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Departamento de Qumica e Bioqumica

Teste Terico-Prtico Modelo de Bioqumica I
Licenciatura em Bioqumica
Ano lectivo 2011/2012

Durao do teste: 1h30 + 30 min

Nome:
Nmero:



Grupo I (8 valores)

Responda a todas as questes de escolha mltipla no enunciado assinalando com um crculo a
resposta correcta. As respostas em branco ou equvocas sero classificadas de zero.

1.1. Os cidos poliprticos, tais como o cido fosfrico (H
3
PO
4
), podem actuar como um sistema tampo:

a) apenas em combinao com bases poliprticas
b) se a sua concentrao em soluo for mantida num valor baixo
c) para valores de pH prximos dos seus valores de pK
a

d) para valores de pH perto da neutralidade

1.2. As solues tampo:

a) tm sempre um valor de pH perto de 7,0
b) so raramente encontradas nos sistemas vivos
c) so capazes de manter o valor de pH da soluo aproximadamente constante
d) causam uma diminuio do valor de pH quando se adiciona um cido soluo

1.3. Um par cido fraco/ base conjugada actua como um sistema tampo:

a) apenas a temperaturas fisiolgicas
b) para valores de pH = pK
a
1
c) para valores de pH = pK
a
2
d) para valores de pH = pK
a
0,1

1.4. Quando pH = pK
a
1, a proporo relativa de [base conjugada, A
-
] : [cido fraco, HA] igual a:

a) 100 : 1
b) 10 : 1
c) 1 : 10
d) 1 : 100

1.5. O aminocido histidina, His, tem uma cadeia lateral ionizvel cujo pK
a
igual a 6,0. A fraco de cadeias
laterais de histidina que apresenta carga positiva a pH 5,4 igual a:

a) 20 %
b) 40 %
c) 60 %
d) 80 %

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1.6. A desnaturao de uma protena globular nunca causa

a) a perda da sua actividade
b) a perda do seu nvel de estrutura primrio
c) a perda dos seus nveis de estrutura quaternrio, tercirio, e por vezes, secundrio
d) a agregao da protena e, consequentemente, a sua precipitao

1.7. A ninidrina

a) um reagente usado para reduzir as ligaes persulfureto
b) um reagente que detecta aminocidos atravs da formao de um complexo de cor prpura
c) um detergente que causa a desnaturao de protenas
d) um reagente usado num dos mtodos de doseamento de protenas

1.8. Qual o efeito de uma soluo concentrada de ureia numa protena?

a) causa a hidrlise das ligaes peptdicas
b) causa a reduo das suas ligaes persulfureto
c) causa a desnaturao da protena
d) reage com os grupos N-terminal das protenas

1.9. No caso de um tetrapptido, para um valor de pH igual ao seu ponto isoelctrico, pI:

a) apenas os seus grupos amina e carboxilo terminais contribuem para a carga global do pptido
b) os seus grupos amina e carboxilo terminais no tm carga
c) a carga global do tetrapptido nula
d) o tetrapptido apresenta quatro cargas inicas

1.10. Quando o aminocido alanina (R= -CH
3
) adicionado a uma soluo tampo com um valor de pH igual a
7.3, a alanina apresenta-se em soluo maioritariamente sob a forma de (ver dados no final do exame):

a) um catio
b) apolar
c) um zwitterio
d) um anio

1.11. Se o pI de uma protena for igual a 7,0, indique qual das seguintes mutaes afectar o valor de pI da
protena mutada:

a) His Asp
b) Gly Leu
c) Glu Asp
d) Arg Lys

1.12. A pH= 6,1, o pptido Ser-Asp-Leu-Lys-Gln-His-Ala tem uma carga global igual a (ver dados no final do
exame):

a) + 0,5
b) 0
c) - 0,5
d) - 1,0





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1.13. Quais dos seguintes pares de aminocidos absorve radiao a 280 nm (no UV):

a) Thr & His
b) Trp & Tyr
c) Glu & Asp
d) Nenhum dos anteriores

1.14. A absorvncia a 340 nm de uma soluo de NADH medida numa cuvette com percurso ptico de 1 cm
igual a 0,465. Se o coeficiente de absoro molar deste composto for 6 200 L mol
-1
cm
-1
, a concentrao de
NADH em soluo :

a) 3,47 10
-4
M
b) 7,50 10
-5
M
c) 1,37 10
-3
M
d) 2,55 10
-5
M

1.15. Suponha que pretende realizar medidas espectrofotomtricas a 500 nm (regio visvel do espectro
electromagntico). Para isso, pode usar:

a) clulas de plstico
b) clulas de vidro
c) clulas de quartzo
d) todas as opes anteriores so vlidas

1.16. Aps ter preparado uma curva de calibrao para o mtodo do Biureto de doseamento de protena,
constatou que a Abs(540nm) da sua amostra desconhecida caa fora da curva. Nestas condies, o
procedimento correcto a seguir consiste em:

a) extrapolar a curva de calibrao
b) diluir a amostra j preparada de modo a que o valor de Abs(540nm) passe a ser abrangido pelos
valores usados no traado da curva de calibrao
c) diluir a amostra original a ser doseada de modo a que o valor de Abs(540nm) passe a ser abrangido
pelos valores usados no traado da curva de calibrao
d) qualquer uma das opes anteriores conduz obteno do mesmo resultado final

1.17. Um mtodo de doseamento de um composto que apresente uma reprodutibilidade elevada:

a) tem uma exactido elevada
b) tem uma sensibilidade elevada
c) tem uma preciso elevada
d) nenhuma das anteriores

