Capela - Capela - Acidos Nucleicos PDF

Carlos Capela
cidos Nucleicos pgina 1 de 60

CIDOS NUCLEICOS
CIDOS NUCLEICOS................................................ 1
A. INTRODUO......................................................... 4
1. OS NUCLETIDOS ......................................................... 4
1.a. Estrutura dos Nucletidos....................................................... 4
1.A.I. AS BASES NITROGENADAS .............................................................. 4
1.A.II. AS PENTOSES................................................................................... 4
1.A.III. O FOSFATO...................................................................................... 4
1.b. Principais funes dos Nucletidos........................................ 4
2. O DNA........................................................................... 4
2.a. A Ligao Fosfodister ........................................................... 4
2.b. A Estrutura do DNA................................................................ 4
1.B.I. ESTRUTURA PRIMRIA.................................................................... 4
1.B.II. ESTRUTURA SECUNDRIA A DUPLA HLICE............................... 4
1.B.III. ESTRUTURA TERCIRIA................................................................... 4
2.c. Organizao do Material Gentico Eucaritico .................... 4
2.C.I. AS HISTONAS ................................................................................... 4
2.C.II. OS NUCLEOSSOMAS......................................................................... 4
2.C.III. NVEIS DE ORGANIZAO DO DNA................................................. 4
3. O RNA........................................................................... 4
3.a. A Estrutura do RNA................................................................ 4
3.A.I. ESTRUTURA PRIMRIA.................................................................... 4
3.A.II. ESTRUTURA SECUNDRIA............................................................... 4
3.A.III. ESTRUTURA TERCIRIA................................................................... 4
3.b. Tipos de RNA........................................................................... 4
3.B.I. RNA RIBOSSMICO
R
RNA........................................................... 4
3.B.II. RNA DE TRANSFERNCIA
T
RNA................................................. 4
3.B.III. RNA MENSAGEIRO
M
RNA........................................................... 4

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B. METABOLISMO DOS NUCLETIDOS ..................... 4
1. BIOSSNTESE DOS NUCLETIDOS................................. 4
1.a. Sntese dos nucletidos com purinas...................................... 4
1.A.I. SNTESE DE IMP.............................................................................. 4
1.A.II. SNTESE DE AMP E GMP................................................................ 4
1.A.III. SNTESE DOS NUCLESIDOS DI- E TRIFOSFATO PRICOS................ 4
1.A.IV. REGULAO DA SNTESE................................................................. 4
1.b. Sntese dos nucletidos com pirimidina ................................. 4
1.B.I. SNTESE DO UMP............................................................................ 4
1.B.II. SNTESE DE CMP............................................................................. 4
1.B.III. REGULAO DA SNTESE ................................................................ 4
1.c. Formao dos desoxirribonucletidos ................................... 4
1.C.I. FORMAO DA DTMP..................................................................... 4
1.d. Sntese das Coenzimas Nucleotdicas..................................... 4
1.D.I. NAD
+
E NADP
+
............................................................................... 4
1.D.II. FAD................................................................................................. 4
1.D.III. COA................................................................................................. 4
1.e. Inibidores................................................................................. 4
1.E.I. SULFAS............................................................................................. 4
1.E.II. METOTREXATO ............................................................................... 4
2. CATABOLISMO DOS CIDOS NUCLEICOS E
NUCLETIDOS........................................................................ 4
2.a. Catabolismo dos cidos Nucleicos, Nucletidos e
Nuclesidos ........................................................................................ 4
2.b. Catabolismo das bases pricas ............................................... 4
2.c. Catabolismo das bases pirimdicas ......................................... 4
3. DOENAS....................................................................... 4
3.a. Alteraes do metabolismo das purinas ................................. 4
3.A.I. A GOTA............................................................................................ 4
3.A.II. A SNDROME DE LESCH-NYHAN..................................................... 4
3.A.III. IMUNODEFICINCIA ASSOCIADA A DEFEITOS NA DEGRADAO DE
NUCLETIDOS DE PURINA................................................................................ 4
3.b. Alteraes do metabolismo das pirimidinas........................... 4
3.B.I. ACIDRIA ORTICA HEREDITRIA................................................ 4

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C. BIOSSNTESE DOS CIDOS NUCLEICOS E
TRANSFERNCIA DA INFORMAO GENTICA. .......... 4
1. REPLICAO DO DNA.................................................. 4
1.a. Iniciao .................................................................................. 4
1.b. Elongao................................................................................ 4
1.c. Terminao.............................................................................. 4
2. TRANSCRIO DO DNA................................................ 4
2.a. Iniciao .................................................................................. 4
2.b. Elongao................................................................................ 4
2.c. Terminao.............................................................................. 4
2.d. Maturao do
m
RNA ............................................................... 4
3. TRADUO A SNTESE DE PROTENAS ..................... 4
3.a. Introduo ............................................................................... 4
3.b. O cdigo gentico .................................................................... 4
3.B.I. CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO..................................... 4
3.c. Componentes necessrios traduo..................................... 4
3.C.I. OS AMINOCIDOS: .......................................................................... 4
3.C.II. O RNA DE TRANSFERNCIA:.......................................................... 4
3.C.III. O RNA MENSAGEIRO: .................................................................... 4
3.C.IV. RIBOSSOMAS: .................................................................................. 4
3.C.V. FACTORES PROTEICOS: .................................................................. 4
3.C.VI. FONTES DE ENERGIA....................................................................... 4
3.d. Etapas da Biossntese Proteica:.............................................. 4
3.D.I. ACTIVAO DOS AMINOCIDOS:.................................................... 4
3.D.II. INICIAO DA CADEIA: ................................................................... 4
3.D.III. ELONGAO DA CADEIA:................................................................ 4
3.D.IV. TERMINAO DA CADEIA POLIPEPTDICA:.................................... 4
3.D.V. MODIFICAES PS-TRANSLACIONAIS ......................................... 4

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A. INTRODUO

So as molculas com a funo de armazenamento e expresso da informao
gentica.

Existem basicamente 2 tipos de cidos nucleicos:
O cido Desoxirribonucleico DNA
O cido Ribonucleico RNA
Os cidos nucleicos so macromolculas formadas pela ligao tipo fosfodister
entre 5 nucletidos diferentes. Podem-se encontrar tanto na forma livre como
associados a protenas (histonas e protaminas).

