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Avaliao da produo de agentes antimicrobianos

por fungos do gnero Pleurotus
*WISBECK, E.
1,2
; ROBERT, A. P.
2
; FURLAN, S.A.
2
1
Programa de Doutorado em Engenharia Qumica CPGENQ/UFSC Campus Universitrio s/n Caixa Postal 476
Trindade Florianpolis/SC
2
UNIVILLE Universidade da Regio de Joinville C. Postal 246, 89201-972 Joinville/SC
*e-mail: furlan.joi@zaz.com.br
Resumo: Os fungos do gnero Pleurotus so cogumelos comestveis que possuem diversas propriedades teraputicas. Este trabalho
teve como objetivo verificar a possvel existncia de agentes antimicrobianos, produzidos por diferentes linhagens de Pleurotus,
contra Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Candida albicans. Os testes foram realizados com as linhagens
cultivadas em cultura submersa, testando-se a ao antimicrobiana do caldo fermentado pelos fungos atravs dos mtodos de
difuso com discos e de comparao. A linhagem Pleurotus ostreatus DSM 1833 apresentou atividade antimicrobiana contra S.
aureus, B. subtilis e C. albicans. J a linhagem Pleurotus ostreatus CCB 001 apresentou atividade somente contra B. subtilis.
Pleurotus sp. apresentou 100% de inibio da bactria B. subtilis, pelo mtodo de comparao e Pleurotus sajor caju CCB 019 no
apresentou atividade antimicrobiana contra nenhum dos microrganismos testados.
Palavras-chave: Pleurotus; atividade antimicrobiana; cultura submersa; caldo fermentado.
Abstract: The fungi of genus Pleurotus are edible mushrooms that have several therapeutic properties. This paper aimed to verify
the possible existence of antimicrobial agents produced by different strains of Pleurotus, against Escherichia coli, Staphylococcus
aureus, Bacillus subtilis and Candida albicans. The tests were carried out with the strains cultivated in submerged culture testing
the antimicrobial activity of the fermented broth by the mushrooms with the method of diffusion disks and of comparison
methods. The strain Pleurotus ostreatus DSM 1833 presented antimicrobial activity against S. aureus, B. subtilis and C. albicans. On
the other hand, the strain Pleurotus ostreatus CCB 001 presented activity only against B. subtilis. Pleurotus sp. presented 100%
inhibition of the bacteria B. subtilis by the comparison method and Pleurotus sajor caju CCB 019 did not present antimicrobial
activity against any of the tested microorganisms.
Keywords: Pleurotus; antimicrobial activity; submerged culture; fermented broth.
Introduo
Os fungos do gnero Pleurotus, alm de
apresentarem propriedades nutricionais com elevados
teores de protenas (19 a 35% da massa seca),
aminocidos essenciais, cidos graxos insaturados,
vitaminas e minerais, apresentam um vasto potencial
de uso medicinal. Diversos trabalhos comprovam a
existncia de compostos com efeitos teraputicos,
como por exemplo a lecitina, que apresenta fator de
coagulao sangnea, e o ?-D-glucano, produzido
por Pleurotus ostreatus, que possui ao antitumoral e
estimula o sistema imunolgico (RAJARATHNAM
et al., 1989; ZHANG et al., 1994).
Conhece-se ainda sua ao preventiva nas
doenas cardacas e na arterioesclerose, atravs da
reao da absoro do colesterol pela lovastatina,
produzida por P. ostreatus, P. cornucopiae, P. eryngii e P.
sapidus (GUNDE-CIMERMAN e CIMERMAN,
1995), e sua ao antimicrobiana pela produo de
antibiticos como, por exemplo, a pleurotina,
produzida por P. griseus (GUNDE-CIMERMAN, 1999;
ROBBINS et al., 1947).
Estudos cientficos apontam a capacidade de
vrias espcies do gnero Pleurotus de produzir agentes
antimicrobianos, tais como: Pleurotus japonicus, que
produz o antibitico 6-deoxyilludin M, com atividade
contra Bacillus subtilis (HARA et al., 1987), P. griseus,
P. palmatus e P. sapidus, que tm atividade antibitica
especialmente sobre Staphylococcus aureus (GUNDE-
CIMERMAN, 1999) e P. ostreatus, com ao
antimicrobiana principalmente contra B. subtilis
(GARCIA et al., 1998; BELTRAN-GARCIA, 1997;
BIANCO COLETTO, 1981).
