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n
c
i
a
(
5
4
0
n
m
)
Concentrao (mg/mL)
Clculo da concentrao de glucose
Para a realizao do clculo da concentrao de glucose nos tubos de ensaio,
comeou-se por calcular a concentrao final dos tubos de ensaio que continham glucose a 5
mg/mL, com volumes iniciais diferentes e volume final de 25 mL.
Tubo 1
Para os restantes tubos, os clculos foram iguais, variando s o volume inicial.
Tubo n. 0 1 2 3 4 5 6
Concentrao final 0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,14
Absorvncia 0,007 0,059 0,113 0,176 0,217 0,227 0,309
Tabela 1 - Registo dos valores das concentraes finais das solues que contm Glucose 5,0 mg/mL.
Com estes valores possvel fazer a recta de calibrao e depois determinar a
concentrao de glucose. A absorvncia do tubo 0(controlo), foi subtrada a todos os valores
de absorvncia de modo a que a recta passe na origem.
Grfico 1-Absorvncia vs Concentrao
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A recta de calibrao y=2,2908x + 0,0006 sendo que y a absorvncia e x a
concentrao. A partir desta recta possvel calcular os valores de absorvncia dos tubos 7,8 e
9.
Tubo 7
Abs
540
= 0,004
y=2,2908x + 0,0006 0,004 = 2,2908x + 0,0006 x = 1,48 x10
-3
mg/mL
Este valor corresponde concentrao final nos 25 mL. Mas a amostra foi diluida at perfazer
o valor de 50 mL e depois desse volume foram retirados volumes diferentes de soluo aos
quais foi adicionado o reagente.
1,48 x10
-3
mg/mL
Massa de glucose na soluo:
Vi=50 mL
50 1,4 mg
Para os outros os tubos, os clculos efectuados foram os mesmos. A seguir apresenta-
se um quadro com os resultados obtidos.
Mdia de concentrao:
(1,48 x10
-3
+2,36 x10
-3
+ 3,23 x10
-3
)/3 = 2,35 x10
-3
mg/mL
Massa mdia de glucose:
Tubo n 7 8 9
Absorvncia
(540nm)
0,004 0,006 0,008
Concentrao
(mg/mL)
1,48 x10
-3
2,36 x10
-3
3,23 x10
-3
Volume de
hidrosilado (mL)
1,3 1,6 2
Massa de glucose
(mg)
1,4 1,84 2,02
11
(1,4+ 1,84 + 2,02)/3 = 1,75 mg
Percentagem (m/m):
%(m/m) = (massa final/massa hidrosilado) x 100
%(m/m) = (1,75/50,2) x 100 %(m/m) = 3,49%
%(m/m) Nestum=84,7%
O rendimento desta experincia foi muito baixo. Conclui-se que houve uma srie de
erros na experincia que contribuiram para um decrscimo do rendimento: erros na medio
de volumes, a hidrlise cida pode no ter sido totalmente eficaz, a filtrao tambm no foi
totalmente eficaz e houve perda de glcidos na transferncia do reagente de um recipiente
para o outro.
3. Bibliografia
Quintas, A., Halpern, M.J., Freire, A.P. Eds., Bioqumica Organizao Molecular da Vida,
Lidel, Lisboa, 2008.
Lehninger Principles of Biochemistry, 6th Edition David L. Nelson, Michael M. Cox,
Macmillan, International Edition, 2013.
4. Questes a desenvolver
4.1. A forma predominante da glucose em soluo a estrutura em anel representada pela
projeo de Haworth. Porque que a glucose d um resultado positivo, reagindo
completamente, nas reaes caractersticas da sua forma em cadeia aberta?
A projeo de Haworth representa os glcidos na sua forma cclica. Em soluo a
glucose encontra-se predominantemente na sua forma cclica, em anis de cinco ou seis
carbonos que so as estruturas mais estveis, e em menor quantidade na sua forma em cadeia
aberta ou linear, que ajuda a estabilizar as formas cclicas.
Contudo, quando introduzido um reagente especfico para a estrutura de glucose em
cadeia aberta na soluo, a glucose vai reagir completamente, perturbando o equilbrio.
Segundo o princpio de Le Chatelier, o sistema vai evoluir no sentido de contrariar esta
perturbao e fazer aumentar a concentrao de glucose em cadeia aberta.
A glucose reage completamente nas reaes caractersticas da sua forma em cadeia
aberta, porque o sistema est continuamente a manter o equilbrio das espcies no meio, ou
seja, permite que quando a concentrao de glucose diminua, o sistema evolua no sentido de
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formar mais glucose em cadeia aberta. Assim, toda a glucose em cadeia aberta acaba por
reagir e estas reaes caractersticas so positivas.