Cromossoma
Genes
Dupla Hlice de DNA
Sequncia
reguladora
Intres Exes
Transcrio do DNA
Splicing do RNA
Traduo
RNA
Protena
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1.OS NUCLETIDOS
So as unidades fundamentais dos cidos nucleicos. Ligam-se uns aos outros
atravs de ligaes fosfodister, formando cadeias muito longas com milhes de
resduos de comprimento.
Alm de participarem da estrutura dos cidos nucleicos, os nucletidos actuam
tambm como componentes na estrutura de coenzimas importantes no metabolismo
oxidativo da clula, e como forma de energia qumica ATP, por exemplo.
Actuam ainda como activadores e inibidores importantes em vrias vias do
metabolismo intermedirio da clula.

1.a. Estrutura dos Nucletidos

Os nucletidos so molculas formadas por:
Uma pentose;
Uma base nitrogenada;
Um ou mais grupos fosfato.
Ao conjunto formado pela pentose e pela base azotada d-se
o nome de Nuclesido.

1.a.i. AS BASES NITROGENADAS
Pertencem a 2 famlias de compostos, e so 5 no total:
Bases Pricas, ou Purinas (anel duplo): Adenina e Guanina;
Bases Pirimdicas, ou Pirimidinas (anel simples): Citosina, Timina e Uracilo.
Tanto o DNA como o RNA possuem as mesmas bases pricas, e a citosina como
base pirimdica.
A timina existe apenas no DNA, e no RNA, substituda pela uracilo que possui
um grupo metil a menos.
Em alguns tipos de DNA virais e no RNA de transferncia podem aparecer bases
incomuns.
As bases azotadas unem-se ao carbono 1 das pentoses por ligaes covalentes.
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1.a.ii. AS PENTOSES
A adio de uma pentose a uma base nitrogenada produz um nuclesido. Os
nuclesidos de A, C, G, T e U so denominados, respectivamente, Adenosina, Citosina,
Guanosina, Timidina e Uridina.
Se o acar em questo a Ribose, temos um ribonuclesido, caracterstico do
RNA.
Se o acar a desoxirribose 1 hidroxilo (-OH) a menos em C
2
temos um
desoxirribonuclesido, caracterstico do DNA.
A ligao com a base nitrogenada ocorre sempre atravs do hidroxilo do carbono
anomrico da pentose.

DNA RNA
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1.a.iii. O FOSFATO
A adio de um ou mais radicais fosfato pentose, atravs de uma
ligao tipo ster com o hidroxilo do carbono 5 da mesma, d origem aos
Nucletidos.
Os grupos fosfato so responsveis pelas cargas negativas dos
nucletidos e dos cidos nucleicos.
A adio do segundo ou terceiro grupo fosfato ocorre em sequncia, dando origem
aos nucletidos di e trifosfatados. A funo principal destes nucletidos di e
trifosfatados armazenar energia.

1.b. Principais funes dos Nucletidos

Metabolismo energtico os nucletidos entram na constituio do ATP, que
a principal forma de energia qumica para as clulas. Este est envolvido na
contraco muscular, no transporte activo e na manuteno de gradientes
inicos;
Unidades monomricas dos cidos Nucleicos;
Mediadores fisiolgicos nuclesidos e nucletidos servem como mediadores
fisiolgicos de processos metablicos chave, como por exemplo, a adenosina
importante no controlo do fluxo sanguneo;
Funo de Percursor alguns nucletidos so percursores para a formao de
cofactores;
Componente de Coenzimas o AMP um componente das coenzimas NAD
+
,
NADP
+
, FAD, suas formas reduzidas, e coenzima A.
Intermedirios activados os nucletidos tambm servem como
transportadores de intermedirios activados necessrios para vrias reaces.
Por ex: a UDP-glicose um intermedirio chave para a sntese de glicognio e
de glicoprotenas;
Efectores Alostricos muitas das etapas reguladoras das vias metablicas so
controladas pelas concentraes intracelulares de nucletidos.

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2.O DNA
Est presente no ncleo das clulas eucariticas, nas mitocndrias, nos cloroplastos,
e no citosol das clulas procariticas.
Nas clulas germinativas e no vulo fertilizado, dirige todo o desenvolvimento do
organismo, a partir da informao contida na sua estrutura. duplicado cada vez que a
clula somtica se divide.
O DNA um polidesoxirribonucletido formado por milhares de nucletidos
ligados entre si atravs de ligaes fosfodister 3-5.

2.a. A Ligao Fosfodister

Ocorre entre o fosfato do carbono 5 da pentose de um nucletido e o hidroxilo do
carbono 3 da pentose do nucletido seguinte. A cadeia resultante bastante polar, e
possui:
Uma extremidade 5 Fosfato, do carbono 5 da pentose, livre;
Uma extremidade 3 Hidroxilo, do carbono 3 da pentose, livre
Por conveno, as bases de uma sequncia so sempre descritas da extremidade 5
para a extremidade 3.
As ligaes fosfodister podem ser quebradas enzimaticamente por enzimas
chamadas Nucleases, que se dividem em:
Endonucleases quebram ligaes no meio da molcula;
Exonucleases quebram ligaes nas extremidades da molcula.

2.b. A Estrutura do DNA

1.b.i. ESTRUTURA PRIMRIA
A estrutura primria a sequncia de nucletidos que o formam. A sequncia das
bases caracterstica de um cido nucleico, pois nela que reside a informao
gentica.

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1.b.ii. ESTRUTURA SECUNDRIA A DUPLA HLICE
Na dupla hlice do DNA, descrita pela primeira vez por Watson e Crick, as cadeias
da molcula dobram-se em torno de um eixo comum e de modo antiparalelo a
extremidade 5 de uma cadeia est emparelhada com a extremidade 3 da outra cadeia.
No tipo mais comum de hlice B o esqueleto hidroflico dos fosfatos e
pentoses fica na parte externa, enquanto que as bases hidrofbicas, fixadas a este
esqueleto, ficam no lado interno da estrutura.

Existe uma complementaridade de Bases entre as cadeias da molcula do DNA.
Assim, temos sempre emparelhadas:
Adenina com Timina A-T
Citosina com Guanina C-G

As bases mantm-se emparelhadas devido formao de pontes de hidrognio, 2
entre A e T e 3 entre C e G.

