrios. Decorre da aplicao nica ou
repetida destes agentes a um stio cutneo idntico.
O quadro pode ser produzido por agentes fsicos ou infecciosos; porm a maior
parte dos irritantes primrios so substncias qumicas. O grau de penetrao da
substncia atravs da pele depende da concentrao desta e da espessura da camada
crnea. O tempo de exposio e a integridade do tegumento tambm so fatores
decisivos na produo da DCIP. Os irritantes podem ser cidos ou bases fortes e podem
provocar leses pelo contato imediato. Irritantes fracos exigem contato repetido e/ou
prolongado para desencadearem a resposta inflamatria. Os diferentes produtos
induzem alteraes morfolgicas distintas. Pode haver necrose de alguns queratincitos
ou reao espongitica. A clnica das leses costuma ser mais variada que a da DCA. O
curso pode ser iniciado com descamao e/ou eritema e evoluir para ulcerao. Para
irritantes fortes a reao costuma surgir em horas aps o contato, enquanto para os
fracos pode durar semanas. As sensaes descritas so prurido, dor em fisgada e
queimao.
17

A resposta a uma substncia em particular no prediz a reao a outras. Cada
reao depende da susceptibilidade especfica do indivduo ao agente etiolgico em
questo e de fatores endgenos como idade, sexo, raa e ciclo menstrual (NICANDER,
1998).
A fisiopatologia da DCIP no to conhecida como a da DCA. Sabe-se que,
diferentemente desta, a resposta endgena presena do patgeno no especfica. A
substncia irritante lesa os queratincitos e estes iniciam a produo de citocinas que
ativam as clulas de Langerhans e de Merkel adjacentes e desencadeiam o processo
inflamatrio (DUARTE et al., 2000). H, portanto, trs processos envolvidos:
destruio da barreira da pele, alteraes morfolgicas epidermais e liberao de
mediadores (SMITH et al., 2002). Os mediadores apontados so: fator de necrose
tumoral alfa (TNF-a), interferon-gama (IFN-g), interleucinas (IL) 1a, 2, 6, 8, 10,
protena induzida por interferon-10 (IP-10) e protena inflamatria de macrfago-2
(MIP-2) com predominncia de CD4+ sobre as clulas CD8+ (LEVIN, MAIBACH,
2002).
A DCIP mais comumente causada pela exposio repetida gua, detergentes
e solventes. O detergente aninico SLS a substncia utilizada com mais freqncia na
induo de DCIP experimental. De acordo com WAHLBERG e MAIBACH (1980), o
irritante usado experimentalmente deve possuir as seguintes caractersticas: no causar
toxicidade sistmica, sensibilizao, carcinognese ou inconvenincia cosmtica, no
possuir pH extremo e ser quimicamente bem definido.
O SLS um emulsificante utilizado em veculos farmacuticos, cosmticos,
pastas de dente e at mesmo comida. Sua ao sobre a tenso superficial tambm atinge
o estrato crneo e corresponde ao potencial irritativo da pele.
O aspecto clnico das leses agudas por SLS eritema, infiltrao e eroso
superficial. Vesculas e pstulas existem quando so aplicadas concentraes maiores
do irritante. Fissuras e descamao surgem na fase de recuperao e em aplicaes
repetidas de SLS (LEE, MAIBACH, 2004). As alteraes histopatolgicas tambm
dependem da concentrao do agente. Podem ocorrer: espongiose, vacuolizao
intracelular, degenerao hidrpica das clulas basais, hiperceratose, paraceratose e
necrose (LEE, MAIBACH, 2006). Na derme h infiltrado inflamatrio em vrios nveis.
Os linfcitos T predominam e as clulas CD4+ superam as CD8+ em nmero.
Alm da concentrao, NICANDER (1998) tambm atribuiu variaes da
resposta cutnea preparao do SLS. As cadeias carbnicas podem ser substitudas por
18

outras maiores. Estas ltimas produzem efeito menos irritativo, ainda que sejam
aplicadas concentraes iguais pele (NICANDER, 1998).

19

CAPTULO 3

BIOENGENHARIA CUTNEA

3.1 Tcnicas subjetivas

A histria clnica, a inspeo visual e palpatria so os mtodos mais
comumente utilizados no diagnstico das dermatites de contato e na descrio da leso
tecidual. A caracterizao da resposta ao irritante subjetiva e usa escalas arbitrrias
que qualificam as principais alteraes macroscpicas do tegumento. O observador deve
ser treinado a classificar parmetros como edema, eritema e presena de vesculas e
relacion-los de forma quantitativa em seus diferentes graus.
As escalas visuais normalmente so compostas por trs a cinco descritores da
leso. Vrias escalas encontram-se disponveis e muitos grupos de pesquisa utilizam
seus prprios critrios de classificao. Para testes utilizando SLS a Sociedade Europia
de Dermatite de Contato (European Society of Contact Dermatitis ESCD) criou guias
apresentando metodologias de aplicao experimental e escalas para caracterizao da
resposta ao agente (TUPKER et al., 1997) (Tabela 2). O Grupo Internacional
Investigador de Dermatites de Contato desenvolveu um sistema com proposta
semelhante, descrito na Tabela 3.
20

Tabela 2 - Sistema simples da ESCD para pontuao de reaes agudas ao SLS. Leitura de 25 a 96 horas
aps uma exposio nica. Adaptado de TUPKER et al. (1997).
2

Pontuao Qualificao Descrio
0 Negativo Sem reao
Duvidoso Eritema muito fraco ou descamao diminuta
1 Fraco Eritema fraco, edema leve, descamao leve e/ou aspereza
leve
2 Moderado Grau moderado de: eritema, edema, descamao, aspereza,
eroses, vesculas, bolhas, crostas e fissuras
3 Forte Grau marcante de: eritema, edema, descamao, aspereza,
eroses, vesculas, bolhas, crostas e fissuras
4 Muito forte / custico Como o nvel 3, com reas de necrose

Tabela 3 Leitura dos testes de contato indicada pelo Grupo Internacional Investigador de Dermatites de
Contato. Adaptado de TUPKER et al. (1997).
2

Reao Resultado
Ausente Negativo (-)
Leve eritema Duvidoso (?)
Discreto eritema com algumas ppulas (leso elevada com at 1 cm de
dimetro)
Positivo (+)
Eritema + Ppulas + Vesculas (elevao com menos de 1 cm de dimetro
e com lquido no interior)
Positivo (++)
Eritema intenso + Ppulas + Vesculas confluentes Positivo (+++)

Apesar da maior parte das escalas descritas em testes de contato com irritantes
possuir de quatro a cinco itens, NICANDER et al. (1996) constataram que o uso de trs
qualificadores (1) eritema leve, (2) eritema e edema leve, (3) eritema, edema e
vesculas proporcionou resoluo suficiente para avaliar as reaes da pele ao
irritante.

3.2 Tcnicas de bioengenharia cutnea

Em estgios subclnicos e em casos de leses no eritematosas no possvel
identificar a irritao da pele por mtodos subjetivos de inspeo visual e palpatria
(GROVE, GROVE, 1989).

2
Traduo do autor.
21

Como alterativa, existem metodologias que utilizam instrumentos biomdicos de
forma no invasiva e permitem a anlise de propriedades da pele s e enferma mesmo
quando o discernimento humano no capaz de detect-las. As tcnicas so variadas e
avaliam parmetros fsicos diferentes. Quando utilizadas em combinao, os resultados
podem ser ainda mais fidedignos (FERREIRA, 2006).
Para SERUP (2001), o planejamento do estudo, o treinamento do pesquisador e
o controle das condies que possam interferir nas medidas so os principais fatores
preditores do sucesso das pesquisas envolvendo estas tcnicas.
A seguir sero descritas as tcnicas de bioengenharia mais utilizadas na medio
de fenmenos adversos pelo contato com o SLS e outros irritantes primrios.

3.2.1 Perda de gua transepidrmica (Transepidermal water loss - TEWL)

A perda de gua transepidrmica definida como a difuso passiva da gua
atravs da epiderme, ou seja, a perda constitutiva de vapor de gua da pele na ausncia
de atividade glandular sudorpara (PINSON, 1942 apud CHILCOTT et al., 2002). Este
parmetro muito utilizado em estudos in vivo para avaliao da funo de barreira da
pele induzida irritao experimentalmente.
Apesar de sua heterogeneidade, o estrato crneo tem sido descrito como uma
membrana homognea para a difuso de gua e, portanto, obedece lei de Fick, para a
qual dois componentes participam deste processo: a barreira e a fora propulsora
(ENDO et al., 2007). Estes dois parmetros relacionam-se permitindo que o fluxo de
gua caminhe de regies de alta concentrao para as de baixa concentrao, em
magnitude proporcional ao gradiente de concentrao.
Os lipdeos intercelulares do estrato crneo formam uma barreira contra a
difuso de gua atravs da epiderme. Quando a pele danificada, ocorre prejuzo desta
funo, resultando em maior perda de gua (NETZLAFF et al., 2006). De acordo com
DI NARDO et al. (1996), em aplicaes tpicas de SLS este ndice sofre um aumento
caracterstico, que guarda relao com a concentrao em uso. Em experimento
realizado com soluo de SLS a 1%, foi observado que o aumento dos ndices de perda
de gua transepidrmica mantm-se por 7 a 9 dias (GLOOR et al., 2004).
Atualmente existem vrios instrumentos disponveis para sua medio, tais
como: Tewameter TM 210 (Figura 7), TM 300 e Tewameter Multi Probe Adapter 5
(Courage and Khazaka, Alemanha), Evaporimeter TM EP 1 (ServoMed AB, Sucia),
22

ServoMed EP-3 Evaporimeter (ServoMed, Sucia), VapoMeter (Delfin Technologies,
Finlndia), H4300 (Nikkiso-YSI, Japo), DermaLab TWEL Probe (Cortex Technology,
Dinamarca) (FLUHR, et al., 2006) e Acaderm (Menlo Park, EUA) (BRANCO et al.,
2005).

(a)

(b)
Figura 7 (a) Medida da perda transepidrmica de gua com Tewameter; (b) aspecto geral do
equipamento Tewameter TM 210
. Extrado de FERREIRA (2006).

Por tratar-se de um fenmeno fsico (evaporao) relacionado a um fenmeno
fisiolgico (transpirao), tanto fatores exgenos como endgenos interferem nesta
tcnica. A perfuso sangunea, as flutuaes de temperatura corporal, a atividade das
glndulas sudorparas, o metabolismo e outras variaes tm influncia sobre a perda
transepidrmica de gua (CHILCOTT et al., 2002). Vrias condies devem ser
observadas durante a mensurao. Para aumentar a preciso da tcnica, deve haver o
controle da temperatura e da umidade locais e a estabilidade fsica e psquica deve ser
assegurada. NICANDER (1998) sugere que o indivduo descanse por pelo menos
quinze minutos antes da medio em ambiente com temperatura entre 20 e 22C.
Apesar de a tcnica ter sido descrita inicialmente como capaz de avaliar a
integridade do tecido cutneo e, como conseqncia, sua funo de barreira, existe um
questionamento atual sobre esta afirmao. Em estudos in vitro, nos quais as condies
externas puderam ser controladas, no foi possvel relacionar a perda transepidrmica de
gua com a permeabilidade da pele (CHILCOTT et al., 2002, NETZLAFF et al., 2006).
Estes estudos indicam que o parmetro no parece ser uma boa ferramenta na medio
da funo de barreira da pele. De fato, o uso deste ndice como base para acessar a
permeabilidade cutnea tem sido amplamente questionado, principalmente no caso da
pele hidratada (CLONIDINE TRANSDERMAL SYSTEM MEETING, 2003).
PROKSCH et al. (2008) ressaltam que a perda de gua transepidrmica est relacionada
23

apenas barreira de dentro para fora. A barreira de fora para dentro, aquela que protege
contra os danos por substncias externas, necessita de estudo pela microscopia ou
anlises qumicas, os quais permitem a avaliao da integridade dos estratos, sua
composio lipdica e seu grau de permeabilidade. Alm disto, como a perda de gua
trasnsepidrmica tambm depende da fora propulsora, fatores que levem reduo do
fluxo sanguneo, como a aplicao tpica de corticides (anti-inflamatrios), podem
reduzir seus valores sem que isto esteja relacionado recuperao da funo de barreira
do tecido.

3.2.2 Corneometria (CM): Capacitncia eltrica e condutncia

O contedo de gua no estrato crneo pode estar comprometido em diversas
condies, como em estados de desidratao ou quando h perda da capacidade de
reteno de gua (TAGAMI, 1994). A capacitncia eltrica e a condutncia podem ser
utilizadas na avaliao do contedo de gua do estrato crneo e na medida de resposta
ao irritante, j que solventes orgnicos e surfactantes so capazes de reduzir o estado de
hidratao da camada (ENDO et al., 2007).
A medida realizada em baixas freqncias por equipamentos como o
Corneometer
TM
CM820 (Figura 8) e o CM825 (Courage & Khazaka, Alemanha). A
sonda possui cerca de 49 mm
2
de rea de contato com a superfcie da pele. Ao ser
posicionada sobre a mesma, aplicada uma fora constante e o grau de hidratao
definido pela diferena entre os valores das constantes dieltricas da gua e do estrato
crneo (NICANDER, 1998). O resultado reflete alteraes a uma profundidade de
0,1 mm e expresso em unidades arbitrrias.
Vrias condies podem causar influncia sobre a medida. Antes da utilizao
do instrumento recomenda-se que o indivduo aguarde 20 a 30 minutos em ambiente
com temperatura entre 20 e 25
o
C e umidade relativa entre 40 e 50% (NICANDER,
1998).
24

(a)

(b)
Figura 8 (a) Aspecto geral do Corneometer
TM
CM820; (b) medida de capacitncia eltrica de
hidratao com o equipamento. Extrado de FERREIRA (2006).

Embora a tcnica seja utilizada em muitas pesquisas dermatolgicas, sua eficcia
questionada. Como a poro profunda do estrato crneo possui maior capacidade de
manter-se hidratada (TAGAMI, 1994), quando o SLS aplicado em baixas
concentraes, o estrato crneo sofre desidratao em sua poro superficial, porm as
camadas mais profundas no so afetadas. Os valores de capacitncia nesta condio
so baixos. Isto ocorre devido proximidade das camadas inferiores do estrato crneo
com o vasto contedo de gua da camada basal. J em concentraes maiores de SLS a
barreira mais profunda tambm afetada, desencadeando um aumento no transporte de
gua do estrato basal que excede a evaporao. Neste caso os valores de capacitncia
apresentados so altos. H ainda uma faixa de concentraes para as quais no
possvel detectar respostas pelo equipamento. Isto ocorre devido ao equilbrio entre o
aumento do transporte de gua e a evaporao da superfcie. Devido variabilidade da
resposta quanto s concentraes do irritante, a capacitncia eltrica de hidratao no
parece revelar-se como um bom parmetro na caracterizao da irritao cutnea.
A condutncia eltrica tambm utilizada para avaliao da hidratao do
estrato crneo. Neste caso, o instrumento mais comum o Skicon-200EX (I.B.S. Inc.,
Japo).