4.2. Apesar de possurem uma extremidade redutora, o amido e o glucognio do um
resultado negativo nos testes de deteo de glcidos redutores. Justifique.
O amido e o glucognio so polisidos, ou seja so constitudos por muitos resduos de
oses. O amido constitudo por glucose, amilose e amilopectinas. Enquanto o glucognio
constitudo por polmeros de glucose.
O amido constitudo por amilose, que uma macromolcula linear de estrutura
helicoidal, ou seja constituda por resduos de D-glucopiranose ligados entre si por ligaes
glucosdicas -1,4. A amilopectina e o glucognio so polmeros ramificados de -glucose
unidos por ligaes glucosdicas. Contudo, o glucognio tem uma estrutura mais ramificada do
que a amilopectina e s tem uma extremidade redutora.
A amilose, a amilopectina e o glucognio efetuam ligaes pela extremidade redutora
de cada resduo osdico, o que significa que cada polisido tem apenas uma extremidade
redutora, que pertence ao ltimo resduo. Porm, no amido, a extremidade redutora do
ltimo resduo est virada para dentro da molcula, no interior da hlice estrutural. Deste
modo, os agentes oxidantes no so capazes de atacar o interior da molcula, uma vez que os
grupos no redutores esto virados para fora, impedindo o contacto.
O amido e o glucognio do um resultado negativo no teste de Benedict de deteo de
glcidos redutores, porque a extremidade redutora est no interior da molcula e nunca chega
a estar em contacto com o (Cu), o agente oxidante.
O amido uma molcula de grande dimenso, por isso existem muitos resduos de
glucose que esto ligados e que no possuem uma extremidade redutora, em relao aos
resduos que possuem essa extremidade. Se a concentrao de amido e glucognio em soluo
baixa, ento no esto em soluo molculas suficientes para que o resultado do teste de
Benedict seja positivo.
4.3. Como explica a obteno de um falso resultado positivo se efetuar um aquecimento
prolongado de algumas solues de glcidos no teste de Barfoed?
O teste de Barfoed oxida as oses atravs do io (Cu) e permite a identificao de oses
numa soluo e ainda a distino entre ose e disido. As oses e os disidos tm uma
velocidade de reao distinta com uma soluo de acetato de cobre em cido actico. As oses
reagem mais depressa do que os disidos.
Quando se efetua um aquecimento de um glcido ocorrem ruturas das ligaes
glucosdicas, quebrando os sidos e originando resduos de oses mais pequenos. Nos glcidos a
extremidade redutora responsvel pela ligao glucosdica, quando esta ligao quebrada,
a extremidade redutora fica livre em soluo, podendo reagir com agentes oxidantes no teste
de Barfoed. As oses aparecem mais rapidamente que os disidos, permitindo a sua deteo
em primeiro lugar e a presena de oses em soluo constitui um resultado positivo no teste de
Barfoed.
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Porm, quando se efetua um aquecimento prolongado de um glcido, os disidos
comeam a ser hidrolisados e a reagir com os ies (Cu) presentes em soluo. Quando isto
ocorre obtm-se um falso positivo, pois esto a reagir disidos quando apenas se pretendem
detetar oses. Um falso positivo torna um teste no fivel pois adultera os resultados da
experincia e neste caso, impossibilita a anlise da presena ou no de oses em glcidos.
4.4. Por que foi necessrio proceder hidrlise cida da farinha alimentar previamente
aplicao do mtodo do DNS?
O DNS ou 3,5-dinitrosalicilato, quando aquecido e em meio bsico reage com glcidos
redutores para formar o 3-amino-5-nitrosalicilato. Este mtodo oxida os grupos redutores dos
glcidos, tais como os aldedos e cetonas das oses permitindo quantificar uma amostra.
A farinha alimentar composta principalmente por amido e resduos de glucose,
molculas que no so redutoras e por isso no so capazes de reagir com o DNS. Para fazer a
farinha alimentar reagir com o DNS necessrio torna-la numa molcula redutora capaz de
reagir com o composto, que oxidante. A farinha alimentar sofre uma hidrlise cida que vai
quebrar as ligaes glucosdicas e permitir que se formem oses cujas extremidades redutoras
passam a estar em contacto com a soluo, em vez de estabelecerem ligaes com outras
oses. Aps o aparecimento das oses em soluo, estas j so capazes de reagir com o DNS,
pois as extremidades redutoras das oses vo ser oxidadas pelo DNS e permitir a realizao do
mtodo.