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Existem 3 formas estruturais de DNA:
A forma B descrita por Watson e Crick em 1953 e j citada acima, a forma
mais comum; a hlice tem rotao para a direita, com 10 resduos por volta e com
planos de bases perpendiculares ao eixo helicoidal.
A forma A Obtida pela desidratao moderada da forma B, tambm possui
rotao para a direita, mas possui 11 resduos por volta e as bases esto num ngulo de
20 graus em relao ao eixo helicoidal.
A forma Z A hlice nesta forma possui rotao para a esquerda e contm cerca
de 12 resduos por volta.
A transio entre as formas de DNA pode desempenhar um papel importante na
regulao da expresso gentica.

1.b.iii. ESTRUTURA TERCIRIA
A molcula de DNA pode sofrer enrolamento no sentido da sua progresso e
tambm dobras sobre si prpria embora de uma forma menos ntida do que as
protenas quando adquirem a estrutura terciria.
Essas conformaes designam-se por supercoiling que se poder traduzir por
sobre-enrolamento ou superenrolamento.
A estrutura terciria do DNA encontra-se nos eucariotas, nos seus nucleossomas,
situao em que o enrolamento se faz em torno das histonas.
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O DNA pode formar superenrolamento para a direita (negativo) ou para a esquerda
(positivo). O superenrolamento negativo comunica um stress torcional ao DNA que
favorece a separao das cadeias.
Nas clulas existem enzimas denominadas Topoisomerases que so capazes de
conferir superenrolamento ao DNA (DNA-girase) e tambm de o desenrolar
(Topoisomerase I).

2.c. Organizao do Material Gentico Eucaritico

O DNA total de uma clula mede em mdia 1 metro de comprimento. Para que um
volume to grande de material gentico esteja compreendido dentro do ncleo da
clula, o DNA interage com um grande nmero de protenas com o objectivo da sua
compactao. Estas protenas exercem funes importantes na organizao e
mobilizao deste material gentico

2.c.i. AS HISTONAS
As histonas so pequenas protenas bsicas, ricas em lisina e arginina, e carregadas
positivamente em pH fisiolgico, s quais se associa a molcula do DNA.
As suas cargas positivas, em associao com o catio Mg
2+
, facilitam esta ligao
com o esqueleto negativo do DNA e estabilizam o conjunto.
Existem 5 classes de histonas: H1, H2, H2B, H3 e H4.

2.c.ii. OS NUCLEOSSOMAS
So considerados as unidades estruturais dos
cromossomas.
So formados por 8 molculas de histonas: 2
H2, 2 H2B, 2 H3 e 2 H4, formando um octmero
regular sobre o qual se enrola a dupla cadeia do
DNA, cerca de 2 voltas (146 nucletidos por
nucleossoma).
Os nucleossomas so ligados entre si por
Nucleossoma
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segmentos de DNA ligante de aproximadamente 50 nucletidos de comprimento,
formando os polinucleossomas, ou nucleofilamentos.
Aps vrios nveis de organizao espacial,
ancorados por vrios tipos de protenas, chegamos
estrutura final dos cromossomas.
A histona H1 no participa da estrutura dos
nucleossomas, mas sim liga-se ao DNA ligante e
participa do processo de compactao das estruturas,
formando os solenides.

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2.c.iii. NVEIS DE ORGANIZAO DO DNA

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3.O RNA
O RNA criado a partir de um molde de DNA e utilizado na expresso da
informao gentica. A sntese de uma molcula de RNA a partir de um molde de DNA
chama-se transcrio. Nesta transcrio, modificaes podem ocorrer sobre a molcula
de RNA transcrita, convertendo-a de uma cpia fiel numa cpia funcional do DNA.
Em relao ao DNA, o RNA possui uracilo no lugar da timina na sequncia de
bases. A pentose do RNA a Ribose.
O RNA formado por uma cadeia nica, com eventual emparelhamento de bases
intracadeia. A molcula do RNA muito menor que a do DNA.

3.a. A Estrutura do RNA

3.a.i. ESTRUTURA PRIMRIA
Tal como no DNA, a estrutura primria a sequncia de nucletidos que o formam.

3.a.ii. ESTRUTURA SECUNDRIA
Contrariamente ao que acontece com a molcula de DNA, o RNA formado por
uma nica cadeia polinucleotdica. No entanto, esta cadeia simples pode, em
determinadas zonas, dobrar-se sobre si prpria, devido formao de pontes de
hidrognio entre as bases complementares.

3.a.iii. ESTRUTURA TERCIRIA
Alm da estrutura secundria por pares de bases, as molculas de RNA tambm
formam outras pontes de Hidrognio, gerando a estrutura terciria.

3.b. Tipos de RNA
Existem 3 tipos fundamentais de RNA, cada um com caractersticas estruturais e
funcionais prprias:

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3.b.i. RNA RIBOSSMICO
R
RNA
O rRNA sintetizado no nuclolo, uma vez que nessa zona que se encontram os
seus genes codificadores. Aps a sua sntese vai agregar-se a protenas especficas
sintetizadas previamente no citoplasma, dando origem s ribonucleoproteinas que
entram na constituio dos ribossomas, os organelos responsveis pela sntese proteica.
Corresponde a cerca de 80% do total de RNA da clula.

3.b.ii. RNA DE TRANSFERNCIA
T
RNA
a menor molcula dos 3 tipos de RNA. Inclui na sua composio uma sequncia
de 3 bases designadas anticodo e tem como funo estabelecer a correspondncia
entre os aminocidos e os codes do mRNA, de modo a permitir a traduo da
informao codificada no mRNA em protenas.
Possui um extenso emparelhamento de bases intracadeia, actuando no
posicionamento dos aminocidos na sequncia prevista pelo cdigo gentico, no
momento da sntese proteica. Est ligado de forma especfica a cada um dos 20
aminocidos encontrados nas protenas (proteicos comuns).
Corresponde a cerca de 15% do RNA total da clula.