3.2.3 Fluxometria por Doppler a laser (Laser Doppler Flowmetry LDF)

Na pele exposta ao SLS ocorrem alteraes hemodinmicas que se expressam
pela perfuso diferenciada dos eritrcitos e aumento do fluxo sanguneo microvascular
25

local. A fluxometria por Doppler a laser mede a intensidade da inflamao pela anlise
do fluxo sanguneo subpapilar (GLOOR et al., 2004). O movimento das partculas
detectado pela reflexo de luz dos eritrcitos. O contedo analisado composto
majoritariamente pelo plexo vascular superficial (arterolas, capilares e vnulas), porm
no abrange os plexos mais profundos da derme.
H dois tipos de instrumentos utilizados: a sonda e a varredura de imagens. Os
modelos encontrados de sonda so constitudos por um laser de baixa potncia com uma
sonda de fibra tica, so o BLF 21 (Transonic Systems, EUA), DRT4, Moorlab (Moor
Instruments, Inglaterra), Laserflo BPM (Vasamedics, EUA), Oxyflow, Oxylab (Oxford
Optronix, Inglaterra), PF4000 e PF5000 (Perimed, Sucia). A deteco feita em uma
nica regio da pele, cuja dimenso determinada pelas propriedades pticas do tecido
e pela geometria da sonda (NILSSON et al., 1980). Um feixe de laser com comprimento
de onda entre 632 e 785 nm aplicado sobre a pele formando um foco de luz de cerca
de 1 mm
2
. A luz incidente alcana profundidade de 1 a 1,5 mm, sofre espalhamento e
uma poro refletida coletada pelas fibras ticas. A profundidade depende do
comprimento de onda, da pigmentao da pele e do tipo de sonda (CHOI, BENNETT,
2003).
No modelo de varredura, cujos principais representantes so o Lisca PIMII
(Lisca Development, Linkoping, Sucia) e Moor LDI-2 (Moor Instruments, Axminster,
Inglaterra), a funo das fibras pticas substituda por um sistema de espelhos e lentes.
O feixe do laser direcionado pele pelo sistema de espelhos e move-se discretamente
enquanto o espalhamento de luz captado pelo detector. O sinal formado proporcional
ao produto da velocidade e da concentrao do eritrcito. As medidas so armazenadas
na memria do computador conforme o feixe segue adiante. O resultado destas medidas
expresso em unidades arbitrrias e revelado na tela como uma imagem de perfuso
colorida.
Os valores de perfuso relativa representam o fluxo sanguneo de capilares e
vasos de pequeno calibre. Devido s variaes vasculares locais, o nmero de medidas
determinado pela preciso desejada (LINE et al., 1992). Alm disto, a
microvascularizao cutnea pode ser afetada por fatores fisiolgicos como sexo, idade,
raa, stio anatmico da pele, variaes circadianas, ciclo menstrual, postura, atividade
fsica, atividade mental e temperatura. As variaes intra-individuais perfazem, ainda,
um coeficiente de cerca de 50% em respostas irritativas (AGNER, SERUP, 1990 apud
EUN, 1995).
26

ARAMAKI et al. (2001) compararam os ndices de fluxometria por Doppler a
laser com a perda transepidrmica de gua e evidenciaram o aumento dos primeiros
apenas com concentraes mais elevadas de SLS. Eles atriburam este fenmeno
sequncia de eventos na pele irritada: danos barreira epidrmica, pela alterao dos
lipdeos e protenas do estrato crneo, so anteriores resposta inflamatria. Porm,
quando a barreira danificada de forma severa por concentraes mais elevadas de SLS,
a resposta inflamatria intensa, e s ento possvel constatar as mudanas pela
fluxometria. Em seu estudo, concluram que a fluxometria por Doppler a laser um
mtodo vlido para concentraes de SLS iguais ou superiores a 0,5% e tempo de
aplicao maior ou igual a seis horas.

3.2.4 Mtodo colorimtrico

O olho humano e o crebro possuem um limite para a deteco de cores com
comprimentos de onda entre 400 e 800 nm, com sensibilidade mxima entre 500 e
600 nm. Em estados inflamatrios a avaliao visual pode ser comprometida pela
descamao e pela pigmentao (FULLERTON et al., 1996). Por outro lado, existem
instrumentos e princpios colorimtricos que permitem expressar um amplo espectro de
cores e uma medida com maior exatido.
H dois princpios de medio da cor da pele: espectrofotometria e anlise por
estmulo triplo. A primeira utiliza instrumentos caros e pouco prticos para o uso
rotineiro (FULLERTON et al., 1996). A segunda conta com dois tipos de instrumentos:
o espectrofotmetro de banda estreita (DermaSpectrometer, Crtex Technology,
Dinamarca) e o colormetro por estmulo triplo (Chroma Meter CR 200 e CR 300,
Japo).
Este ltimo mede a reflexo, e o mais usado na medio de resposta a
irritantes. Uma lmpada de xnon emite uma luz branca intensa que abrange todo o
espectro visvel. A luz refletida quantificada por trs foto clulas sensveis e seus
filtros correspondentes. A medida realizada a partir das trs cores primrias: azul
(450 nm), verde (550 nm) e vermelho (610 nm). O valor referente ao vermelho uma
medida de eritema. Com o aumento do eritema, h maior absoro do comprimento de
onda da cor verde e, consequentemente, menor reflexo da mesma.
O espectrofotmetro de banda estreita funciona como um fotmetro de reflexo
com um diodo de emisso de luzes verde e vermelha e um foto diodo azul que detecta a
27

luz que retorna da pele. O instrumento expressa o eritema como um ndice entre
hemoglobina e melanina. Ele capta a intensidade das luzes vermelha (I
vcrm
) e verde
(I
vcrdc
) refletidas, as quais definem o ndice de eritema (E), onde

E = 1uu log[
I
vem
I
vede
(1)

O ndice de melanina (H), calculado a partir da luz refletida, usado para avaliar
a densidade ptica da pele:

H = 1uu log[
1
I
vede
(2)

A medida influenciada por variveis instrumentais, ambientais e individuais. A
ptica da pele depende dos cromforos, melanina e hemoglobina, da interface com o
estrato crneo (ngulo de iluminao, por exemplo), do espalhamento por estruturas
mais profundas na derme, do comprimento de onda incidente e de condies
fisiolgicas (FULLERTON et al., 1996). As variveis individuais so: idade, sexo, raa,
stio anatmico, doenas cutneas, variaes inter e intra-individuais, variaes diurnas,
atividades fsica e mental, alimentao, uso de lcool ou drogas, ciclo menstrual,
menopausa e posio ortosttica (FULLERTON et al., 1996). As correntes de
conveco do ar, a temperatura local, a luz ambiente e a umidade devem ser
controladas. Segundo GLOOR et al. (2004), as medidas devem ser realizadas nas
condies padro, com tempo de 30 minutos para adaptao.

3.2.5 Outras tcnicas

Existem ainda outras tcnicas capazes de avaliar as propriedades fsicas e
qumicas da pele. O ultrassom de alta frequncia (de 20 a 150 MHz) pode ser utilizado
na avaliao estrutural da pele, como medida do espessamento da pele e do edema. O
grau de atenuao da ecogenicidade da epiderme varia de acordo com a concentrao de
SLS e a resposta mostra-se dose-dependente. As vantagens da tcnica de ultrassom so o
estudo da prpria estrutura do rgo e a menor interferncia de condies ambientais,
fsicas ou psquicas (SERUP, 2001). Em contrapartida, necessrio um treinamento
tcnico especializado, o que pode introduzir um erro potencial.
28

Apesar de ter sido descrita uma boa correlao entre os dados ecogrficos e a
perda transepidrmica de gua, SEIDENARI e PELLACANI (2005) concluram que as
alteraes morfolgicas detectadas pelo ultra-som parecem estar mais relacionadas com
o fluxo de gua transepidermal do que o prprio contedo de gua no estrato crneo. J
quando o dano barreira cutnea pouco pronunciado, o uso do ultra-som parece ser
mais adequado que tcnicas como perda transepidrmica de gua e fluxometria por
Doppler a laser (SERUP, 2001). Isto se deve ao fato de que na dermatite de contato o
comprometimento da barreira cutnea o primeiro mecanismo de agresso. Em seguida
ocorrem a sensibilizao, a inflamao e os distrbios constitutivos, que incluem a
mudana na composio lipdica (PROKSCH et al., 2006).
Em condies fisiolgicas os lipdeos do estrato crneo caracterizam-se por
quantidades semelhantes de ceramidas, colesterol e cidos graxos livres. Irritantes
contendo detergentes ou solventes danificam a barreira cutnea, pois removem os
lipdeos do estrato crneo ou alteram sua composio. Uma vez que cornecitos so
circundados por lipdeos, os quais formam as regies de continuidade do estrato crneo,
os prximos eventos so marcados pela invaso dos espaos ocupados anteriormente
pelos lipdeos. Logo, suceder-se-o a penetrao do irritante nas camadas de clulas
vivas da epiderme, o dano das membranas dos queratincitos, a mudana molecular dos
lipdeos, e, finalmente, a inflamao.
A medida quantitativa do contedo superficial de lipdeos pode ser obtida pela
sebumetria. O instrumento utilizado o Sebumeter SM 810 (Courage & Khazaka,
Alemanha). Este equipamento constitudo por um fotmetro que mede o nvel de
transmisso de luz de uma folha de plstico com uma camada de sebo umedecido. A
sonda comprimida contra a pele por trinta segundos em presso constante de
9,4 N/cm
2
. O instrumento mede a variao de luz transmitida atravs da folha. A
variao proporcional absoro do contedo lipdico. O resultado, expresso em
microgramas por centmetro, reflete a quantidade total de lipdeos na superfcie da pele
(PROKSCH et al., 2006).
Assim como o contedo de lipdeos, o pH cutneo tambm pode ser utilizado
como medida do grau de acometimento da pele. O pH cido do estrato crneo segue um
gradiente ao longo da camada, o que parece ser importante no controle das reaes
enzimticas, na renovao celular, na defesa contra microorganismos e na formao da
barreira semipermevel da pele (PARRA et al., 2003, SCHMID-WENDTNER,
KORTING, 2006). Diversas condies afetam o pH cutneo: hidratao, suor, sebo,
29

stio anatmico, predisposio gentica, idade, contato com substncias qumicas,
medicaes tpicas e ocluso por roupas. As mudanas de pH da pele tm sido descritas
na patognese de diversas doenas, dentre elas a dermatite de contato por irritante
primrio.
A medida de pH superficial cutneo utilizada para avaliar as mudanas de pH
durante a exposio a produtos qumicos e o estado da pele nos processos patolgicos
agudos ou crnicos (COURAGE & KHAZAKA, 1998 apud EHLERS et al., 2001). O
procedimento utilizado na atualidade a medio potenciomtrica do pH. Os impulsos
eltricos so medidos por um eletrodo e a diferena de potencial medida por um
potencimetro (pH900, Courage & Khazaka e pH meter 1140, Mettler Toledo).
Segundo PARRA et al. (2003), os valores de pH registrados devem ser interpretados
com cautela, pois os ons hidrognio no esto em soluo pura em membranas semi-
hidrofbicas como o estrato crneo. O que se mede de fato na superfcie da pele um
pH aparente, devido ao material extrado da difuso do estrato crneo na gua aplicada
pele (PARRA et al., 2003).
Como a capacidade de tamponamento da pele elevada, a medida de pH deve
ser a mais precisa possvel. Alm disto, variaes quanto idade, sexo, tipo de pele,
stio anatmico e horrio da medio, condies ambientais e higiene local devem ser
observados antes do procedimento. Mesmo as pequenas variaes de pH podem
significar mudanas estruturais a nvel molecular (PARRA et al., 2003).

3.2.6 Tcnicas de bioengenharia cutnea: reviso de literatura

Para o melhor entendimento sobre os estudos realizados para deteco de
irritao cutnea, resultados com o uso das tcnicas supracitadas sero descritos neste
tpico, de modo a corroborar com a interpretao fisiolgica do fenmeno.
Gloor e colaboradores realizaram em 2004 um experimento de sensibilizao
cutnea com SLS a 1%. Os resultados mostram algumas peculiaridades de cada tcnica
utilizada, mas, sobretudo, o retorno aos valores iniciais por volta do nono dia.
Devido ao direta do irritante sobre a epiderme, a qual provoca perda de gua
por evaporao, existe uma desidratao inicial importante (PROKSCH et al., 2008). A
perda de gua transepidrmica a primeira a se alterar, o que tambm observado pela
corneometria, que mede a hidratao da pele. Dados obtidos por GLOOR et al. (2004)
com estas duas tcnicas, quando uma concentrao de 1% de SLS foi utilizada num
30

estudo longitudinal, so mostrados na Figura 9 e na Figura 10. Houve um aumento
expressivo da reteno e transporte hdricos em torno de 24 horas aps exposio,
seguido do retorno aos nveis iniciais.

Figura 9 Valores de corneometria aps irritao da pele com SLS 1%. Extrado de GLOOR et al.
(2004).

Figura 10 Valores de perda de gua transepidrmica aps irritao da pele com SLS 1%. Extrado de
GLOOR et al. (2004).

KUZMINA et al. (2003) tambm obtiveram dados de perda transepidrmica de
gua relacionados com o efeito do SLS. Uma aplicao nica do irritante a 2% no dia 1
foi acompanhada por mais 14 dias e notou-se uma elevao mxima da perda de gua
no terceiro dia (72 horas aps a remoo do agente) seguida de uma queda progressiva
(Figura 11). Os dados obtidos pelos grupos de GLOOR et al. (2004) e KUZMINA et al.
(2003) so compatveis com o aumento da hidratao pelo influxo de gua descrito
anteriormente.
31

Figura 11 Valores de perda de gua transepidrmica aps irritao da pele com SLS 1%. As curvas
tracejada e contnua representam populaes de estudo de duas regies diferentes da Sucia. Extrado de
KUZMINA et al. (2003).

O prximo evento aps a desidratao cutnea inicial a vasodilatao dos
vasos da derme e o extravasamento de lquido contendo protenas e clulas. Duas
tcnicas se propem a identificar o aumento do fluxo sanguneo vascular da derme: a
fluxometria por Doppler a laser (de maneira direta), e a colorimetria (de forma indireta).
GLOOR et al. (2004) tambm efetuaram medidas por estas tcnicas ao longo dos dias
subsequentes exposio nica ao SLS a 1% (Figura 12 e Figura 13). Os dados obtidos
apontam para um aumento do fluxo sanguneo, cujo pico atingido em at 24 horas
aps a remoo do irritante. Isto compatvel com as evidncias de acmulo de
contedo intravascular predominante na epiderme inferior (FARTASCH, 1998), j que
o aumento verificado pela LDF no dia 1 (24 horas aps a remoo do irritante, o que
corresponde ao dia 2 do presente estudo) no acompanhado por aumento proporcional
na perda de gua transepidrmica. Ou seja, a perda por evaporao menor do que o
extravasamento de lquido intravascular para a epiderme.

32

Figura 12 Anlise da irritao da pele aps aplicao de SLS 1% por fluxometria por Doppler a laser.
Extrado de GLOOR et al. (2004).

Figura 13 Valores de colorimetria aps irritao da pele com SLS 1%. Extrado de GLOOR et al.
(2004).