Tendo em vista as propriedades teraputicas de
fungos desse gnero e a importncia da busca de novos
medicamentos, este trabalho visa verificar a possvel
existncia de agentes antimicrobianos no caldo
fermentado por diferentes espcies de fungos do
gnero Pleurotus.
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Avaliao da produo de agentes antimicrobianos por fungos do gnero Pleurotus
Metodologia
Microrganismos e manuteno
As seguintes linhagens de fungos do gnero
Pleurotus foram avaliadas: Pleurotus ostreatus DSM
1833, Pleurotus ostreatus CCB 001, Pleurotus sajor caju
CCB 019 e Pleurotus sp., nativo do municpio de
Joinville, Santa Catarina.
Esses microrganismos foram mantidos em meio
TDA - extrato de trigo, dextrose e gar (VIRMOND
et al., 1996) - e armazenados em geladeira a 4C. Os
repiques foram realizados a cada trs meses.
Para a avaliao da ao antimicrobiana dos
fungos do gnero Pleurotus foram utilizados os
seguintes microrganismos: Escherichia coli ATCC
8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis
ATCC 6051 e Candida albicans ATCC 10231.
E. coli e S. aureus foram mantidos em meio
Nutrient Agar (NA - 5,0g/L de peptona; 3,0g/L de
extrato de carne e 15,0g/L de gar), com
temperatura de incubao em 37C. B. Subtilis foi
mantido em meio NA e Candida albicans em meio
Yeast Malt Extract Agar (YMA 3,0g/L de extrato
de levedura; 3,0g/L de extrato de malte; 5,0g/L de
peptona; 10g/L de glicose e 20g/L de gar), ambos
com temperatura de incubao de 28C. Os repiques
foram realizados mensalmente.
Meios e condies de cultivo
O meio de cultivo utilizado para o crescimento
de todas as linhagens de fungos testadas foi o meio
lquido POL (MAZIERO, 1996): 5g/L NH
4
2SO
4
; 0,2g/
L MgSO
4
.7H
2
O; 1,0g/L K
2
HPO
4
; 2,0g/L extrato de
levedura; 1,0g/L peptona; 1,0g/L CaCO
3
; 20g/L
glicose; pH 6,5.
As linhagens dos fungos cresceram em frascos
Erlenmeyer de 500mL, contendo 100mL de meio
POL, inoculados com dois discos de gar (8mm de
dimetro), contendo miclio fngico e incubados
sob agitao recproca a 120min
-1
, em agitador B.
BRAUN modelo CERTOMAT U, em temperatura
de 30C, por 14 dias.
Aps o perodo de cultivo, o caldo fermentado foi
separado da biomassa fngica por centrifugao (3500
x g, 15 minutos), sob condies asspticas, para posterior
utilizao no teste de atividade antimicrobiana.
Metodologia analtica
A seguir so descritas as metodologias utilizadas
para a verificao da atividade antimicrobiana do
caldo fermentado por fungos do gnero Pleurotus.
Mtodo de difuso com discos (RIBEIRO e
SOARES, 1998)
Placas de Petri contendo os meios de cultivo
especficos para os microrganismos teste, NA e YMA,
foram inoculadas com os referidos microrganismos a
uma concentrao de 10
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UFC (Unidades Formadoras
de Colnia)/mL.
Discos de papel filtro (5mm de dimetro),
previamente esterilizados, foram imersos no caldo
fermentado pelos fungos do gnero Pleurotus e colocados
em dois pontos sobre o meio de cultivo das placas de
Petri previamente inoculadas com os microrganismos-
teste. As placas foram incubadas a 28 ou 37C, de
acordo com o microrganismo-teste, e verificou-se a
ao antimicrobiana do caldo fermentado, contido nos
discos de papel filtro, pela presena ou no de halo
inibidor aps 24 horas de incubao.
Mtodo de comparao (GARCIA et al.,
1998)
Placas de Petri contendo meios de cultivo NA
e YMA f oram i nocul adas com os devi dos
microrganismos-teste a uma concentrao de 10
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UFC/ mL di l u da 10. 000 vezes, de modo a
apresentarem, aps a i ncubao, nmero de
colnias em torno de 100. Essa concentrao foi
consi derada testemunha e uti l i zada para
posterior comparao.