Estrutura
secundria
Estrutura terciria
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3.b.iii. RNA MENSAGEIRO
M
RNA
a molcula resultante da transcrio do DNA. Actua como transportador da
informao gentica do ncleo da clula eucaritica para o citosol, onde ocorrer a
biossntese proteica, atravs da leitura de 3 bases o codo.
Corresponde a apenas 5% do total de RNA da clula
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B. METABOLISMO DOS
NUCLETIDOS

1.BIOSSNTESE DOS NUCLETIDOS
Embora os animais ingiram cidos nucleicos e consequentemente nucletidos, nos
seus alimentos, a sua sobrevivncia no depende da absoro e utilizao desses
compostos, uma vez que o Homem e a maioria dos vertebrados podem sintetizar de
novo nucletidos de purina e pirimidina. Tambm conseguimos reutilizar aquelas de
que j dispomos no nosso organismo, e que assim sofrem um turnover elevado.
Existe um grande turnover do RNA e dos nucletidos, mas no de DNA. O
reaproveitamento de purinas, pirimidinas e nuclesidos envolve a sua converso a
nucletidos, evitando assim clula um gasto desnecessrio de energia.
Por outro lado, existe uma interconverso de nucletidos de forma a manter uma
concentrao apropriada de percursores para a sntese de RNA, DNA e outros
intermedirios nucleotdicos.
A sntese de novo tem como fontes: tomos de carbono, azoto e oxignio, os
aminocidos glutamina, glicina e cido asprtico, o CO
2
, a ribose-5-fosfato e o
amonaco (NH
4
).
A sntese de novo de nucletidos implica a sntese das pentoses (pela vias das
pentoses fosfato) e das bases azotadas.
As purinas e pirimidinas que no so reutilizadas so catabolisadas e os produtos
resultantes excretados. Nos primatas, o produto de excreo final o cido rico,
enquanto que noutros mamferos este catalisado em alantona.

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1.a. Sntese dos nucletidos com purinas

As purinas so formadas a partir dos seguintes percursores:
1. Glicina C
4
, C
5
e N
7
.
2. Formilo (combinado ao THF) C
2
e C
8
.
3. Glutamina fornece o N para os N
3
e N
9
.
4. cido Asprtico N
1
.
5. CO
2
C
6
.

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A sntese faz-se por um grande nmero de etapas. O primeiro nucletido a formar-
se o IMP, formando-se os outros a partir dele.

1.a.i. SNTESE DE IMP
As principais etapas so as seguintes:
1. Formao da forma activada da ribose o 5-fosforribosil-1-pirofosfato
(PRPP) por combinao da ribose-5-fosfato com o ATP. Esta reaco
catalisada pela Ribose-5-fosfato Pirofosfocinase, inibida pelo ADP, GDP,
AMP e cido 2,3-Bisfosfoglicrico. O io Mg
2+
e o grupo fosfato actuam
como activadores.

2. Formao da 5-fosforribosilamina, sendo o NH
2
cedido pela glutamina.

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3. Formao do ribtido de glicinamida, por combinao com a glicina.
4. Transferncia de um carbono, formando-se o ribtido da formilglicinamida.
O formilo transportado pelo cido tetrahidroflico (THF).
5. Amidinao pela glutamina, formando-se o ribtido da formilglicinamidina.
A reaco faz-se na presena de ATP.
6. Ciclizao em ribtido do 5-amino-amidazol, com gasto de ATP.
7. Carboxilao em ribtido do cido 5-amino-imidazol carboxlico.
8. Formao de uma amida por combinao com o cido asprtico, formando-
se o ribtido do 5-amino-4-imidazol-succino carboximida.
9. Transformao em ribtido da 5-aminoimidazol-carboxamida por perda de
cido fumrico.
10. Formilao em ribtido da formil aminoimidazol-carboxamida e
desidratao deste em IMP.

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1.a.ii. SNTESE DE AMP E GMP
O IMP combinando-se com cido asprtico formando cido adenilo-succnico. A
energia para a sntese fornecida pela hidrlise do GTP. O cido adenilo-succnico
hidrolisa-se, em seguida, em cido fumrico e AMP.
Para a sntese do GMP ter que ser introduzido um tomo de azoto no ncleo de
purina do IMP. O IMP , inicialmente, oxidado em XMP e, depois, este aminado pela
glutamina em GMP.

1.a.iii. SNTESE DOS NUCLESIDOS DI- E TRIFOSFATO PRICOS
Os mononucletidos AMP e GMP so convertidos em nuclesidos difosfato (ADP
e GDP) pela transferncia de um grupo fosfato de ATP.

GMP/AMP + ATP GDP/ADP + ADP Nuclesido-5-monofosfato cinase

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O GDP ento convertido em GTP com gasto de outro ATP.

GDP + ATP GTP + ADP Nuclesido-5-difosfato cinase

A converso do ADP em ATP feita maioritariamente por fosforilao oxidativa,
mas tambm por reaces de gliclise e ciclo de Krebs.
O ATP e o GTP so os percursores pricos necessrios para a sntese dos cidos
nucleicos.

1.a.iv. REGULAO DA SNTESE
A sntese de nucletidos de purina controlada a vrios nveis:
Os nveis de PRPP so regulados pelo AMP, GMP e IMP, do mesmo modo que
a converso do PRPP em 5-fosforribosilamina.
O AMP e GMP regulam a sua prpria sntese a partir do IMP, ou seja, uma
elevada concentrao de AMP inibe a sua sntese, e uma concentrao elevada
de GMP inibe a do GMP.

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1.b. Sntese dos nucletidos com pirimidina

Os percursores do ncleo pirimdico so C
4
, C
5
, C
6
e N
1
do cido asprtico, N
3
da
glutamina e C
2
do CO
2
.

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1.b.i. SNTESE DO UMP
Contrariamente sntese de novo de nucletidos de purina, este processo mais
simples devido estrutura anelar simples das pirimidinas.
1. Formao do Carbamil-fosfato (uma forma activada de azoto) atravs da
condensao de CO
2
, amonaco e ATP, numa reaco catalisada pela Carbamil
fosfato sintetase II, tendo como coenzima a Biotina.

2. O Carbamil-fosfato, reage com o cido asprtico formando o cido carbamil-
asprtico.
3. Este cido desidrata-se dando cido di-hidro-ortico que desidrogenado por
um enzima com NAD
+
dando cido ortico.

4. O cido ortico recebe a ribose do PRPP, dando cido orotidlico.
5. Seguidamente, o cido orotidlico descarboxila-se em UMP.
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1.b.ii. SNTESE DE CMP
O UMP para se converter em CMP necessita de se transformar, primeiro, em UTP
(pela aco de cinases). Este, aminando-se pela glutamina na presena de ATP, origina
o CTP.
A formao e a presena de TMP bastante rara.

1.b.iii. REGULAO DA SNTESE
Devido, ao seu papel de regulador
alostrico da Carbamil fosfato sintetase II, o
CTP intervm decisivamente no controlo do
metabolismo dos nucletidos pirimdicos.