1.18. Para determinar experimentalmente o valor de K
m
de um enzima em relao a um dado substrato, deve-
se:

a) realizar ensaios numa gama alargada de concentraes de enzima
b) realizar ensaios numa gama alargada de concentraes de substrato
c) utilizar trs concentraes diferentes de inibidor
d) nenhuma das anteriores

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1.19. Quando [S]= 0,1 K
m
, a velocidade inicial, v
0
, da reaco catalisada por um enzima que segue uma
cintica de Michaelis-Menten igual a:

a) 0,09 V
max

b) 0,20 V
max

c) 0,33 V
max

d) 0,90 V
max


1.20. A sacarose (Glc(12)Fru) d um resultado negativo nos testes de deteco de glcidos redutores
porque:

a) uma molcula muito ramificada
b) as suas extremidades redutoras no esto facilmente acessveis
c) ambos os carbonos anomricos da glucose e da frutose esto envolvidos no estabelecimento da
ligao glicosdica
d) nenhuma das anteriores


Grupo II (3 valores)


Suponha que pretende preparar 1 L de uma soluo tampo (pH 5,0) 0,2 M. Esta soluo tampo ir ser
empregue na realizao do estudo cintico de um enzima que catalisa uma reaco em que ocorre a
acidificao do meio reaccional. Tem sua disposio cido actico (pK
a
= 4,76) e imidazole (pK
a
= 6,0).

2.1. Qual dos dois tampes disponveis escolheria para preparar a soluo tampo para o fim em questo?
Justifique.

2.2. Explique como prepararia a soluo tampo escolhida, assumindo que dispe apenas da forma cida, HA,
do composto tampo no laboratrio.

2.3. Refira outros trs factores importantes que influenciam a escolha de uma soluo tampo a ser usada em
experincias bioqumicas.


Grupo III (2 valores)


De acordo com os valores apresentados no quadro seguinte:

Protena pI M
r
[protena] (mg/mL)
A 4,7 66 000 10,5
B 6,5 60 000 3
C 6,5 120 000 4

3.1. Preveja qual ser a separao final de uma mistura de protenas A, B e C aps uma electroforese realizada
em tiras de acetato de celulose a pH 8.6. Justifique.

3.2. Desenhe o electroforama correspondente separao realizada na alnea anterior supondo que a tira de
acetato de celulose foi revelado com o corante Ponceau S no final da electroforese.








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Grupo IV (2 valores)

4.1. Explique detalhadamente o mecanismo de desnaturao de uma protena globular solvel por adio de
um cido forte soluo.

4.2. Ser de esperar que, neste caso, a desnaturao da protena seja acompanhada pela sua precipitao?
Justifique.


Grupo V (5 valores)

Suponha que pretende dosear a concentrao proteica da clara do ovo atravs da aplicao do mtodo do
Biureto. Para isso:
- Filtrou uma clara de ovo atravs de uma camada dupla de gaze para um copo de 100 mL (Filtrado);
- Em seguida diluiu 5 mL de filtrado num balo de 50 mL com gua destilada (Amostra);
- A concentrao proteica da soluo anterior foi doseada pelo mtodo do Biureto (Tubos 9, 10, 11 e 12):
Quadro 1. Mtodo do Biureto.
Soluo Tubo N.
(mL)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
BSA
2,75 mg/mL
- - - -
Amostra - - - - - - - - 0,2 0,4 0,7 1,0
gua destilada 3,0
Reagente de
Biureto
3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0
[BSA]
(mg/mL)
0 0,137 0,275 0,412 0,550 0,779 1,053 1,374 ? ? ? ?
Abs
540 nm
0,025 0,062 0,099 0,135 0,169 0,229 0,294 0,368 0,182 0,325 0,429 0,442
- A curva de calibrao obtida est representada na figura seguinte:
Mtodo do Biureto
y = 0.2502x + 0.0294
R
2
= 0.9991
0.000
0.100
0.200
0.300
0.400
0.0 0.5 1.0 1.5
[BSA] (mg/mL)
A
b
s
(
5
4
0
n
m
)


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5.1. Atendendo aos resultados experimentais apresentados, explique como foi acertado o zero do
espectrofotmetro aos 540 nm. Justifique.

5.2. Complete o quadro anterior: volumes de BSA 2.75 mg/mL e de gua destilada adicionado a cada tubo.

5.3. Atendendo curva de calibrao apresentada na figura abaixo, calcule (apresente os clculos):

5.3.1. a concentrao proteica da Amostra.
5.3.2. a concentrao proteica do Filtrado.



Tabela - Propriedades dos aminocidos
Aminocido

Smbolos

M
r

Valores de pK
a
dos aminocidos
Grupo -
carboxlico
Grupo -amina Cadeia lateral

Glicina Gly G 75 2.35 9.78
Alanina Ala A 89 2.35 9.87
Valina Val V 117 2.29 9.72
Leucina Leu L 131 2.33 9.74
Isoleucina Ile I 131 2.32 9.76
Metionina Met M 149 2.28 9.21
Fenilalanina Phe F 165 2.58 9.24
Tirosina Tyr Y 181 2.20 9.11 10.07
Triptofano Trp W 204 2.38 9.39
Serina Ser S 105 2.21 9.15
Prolina Pro P 115 2.00 10.60
Treonina Thr T 119 2.09 9.10
Cistena Cys C 121 2.05 10.25 8.00
Asparagina Asn N 132 2.02 8.80
Glutamina Gln Q 146 2.17 9.13
Lisina Lys K 146 2.18 8.95 10.53
Histidina His H 155 1.77 9.18 6.10
Arginina Arg R 174 2.01 9.04 12.48
cido asprtico Asp D 133 2.10 9.82 3.86
cido glutmico Glu E 147 2.10 9.47 4.07