3.2.7 Bioimpedncia

A espectroscopia de impedncia eltrica aplica-se a medidas de fenmenos
eletroqumicos em diversos materiais e na pesquisa de condies clnicas em vrios
rgos. As medidas so realizadas dentro da faixa de freqncia de interesse, a qual
varia, em geral, de 100 Hz a 10 MHz (BROWN, 2003). Dois ou mais eletrodos so
utilizados para aplicar um sinal de corrente ou de tenso ao material. O sinal de resposta
processado por tcnicas especficas de acordo com o objetivo do estudo.
O termo bioimpedncia refere-se ao estudo da impedncia eltrica de materiais
biolgicos. a propriedade eltrica passiva do tecido de se opor a um fluxo de corrente
(GRIMNES, MARTINSEN, 2008). Suas medidas guardam relao com os processos
33

eletroqumicos fisiolgicos e variam quanto ao grupo celular e organizao destes para
formar o tecido.
A bioimpedncia estimada pela relao entre a diferena de potencial, medida
entre dois eletrodos, e a corrente eltrica que percorre o meio em estudo. A corrente
eltrica sempre segue o caminho de menor oposio e, portanto, a impedncia do tecido
biolgico depende de vrios fatores: estrutura anatmica, quantidade de gua, nmero
de camadas do estrato crneo, distncia entre os eletrodos, localizao do campo
eltrico (BOLFE et al., 2007). Segundo PLIQUETT e PLIQUETT (1996), os valores de
impedncia dependem at mesmo das condies de circulao sangunea e da densidade
dos ductos sudorparos. Estes, juntamente com os folculos pilosos, dominam os
caminhos da corrente eltrica em baixas frequncias.
Quando as clulas sofrem alteraes qumicas ou estruturais, ocorrem mudanas
significativas em suas propriedades eltricas (GRIMMES e MARTINSEN, 2000). Cada
tipo de reao tecidual produz um padro caracterstico de impedncia (NYRN et al.,
1999). Para determinados valores de frequncia possvel que os valores de impedncia
reflitam alteraes no espao extracelular como o edema e permitam estim-lo de forma
quantitativa (NICANDER et al., 1995). Portanto, as medidas de impedncia eltrica
podem ser usadas para estimar o grau de mudanas estruturais no tecido biolgico.
Devido a sua capacidade de revelar tais mudanas, mesmo quando no possvel
detect-las visualmente (NICANDER et al., 1997), as tcnicas de bioimpedncia
possuem grande potencial como ferramenta de suporte diagnstico (NICANDER,
OLLMAR, 1999).
Por tratar-se da metodologia a ser utilizada no presente trabalho, sua abordagem
ser realizada de forma detalhada a seguir.

3.3 Impedncia eltrica

3.3.1 Conceitos

Antes de iniciarmos a discusso sobre a bioimpedncia e sua abordagem no
mbito do diagnstico clnico, sero destacados alguns dos conceitos considerados
relevantes para o estudo das propriedades eltricas do tecido cutneo (GRIMNES,
MARTINSEN, 2008).
34

A impedncia eltrica (Z) refere-se propriedade de um material de opor-se
passagem de corrente eltrica. A impedncia segue uma relao algbrica entre a tenso
e a corrente, conforme a lei de Ohm:

i Z u =
,
(3)

onde u a tenso (volts, V), Z a impedncia (ohms, ) e i a corrente (ampres, A).
Note que as grandezas presentes na Equao (3) so grandezas genericamente
complexas, ou seja, possuem mdulo e fase.
Quando a corrente incide sobre sistemas constitudos unicamente por
componentes resistivos, a impedncia, determinada pela relao entre a tenso e a
corrente, que, por sua vez, ser igual resistncia:

R
i
u
Z = = (4)

A presena de elementos capacitivos, os quais armazenam carga eltrica quando
submetidos a uma diferena de potencial, no entanto, atribui novas caractersticas ao
circuito. Um elemento capacitivo tambm exerce um tipo de oposio passagem da
corrente. Esta oposio dita reatncia (
c
X ).
A relao matemtica entre a corrente e a tenso no caso dos capacitores
dt
du
C i = , e admitindo-se o uso da propriedade de Laplace em que
dt
d
s = , temos que
) ( ) ( s U C s s I = e ) (
1
) ( s I
sC
s U = . Portanto, a reatncia capacitiva (
c
X ) ser
representada no domnio de Laplace como
sC
1
. Ademais, para regime senoidal
permanente, assumindo-se a relao e j s = , onde 1 = j (unidade imaginria), temos
que
c j
X
c
e
1
= .
Em
c
X a dependncia quanto frequencia ( e ) implica que, nos circuitos com
capacitores, a impedncia se descreve de forma diferenciada para cada valor de
freqncia. Outra observao importante que para um circuito constitudo tanto por
componentes capacitivos como resistivos, afora os regimes permanentes senoidais, a
35

relao entre tenso e corrente no poder ser representada como um escalar, mas como
um nmero complexo. A resistncia ( R ) e a reatncia capacitiva (
c
X ) contribuiro para
as partes real (Re) e imaginria (Im) de Z distintamente em cada circuito:

Z = Re(Z) +Im(Z) = R -]X
c
(5)

Em coordenadas cartesianas, a corrente e a tenso sero representadas como
vetores distanciados um ngulo , girando a um ngulo de fase a uma velocidade
angular e . Ao ngulo formado entre estas partes d-se o nome de ngulo de fase e
representao vetorial atribui-se o termo fasores ou rotao vetorial (Figura 14).
Em um sistema puramente capacitivo, a corrente torna-se adiantada com relao
tenso em /2 radianos. Logo, reatncia capacitiva descreve a parcela da impedncia
capaz de defasar tenso e corrente em 90.

Figura 14 Representao da impedncia no espao dos nmeros complexos. Z: impedncia. Re (Z):
componente horizontal (parte real). Im (Z): componente vertical (parte imaginria). 0: ngulo de fase.

A conduo de eletricidade tambm se aplica aos materiais biolgicos
(WEBSTER, 2000). Eles possuem tanto propriedades capacitivas como resistivas e,
portanto, exibem um comportamento dependente da freqncia. Isto significa que, a
nvel molecular e celular, os componentes do tecido (membrana celular, lquidos intra e
extracelular e outros) contribuem para a impedncia de forma variada nas diferentes
freqncias.
Um tecido biolgico pode apresentar-se tanto como um condutor como um
dieltrico (isolante seco capaz de armazenar energia eltrica). O primeiro caso aplica-se
s solues eletrolticas, as quais permitem a conduo de corrente pela atividade
inica. Quando se trata de estruturas moleculares, no entanto, o fenmeno sucedido
36

passagem de corrente o da polarizao, um comportamento tpico do material
dieltrico. A polarizao pode ser descrita como um distrbio de distribuio de cargas
em uma regio devido presena de energia externa ou interna (GRIMNES,
MARTINSEN, 2008, FERREIRA, 2006). Como todo tomo exerce atrao sobre os
eltrons em uma ligao qumica, ocorre nas molculas a formao de cargas parciais
positivas e negativas que se mantm separadas por uma determinada distncia. O tomo
com maior eletronegatividade (capacidade de atrair eltrons) torna-se mais negativo,
enquanto os demais tomos da ligao tornam-se mais positivos. A esta formao de
cargas parciais chama-se dipolo permanente. Na medida em que se aplica um degrau de
tenso ou campo eltrico, tais cargas orientam-se pelo movimento rotacional da
molcula e o material polariza-se.
O tecido biolgico no se qualifica unicamente como seco ou mido, condutor
ou no condutor, mas possvel admitir que h nele ambas as propriedades e muitos
outros conceitos esto relacionados. Por ora, sabe-se que a pele, apesar de abranger
vrias propriedades eltricas, encontra o comportamento dieltrico como o principal
descritor do estrato crneo.
Aps ter sido aplicado um degrau de tenso ou um campo eltrico, o material
dieltrico dispe de um determinado tempo para que as molculas dipolares se orientem
e atinjam um novo equilbrio (DEBYE, 1929). Ao tempo necessrio para a estabilizao
das cargas d-se o nome de tempo de relaxao. Este conceito est ligado ao domnio do
tempo. No domnio da freqncia o fenmeno correlato chama-se disperso. Como os
materiais biolgicos possuem uma distribuio assimtrica dos tempos de relaxao e j
que o conceito de disperso pode ser empregado em vrios modelos, este ltimo
considerado de maior abrangncia e, por isto, mais utilizado (GRIMNES,
MARTINSEN, 2008).
SCHWAN (1957) descreveu trs disperses principais em tecidos vivos: , e
, que correspondem diviso em frequncias da relaxao e explicam o
comportamento eltrico dos biomateriais (Figura 15). A distino destes grupos ocorre
por efeitos eletrocinticos, composio das membranas celulares, organelas
intracelulares e outros (GRIMNES, MARTINSEN, 2000). A disperso est
relacionada em maior parte com processos de difuso de ons, densidade inica e
polarizao em torno das clulas; a disperso reflete as propriedades dieltricas das
membranas, suas interaes com os eletrlitos intra e extracelulares e as mudanas
estruturais; e a disperso tem relao com a relaxao de pequenas molculas como a
37

gua, sais e cadeias curtas de aminocidos (SCHWAN, 1957). As disperses e
aparecem entre 10 Hz e dezenas de MHz, enquanto estudos entre 100 Hz e 10 MHz
abrangem a disperso e detectam alteraes morfolgicas como o edema
(NICANDER, 1998). Como o degrau de tenso ideal possui todas as freqncias, uma
das formas de descrever o fenmeno de disperso pela anlise do sinal de resposta ao
degrau (GRIMNES, MARTINSEN, 2008).

Figura 15 Espectro de impedncia nos tecidos. Comportamento decrescente da constante dieltrica (s)
e crescente da condutividade (o) em funo da freqncia. Extrado de SCHWAN (1957).

Ao permitir a polarizao e o armazenamento de energia eltrica, o dieltrico
exprime um conceito chamado permissividade (em ingls, permittivity). O fenmeno de
disperso expressa a permissividade em funo da frequncia. A permissividade
dieltrica (*) depende da frequncia, , portanto, uma grandeza complexa:

et
c
c c c
j
j
+
= =
1
" ' *
0
(6)

O smbolo * c , tambm chamado de constante dieltrica, denota seu carter
complexo; ' c a parte real da permissividade complexa, chamada permissividade
relativa; " c corresponde parte imaginria, conhecido como fator de perdas;
0
c o
valor da permissividade na frequncia zero, j a unidade imaginria ( 1 = j ); a
freqncia angular (rads
-1
); o tempo mdio de relaxao e corresponde a uma
freqncia angular caracterstica (
c
= 1 / );
A expresso matemtica (6) advm de um modelo para o comportamento de
relaxao dieltrica, cuja tcnica foi desenvolvida por DEBYE (1929). Ele utilizou um
38

circuito RC paralelo para modelar a perda dieltrica de dipolos de rotao livre em um
meio viscoso (Figura 16). Com isto, incorporou o mecanismo de relaxao ao capacitor
ideal.

Figura 16 Circuito equivalente de Debye. Extrado de BARSOUKOV e MACDONALD (2005).

Uma representao comum para as partes real e imaginria da permissividade
dieltrica inclui os valores de permissividade de acordo com a frequncia esttica
(zero),
0
c , e frequncias muito elevadas
c :

et
c c
c c c c
j
j
+
+ = =

1
" ' *
0
, (7)

a qual pode ser reescrita como:

( )( )
( )
2
0
1
1
*
et
et c c
c c
+

+ =

j
(8)

Desta, so extradas as expresses individuais de ' c e " c :

( )
( )
2
0
1
'
et
c c
c c
+

+ =

(9)

( )
( )
2
0
1
"
et
et c c
c
+
=

(10)

Desenvolvendo estas expresses chega-se a uma equao correspondente do
crculo:

39

2
0 2
2
0
2
"
2
' |
.
|
\
|
= +
(
(
|
.
|
\
| +

c c
c
c c
c (11)

Observa-se que, luz da equao geral para um crculo de centro (o, b) (Equao
(12)), o valor de b na Equao (11) igual a zero e, portanto, o centro estar localizado
sobre o eixo das abscissas.

2 2 2
) ( ) ( r b y a x = + (12)

O grfico de ' c versus " c descreve um semicrculo cuja frequncia vai de
infinito a zero no sentido anti-horrio. Geralmente plotam-se os valores normalizados:
) /( "
0
c c c versus ) /( ) ' (
0
c c c c , de acordo com as equaes (9) e (10) (Figura 17).

Figura 17 Grfico dos valores normalizados de s
i
versus s
"
. A seta indica a direo de freqncia
crescente. Adaptado de MAGIN (2006).

A teoria da perda dieltrica de Debye capaz de descrever o comportamento da
freqncia de materiais como a gua e alcoois simples; no entanto, aplica-se a um
nmero limitado de dieltricos.
Em 1941, os irmos Cole apresentaram uma nova equao dieltrica para a
permissividade. Eles constataram que os dados experimentais de dieltricos levavam a
40

crculos com centros deprimidos e desenvolveram uma equao emprica com base
naquela elaborada por DEBYE (1929) para aumentar a correspondncia entre as
medidas dieltricas e a teoria. A equao dieltrica de Cole-Cole anloga de DEBYE
(1929); eleva-se, contudo, o termo ( ) et j potncia ( ) o 1 (Equao (13)).

( )
o
et
c c
c c

+

+ =
1
0
1
*
j
(13)

O expoente o, cujo valor varia de 0 a 1, um parmetro relacionado ao grau de
depresso do semicrculo. Quanto menor o valor de o, maior a depresso do semicrculo
no eixo das abscissas e maior o efeito de disperso dieltrica (Figura 18). COLE (1940)
interpretou o como uma medida de interaes moleculares. O valor de o igual a 1
significa ausncia de interao molecular (capacitor ideal). Em medidas experimentais
da pele, o valor de o encontra-se normalmente entre 0,5 e 1,0 (KONTTURI et al.,
1993).
No modelo de circuito de Cole-Cole (1941) o resistor no modelo de DEBYE
(1929) foi substitudo por um fractor, que um dispositivo capaz de exibir uma relao
de ordem no inteira entre a impedncia e a frequncia (KULKARNI, 2005), cujo
significado em eletroqumica se expressa por um elemento de fase constante (constant
phase element, CPE). O objetivo representar uma impedncia dependente da
frequncia (Figura 19). A impedncia do fractor definida como:

Z(]) =
k
(]o)
o
, (14)

onde k uma constante.
O valor de o varia conforme as propriedades que mais se configuram com os
elementos de um circuito. O fractor pode adquirir caractersticas moderadas de um
capacitor (o = +1), resistor (o = u) ou de um indutor (o = -1), conforme os valores
que assume entre -1 e 1. Distingue-se dos demais elementos pelo fato de seu ngulo de
fase permanece constante a despeito de mudanas na frequncia, variando apenas o
valor de o. De fato, a dependncia quanto freqncia pode ser aproximada por uma
resposta caracterizada por um ngulo de fase constante (GRIMNES, MARTINSEN,
2008). A proposta de utilizao deste elemento teve como objetivo a expresso de
41

achados experimentais (COLE, COLE, 1941). No h, no entanto, um significado
convencional para o CPE, ele incompatvel com os componentes de um circuito e no
possvel vislumbr-lo fisicamente. Ele participa da equao analtica do modelo
permitindo que o arco produzido tenha o centro deprimido, como ocorre nos materiais
dieltricos. Este grfico conhecido como diagrama de Wessel, diagrama de Cole ou
grfico de Nyquist, diferenciado para cada material biolgico (Figura 18).

Figura 18 Grfico dos valores normalizados de s
i
versus s
"
de Debye (curva tracejada, u = ) e de
Cole-Cole (curva contnua, u = , 5). A seta indica a direo de freqncia crescente. Adaptado de
MAGIN (2006).

(a) (b)
Figura 19 (a) Circuito de Debye com elementos ideais; (b) Circuito de Cole-Cole com o CPE
substituindo o resistor. Adaptado de BARSOUKOV e MACDONALD (2005).