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1.c. Formao dos desoxirribonucletidos

Os desoxirribonucletidos so formados a partir da reduo do anel de ribose pela
Ribonuclesido difosfato redutase que catalisa a reduo dos ribonucletidos
difosfatados.
Esta enzima utiliza como dador de hidrognio na reduo da ribose uma protena, a
Tioredoxina, com SH quando reduzida e S-S quando oxidada. A tioredoxina oxidada
passa a reduzida pela aco do NADPH, reaco catalisada pela tioredoxina redutase.
Desta forma, h uma manuteno de desoxirribonucletidos necessrios para a
sntese de DNA.
ADP, GDP, CDP e UDP so catabolisados respectivamente em dADP, dGDP,
dCDP e dUDP.

1.c.i. FORMAO DA DTMP
O uracilo no componente do DNA porque este contm timina (uracilo metilado).
O dUMP metilado pelo N
5
-N
10
-metileno-THF que actua como dador de electres e de
carbono, reaco catalisada pela Timidilato sintetase.

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1.d. Sntese das Coenzimas Nucleotdicas

Os coenzimas FAD, NAD
+
, NADP
+
e Coenzima A tm uma base nucleotdica.
Cada um destes coenzimas tem um resduo de AMP como parte da molcula que, no
entanto, no est directamente envolvido na parte funcional da molcula.

1.d.i. NAD
+
E NADP
+

A sntese de NAD
+
e NADP
+
inicia-se a partir da condensao de Nicotinamida
com PRPP. A nicotinamida ou ingerida ou deriva do Triptofano. A carncia de
Nicotinamida provoca o Pelagra.
O PRPP reage com a nicotinamida para formar o nicotinamida-mononucletido
que, recebendo um AMP do ATP, se transforma em NAD
+
. Este pode ser fosforilado
em NADP
+
, pela NAD
+
quinase.

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O NAD
+
e o NADP
+
so transportadores de equivalentes redutores. O NAD
+
uma
coenzima nas reaces (geralmente catablicas) em que os equivalentes redutores so
utilizados na sntese de ATP e actua como aceitador de 2 e
-
e um proto H
+
,
provenientes de um dador ou substrato que oxidado. O NADP
+
utilizado em
reaces (geralmente anablicas) em que os equivalentes redutores sero aproveitados
em reaces de sntese e actua de forma anloga ao NAD
+
.

1.d.ii. FAD
A sntese do FAD faz-se a partir da vitamina B
2
(Riboflavina) que sofre 2
fosforilaes pelo ATP.

Carlos Capela
1.d.iii. COA
A sntese de CoA faz-se a partir de uma outra vitamina do grupo B, o cido
pantotnico.

Carlos Capela
1.e. Inibidores

Actualmente, muitos frmacos so fabricados para inibirem uma enzima especfica,
numa via metablica. Esta aplicao mais facilmente observada com frmacos
antivirais, antibacterianas e antitumorais, que so administradas ao paciente, sob
condies de toxicidade limitada. Tal toxicidade , frequentemente, inevitvel porque,
existem poucas vias metablicas crticas que so inerentes/particulares ao tumor, ao
vrus ou bactria. Assim, os frmacos que destroem estes organismos, frequentemente
mataro as clulas hospedeiras.
Uma caracterstica de que se pode tirar vantagem o tempo comparativamente mais
curto de gerao, dos organismos indesejveis. Eles so muito mais sensveis aos
antimetablitos e, em particular, queles que inibem as enzimas envolvidos na
replicao. Antimetablitos so compostos com alguma diferena estrutural do
substrato natural. Como exemplo temos:

1.e.i. SULFAS
A quimioterapia moderna teve o seu incio com compostos de frmula geral R-SO
2
-
NHR. A Sulfanilamida, o membro mais simples da classe, um agente anti-bacteriano
porque compete com o cido p-aminobenzico (PABA), que necessrio para o
crescimento bacteriano.

A bactria no pode absorver cido flico (uma vitamina essencial para o
hospedeiro), por isso deve sintetiz-la. Como a sulfanilamida um anlogo estrutural
do cido p-aminobenzico, a dihidropteroato sintetase bacteriana levada a fazer um
intermedirio contendo sulfanilamida, que no pode ser convertida a cido flico.
Assim, a bactria privada de cido flico necessrio para o crescimento e diviso.
Como o homem requer cido flico da dieta diria, a sulfanilamida no perigosa
nas doses que destroem a bactria.
Carlos Capela
1.e.ii. METOTREXATO
A biossntese de purinas, bases heterocclicas necessrias para a sntese de RNA e
DNA, requer cido flico, que serve como uma coenzima na transferncia de unidades
de carbono de vrios aminocidos dadores.
Metotrexato (cido 4-amino-N
10
-metil flico) um anlogo estrutural do cido
flico. O seu mecanismo de aco baseado na competio com o dihidrofolato (DHF)
pela dihidrofolato redutase. Este liga-se 1000 vezes mais fortemente que o substrato
natural e um potente inibidor competitivo da enzima. A sntese de TMP para na
presena de metotrexato devido falha na reaco de transferncia de um carbono (a
Timidilato sintetase particularmente sensvel presena de N
5
-N
10
-metileno-THF).
Como a diviso celular depende de TMP e de outros nucletidos, a clula no se pode
multiplicar.
Um problema que as clulas humanas que se dividem rapidamente, como as da
medula ssea e da mucosa intestinal, so sensveis droga pelas mesmas razes.
Tambm, o uso prolongado leva a uma amplificao do gene para a dihidrofolato
redutase, com nveis aumentados da enzima e crescimento preferencial de clulas
resistentes ao metotrexato.
Aminopterina (cido 4-amino flico) funciona de maneira similar ao metotrexato,
uma vez que estruturalmente anloga ao cido flico, inibindo, assim, a dihidrofolato
redutase.

Carlos Capela
2.CATABOLISMO DOS CIDOS NUCLEICOS
E NUCLETIDOS

2.a. Catabolismo dos cidos Nucleicos,
Nucletidos e Nuclesidos

As Nucleoprotenas so, primeiramente, cindidas por proteases em protenas e
cidos nucleicos. A digesto de cidos nucleicos e o seu catabolismo tecidular faz-se
por vias relativamente semelhantes.
O processo inicial a despolimerizao por nucleases em nucletidos. Estas so
ribonucleases ou desoxirribonucleases.
Os nucletidos resultantes so desfosforilados por nucleotidases. As nucleotidases
cindem os nucletidos formados por fosforlise, em pentose-1-fosfato e respectiva
base.