Placas de Petri contendo meio de cultivo NA ou
YMA (com concentrao de nutrientes em dobro) e
caldo fermentado na proporo 1 : 1 foram inoculadas
com os microrganismos-teste na mesma concentrao
considerada testemunha. As placas foram incubadas
a 28 ou 37C, conforme o caso, e as colnias foram
contadas aps 24 horas.
A ao ant i mi cr obi ana do cal do
fermentado foi verificada quando o nmero de
colnias das placas contendo caldo fermentado
fosse 50% menor que o nmero de colnias das
placas testemunhas.
Revista Sade e Ambiente / Health and Environment Journal, v.3, n.2, dez. 02
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Resultados e discusso
Os resultados obtidos para as linhagens de fungos do gnero Pleurotus testadas esto apresentados na
tabela 1.
Tabela 1 Resultados da inibio do crescimento dos microrganismos-teste pela ao antimicrobiana do caldo fermentado por
diferentes espcies de fungos do gnero Pleurotus.
(+) presena de halo inibidor (-) sem presena de halo inibidor
De acordo com os resultados apresentados na
tabela 1, observa-se que a atividade antimicrobiana,
utilizando-se o mtodo de difuso com discos, foi
positiva somente para o caldo fermentado pela
linhagem Pl eurotus sp. contra B. subti l i s,
apresentando um halo de inibio de
aproximadamente 8mm de dimetro.
HARA et al. (1987), utilizando o mtodo de
difuso com discos, com caldo fermentado por P.
japonicus, observaram ao antimicrobiana, tambm,
apenas contra B. subtilis. Os autores isolaram a
substncia antimicrobiana 6-Deoxyilludin M do caldo
fermentado pelo fungo.
As demais linhagens no apresentaram halo de
inibio. Isso pode ser atribudo ao fato de a
concentrao dos agentes antimicrobianos, contida
no disco de papel, no ser suficientemente elevada a
ponto de resultar halo de inibio, uma vez que a
linhagem P. ostreatus CCB 001, por exemplo,
apresentou cerca de 97,3% de inibio contra B.
subtilis, pelo mtodo de comparao, e no apresentou
halo inibidor pelo mtodo de difuso com discos. Isso
ocorreu tambm com a linhagem P. ostreatus DSM
1833, contra S. aureus, B. subtilis e C. albicans.
Figura 1 Percentual de inibio do crescimento dos microrganismos-
teste pela ao antimicrobiana do caldo fermentado por fungos do gnero
Pleurotus.
Pela figura 1 observa-se que a linhagem P. ostreatus
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Avaliao da produo de agentes antimicrobianos por fungos do gnero Pleurotus
DSM 1833 produz agentes antimicrobianos capazes
de inibir no somente o crescimento da bactria B.
subtilis, como nos casos das linhagens P. ostreatus CCB
001 e Pleurotus sp., mas tambm o crescimento de C.
albicans e S. aureus.
GARCIA et al. (1998) detectaram a atividade
antimicrobiana do miclio de P. ostreatus, crescido
sobre gros de trigo, contra E. coli, Pseudomonas
aeroginosa, S. aureus, Lactobacillus plantarum,
Leuconostoc mesenteroides e B. subtilis, utilizando o
mtodo de comparao. BELTRAN-GARCIA et al.
(1997) tambm observaram a ao antimicrobiana de
compostos volteis contidos nos corpos frutferos de
P. ostreatus contra diversas bactrias, inclusive B.
subtilis. No entanto, BIANCO COLETTO (1981)
avaliou a atividade antimicrobiana do miclio e do
caldo fermentado por P. ostreatus e verificou ao
somente contra B. subtilis.
Esses resultados parecem estar relacionados
com a espcie de Pleurotus. Observa-se que, tanto
neste trabalho como em outros trabalhos citados,
P. ostreatus apresenta atividade antimicrobiana
efetiva contra B. subtilis. Assim sendo, sugere-se
que a linhagem Pleurotus sp. (nativa da regio de
Joinville), que apresentou inibio de 100% contra,
apenas, B. subtilis, possa pertencer espcie P.
ostreatus. Isso porque a espcie P. sajor caju parece
no produzir antimicrobianos ou pelo menos
quantidades expressivas a ponto de observar-se
inibio contra os microrganismos-teste. No foi
encontrada literatura citando essa espcie como
produtora de antimicrobianos.
Agradecimentos
A equipe agradece UNIVILLE pelo apoio
financeiro e pela disponibilidade dos laboratrios para
a conduo dos trabalhos.
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