Na pele, em particular, cujas camadas e componentes celulares se apresentam de
forma complexa e amplamente heterognea, a contribuio sobre a impedncia se d de
42

forma muito variada. Os dados experimentais da pesquisa eltrica do tecido cutneo
ajustam-se melhor aos modelos com CPE (GRIMNES, MARTINSEN, 2005).

3.3.2 Modelos

Para que sejam atribudos significados fsicos aos parmetros de impedncia,
necessria a descrio de modelos de circuitos equivalentes s medidas bioeltricas. Os
modelos consistem na representao do sistema biolgico por um circuito eltrico
composto por elementos resistivos e capacitivos dispostos em srie ou em paralelo. A
arquitetura guiada pelo objetivo do modelo, o qual pode buscar a descrio do
comportamento eltrico geral do tecido ou vincular-se s caractersticas das estruturas
que o compem.
De acordo com GRIMNES e MARTINSEN (2000), os modelos podem seguir
trs fundamentos. No primeiro, h distino completa entre as estruturas
microanatmicas. As membranas lipdicas so representadas por capacitores, os
eletrlitos por resistores, as membranas semipermeveis por fontes de tenso. No
segundo, apenas os elementos com maior contribuio s propriedades eltricas do
tecido so caracterizados. No terceiro, o circuito eltrico equivale a um conjunto nico e
corresponde ao comportamento eltrico do tecido, sem distino microanatmica.
A Figura 20 representa o modelo desenvolvido por TREGEAR (1966), o qual
descreve estruturalmente as diversas camadas da pele. Os capacitores representam as
membranas celulares colapsadas dos cornecitos e o lquido intracelular, cuja
resistncia desprezvel. Os resistores representam a condutncia intercelular, que
diminui assim como a hidratao do estrato crneo das regies mais profundas at as
mais superficiais (GRIMNES, MARTINSEN, 2000). A maior parte dos modelos j
desenvolvidos para a pele, no entanto, no se compromete com a descrio anatmica
detalhada, mas busca, sobretudo, a equivalncia com o comportamento eltrico do
tecido.

43

Figura 20 Modelo desenvolvido por TREGEAR (1966). Extrado de FERREIRA (2006).

Na criao do modelo, uma das maiores expectativas envolvidas a de que este
alcance a dinmica do sistema em estudo. Particularmente, quando o objetivo se
restringe a fenmenos localizados em uma determinada camada, a demanda de
correlaes explcitas entre todos os componentes do tecido e do circuito, alm de
utpica, torna-se desnecessria. Um modelo que se dirija a alteraes do estrato crneo,
por exemplo, pode ser ainda mais efetivo do que aquele que desmembra as estruturas e
interaes moleculares de camadas mais densas. No entanto, a despeito dos
componentes inseridos no circuito eltrico de escolha, importante que ele d suporte
explicao sobre os fenmenos biolgicos do tecido, de forma que variaes qumicas e
estruturais possam refletir uma mudana correlata nos parmetros dos componentes
eltricos. O desafio em questo reside em estimar mudanas numricas para os
elementos do circuito previamente s alteraes morfofisiolgicas. Isto garante a
interpretabilidade do modelo.

3.3.3 Bioimpedncia cutnea: reviso de literatura

Os achados sobre as propriedades eltricas dos tecidos biolgicos foram obtidos
por vrios estudos no mbito da eletroqumica. No incio do sculo XX, HBER (1910,
1912) utilizou correntes alternadas de alta freqncia para estimar a condutividade no
interior de hemcias e demonstrou a presena de caractersticas eltricas na membrana
celular. Mais tarde os estudos foram estendidos para vrias frequncias e foi possvel
caracterizar o comportamento dieltrico da superfcie da clula (FRICKE, 1924,
MCCLENDON, 1926a, 1926b). Na dcada de 1920 vrios pesquisadores identificaram
a correlao entre a freqncia e as variaes de resistncia e reatncia da membrana
(COLE, 1932). Alm disto, observaram que o ngulo de fase permanece relativamente
44

constante, mesmo em limites amplos de frequncia (COLE, 1932). Esta variao da
resistncia e da capacitncia conservando o ngulo de fase assemelha-se ao fenmeno
de polarizao nas interfaces entre o metal e o eletrlito (COLE, 1932).
O conceito de impedncia eltrica tem sido aplicado ao campo da medicina
desde a dcada de 1920. Vrias aplicaes clnicas j foram descritas:
eletrocardiografia, eletroencefalografia, desfibrilao e eletrochoque, tomografia
cardiopulmonar, eletroporao, anlise da composio corporal, hidratao do estrato
crneo, neoplasias cutneas e vrios tipos de achados patolgicos da pele, dentre outros
campos de estudo (GRIMNES, MARTINSEN, 2008).
O primeiro estudo de bioimpedncia em dermatologia foi realizado por NILSON
et al. (1992) para avaliar a resposta da mucosa oral exposio de lquidos dentrios e
outros materiais. Os resultados mostraram que a tcnica de impedncia eltrica foi mais
sensvel do que a anlise visual.
Os estudos com a pele humana iniciaram em 1992 com OLLMAR e
EMTESTAM. Eles analisaram a irritao cutnea aps o contato com SLS. Neste
experimento tambm foi possvel constatar a maior sensibilidade da tcnica de
bioimpedncia quando comparada leitura visual. Mais tarde foi possvel observar a
resposta a diferentes concentraes de SLS (NICANDER et al., 1995, NICANDER et
al., 1997) e as variaes quanto ao stio anatmico (EMTESTAM, OLLMAR, 1993,
NICANDER et al., 1997, BERG, 2002). As medidas de bioimpedncia tambm foram
comparadas aos achados histopatgicos (NICANDER et al., 1996) e a outras tcnicas de
bioengenharia no invasivas (OLLMAR et al., 1994). As reaes sazonais da pele
(NICANDER, OLLMAR, 2000) e a profundidade em que eram realizadas as medies
(NICANDER et al., 1995) mostraram influncia sobre a medida. No campo das reaes
ao SLS tambm foi descrita a capacidade da bedana em reduzir seus efeitos
(NICANDER et al., 2003). No estudo das dermatites de contato, a impedncia foi
utilizada na distino entre as reaes alrgicas (NYRN et al., 2003) e por irritantes
primrios e na pesquisa do efeito de emolientes nas reaes alrgicas (KUZMINA et al.,
2005). A pele normal foi comparada com a pele de pacientes atpicos sem manifestao
clnica e, mesmo na ausncia de leses ativas, a bioimpedncia mostrou-se capaz de
identificar alteraes no contedo lipdico da camada crnea (NICANDER, OLLMAR,
2004). Neoplasias cutneas tambm foram observadas pela tcnica de impedncia
eltrica para distino de carcinomas basocelulares (BEETNER et al., 2003), melanoma
maligno e nevo benigno (BERG et al., 2004). Foi descrito um eletrodo microinvasivo
45

que permite uma melhor separao entre estas duas ltimas patologias (BERG et al.,
2005). Tambm foi estudado o efeito de corticosterides tpicos em 31 freqncias de 1
kHz a 10 MHz e a resposta ao uso do anti-inflamatrio foi significativa e concentrao-
dependente (EMTESTAM et al., 2007). A maior parte dos estudos utilizou as mesmas
especificaes de freqncia deste ltimo e ndices especficos de impedncia eltrica
(OLLMAR, NICANDER, 1995, NICANDER et al., 1996, 1997). Os ndices HIX, PIX,
RIX e IHIX so obtidos pela relao entre impedncias em baixas (20 kHz) e altas
freqncias (500 kHz):

HIX =
abs(z
20 RHz
)
abs(z
S00 RHz
)
, (15)

onde abs(Z
]
) a magnitude da impedncia na freqncia f;

PIX = aig(Z
20 kHz
) - aig(Z
500 kHz
) (16)

onde aig(Z
]
) o ngulo de fase em graus na frequncia f;

RIX =
Rc(z
20 RHz
)
abs(z
S00 RHz
)
(17)

onde Re(Z
]
) a parte real da impedncia no plano complexo na frequncia f;

IHIX =
Im(z
20 RHz
)
abs(z
S00 RHz
)
(18)

onde Im(Z
]
) a parte imaginria na frequncia f.
Recentemente, BIRGERSSON et al. (2011) utilizaram um modelo matemtico
para a bioimpedncia da pele, buscando captar sua morfologia estratificada, ajudar na
operao dos eletrodos e auxiliar na escolha dos sinais mais relevantes. Para isto, o
grupo estudou a influncia de variaes de espessura do estrato crneo, viabilidade do
tecido e gordura subcutnea nas medidas de bioimpedncia. O modelo considerou
propriedades eletromagnticas (conservao de cargas) e foi possvel mostrar a
influncia da concentrao inica da soluo tpica e do tempo de exposio mesma.
Este estudo aponta para a tendncia de adequao da tcnica de bioimpedncia cutnea
46

fisiopatologia do tecido e para a expanso do seu significado para alm da simples
extrao de parmetros.
Diferentemente da abordagem da maior parte dos trabalhos da literatura, os
quais utilizam o sinal senoidal de freqncia variada para o estudo das disperses, sabe-
se que o conceito de relaxao est ligado ao degrau de tenso, o qual possui idealmente
todas as componentes de frequncias (GRIMNES, MARTINSEN, 2008). O Laboratrio
de Instrumentao Biomdica (LIB) do Programa de Engenharia Biomdica (PEB) da
COPPE/UFRJ tem desenvolvido estudos na rea de impedncia eltrica da pele
(MENDONA, SOUZA, 2003, FERREIRA, 2006, 2007) com base na aplicao do
degrau de tenso a fim de captar a resposta da corrente mtodo desenvolvido por
NEVES e SOUZA (2000).
O primeiro estudo dedicado aplicao desta tcnica na identificao de
alteraes da pele causadas por irritao foi realizado por MENDONA e SOUZA
(2003) com a aplicao de um modelo simples de bioimpedncia corporal para o ajuste
dos dados experimentais da resposta de corrente ao degrau de tenso (Figura 21).
Apesar de apresentar resultados promissores, verificou-se dificuldade no melhor ajuste
do modelo aos dados experimentais.

Figura 21 Modelo simplificado para medies de bioimpedncia corporal (NEVES, SOUZA, 2000).
Re: resistncia extracelular; R|: resistncia intracelular; Cm: capacitncia de membrana; Ce: capacitncia
do eletrodo; Fd: degrau de tenso; |(t): corrente esperada. Extrado de FERREIRA (2006).

Posteriormente (FERREIRA, SILVA, SOUZA, 2004), dados da resposta de
corrente ao degrau de tenso aplicado pele submetida ao SLS a 5% foram analisados
com um modelo usando o CPE (Figura 22), mais compatvel com as caractersticas de
disperso da pele (GRIMNES, MARTINSEN, 2005, SOSA et al., 2005). Neste modelo
o CPE encontra-se em srie com uma resistncia R, sendo o conjunto chamado
47

elemento srie de Cole ou elemento de fase constante de Fricke (CPE
F
) (FERREIRA,
2006) e cuja impedncia definida como:

( )
cpeF
R
Z R
j
o
e
= + . (19)

Figura 22 Modelo eltrico para a pele humana. O capacitor Ce modela a capacitncia do eletrodo. O
elemento puramente resistivo Re modela a conduo eltrica a baixas freqncias. A resistncia R em
srie com o CPE forma o elemento srie de Cole ou elemento de fase constante de Fricke (CPE
F
).
Extrado de FERREIRA (2006).

Devido ao expoente fracional o, a soluo exata do modelo eltrico da Figura 22
envolve equaes diferenciais fracionrias. Pelo desconhecimento da tcnica de clculo
fracional poca do trabalho (FERREIRA, SILVA, SOUZA, 2004), os autores
obtiveram uma soluo da resposta de corrente por meio da aproximao da expresso
de Z
cpeF
em baixas freqncias (s 0).
Apesar da obteno de resultados melhores que o modelo clssico (Figura 21),
no que concerne capacidade de prever alteraes fisiopatolgicas da pele, o modelo da
Figura 22 foi novamente modificado para o modelo proposto por GRIMNES e
MARTINSEN (2005) (Figura 23). Neste caso, a soluo da resposta de corrente foi
obtida (FERREIRA, SILVA, SOUZA, 2007) com uma aproximao da expresso de
Z
cpeF
no domnio de Laplace vlida para a regio da freqncia caracterstica, isto ,
para 1 = t s , onde t o inverso da freqncia caracterstica do sistema biolgico, cujo
valor encontra-se normalmente entre 35 a 80 kHz. Os resultados obtidos a partir deste
ltimo modelo so aqueles considerados adiante na discusso do presente trabalho.

48

Figura 23 Circuito equivalente da pele para calcular a resposta ao degrau e derivar os parmetros
eltricos de impedncia. Ce: capacitncia de eletrodo; R
1
: resistncia interna; R
2
: resistncia externa;
CPE: elemento de fase constante. Extrado de FERREIRA (2006).

Devido variabilidade interindividual, FERREIRA (2006) desenvolveu um
ndice com os parmetros de bioimpedncia (Equao (20)), o que conferiu resultados
estatisticamente significativos para o estudo do grau de irritao da pele ao longo de 5
dias aps a aplicao de SLS em diferentes concentraes (0,5%, 1%, 2%, 5%):

1
2
R
IX
R
o = , (20)

onde R
1
a resistncia interna da pele para o anel 2 (anel mais interno da sonda coaxial
utilizada para a coleta dos dados experimentais), R
2
a resistncia externa da pele para
o anel 1 (anel mais externo da sonda coaxial utilizada para a coleta dos dados
experimentais) e o o parmetro do CPE para o anel 1, associado ao fenmeno de
disperso do estrato crneo.
Todavia, o uso de um ndice com os parmetros de impedncia dificulta a
interpretao fisiolgica do modelo. Alm disto, possvel que o uso de uma soluo
aproximada tenha limitado a qualidade dos resultados. Tais fatos motivaram o presente
estudo na busca de uma soluo mais geral que pudesse aumentar o poder diagnstico
da tcnica.
Seguindo esta abordagem, e a fim de buscar resultados de bioimpedncia mais
fidedignos, este trabalho visou resoluo analtica do modelo com CPE, sem o uso de
aproximaes ou ndices. Tal resoluo depende de uma nova rea da matemtica
aplicada conhecida como clculo fracional (KILBAS et al., 2006), sendo o
conhecimento desta ferramenta o objetivo primordial deste estudo.