Carlos Capela
2.b. Catabolismo das bases pricas

O catabolismo das purinas leva no homem formao de cido rico.
O catabolismo faz-se por desaminao das bases pricas livres ou das bases
integradas em nucletidos ou nuclesidos, seguindo-se uma oxidao dos produtos
formados.

Por desaminao, os nucletidos de adenina origina a hipoxantina, enquanto os
nucletidos de guanina a xantina. A hipoxantina oxidada a xantina, e esta, pela
xantina oxidase, oxida-se a cido rico, um produto final exclusivo da degradao da
purina em seres humanos.
A xantina oxidase uma enzima que tem, como, coenzima, o FAD e contm ferro e
molibdnio, e requer oxignio como substrato.
Carlos Capela
Como o cido rico no muito solvel em meio aquoso, existem condies
clnicas nas quais nveis elevados de cido rico resultam em depsito de cristais de
urato de sdio, principalmente nas articulaes.
Na maior parte das espcies, o cido rico no o produto final da excreo do
metabolismo prico sendo descarboxilado oxidativamente em alantona pela aco da
uricase. Esta enzima encontra-se no fgado e rins dos mamferos mas no se encontra
no Homem e nos primatas.

Carlos Capela
2.c. Catabolismo das bases pirimdicas

O catabolismo das pirimidinas, que ocorre principalmente no fgado, leva a
produtos finais altamente solveis, o que contrasta com a produo a partir das purinas
de cido rico e de urato de sdio que so pouco solveis.
No que se refere citosina e uracilo, estes so catabolisados em -alanina, a qual
pode ser eliminada pela urina, incorporada no cido pantotnico ou catabolisada a cido
actico.
No que se refere timina esta catabolisada em cido -aminoisobutrico, que na
maior parte vai-se transformar em ureia, alm disso origina algum cido propinico.

Carlos Capela
3.DOENAS

3.a. Alteraes do metabolismo das purinas

Existem vrias doenas associadas a alteraes no metabolismo dos nucletidos de
purina entre as quais se destacam: a Gota, a sndrome de Lesh-Nyan e a
Imunodeficincia.

3.a.i. A GOTA
A Gota caracterizada pelos nveis elevados de cido rico no sangue e urina
devido a vrias anormalidades metablicas que levam produo aumentada de
nucletidos pricos pela via de novo. A maioria dos sintomas clnicos resulta da baixa
solubilidade do cido rico em ambientes aquosos. Cristais de urato de sdio
depositam-se nas articulaes (cartilagem e membranas sinoviais) e no tecido renal
intersticial.
Estudos de pacientes com gota demonstraram que uma heterogeneidade e
multiplicidade de defeitos so a causa da produo aumentada de cido rico. Em
alguns casos, os defeitos bioqumicos ainda no foram determinados.
Exemplos de defeitos bioqumicos que resultam numa sntese aumentada de
nucletidos incluem os seguintes:
1. Actividade aumentada da PRPP sintetase, que resulta num aumento dos
nveis intracelulares de PRPP. O PRPP, age como um efector alostrico positivo
da glutamina-PRPP amidotransferase, levando ao fluxo aumentado da via de
novo, uma vez que a actividade da etapa limitante acentuadamente aumentada;
2. Diminuio parcial da actividade da HGPRTase, tem duas vertentes com
respeito via de novo para a sntese de nucletidos de purina. Primeiro, como
h diminuio na recuperao de hipoxantina e guanina, o PRPP no
consumido na reaco catalisada pela HGPRTase. O PRPP pode activar a
glutamina-PRPP amidotransferase. Segundo, com a diminuio da recuperao
de hipoxantina e guanina, IMP e GMP no so formados por essa via, assim, a
regulao da etapa da glutamina-PRPP amidotransferase por IMP e GMP como
efectores alostricos negativos fica comprometida.
Carlos Capela
3. Deficincias da glicose-6-fosfatase. Em pacientes que tem deficincia de
glicose-6-fosfatase (doena de von Gierke e doena de armazenamento de
glicognio tipo I) tambm ocorre, frequentemente, hiperuricmia e gota. A
perda da actividade da glicose-6-fosfatase resulta na acumulao de glicose-6-
fosfato (principalmente nos hepatcitos), sendo posteriormente desviada para a
via das pentoses fosfato, no que resulta um aumento de ribose-5-fosfato e
consequentemente o nvel de PRPP intracelular aumentado. O PRPP um
efector alostrico positivo da glutamina-PRPP amidotransferase.

Estes exemplos demonstram que factores que aumentam a actividade da etapa
limitante na sntese de novo de nucletidos de purina levam a um aumento da sntese e
degradao a cido rico.
Existem diferentes abordagens para o tratamento da gota que incluem colchicina,
drogas anti-hiperuricmicas e alopurinol (um anlogo da hipoxantina). O alopurinol
um inibidor eficiente da xantina oxidase que o converte em oxipurinol, que, por sua
vez, se liga fortemente enzima inactivando-a, resultando uma diminuio dos nveis
de cido rico.

Em pacientes que no possuem deficincia na HGRTPase, o tratamento com
alopurinol inibe a xantina oxidase, aumentando, assim, as concentraes de hipoxantina
e xantina. Essas bases pricas so, ento, recuperadas para formar IMP e XMP. Estas
reaces consomem PRPP e geram inibidores da glutamina-PRPP amidotransferase. O
efeito global do alopurinol a diminuio quer da formao de cido rico quer da
sntese de novo de nucletidos de purina.