49

CAPTULO 4

O CLCULO FRACIONAL

4.1 Histrico

Enquanto pode ser relativamente simples entender o conceito de expoentes
inteiros como em x
2
= x x, a interpretao de operaes mais elaboradas, como x
2,3

ou c
]n
, no se atinge de forma to direta. Ainda assim, possvel desenvolver tais
raciocnios, e muito do conhecimento matemtico inicialmente complexo encontra seu
sedimento pouco a pouco, pela extenso dos significados usuais. Com o clculo
fracional o caminho no foi diferente. No clculo diferencial integral, havia o
questionamento sobre os valores assumidos por n na notao d
n
y / dx
n
de Leibniz para
derivadas de n-sima ordem, onde n N = {0,1,2, ...}. Em 1695, LHopital perguntou a
Leibniz: E se n fosse ? Em resposta, Leibniz afirmou que isto levaria a um paradoxo e
a conseqncias teis algum dia. Logo, se a idia pressupe n como no-inteiro, temos o
primeiro registro do que seria chamado clculo fracional, nome dado teoria das
equaes diferenciais de ordem fracional. Posteriormente, a pergunta sobre o valor de n
foi estendida a todo nmero, sendo ele fracional, irracional ou complexo. Com isto, o
termo clculo fracional passa a no alcanar os novos domnios da teoria. Uma
definio mais apropriada seria clculo diferencial integral de ordem arbitrria.
Desde o incio do questionamento por LHopital, vrios matemticos
contriburam para o crescimento da teoria (Abel, Liouville, Riemann, Holmgren, Euler,
50

Lacroix, Lagrange, Laplace, Fourier, de Morgan, Grnwald, Letnikov, Lourant, Krug,
Hadamard, Heaviside, Hardy, Littlewood, Weyl, Lvy, Davis, Post, Zygmund, Love,
Erdlyi, Kober, Riesz, Feller, Widder, Osler, Sneddon, Mikolas, Al-Bassam). O
primeiro evento sobre o tema foi organizado por B. Ross em 1974, na Universidade de
New Haven, EUA. Neste mesmo ano OLDHAM e SPANIER (1974) publicaram o
primeiro livro sobre o assunto. Mais tarde, outros livros foram escritos e tornaram-se
referncia no estudo da teoria e aplicao das derivadas e integrais fracionais SAMKO
et al. (1993), MILLER e ROSS (1993), KIRYAKOVA (1994), PODLUBNY (1999),
MAGIN (2006).
Por quase 300 anos a teoria foi estudada unicamente por matemticos e seu
desenvolvimento restringia-se ao mbito terico. Contudo, o grande interesse no assunto
motivou outros ramos da cincia e, junto ao entendimento progressivo sobre a teoria,
houve uma melhor definio sobre sua utilidade, o que rendeu impacto sobre diferentes
reas. Atualmente aplica-se a dinmica de fluidos, teoria eletromagntica, redes
eltricas, reologia, controle, caos, fractais, e atinge campos da engenharia, economia,
biologia e outros.
Na engenharia h muitas situaes em que as transformadas e os mtodos
convencionais no captam a dinmica do sistema. neste ponto onde o clculo
diferencial integral de ordem arbitrria ou, simplesmente, clculo fracional
disponibiliza ferramentas potenciais para a sua soluo. Em sistemas biolgicos, por
exemplo, tais ferramentas permitem o desenvolvimento de modelos matemticos que
descrevem com acurcia os processos fisiolgicos e a resposta a estmulos eltricos,
mecnicos ou qumicos em todas as escalas de complexidade (MAGIN, 2006). Em
engenharia biomdica, um dos campos de atuao reside nos modelos de impedncia,
modelos viscoelsticos e modelos biomecnicos de ordem fracional. A tcnica se
adequa modelagem de disperses dieltricas Cole-Cole e permite o ajuste de curvas
tericas prximas aos valores experimentais. til, portanto, na anlise de sistemas
eltricos de bioimpedncia com modelos utilizando CPE e na soluo das equaes
diferenciais resultantes. Estende-se tambm a neurocincia, processamento de sinais,
biomecnica molecular, modelagem de sistema de controle neural e do sistema
respiratrio, entre outros.
Apesar do longo histrico e constante aprimoramento, o clculo fracional vem
ainda conquistando a maturidade e considerado um novo campo da matemtica. Seu
contedo transcende os domnios dos cursos de graduao e compe um ramo de
51

desafios. A soluo das equaes diferenciais integrais fracionais requer o
conhecimento das definies de derivadas e integrais de ordem arbitrria, o uso de
vrias funes auxiliares, de tabelas no usuais de funes temporais e suas
transformadas de Laplace (MAGIN, 2006) e a implementao de algortmos elaborados.
Estes conceitos sero abordados nos tpicos a seguir e constituiro a base para a
aplicao do clculo fracional neste trabalho.

4.2 Funo Gamma

A funo gamma constitui um dos conceitos mais bsicos do clculo diferencial
intergral de ordem arbitrria. Ela est inserida na definio de outra funo de grande
importncia, a Mittag-Leffler, descrita a seguir. Uma peculiaridade destas funes a
existncia de mais de uma representao matemtica. Isto possui grande utilidade na
comprovao de conceitos, porm preciso atentar para a escolha das mesmas ao longo
do raciocnio matemtico. A definio em integral da funo gamma pode ser escrita
como:

I(x) = c
-u
0
u
x-1
Ju, (21)
ou
I(x +1) = c
-u
0
u
x
Ju, para todo x e R (22)

De forma alternativa, tambm pode ser definida usando o conceito de limite:

I(x) = lim
n-
n!n
x
(x+1)(x+2).(x+n)
(23)

O entendimento da funo gamma obtido de forma bem mais simples pela
anlise de suas propriedades, as quais a revelam como uma generalizao da operao
fatorial. O caminho para este significado se inicia pela integrao por partes da Equao
(22):

I(x +1) = |(-c
-u
u
x
)]
u
- (-c
-u
0
)xu
x-1
Ju = u +x c
-u
0
u
x-1
Ju = xI(x)

52

Como primeira concluso podemos verificar que:

I(x +1) = xI(x) (24)

Sabendo que I(1) = 1, se I(x) = (x -1)!, ento I(x +1) = x!. De fato,
I(x +1) = xI(x) = x(x -1)! = x!. Logo, a funo gamma pode ser descrita como
uma operao fatorial cujo significado se estende a nmeros inteiros e no inteiros,
positivos ou negativos. Isto pode ser observado nos exemplos com
x =
3
2
e x = -
3
2
, sendo I [
1
2
= n:

3
2
! = I _
S
2
+1] =
S
2
I _
S
2
] =
S
2
I _
1
2
+ 1] =
S
2
1
2
I _
1
2
] =
3
4
a

-
3
2
! = I _-
S
2
+1] = I _-
1
2
]

Como I(x) =
I(x+1)
x
,
I _-
1
2
] =
I [-
1
2
+1
-
1
2
= -2 I _
1
2
] = -2a

O grfico para os valores positivos e negativos da funo est ilustrado na Figura
24, a qual mostra segmentos descontnuos, cada um deles com um nico ponto mnimo
ou mximo e com concavidades alternadas. O acesso a esta funo pode ser
rapidamente obtido pelo comando gamma(x) no Matlab
.

Figura 24 Grfico da funo gamma obtido pelo MATLAB
.
-5 -4 -3 -2 -1 0 1 2 3 4 5
-10
-8
-6
-4
-2
0
2
4
6
8
10
53

4.3 Funo de Mittag-Leffler

Quando a transformada de Laplace utilizada na soluo de equaes
diferenciais integrais de ordem arbitrria, os termos usualmente obtidos no esto
relacionados a quaisquer funes temporais encontradas nas tabelas comumente
utilizadas nos cursos de engenharia. Um caminho alternativo ao uso das tabelas
clssicas consiste na busca dos pares destas funes e suas transformadas em tabelas
especiais, as quais envolvem funes auxiliares (Tabela 4). Nestas tabelas a Mittag-
Leffler perfaz grande parte da coluna do domnio de Laplace e este o principal motivo
para seu estudo neste trabalho.

Tabela 4 - Pares de transformadas de Laplace envolvendo funes especias. Adaptado de MAGIN
(2006).*

*a uma constante real, u e possuem valores arbitrrios maiores que zero.

Analogamente funo gamma, a qual abrange a operao fatorial, a funo de
Mittag-Leffler assumida como uma generalizao da funo exponencial. Alm disto,
como foi mencionado no tpico anterior, a funo gamma est contida na definio da
Mittag-Leffler:

54

E
u
(x) =
x
k
I(uk+1)
(o > u),
k=0
(25)

E
u,[
(x) =
x
k
I(uk+[)
(o > u, [ > u)
k=0
(26)

Observa-se que a funo de Mittag-Leffler pode ser definida por um nico
parmetro (o), ou por dois parmetros (o e [). Quando [ adquire o valor de 1 (um), o
segundo parmetro pode ser omitido. Nos demais casos (o > u, [ > u e = 1), o e [
esto explcitos.
possvel verificar que, quando se trata de equaes diferenciais integrais, a
funo exponencial se apresenta para as ordens inteiras assim como a funo de Mittag-
Leffler para as ordens no-inteiras. Como exemplo, temos que a funo de Mittag-
Leffler t
u-1
E
u,u
(-ot
u
) a soluo da equao
d
o
(t)
dt
o
+o(t) = u (MAGIN, 2006),
enquanto c
-ut
a soluo para
d(t)
dt
+o(t) = u. De fato, para o = 1,
t
u-1
E
u,u
(-ot
u
) = c
-ut
.
Graficamente, o comportamento das curvas das funes de Mittag-Leffler
tambm pode ser analisado de forma comparativa s funes c
x
e c
-x
. A Figura 25
mostra valores especficos de o e [: E
1,1
(x) = c
x
, E
1 2 ,1
(x) = c
x
2
crc(-x),
E
1,2
(x) =
c
x
-1
x
, E
2,1
(x
2
) = cosh (x), E
2,2
(x
2
) =
sInh (x)
x
, onde crc corresponde
funo erro complementar, outra funo auxiliar tambm presente em tabelas especiais
de transformadas de Laplace, porm sem aplicao neste trabalho. Em seguida, o
grfico na Figura 26 revela o decaimento de E
1 2 ,1
(-x) = c
x
crc(x) semelhana
de c
-x
e c
-x
.
Vale ressaltar que E
u
(x) ou E
u,[
(x) so diferenciveis em qualquer regio do
plano complexo e a apresentao grfica pode admitir os formatos mais variados.
O resultado numrico desta funo no obtido de forma simples como ocorre
com a funo gamma. Para tal, so utilizados algoritmos computacionais baseados nas
definies da Mittag-Leffler (Equaes (25) e (26)), os quais prevem uma srie de
intercorrncias durante o clculo, incluindo o erro admitido pela limitao dos termos
do somatrio.

55

Figura 25 Comparao entre e
x
e algumas funes de Mittag-Leffler. Extrado de MAGIN (2006).

Figura 26 Comparao entre F
1 2
(- x
1 2
), e
-x
e e
-x
1 2
. Extrado de MAGIN (2006).

Quando necessrio, possvel calcular a derivada da funo de Mittag-Leffer
diretamente sobre os resultados de tais algoritmos, como ser descrito no prximo
tpico, ou, em alternativa, pelo uso de sua definio:

E
u,[
y
(x) =
d
y
dx
y
E
u,[
=
y
k
x
k
k!I(uk+[)
(o > u, [ > u, y > u)
k=0
, (27)
56

onde y
n
o smbolo de Pochhammer:
y
0
= 1
y
k
= y(y +1)(y +2) .(y +k -1)

Existem ainda propriedades da funo para argumentos e operaes particulares,
os quais sero mencionados conforme seu emprego neste trabalho.

4.4 Definies de derivadas e integrais fracionais

Nos tpicos anteriores, uma notao utilizada para a derivada de ordem arbitrria
foi
d
o
(t)
dt
o
. No entanto, existe outro operador ainda mais utilizado, o qual expande os
conceitos dos operadores de derivadas e integrais usuais a uma ordem no inteira:
t
u
u
.
.
Quando o > u,
t
u
u
.
corresponde ao operador J
u
Jt
u
. Quando o = u,
t
u
u
.
=
1. Por fim, quando o < u,
t
u
u
.
corresponde ao operador (J)
-u
t
u
. H algumas
definies para a derivao e a integrao de ordem arbitrria, dentre elas a de
Grnwald-Letnikov, Riemann-Liouville e Caputo, as quais so apresentadas a seguir.

4.4.1 Definio de Grnwald-Letnikov

t
u
u
.
(t) = lim
h-0
1
h
o
(-1)
]
[
u
]
j
t-c
h
[
]=0
(t -]b) (28)

4.4.2 Definio de Riemann-Liouville

t
u
u
.
(t) =
1
I(n-u)
[
d
dt
](:)
(t-:)
o-n+1
J
t
u
(29)
(n -1 o < n)

4.4.3 Definio de Caputo

t
u
u
.
(t) =
1
I(u-n)
]
(n)
(:)
(t-:)
o-n+1
J
t
u
(30)
(n -1 o < n)
57

4.4.4 Derivada da funo de Mittag-Leffler

t
y
u
.
(t
uk+[-1
E
u,[
(k)
(zt
u
)) = t
uk+[-y-1
E
u,[-y
(k)
(zt
u
) (31)

4.5 Transformada de Laplace e convoluo

Aqui vale a recordao de conceitos bsicos sobre a transformada de Laplace, os
quais sero utilizados adiante. O mtodo permite a transformao de equaes
diferenciais lineares com coeficientes constantes em equaes algbricas. Uma funo
(t) representada no domnio do tempo possui uma correspondente no domnio de
Laplace, descrita como F(s). A transformada de Laplace da funo (t) obtida por
integrao:

I{(t)] = c
-st
0
(t)Jt = F(s) (32)

Ao final, a transformada inversa de Laplace inversa fornece a soluo completa
no domnio do tempo:
I
-1
{F(s)] = c
st
c
1
+]
c
1
-]
F(s)Js = (t)

Quanto transformada de Laplace da convoluo de duas funes temporais,
temos:

(t) - g(t) = (t -)g()J
t
0
= ()g(t -)J
t
0
(33)

I{(t) - g(t)] = F(s)0(s) (34)

Portanto, a multiplicao de duas funes no domnio de Laplace corresponde
convoluo no tempo.
Alm dos pares de transformada descritos na Tabela 4, h alguns outros pares
conhecidos, como a transformada t
k
c
_ut
(Equao (35)) e da funo de Mittag-Leffler
(Equao (36)) (PODLUBNY, 1999):
58

I{t
k
c
_ut
] =
k!
(s+u)
k+1
(35)

I{t
uk+[-1
E
u,[
(k)
(zt
u
)] =
k!s
o-
(s
o
+u)
k+1
(36)

4.6 Funo de Green

Apesar da facilidade encontrada com o uso das tabelas com funes especiais de
transformadas de Laplace, h diversas situaes em que o modelo proposto exige
solues bem mais elaboradas. Equaes diferenciais fracionais com dois ou mais
termos so traduzidas no domnio de Laplace por equaes igualmente extensas, no
descritas em tabelas convencionais e cuja simplificao por fraes parciais tampouco
se aplica.
Uma das formas de manusear estas equaes por meio da funo de Green
0(t, ), descrita inicialmente por George Green em 1830. Esta funo permite resolver
equaes diferenciais do tipo:

I
t
0
y(t) = (t)
0
.
(37)

onde (t) pode ser vista como a entrada de um sistema, y(t) como sua sada e I
t
0
0
.
um
operador diferencial linear adjunto (PODLUBNY, 1999).
A soluo para a Equao (37) ser

y(t) = 0(t, )()J
t
0
(38)

quando

0(t, ) 0(t -). (39)

Deste modo, podemos observar que a chamada funo de Green assemelha-se
com o conceito de resposta impulsiva, tendo a Equao (38) vista como a integral de
convoluo entre a entrada (t) e a resposta impulsiva 0(t, ).
59

A funo de Green 0
1
0
para uma equao diferencial de ordem fracional de um
nico termo e com coeficientes constantes

o
t
u
y(t) = (t)
0
.
(40)

e cuja transformada inversa de Laplace dada por

0
1
(s) =
1
us
o
(41)

tem como soluo para condies iniciais homogneas.

g
1
(t) =
1
u
t
o-1
I(u)
(42)