Carlos Capela
3.a.ii. A SNDROME DE LESCH-NYHAN
A sndrome de Lesch-Nyhan caracterizada clinicamente por hiperuricmia,
produo excessiva de cido rico e problemas neurolgicos, que podem incluir
espasticidade, retardo mental e auto-mutilao.
Esta doena est associada a uma deficincia severa ou total da actividade da
HGPRTase. O gene para a HGPRTase est no cromossoma X, assim, a deficincia
virtualmente limitada a homens, sendo as mulheres portadoras.
O papel da HGPRTase catalisar reaces nas quais hipoxantina e guanina so
convertidas a nucletidos. Assim, a hipoxantina e guanina no so recuperadas, levando
ao aumento intracelular de PRPP e diminuio dos nveis de IMP ou GMP. Ambos os
factores promovem a sntese de novo de nucletidos de purina, mas sem a regulao
apropriada da via.
Ainda no est compreendido porque que um defeito severo na via de recuperao
leva a problemas neurolgicos? Argumenta-se que os produtos da degradao das
purinas (hipoxantina, xantina e cido rico) podem no ser txicos para o sistema
nervoso central (SNC). No entanto, possvel que esses metablitos sejam txicos para
o SNC em desenvolvimento ou que a falta dessa enzima leve a um desequilbrio nas
concentraes de nucletidos de purina em pocas crticas de desenvolvimento. Se a
actividade da IMP desidrogenase no crebro fosse extremamente baixa, a falta de
HGPRTase poderia levar ao decrscimo dos nveis intracelulares de GTP devido ao
decrscimo da recuperao de guanina. Como o GTP percursor da tetrabiopterina, um
cofactor necessrio para a biossntese de neurotransmissores; e necessrio em outras
funes como a transduo de sinal atravs de protenas-G e na sntese proteica; baixos
nveis de GTP durante o desenvolvimento poderiam ser o factor desencadeador das
manifestaes neurolgicas observadas.
Tratamento de pacientes com alopurinol diminui a quantidade de cido rico
formado, aliviando alguns dos problemas causados pelos depsitos de urato de sdio.
Entretanto, como os pacientes com Lesch-Nyhan tem uma reduo acentuada na
actividade da HGPRTase, a hipoxantina e a guanina no so recuperadas, o PRPP no
consumido e, consequentemente a sntese de novo de nucletidos de purina no
interrompida. No existe tratamento para os problemas neurolgicos. Estes pacientes,
geralmente, morrem de insuficincia renal, resultante dos elevados depsitos de urato
de sdio.
Carlos Capela
3.a.iii. IMUNODEFICINCIA ASSOCIADA A DEFEITOS NA
DEGRADAO DE NUCLETIDOS DE PURINA
Duas doenas distintas com imunodeficincia so associadas a defeitos na
adenosina desaminase (ADA) e purina nuclesido fosforilase (PNP), respectivamente.
Estas enzimas esto envolvidas nas vias de degradao que levam formao de cido
rico. Adenosina e desoxiadenosina so os substratos para a ADA, enquanto os
substratos para a PNP so a inosina, guanosina, desoxiinosina e desoxiguanosina.
Uma deficincia da ADA associada a uma imunodeficincia severa combinada,
envolvendo as funes dos linfcitos T e B. Deficincia da PNP associada a uma
imunodeficincia envolvendo as funes dos linfcitos T, com poucos efeitos sobre as
funes dos linfcitos B. Em ambos os casos desconhece-se o mecanismo atravs do
qual a falta destas enzimas leva disfuno imunolgica. No entanto, em pacientes com
a falta de ADA, as concentraes intracelulares de dATP e S-Adenosil-Homocistena
esto grandemente aumentadas. Vrias hipteses foram levantadas para explicar as
consequncias bioqumicas da falta de ADA:
1. Altos nveis de dATP inibem a actividade da ribonucletido redutase e, como
consequncia inibem a sntese de DNA;
2. A desoxiadenosina inactiva a S-adenosil-homocistena hidrolase, levando
diminuio da quantidade de S-adenosilmetionina necessria para a metilao
de bases do RNA e do DNA;
3. Nveis aumentados de adenosina resultam num aumento de cAMP.

possvel que cada um destes mecanismos contribua para o efeito total sobre a
disfuno imunolgica. No entanto, no existe uma explicao adequada para a
especificidade dos efeitos somente sobre os linfcitos B e T.
Tratamento de crianas com deficincia de ADA, inclui transfuso de sangue,
transplantes de medula ssea, terapia de reposio da enzima com ADA-polietileno
glicol (ADA-PEG) e, mais recentemente, terapia genica.
Cada um dos tratamentos tem vantagens e desvantagens. Transfuses sanguneas
produzem problemas de excesso de ferro e segurana da fonte. Transplante da
medula ssea, embora seja curativo, requer um doador compatvel. A terapia com
reposio da enzima com ADA-PEG tem sido at ao momento o tratamento mais bem
sucedido, mas requer monitoriamento constante e injeces frequentes de ADA-PEG e
Carlos Capela
h um custo considervel envolvido. A terapia genica a esperana para o futuro,
consiste na transferncia do gene ADA para clulas com deficincia de ADA.

Carlos Capela
3.b. Alteraes do metabolismo das pirimidinas

Existem vrias doenas devidas a alteraes no metabolismo dos nucletidos de
pirimidina, entre os quais se destaca a Acidria Ortica Hereditria. Contudo, as
anormalidades clinicamente detectveis no so muito frequentes, ao contrrio do que
acontece com as purinas, pelo facto dos produtos de catabolismo serem muito
hidrossolveis.

3.b.i. ACIDRIA ORTICA HEREDITRIA
Resulta de um defeito na sntese de novo de nucletidos de pirimidina. Esta doena
gentica caracterizada por anemia severa, retardamento no crescimento e elevados
nveis de excreo de cido ortico. A base bioqumica para a acidria ortica um
defeito numa ou ambas actividades (orotato fosforribosiltransferase ou OMP
descarboxilase) associadas UMP sintetase, uma protena bifuncional. uma doena
muito rara (somente 15 pacientes so conhecidos), mas a compreenso das bases
metablicas dessa doena levaram a um tratamento bem sucedido. Os pacientes
recebem uridina, que leva no somente reverso do problema hematolgico, mas
tambm diminuio da formao de cido ortico. A uridina captada pelas clulas e
convertida, pela uridina fosfotransferase, a UMP, que convertido a UDP e, ento, a
UTP. O UTP formado a partir da uridina exgena, por sua vez, inibe a carbamil-fosfato
sintetase II, a principal etapa reguladora da via de novo. Como resultado, o cido
ortico produzido atravs da via de novo acentuadamente diminudo para nveis
essencialmente normais. UTP tambm substrato para a sntese de CTP. De facto, a
uridina exgena desvia o metabolismo da UMP sintetase deficiente e fornece, para as
clulas, UTP e CTP necessrios para a sntese de cidos nucleicos e outras funes
celulares.
O tratamento bem sucedido da acidria ortica hereditria com uridina fornece
dados, in vivo, sobre a importncia da etapa da Carbamil-fosfato sintetase II, como um
ponto de regulao da sntese de nucletidos de pirimidina no homem.

Carlos Capela
C. BIOSSNTESE DOS CIDOS
NUCLEICOS E TRANSFERNCIA
DA INFORMAO GENTICA.