Para os casos particulares de 0
2
(s), 0
3
(s) e 0
4
(s), descreve-se:

o
t
u
y(t) +
0
.
by(t) = (t)
0
2
(s) =
1
os
u
+ b

g
2
(t) =
1
u
t
u-1
E
u,u
[-
b
u
t
u
(43)

o
t
u
y(t) +
0
.
b
t
u
y(t) +
0
.
cy(t) = (t)
0
3
(s) =
1
os
[
+bs
u
+c

g
3
(t) =
1
u
(-1)
k
k!
m=0
[
c
u
k
t
[(k+1)-1
E
[-u,[+uk
(k)
[-
b
u
t
[-u
(44)

o
t
u
y(t) +
0
.
b
t
u
y(t) +
0
.
c
t
u
y(t) +
0
.
Jy(t) = (t)
0
4
(s) =
1
os
y
+bs
[
+ cs
u
+J

g
4
(t) =
1
u
1
m!
m=0
[
-d
u
m
(
m
k
)
m
k=0
[
c
d
k
t
y(m+1)-uk-1
E
y-[,y+[m-uk
(m)
[-
b
u
t
y-[

(45)
60

De forma generalizada, para uma equao diferencial de ordem fracional de n
termos e com coeficientes constantes

o
t
[
n
y(t) +
n
.
o
t
[
n-1
y(t) +
n-1
.
.o
1
t
[
1
y(t) +o
0
t
[
0
y(t) = (t), (46)

e cuja transformada de Laplace origina uma funo de transferncia que dada por:

0
n
(s) =
1
u
n
s
n
+u
n-1
s
n-1
++u
1
s
1+u
0
s
0
. (47)

Apresenta como soluo a funo de Green

g
n
(t) =
1
o
n
(-1)
m
m!
m=0
(m; k
0
, k
1
, ., k
n-2
)
k
0
+k
1
+ ... +k
n-2
=m
k
0
>0; ... ,k
n-2
>0

_
o
o
n
]
k
i
n-2
=0
t
([
n
-[
n-1
)m+[
n
+ ([
n-1
-[
]
)k
]
-1
n-2
]=0

E
[
n
-[
n-1
, [
n
+ ([
n-1
-[
]
)k
]
n-2
]=0
(m)
[-
u
n-1
u
n
t
[
n
-[
n-1
(48)

Seguindo a Equao (47), normalmente os casos de interesse possuem [
0
= u.
Portanto, para cada equao diferencial integral de ordem arbitrria existe uma
funo de Green que exprime sua resposta impulsiva. Logo,

y
mpuIso
(t) = g
n
(t). (49)

E enquanto a resposta impulsiva do sistema de ordem fracional a prpria
funo de Green para a mais elevada ordem do sistema, a resposta ao degrau obtida
pela integral desta mesma funo de Green:

y
dcgrau
(t) =
t
-1
g
0
.
n
(t). (50)

61

A funo de Green constitui o resultado de sucessivas operaes matemticas.
Estas esto sujeitas a aproximaes durante sua implementao computacional, o que
pode levar a erros significativos.

62

CAPTULO 5

MATERIAIS E MTODOS

5.1 Modelos eltricos e soluo analtica

O circuito eltrico para a pele proposto inicialmente no presente trabalho foi
composto pelas resistncias R
b
e R
p
e pela capacitncia C
c
, com o objetivo de modelar a
impedncia do eletrodo, e pelos componentes R
c
, R
e C
m
u
, que seguem o modelo
utilizado por NEVES e SOUZA (2000) (Figura 22), substituindo o capacitor ideal pelo
fractor (Figura 27).

Figura 4...

Para I
d
= I
d
0
u(t), a equao para a corrente obtida para este modelo foi:
Figura 27 Modelo inicialmente proposto para a pele.
Ce Re
Ri Cm
Rp
Rb
Vd
63

I(s) =
v
d
0
R
b
+R
j
s
1+o
+o
3
s+o
1
s
o
+o
1
o
3
s
1+o
+o
4
s+o
S
s
o
+o
6
2
[, (51)

onde R
=
R
c
R
i
R
c
+R
i
,
1
=
1
R
p
C
c
,
2
=
1
R
i
C
m
o
,
3
=
1
(R
c
+R
i
)C
m
o
,
4
=
R
b
o
3
+R
o
2
R
b
+R
5
=
R
b
o
1
+
1
C
c
+R
o
1
R
b
+R
,
6
2
=
R
b
o
1
o
3
+
n
3
C
c
+R
o
1
o
2
R
b
+R
.

Por corresponder a uma equao diferencial de ordem fracional de quatro
termos, frao
1
s
1+o
+o
4
s+o
S
s
o
+o
6
2
foi aplicada a tcnica com base na funo de Green.
A seguir, desenvolve-se o raciocnio matemtico para a equao de quatro termos
(PODLUBNY, 1999):

o
t
y
y(t) +
0
.
b
t
[
y(t) +
0
.
c
t
u
y(t) +
0
.
Jy(t) = (t), (52)

0
4
(s) =
1
os
y
+bs
[
+cs
u
+J
=

=
1
os
y
+bs
[
1
1 +
cs
u
+J
os
y
+ bs
[
=
=
o
-1
s
-[
s
y-[
+o
-1
b
1
1 +
o
-1
cs
u-[
+o
-1
Js
-[
s
y-[
+o
-1
b
=
=
o
-1
s
-[
s
y-[
+o
-1
b
1
1 -_-1
o
-1
cs
u-[
+o
-1
Js
-[
s
y-[
+o
-1
b
]

Sabendo-se que a soma dos termos de uma progresso geomtrica de razo q<1
pode ser escrita como o
0
q
m
=
u
0
1-q
m=0

0
4
(s) = (-1)
m
m=0
o
-1
s
-[
(s
y-[
+o
-1
b)
m+1
_
c
o
s
u-[
+
J
o
s
-[
]
m

Sabendo-se ainda que (x +y)
m
= (
m
k
) x
m-k
y
k m
k=0
,

64

0
4
(s) = (-1)
m
m=0
o
-1
s
-[
(s
y-[
+o
-1
b)
m+1
[
m
k
m
k=0
c
k
J
m-k
o
m
s
uk-[m

0
4
(s) =
1
o
(-1)
m
m=0
s
-[
(s
y-[
+o
-1
b)
m+1
[
m
k
m
k=0
[
c
J
k
_
J
o
]
m
s
uk-[m

0
4
(s) =
1
o
(-1)
m
m=0
_
J
o
]
m
[
m
k
m
k=0
[
c
J
k
s
uk-[m-[
(s
y-[
+o
-1
b)
m+1

0
4
(s) =
1
o
1
m!
m=0
_
-J
o
]
m
[
m
k
m
k=0
[
c
J
k
m! s
uk-[m-[
(s
y-[
+o
-1
b)
m+1

Como I]t
Am+B-1
E
A,B
(m)
(_C t
A
) =
m!s
A-B
(s
A
+C)
m+1
(PODLUBNY, 2009), ento:

g
4
(t) =
1
o
1
m!
m=0
_
-J
o
]
m
[
m
k
m
k=0
[
c
J
k
t
y(m+1)-uk-1
E
y-[,y+[m-uk
(m)
_-
b
o
t
y-[
]

Com as relaes y = 1 + o, [ = 1, o = o, o = 1, b =
4
, c =
5
c J =
6
2
:

g
4
(t) =
1
m!
m=0
(-
6
2
)
m
[
m
k
m
k=0
_
6
2
_
k
t
(1+u)(m+1)-uk-1
E
u,1+u+m-uk
(m)
_-
b
o
t
u
]

Observa-se, em geral, que a escolha dos termos x e y na relao (x +y)
m
=
(
m
k
) x
m-k
y
k m
k=0
no altera o resultado, de modo que (
m
k
) x
m-k
y
k m
k=0
=
(
m
k
) y
m-k
x
k m
k=0
. Contudo, no raciocnio descrito anteriormente, a ordem destes
termos interfere na funo de Mittag-Leffler produzida na etapa subseqente e permite
uma segunda resposta para g
4
(t):

g
4
(t) =
1
o
1
m!
m=0
_
-J
o
]
m
[
m
k
m
k=0
[
c
J
k
t
y(m+1)-uk-1
E
y-[,y-um+[m+uk
(m)
_-
b
o
t
y-[
]

g
4
(t) =
1
m!
m=0
(-
6
2
)
m
[
m
k
m
k=0
_
6
2
_
k

t
(1+u)(m+1)-uk-1
E
u,1+m+u(1-m+k)
(m)
[-
b
u
t
u
(53)
65

Durante a implementao do algoritmo computacional, para ambos os resultados
foi constatada a produo de sries distintas e divergentes. Como alternativa, a fim de
reduzir a complexidade dos clculos e manter o princpio da interpretabilidade do
modelo, foram realizadas duas simplificaes (Figura 28).
Para valores de R
b
muito menores que a reatncia capacitiva de C
c
(X
C
c
) e
valores muitos elevados de R
p
em relao X
C
c
, o que corresponde a um capacitor C
c

com perdas mnimas, o modelo resultante equivale ao descrito por FERREIRA (2006):

Neste modelo eltrico R
representa a resistncia no meio intracelular e R

c
no
meio extracelular, Cc representa a capacitncia do eletrodo e o CPE modela o processo
de relaxao dieltrica do estrato crneo (POON, CHOY, 1981).
Para V
d
correspondente a um degrau de tenso (I
d
= I
d
0
u(t)), o mais simples
formato de equao para este circuito no domnio de Laplace foi:

v
d
0
s
= j
1
C
c
s
+
R
s
o
s
o
+o
3
+
R
o
2
s
o
+o
3
[ I(s), (54)

onde R
=
R
c
R
i
R
c
+R
i
,
2
=
1
R
i
+C
m
o
,
3
=
1
(R
c
+R
i
)C
m
o
.

A Equao (54) pode ser representada na sua forma geral como:

I
d
(s) = Z(s) I(s) (55)

Aplicando o conceito de transformada inversa de Laplace:

I
d
(t) = I
-1
|Z(s)] - i(t) (56)
Re
Ri Cm

Ce
Vd
Figura 28 Modelo para a pele simplificado. Adaptado de FERREIRA (2006).
66

onde * representa a operao de convoluo.

Logo, poderamos definir o conceito de uma impedncia variante no tempo z(t)
como:
z(t) = I
d
(t)|-]
-1
i(t) (57)

onde |-]
-1
corresponde deconvoluo.

Com o uso de tabelas especiais para a transformada inversa de Laplace de
funes com expoentes no inteiros, para as quais
s
o
s
o
+u
= -ot
u-1
E
u,u
(-ot
u
),
1
s
o
+u
=
t
u-1
E
u,u
(-ot
u
) e E
u,[
(x) =
x
k
I(uk+[)

k=0
a funo de Mittag-Leffler quando o >
u c [ > u, a Equao (54) pode ser reescrita no domnio do tempo como:

I
d
0
u(t) = _
1
C
c
u(t) -|R

2
t
u-1
E
u,u
(-
2
t
u
)] +R

1
t
u-1
E
u,u
(-
2
t
u
)_
- i(t)
(58)

Redefinindo a impedncia do CPE representado na Figura 28 como:

Z
CPL
=
R
0
s
o
:
o
(59)

onde R
0
o valor impedncia do CPE em =
1
2noc
, para c = freqncia
caracterstica, e o assume valores no inteiros entre 0 e 1; a Equao (58) passa a ser
reescrita como:

I
d
0
u(t) = ]
1
C
c
u(t) - jR
[
R
0
(R
c
+R
i
):
o
t
u-1
E
u,u
[-
R
0
(R
c
+R
i
):
o
t
u
[ +R
R
0
R
i
:
o
t
u-1
E
u,u
[-
R
0
(R
c
+R
i
):
o
t
u
- i(t) (60)

Por analogia da Equao (57), o comportamento descrito na Equao 60 nos leva
a uma impedncia no domnio do tempo:
67

z(t) =
1
C
c
u(t) - jR
[
R
0
(R
c
+R
i
):
o
t
u-1
E
u,u
[-
R
0
(R
c
+R
i
):
o
t
u
[ +R
R
0
R
i
:
o
t
u-1
E
u,u
[-
R
0
(R
c
+R
i
):
o
t
u
(61)

Ento, a deconvoluo da corrente experimental do degrau de tenso aplicado
leva a obteno de uma forma temporal de impedncia, cuja representao expressa na
Equao (62).

I
d
0
(t)|-]
-1
i(t) =
1
C
c
u(t) -jR
[
R
0
(R
c
+R
i
):
o
t
u-1
E
u,u
[-
R
0
(R
c
+R
i
):
o
t
u
[ +R
R
0
R
i
:
o
t
u-1
E
u,u
[-
R
0
(R
c
+R
i
):
o
t
u
(62)

Como ser descrito a seguir, isto permitiu que os sinais de corrente da base de
dados pudessem ser utilizados para a obteno de um sinal experimental de impedncia
no domnio do tempo que pudesse ser comparado a sua previso terica descrita na
Equao (61). A Figura 29 ilustra o conceito mencionado.

Figura 29 Programa de ajuste das curvas tericas de acordo com os dados experimentais de corrente e
tenso. direita os parmetros do modelo terico.

68

5.2 Banco de dados e tcnicas de medio

O banco de dados deste trabalho foi formado por sinais de corrente obtidos por
FERREIRA (2006) aps a aplicao de um degrau de tenso pele de 15 coelhos do
Laboratrio de Anlises Toxicolgicas da Faculdade de Farmcia da Universidade
Federal do Rio de Janeiro. Devido maior sensibilidade cutnea em relao aos
humanos, foram utilizados coelhos albinos neozelandeses. A populao de coelhos
compusera animais hgidos, machos e fmeas, com peso corpreo de 2,0 a 3,0 kg,
mantidos em um ambiente com temperatura constante (22 3
o
C) e umidade relativa
entre 30 e 70% durante todo o perodo do teste, alimentados em regime regular de
laboratrio e submetidos a perodos de claro e escuro com intervalos de 12 horas.
Cada coelho fora submetido aplicao tpica de SLS (Pharma Special,
Wuppertal, Germany) com pureza de 93,33%, diludo em gua destilada nas
concentraes de 0,5%, 1,0%, 2,0% e 5,0%, alm do controle, composto por gua
destilada. A primeira medida de impedncia eltrica fora efetuada antes da aplicao de
SLS (dia zero). Em seguida, discos de papel embebidos em cinqenta microlitros de SLS
foram aplicados em cmaras (Finn Chambers
) de 12 mm (Epitest Ltd Oy, Hyryl). As

cmeras distinguiram-se pela concentrao do SLS, sendo uma delas o controle, e foram
dispostas sobre o dorso dos coelhos que fora tricotomizado 24 horas antes. A regio
mantivera-se ocluda por 24 horas com o auxlio de adesivos hipoalergnicos e gaze
(Figura 30).

Figura 30 Ocluso da pele tricotomizada e exposta a substncias irritantes. Extrado de FERREIRA
(2006).

Aps este perodo as cmaras foram removidas e fora realizada a segunda
medida (dia 1). As medidas subsequentes corresponderam aos perodos de 24 horas (dia
69

2), 48 horas (dia 3), 72 horas (dia 4) e 96 horas (dia 5) aps a remoo das cmaras.
Dados referentes ao dia 3 no constam no presente trabalho, pois no foram encontrados
durante a conferncia do banco de dados de FERREIRA (2006). Cada medida de
corrente em resposta ao degrau de tenso fora efetuada em duas profundidades da pele
por meio de uma sonda com dois anis distanciados do eletrodo central (Figura 31).
Como a penetrao da corrente no tecido cutneo corresponde a aproximadamente
metade da distncia entre os eletrodos, a primeira profundidade seria a metade da
distncia entre o anel central e o primeiro anel ( 0,75 mm), refletindo as propriedades
do estrato crneo (NICANDER et al., 1997, FERREIRA, 2006). J a segunda
profundidade seria a metade da distncia entre o anel central e o ltimo anel (
2,37 mm) e reflete as demais camadas.

Figura 31 Ilustrao da sonda utilizada por FERREIRA (2006). As regies em negrito correspondem
aos eletrodos em atividade.

Os valores de R
, R
c
e o para o anel 1 descrevem as alteraes de condutividade
nas pores mais superficiais (estrato crneo). J os valores destas parmetros para o
anel 2 esto relacionados s pores mais profundas (demais estratos do tecido
cutneo).

5.3 Algoritmo e anlise estatstica

Os sinais de corrente foram submetidos a um programa computacional de
adequao ao modelo. O programa foi desenvolvido em MATLAB
e dispe das
seguintes etapas:
(1) tratamento dos sinais de entrada, obtendo-se os sinais z(t) a partir da
deconvoluo entre os sinais de corrente e de magnitide do degrau de tenso contidos no
banco de dados;
70

(2) definio de limites para o ajuste dos parmetros do modelo, a fim de
estabelecer uma aproximao mnima coerente entre as curvas z(t) terica e
experimental;
(3) otimizao dos parmetros do modelo terico, a partir da funo fminsearch
do MATLAB, de modo a ajustar a curva terica de z(t) a sua equivalente experimental,
de acordo com o erro mdio quadrtico entre os pontos experimentais e a curva de
ajuste ou por um nmero mximo de iteraes (300).
Para cada sinal experimental de corrente do banco de dados, o programa
forneceu os valores dos parmetros do circuito proposto (Figura 28) que melhor
ajustassem a curva terica (Figura 29). Como acima mencionado, o programa
necessitou de uma delimitao para os valores de alguns parmetros, uma vez que a
funo de Mittag-Leffler apresenta uma grande sensibilidade em relao aos seus
argumentos. Isto faz com que exista mais de uma soluo para o ajuste, fazendo com
que seja necessrio estabelecer limites para que os parmetros resultantes apresentem
coerncia com os valores esperados. Tendo como base os achados de outros
pesquisadores (FERREIRA, 2006) e a distribuio dos dados deste trabalho, definiu-se
para R
c
a faixa entre 100 e 16000 O, para R
entre 500 e 2300 O e para o entre 0,2 e

0,85.
Inicialmente foi feito um teste de normalidade (Kolmogorov-Smirnov) com um
conjunto de valores dos parmetros do modelo fornecido pelo programa de ajuste.
Constatou-se que penas o parmetro o seguiu a distribuio normal.
Posteriormente a anlise dos resultados dos parmetros eltricos contra os
percentuais de irritante foi realizada por meio de anlise descritiva, utilizando-se
boxplots. Em seguida, os resultados de o foram analisados pelo teste ANOVA com
medidas repetidas de 1 fator (dia). O valor p foi corrigido pelo procedimento de Tukey e
foi adotado um nvel de significncia para p s 0,05. A anlise foi realizada com o uso do
programa MATLAB
, com o uso das funes boxplot, anova1 e multcompare.

Como os valores de R
e R
c
no seguiram a distribuio normal, foi realizado o
teste no paramtrico de Kruskal-Wallis. Os dados de FERREIRA (2006) tambm
foram analisados graficamente de acordo com as mdias e desvios padro obtidos.

71

CAPTULO 6

RESULTADOS

Antes de iniciar a apresentao dos resultados, sero descritos alguns conceitos
importantes sobre a expectativa terica dos mesmos.
esperado que os efeitos sobre a pele aps uma nica exposio ao SLS
regridam progressivamente ou sofram desacelerao ao longo dos dias, o que tem sido
observado em estudos com tcnicas de bioengenharia como TEWL, LDF, CM e
colorimetria (GLOOR et al., 2004). Tal comportamento pode ser representado pela
Figura 10, reproduzida novamente na Figura 32 a titulo de facilidade para o
entendimento.

Figura 32 Valores de perda de gua transepidrmica aps irritao da pele com SLS 1%. Extrado de
GLOOR et al. (2004).
72

Em decorrncia do acima exposto, seria esperado que as alteraes nos
parmetros do modelo eltrico deveriam apresentar comportamento similar ao longo dos
dias.
A resistncia R
modela o volume lquido intracelular. As mudanas no meio

intracelular so posteriores quelas no meio intercelular, pois o contedo da clula ir se
modificar de acordo com a osmolaridade do meio externo, a qual depende do
extravasamento de lquido intravascular para o interstcio. Alm disto, R
um
parmetro que somente ser captado em altas frequncias, quando a corrente vence a
barreira das membranas celulares e passa atravs das clulas. Devido peculiaridade
destes fenmenos eletroqumicos, no existe um padro especfico esperado para a
impedncia do meio intracelular. Haveria, possivelmente, uma alterao nos valores de
R
aps a irritao e um retorno progressivo destes valores aos nveis iniciais, ainda que
no se saiba em quanto tempo estas mudanas seriam atingidas.
A resistncia R
c
modela o volume lquido extracelular. um parmetro que vai
captado em baixas e altas frequncias, pois representa o caminho de menor oposio
passagem de corrente. Alm disto, as mudanas deste meio so decorrentes do
extravasamento de lquido intravascular para o interstcio. Por isto, quanto mais
prxima da derme for a regio analisada, mais expressiva seria a mudana, pois o
interstcio prximo ao leito vascular o primeiro a ser modificado. Isto significa que o
comportamento de R
c
no anel 2 pode ser mais evidente do que no anel 1. Esperamos
tambm que exista um retorno progressivo destes valores aos nveis iniciais e uma
maior concordncia com os resultados de outros estudos, j que uma medida do
acmulo de lquido intercelular. Considerando que o exudato do meio vascular rico
em protenas e clulas do sistema imune, isto pode conferir ao interstcio uma maior
oposio passagem de corrente ainda maior. Portanto, seria esperado que o
comportamento de R
c
fosse crescente aps a irritao e, em seguida, decrescesse aos
nveis iniciais.
O parmetro o um elemento do circuito contendo o CPE. Como ele
responsvel por modelar as disperses dieltricas do tecido, seria esperado que quanto
maior o acometimento da pele, ou seja, quanto maior a mudana morfolgica nas
camadas por conta do edema, maior seria a influncia sobre seu valor. E por existir uma
maior expresso das mudanas nos estratos inferiores, espera-se que o valor de o sofra
alteraes mais evidentes nas medidas com o anel 2. Na medida em que o edema atinge
73

as camadas superiores, novamente se alcana a homogeneidade do meio, e o pode
atingir novos valores, distintos daqueles observados inicialmente. Portanto, a progresso
e a regresso do edema so fundamentais na interpretao de o. Ainda assim, esperamos
que exista um retorno progressivo de seus valores aos nveis iniciais j que a alterao
inflamatria no foi sustentada com a exposio a doses repetidas de SLS.
No trabalho de FERREIRA (2006), por meio de inspeo visual, foi
demonstrado que a mesma concentrao e o mesmo tempo de exposio ao irritante
podem levar a resultados diferentes em cada indivduo. A intensidade da resposta
individual e um nico indivduo tambm pode apresentar reaes variadas quando
submetido mesma exposio em diferentes perodos, ainda que as condies
ambientais e individuais, como temperatura corporal e sudorese, mantenham-se estveis
em ambos os casos. Seria esperado, portanto, uma grande variabilidade dos parmetros.
A irritao da pele de coelhos com uma dose nica de SLS em diferentes
concentraes foi observada pela evoluo dos parmetros de bioimpedncia desde o
momento anterior aplicao das cmaras com o irritante at o 5 dia aps a sua
remoo. A seguir esto dispostos os resultados das estimativas para R
, R
c
e o
associados s medidas realizadas em duas profundidades (anel 1 e anel 2), apresentados
em boxplots.
O dia zero corresponde a medidas realizadas antes da aplicao das cmaras. O
dia 1 corresponde medida feita aps 24 horas de exposio ao SLS nas concentraes
de 0% (cmara de referncia), 0,5%, 1,0%, 2,0% e 5,0%. Os dias 2, 4 e 5 relacionam-se
s medidas efetuadas em 24 horas, 72 horas e 96 horas aps a remoo das cmaras.
Quanto aos resultados de R
e R
c
, no foi observada diferena estatisticamente
significativa para tais valores de resistncia entre os dias de observao em quaisquer
concentraes ou profundidades (anel 1 e anel 2) pelo teste de Kruskal-Wallis.
De acordo com a ANOVA, os valores de o entre o dia zero e os dias posteriores
aplicao do SLS tambm no revelaram diferena estatisticamente significativa
(p>0,05) em quaisquer concentraes para medidas em ambos os anis.

74

ANEL 1

Cmara de referncia SLS a 0,5%

SLS a 1,0% SLS a 2,0%

SLS a 5%

Figura 33 Boxplot da resistncia R
para as medidas realizadas com o anel 1 do controle (cmara de

referncia) e nas concentraes de SLS a 0,5%, 1,0%, 2,0% e 5,0% nos dia zero (antes da aplicao das
cmaras), dia 1 (24 horas aps a aplicao das cmaras), dia 2 (24 horas aps a remoo das cmaras) e
nos dias subseqentes.

75

ANEL 2


SLS a 1,0% SLS a 2,0%

SLS a 5,0%



76

ANEL 1


SLS a 1,0% SLS a 2,0%

SLS a 5,0%

e

77

ANEL 2


SLS a 1,0% SLS a 2,0%

SLS a 5,0%

e

78

ANEL 1


SLS a 1,0% SLS a 2,0%

SLS a 5,0%

Figura 37 Boxplot do parmetro u para as medidas realizadas com o anel 1 do controle (cmara de

79

ANEL 2


SLS a 1% SLS a 2,0%

SLS a 5%

Figura 38 Boxplot do parmetro u para as medidas realizadas com o anel 2 do controle (cmara de

80

CAPTULO 7

DISCUSSO

O estrato crneo constitudo basicamente por cornecitos (anucleados e
planos) dispostos lado a lado, formando uma lmina contnua, e circundados por
lipdeos intercelulares. Esta arquitetura, somada a sua caracterstica apolar e ao reduzido
contedo hdrico, lhe confere a maior contribuio sobre a impedncia cutnea.
Quaisquer mudanas na composio de lquidos e clulas repercutiro nas propriedades
de conduo eltrica do estrato crneo.
Nos estados inflamatrios ocorre uma srie de reaes locais (vasodilatao,
exudao, diapedese de clulas do sistema imune) que culmina no acmulo de lquido
intersticial nas camadas adjacentes ao vaso sanguneo. Quando a inflamao
provocada por um irritante tpico, os eventos so iniciados pela ao direta do agente.
Dependendo do tipo, o irritante causa dano epidermal, como a desnaturao de
queratinas e remoo dos lipdeos (WIGGER-ALBERTI et al., 2000).
Em seguida ao comprometimento da barreira, ocorre a sensibilizao e a
inflamao do tecido. As regies mais profundas da epiderme, as quais mantm maior
proximidade com a vascularizao da derme, sofrem danos expressivos. FARTASCH
(1997), YANG et al. (1995) descreveram um edema intercelular marcante nas camadas
nucleadas aps 24 horas de exposio ao SLS. Logo acima, no estrato crneo inferior, o
edema intercelular observado foi focal e produzido j com a concentrao de SLS a
0,5%. Para esta camada, FARTASCH (1998) tambm observou um distrbio do
81

rearranjo dos corpos lamelares em camadas lipdicas paralelas, diferente do estrato
crneo superior, o qual manteve o arranjo lamelar de lipdeos aps 24 horas de contato
com o SLS.
Os eventos que se seguem aps 48 horas de exposio so ainda mais
complexos, incluindo a proliferao de queratincitos, proliferao de clulas
epidermais e mudanas na diferenciao (WILLIS, 1989).
Apesar de existir uma expectativa quanto progresso da resposta inflamatria
cutnea, este fenmeno bastante especfico para cada indivduo. Sua intensidade, seu
incio e fim dependem das caractersticas do organismo e das condies de exposio ao
meio nocivo, sejam elas por vulnerabilidade do indivduo exposto, pela potncia da
agresso ou pela capacidade de resposta ao dano. Em geral, esperado que a reao ao
estmulo nocivo seja exacerbada inicialmente, mas que regrida de forma espontnea.
Isto foi observado pela anlise dos dados de perda de gua transepidrmica, fluxometria
e colorimetria, os quais apontam para um aumento da resposta ao irritante logo aps a
aplicao do mesmo e em seguida a recuperao das condies iniciais (GLOOR et al.,
2004).
Diferentemente destas tcnicas, a tcnica de bioimpedncia deste estudo tem
como caracterstica a identificao de fenmenos inflamatrios em profundidades
distintas da epiderme. Alm disto, o parmetro o do fractor descreve a heterogeneidade
do tecido e, portanto, trata-se de uma medida do polimorfismo celular e histolgico nas
fases agudas da inflamao cutnea.
No circuito eltrico proposto, R
c
est relacionado resistncia no meio
extracelular. A infiltrao por lquido inflamatrio e as mudanas no contedo
intercelular esto associadas diretamente ao comportamento de R
c
ao longo dos dias. Os
valores de R
c
para o anel 1 so mais representativos das alteraes de condutividade nas
pores mais superficiais (estrato crneo). J os valores de R
c
para o anel 2 esto
relacionados s pores mais profundas (demais estratos do tecido cutneo).
Quando h um distrbio da permeabilidade da barreira por ao de irritantes,
ocorre uma alterao no contedo lipdico que permite o influxo de gua para o estrato
crneo (PROKSCH et al., 2008). E j que o contedo lipdico do estrato crneo
desfavorvel difuso de gua e eletrlitos, o influxo de gua facilita o transporte
inico desde os estratos inferiores. Com o maior contedo de gua e ons, poderia
esperar-se uma menor oposio passagem de corrente pelo estrato crneo, ou seja,
uma reduo no valor de R
c
. No entanto, considerando que o aumento da hidratao das
82

camadas nucleadas decorre do extravazamento de lquido intravascular (exudato)
proveniente do suporte circulatrio da derme, possvel que o contedo celular e
proteico confira menor condutividade ao meio extracelular. Por isto, seria esperado um
aumento nos valores de R
c
, principalmente no anel 2 (aquele que melhor representa os
aspectos das camadas mais internas). Apesar de terem sido observadas curvas de
ascenso at o nvel mximo em torno de 24 horas aps a exposio e declnio
subsequente na concentrao de 2,0% em ambos os anis (Figura 35 e Figura 36), no
foi possvel confirmar este raciocnio pelo atual estudo, j que no houve diferena
estatisticamente significativa entre os valores de R
c
ao longo dos dias.
A hidratao do estrato crneo, o aumento da perda de gua transepidrmica e a
vasodilatao provocam uma diferenciao nas camadas, cuja morfologia ir se
subdividir naquela j apresentada e na nova disposio celular sob hidratao e
exudao. As alteraes morfolgicas detectadas por estudos histopatolgicos mostram
novos arranjos celulares no tecido cutneo exposto ao SLS. NICANDER et al. (1995,
1996) verificaram mudanas como infiltrao linfoctica, presena de vesculas
espongiticas e desconexes entre os queratincitos basais da pele exposta ao SLS a 2%.
Tais achados tendem a interferir no valor de o, pois representam uma mudana na
heterogeneidade do tecido. Em medidas de impedncia cutnea obtidas por GRIMNES
e MARTINSEN (2005), o valor de o decresceu junto ao tempo de penetrao de
soluo eletroltica sob os eletrodos aplicados pele do brao. Tal comportamento
poderia estar associado ao aumento da heterogeneidade das camadas e isto seria
traduzido em uma reduo de o. Em fases mais tardias da inflamao, no entanto, o
valor de o poder aumentar progressivamente na medida em que toda a extenso do
tecido adquira seu novo aspecto ou at que se retome a conformao original.
Como nas reaes agudas h um predomnio de edema e reao inflamatria
desde as camadas mais profundas, seria possvel que estas camadas revelassem
variaes de o em maior magnitude do que o estrato crneo. Com isto, as mudanas de
o ao longo dos dias de irritao cutnea para o anel 2 podem ser mais evidentes do que
aquelas descritas para o anel 1. Logo, seria esperada uma queda nos valores de o aps a
exposio ao irritante e um retorno ao nvel inicial mais evidentes com o aumento da
concentrao do irritante, principalmente nas medidas com o anel 2. Este raciocnio no
foi confirmado pelos achados do atual estudo. Apesar de ter havido uma elevao da o
no anel 2 at o nvel mximo em torno de 24 horas aps a exposio para as
concentraes de 0,5%, 1,0% e 2,0%, estes resultados no apresentaram significncia
83

estatstica (Figura 37 e Figura 38). Tampouco foi possvel verificar uma reao
inflamatria diretamente proporcional concentrao do agente.
Como foi mencionado no Captulo 6, no existiu um padro especfico esperado
para a impedncia do meio intracelular (R
). De fato, o comportamento de R
ao longo
dos dias e a ausncia de significncia estatstica no contriburam para a interpretao
dos resultados deste parmetro (Figura 33 e Figura 34).
Nenhum dos parmetros apresentou o padro esperado quando a pele foi
submetida concentrao mxima utilizada (5,0%). A tcnica de bioimpedncia poderia
perder seu potencial diagnstico com o aumento da sensibilizao, j que a resposta
inflamatria atinge grande complexidade e no haveria mais uma definio clara da
contribuio de cada fator para a impedncia total do tecido biolgico, uma vez que os
seguintes fatores teriam papel importante em tal caso: acmulo de lquido, mudana na
constituio protica e celular e alterao no arranjo das camadas da epiderme.
Quanto contribuio do clculo fracional tcnica de bioimpedncia, no foi
observado um benefcio estatisticamente significativo na deteco da mudana na
heterogeneidade do tecido, descrita por o, e da alterao de condutividade nos meios
extracelular e intracelular, descritos por R
c
e R
, respectivamente. Tanto no estudo de

FERREIRA (2006), o qual utilizou uma aproximao na equao que descrevia a
impedncia do circuito, como no presente estudo, no foram observadas diferenas
estatisticamente significativas para o comportamento destes parmetros ao longo dos
dias em quaisquer concentraes. De forma comparativa, as curvas dos grficos de
FERREIRA (2006) para os componentes modeladores das resistncias intracelular (R
1
)
e extracelular (R
2
) mostraram conformaes diferentes nas concentraes de SLS a
0,5% e 1,0% em relao aos grficos do presente estudo (Figura 39, Figura 40 e Figura
41).

84

SLS 0,5% SLS a 0,5%

SLS a 1,0% SLS a 1,0%

Figura 39 Boxplot comparativo entre os elementos modeladores da resistncia intracelular, R
1

(FERREIRA, 2006) ( esquerda) e R
|
( direita), para medidas com o anel 1, nas concentraes de SLS a
0,5% e 1,0%, ao longo de 5 dias aps a aplicao.

85

SLS a 0,5% SLS a 0,5%

SLS a 1,0% SLS a 1,0%

Figura 40 Boxplot comparativo entre os elementos modeladores da resistncia extracelular, R
2

(FERREIRA, 2006) ( esquerda) e R
e
( direita), para medidas com o anel 2, nas concentraes de SLS a
0,5% e 1,0%, ao longo de 5 dias aps a aplicao.

86

SLS a 0,5% SLS a 0,5%

SLS a 1% SLS a 1,0%

Figura 41 Boxplot comparativo entre os valores de o obtidos por FERREIRA (2006) ( esquerda) e
pelo presente trabalho ( direita) nas concentraes de SLS a 0,5% e 1,0%, ao longo de 5 dias aps a
aplicao.

87

CAPTULO 8

CONCLUSES

Neste trabalho foi aplicado o clculo fracional em um problema real de
modelagem do sistema biolgico. Dados de resposta de corrente ao degrau de tenso
associados pele de coelhos quando submetida ao irritante SLS propiciaram a avaliao
da reao inflamatria por meio da evoluo dos parmetros de bioimpedncia. Tendo
como expectativa terica o pico de inflamao em cerca de 24 horas aps uma dose
nica de SLS e a reduo gradual de seus nveis nos dias subsequentes, era esperado que
os parmetros do modelo eltrico seguissem um comportamento semelhante, com
elevao a um nvel mximo e reduo progressiva de seus valores. Apesar de isto ter
sido observado em algumas concentraes e para alguns componentes do circuito, no
possvel afirmar-se que o modelo fracional aumentou o poder diagnstico da tcnica de
bioimpencia cutnea.
A reao inflamatria envolve muitos fatores que podem influenciar a
bioimpedncia de forma variada e em diferentes momentos da evoluo. Para verificar a
contribuio desta ferramenta matemtica soluo analtica de equaes de
bioimpedncia, seria necessrio o uso de sistemas de menor complexidade.
Alm disto, importante verificar a adequao do modelo, pois a simplificao
do circuito eltrico para a pele pode no ter sido adequada interpretao das mudanas
bioeltricas devido complexidade do sistema. Testar modelos com situaes mais
simples pode oferecer mais informaes neste mbito.
88

So necessrios maiores estudos para o uso do clculo fracional na rea de
bioimpedncia, j que os resultados observados no forneceram uma melhor expectativa
para a interpretao fisiolgica do fenmeno inflamatrio cutneo.
Algumas propostas para os prximos estudos seriam:
(1) A reproduo in vitro da resposta inflamatria cutnea, permitindo um maior
controle das variveis ambientais e individuais;
(2) A normalizao dos dados, a fim de reduzir o problema da grande
variabilidade interindividual e intraindividual e aumentar a sensibilidade da
tcnica;
(3) O aperfeioamento do programa computacional de forma a obter um ajuste
dos parmetros mais preciso.

89

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100

ANEXO I

Algoritmo computacional

%------------------------------------
function lambda = calcula82c(Arquivo)

% Le arquivo de dados experimentais
dados = load(Arquivo);
clear t tg tgz zz zzg
global t tg tgz zz zzg;

i = dados(2:end);
vd = 0.5;
fs = 500000;
t = (0:63)'/fs;
v = ones(size(t))*vd;
tg = (0:20);

[zz,resto] = deconv([v;v],[i]);
zz = [zz(1); fs*zz(2:length(i))];
zzg=zz(2:length(tg));
tgz=tg(2:end);

%Dados de Coelho
ri0 = 1.6e3;
re0 = 5.5e3;
ro0 = 1.8e3;
tau_alf0 = 7.3e-5;
alf0 = 0.5;
ce0 = 5e-4;

lam = [ri0 re0 ro0 tau_alf0 alf0 ce0];
101

opcoes = optimset('Display','off','TolFun',1e-
4,'TolX',1e1,'MaxIter',300,'MaxFunEvals',7000);

% Chama rotina para otimizar os parametros da equao terica
lambda = fminsearch('fit_zz11',lam,opcoes);

%------------------------------------
function err = fit_zz11(lambda)

% Sobre a funo mlf3
% MLF (alpha,beta,Z,P) a funo de Mittag-Leffler E_{alpha,beta}(Z)
% avaliada com a acurcia de 10^(-P) para cada elemento de Z.
% (C) 2001-2005 Igor Podlubny, Martin Kacenak

global t tg tgz zz zzg erroo Plothandle
tgg = tg(2:end)*1e-6;
ri=lambda(1);
re=lambda(2);
r0=lambda(3);
tau=lambda(4);
alf=lambda(5);
tau_alf=tauâlf;
ce=lambda(6);

omega = r0/((re+ri)*tau_alf);
rinf = (ri*re)/(ri+re);
mittag = mlf3(alf,alf,((-omega)*tgg.âlf));
zzt = 1/ce-(rinf*omega*tgg.^(alf-1).*mittag')+((r0*rinf*tgg.^(alf-
1).*mittag')/(ri*tau_alf));

set(Plothandle,'ydata',zzt)
drawnow

erro = 0;
102

errom= max(zzg)*10000;

if ce<0 erro = erro + errom*abs(ce); end;
if (ri<500 | ri>2300) erro = erro + errom*abs(ri); end;
if (re<100 | re>16000) erro = erro + errom*abs(re); end;
if (alf<0.2 | alf>0.85) erro = erro + errom*abs(alf); end;

err = norm(((zzt - zzg')./zzg'),2) + erro;

%------------------------------------
% function [e]=mlf3(alf,bet,Z,P);
% MLF -- Mittag-Leffler function.
% MLF (alpha,beta,Z,P) is the Mittag-Leffler function E_{alpha,beta}(Z)
% evaluated with accuracy 10^(-P) for each element of Z.
% (C) 2001-2005 Igor Podlubny, Martin Kacenak

function [e]=mlf3(alf,bet,c,fi);

if nargin<4 , fi=6; end
%if nargin<3 | alf<=0 | fi<=0
% else
[r,s]=size(c); [r1,s1]=size(alf); [r2,s2]=size(bet);
mx=max([r,s]); mx1=max([r1,s1]); mx2=max([r2,s2]);
if (r>1 & s>1) | (r1>1 & s1>1) | (r2>1 & s2>1) | (mx1>1 & mx2>1)
sprintf('wrong number of input parameters')
else
if mx1>mx2 , mxx=mx1; e=zeros(mx,mx1);
103

else, mxx=mx2; e=zeros(mx,mx2);end;
for i1= 1:mx
for i2=1:mxx

if r>s , z=c(i1,1); else,z=c(1,i1); end
if mx1>mx2 , if r1>s1 , alfa=alf(i2,1); else, alfa=alf(1,i2);end, beta=bet;
else if r2>s2 ,beta=bet(i2,1); else, beta=bet(1,i2); end, alfa=alf; end
if beta<0 , rc=(-2*log(10^(-
fi)*pi/(6*(abs(beta)+2)*(2*abs(beta))^(abs(beta)))))âlfa;
else , rc=(-2*log(10^(-fi)*pi/6))âlfa; end
r0=max([1,2*abs(z),rc]);
if (alfa==1 & beta==1)
e(i1,i2)=exp(z);
else
if (alfa<1 & abs(z)<=1) | (1<=alfa<2 & abs(z)<=floor(20/(2.1-alfa)^(5.5-
2*alfa))) | (alfa>=2 & abs(z)<=50)
oldsum=0;
k=0;
while (alfa*k+beta)<=0
k=k+1;
end
newsum=z^k/gamma(alfa*k+beta);
while newsum~=oldsum
oldsum=newsum;
k=k+1;
term=z^k/gamma(alfa*k+beta);
newsum=newsum+term;
k=k+1;
104

term=z^k/gamma(alfa*k+beta);
newsum=newsum+term;
end
e(i1,i2)=newsum;
else
if (alfa<=1 & abs(z)<=fix(5*alfa+10))
if ((abs(angle(z))>pi*alfa) & (abs(abs(angle(z))-(pi*alfa))>10^(-fi)))
if beta<=1
e(i1,i2)=rombint('K',0,r0,fi,alfa,beta,z);
else
eps=1;
e(i1,i2)=rombint('K',eps,r0,fi,alfa,beta,z)+ ...
rombint('P',-pi*alfa,pi*alfa,fi,alfa,beta,z,eps);
end
elseif (abs(angle(z))<pi*alfa & abs(abs(angle(z))-(pi*alfa))>10^(-fi))
if beta<=1
e(i1,i2)=rombint('K',0,r0,fi,alfa,beta,z)+ ...
(z^((1-beta)/alfa))*(exp(z^(1/alfa))/alfa);
else
eps=abs(z)/2;
rombint('P',-pi*alfa,pi*alfa,fi,alfa,beta,z,eps)+ ...
(z^((1-beta)/alfa))*(exp(z^(1/alfa))/alfa);
end
else
eps=abs(z)+0.5;
105

rombint('P',-pi*alfa,pi*alfa,fi,alfa,beta,z,eps);
end
else
if alfa<=1
if (abs(angle(z))<(pi*alfa/2+min(pi,pi*alfa))/2)
% alfa
newsum=(z^((1-beta)/alfa))*exp(z^(1/alfa))/alfa;
for k=1:floor(fi/log10(abs(z)))
newsum=newsum-((z^(-k))/gamma(beta-alfa*k));
% k
end
e(i1,i2)=newsum;
else
newsum=0;
for k=1:floor(fi/log10(abs(z)))
newsum=newsum-((z^-k)/gamma(beta-alfa*k));
end
e(i1,i2)=newsum;
end
else
if alfa>=2
m=floor(alfa/2);
sum=0;
for h=0:m
zn=(z^(1/(m+1)))*exp((2*pi*i*h)/(m+1));
sum=sum+mlf3(alfa/(m+1),beta,zn,fi);
end
106

e(i1,i2)=(1/(m+1))*sum;
else
e(i1,i2)=(mlf3(alfa/2,beta,z^(1/2),fi)+mlf3(alfa/2,beta,-z^(1/2),fi))/2;
end
end
end
end
end
end
end
%end
end

function [res]=rombint(funfcn,a,b,order,varargin);
if nargin<4 ,order=6; end
if nargin<3
Warning ('Error in input format')
else
rom=zeros(2,order);
h=b-a;
rom(1,1)=h*(feval(funfcn,a,varargin{:})+feval(funfcn,b,varargin{:}))/2;

ipower=1;
for i= 2:order
sum=0;
for j=1:ipower
107

sum=sum+feval(funfcn,(a+h*(j-0.5)),varargin{:});
end
rom(2,1)=(rom(1,1)+h*sum)/2;
for k=1:i-1
rom(2,k+1)=((4^k)*rom(2,k)-rom(1,k))/((4^k)-1);
end

for j=0:i-1
rom(1,j+1)=rom(2,j+1);
end
ipower=ipower*2;
h=h/2;
end
res=rom(1,order);
end

function res=K(r,alfa,beta,z)
res=r.^((1-beta)/alfa).*exp(-r.^(1/alfa)).*(r*sin(pi*(1-beta))-...
z*sin(pi*(1-beta+alfa)))/(pi*alfa*(r.^2-2*r*z*cos(pi*alfa)+z.^2));

function res=P(r,alfa,beta,z,eps)
w=(eps^(1/alfa))*sin(r/alfa)+r*(1+(1-beta)/alfa);
res=((eps^(1+(1-beta)/alfa))/(2*pi*alfa))*((exp((eps^(1/alfa))*cos(r/alfa)).*...
(cos(w)+i*sin(w))))/(eps*exp(i*r)-z);

Fernanda Desouza Barbosa

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MODELO DE IMPEDNCIA DE ORDEM FRACIONAL PARA A RESPOSTA

. Extrado de FERREIRA (2006).

representa a resistncia no meio intracelular e R

) de 12 mm (Epitest Ltd Oy, Hyryl). As

entre 500 e 2300 O e para o entre 0,2 e

, com o uso das funes boxplot, anova1 e multcompare.

modela o volume lquido intracelular. As mudanas no meio

para as medidas realizadas com o anel 1 do controle (cmara de

para as medidas realizadas com o anel 2 do controle (cmara de

, respectivamente. Tanto no estudo de

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