1.REPLICAO DO DNA
O DNA genmico de cada clula contm em si a capacidade de se auto-replicar,
resultando a formao de 2 molculas filhas rigorosamente idnticas molcula
original.
De facto, a replicao do DNA corresponde copia integral de cada uma das
cadeias constituintes do genoma da clula original atravs da polimerizao ordenada
dos nucletidos em obedincia regra de complementaridade de bases que desta forma
conduz produo das 2 molculas filhas. A polimerizao d-se a partir dos quatro
percursores de DNA que so os nuclesidos trifosfato de desoxirribose.
A reaco de polimerizao dos percursores consiste no ataque nucleoflico do
fosfato ligado ao carbono 5 da respectiva pentose ao grupo hidroxilo em posio 3 do
nucletido imediatamente precedente, dando origem formao de ligaes
fosfodister que se vo estabelecendo sucessivamente entre os resduos que constituem
os elos da cadeia polinucleotdica. Em cada uma destas reaces libertado um grupo
pirofosfato formado por 2 fosfatos.
Esta reaco catalisada pelas DNA polimerases (enzimas de Kornberg) que,
embora variando entre si, apresentam diversas propriedades comuns, nomeadamente:
Utilizam como percursores desoxirribonuclesidos trifosfatados;
Dependem do io Mg
2+
para a sua actividade;
Necessitam de um molde de DNA;
Catalisam a polimerizao ordenada dos percursores, de forma sequencial e
unidireccional, j que a reaco se processa exclusivamente na direco 53.

Carlos Capela
A replicao um processo semi-conservativo, j que cada uma das novas
molculas resultantes deste processo constitudo por uma cadeia proveniente da
molcula original de DNA molde e por uma cadeia complementar e anti-paralela
neosintetizada.

A replicao inicia-se num nico stio bem definido da molcula, o stio de
iniciao da replicao, designado por origem. As 2 cadeias do DNA so copiadas em
paralelo e de forma simultnea, at ao ponto de terminao da replicao, tambm este
correspondendo a uma regio bem definida do genoma.
Na replicao ou duplicao distinguem-se 3 etapas: iniciao, elongao e
terminao.

1.a. Iniciao

Nos organismos superiores existem, em geral, mltiplos stios de iniciao da
replicao, ou origens, de modo que o DNA nuclear seja, completamente duplicado no
perodo correspondente fase de sntese do ciclo celular (6-8 horas). Cada unidade de
replicao designada por replico.

Carlos Capela
Existem protenas dotadas de grande afinidade para o DNA e especificidade para as
sequncias caractersticas de cada origem, que determinam a iniciao da replicao
sendo por isso designada por primers.
O primer um fragmento de RNA catalisado por uma RNA polimerase especfica,
designada por Primase. Este facto bastante lgico, j que o RNA pode ser sintetizado
sem um iniciador, enquanto a sntese do DNA o requer.
O primer de RNA e as molculas de protena da forquilha de replicao constituem
o primossoma.
A Girase e a Helicase so duas enzimas que abrem caminho. Estas 2 enzimas
preparam a molcula de DNA para a replicao:
A DNA-girase vai introduzir um ponto de toro logo adiante da progresso da
bifurcao. Trata-se de uma Topoisomerase estas enzimas, essenciais no
metabolismo do DNA, no necessitam de um factor para fornecer energia, o que
significa que a reaco intermediria conserva a energia da ligao fosfodister;
A Helicase, uma enzima que destabiliza a hlice por ruptura das pontes de
hidrognio, liga-se cadeia de DNA na forquilha de replicao, e promove o
desenrolamento custa de energia fornecida pelo ATP.
As regies monocatenrias expostas do DNA molde so estabilizadas por uma
protena especfica protena de ligao ao DNA ou binding protein. este
complexo (DNA monocatenrio e protena de ligao) que constitui o substrato para a
DNA polimerase.

Replico
Topoisomerase
Helicase
Binding proteins
DNA Polimerase
Ligase
Primossoma
Primase
Cadeia leading
Cadeia lagging
Carlos Capela
1.b. Elongao

A copia de DNA molde ento iniciada com a sntese de um fragmento de RNA
catalisada pela primase. O fragmento de RNA sintetizado vai ser o iniciador, sendo a
cadeia polinucleotdica sintetizada a partir do grupo 3 OH do ultimo ribonucletido do
primer, ao qual se vm ligar o resduo 5 fosfato do primeiro desoxirribonucletido da
cadeia de DNA que ser elongada por cpia do molde. Esta reaco catalisada pela
DNA polimerase que, nesta fase, desloca a primase do sistema. Aps o inicio da sntese
da cadeia de DNA, estas sequncias iniciadoras de RNA so removidas pela DNA
polimerase e substitudas por desoxirribonucletidos.
O processo d-se simultaneamente sobre as duas cadeias molde do DNA, afastadas
uma da outra. Uma dessas cadeias oferece um molde, cuja orientao 35 propcia
ao crescimento da neocadeia na direco 53 por polimerizao sequencial dos
nuclesidos trifosfato, denominando-se de cadeia leading ou condutora, por dirigir o
processo de replicao. Aqui a replicao contnua.
Na cadeia orientada 53, denominada cadeia lagging ou atrasada, o processo
de replicao mais complexo, uma vez que iniciado apenas mediada que essa
cadeia vai sendo libertada pelo prprio processo de cpia da cadeia condutora. Isto
deve-se ao facto da DNA polimerase actuar apenas em sentido 53. Assim a
replicao da cadeia atrasada resulta da adio de pequenos fragmentos sintetizados no
sentido 53, denominados fragmentos de Okazaki, em homenagem ao seu
descobridor. A cada fragmento de Okazaki corresponde um primer diferente que ser
depois removido e substitudo por DNA, por aco da DNA polimerase. Esta enzima
funciona como uma enzima de reparao das cadeias de DNA.
O crescimento simultneo das duas cadeias neosintetizadas vai, assim, progredindo,
obrigando o afastamento das duas cadeias de DNA molde, designando-se por forquilha
de replicao o ponto de progresso do fenmeno.

Carlos Capela

1.c. Terminao

A replicao da cadeia de DNA termina com a ligao do ltimo
desoxirribonuclesido trifosfato cadeia neosintetizada. A terminao, distinta da
reaco de condensao catalisada pelas DNA polimerases, catalisada por enzimas
designadas por DNA ligases.
importante ainda referir que esta terminao condicionada pelo factor , que
corresponde a um tripleto de bases, que d a informao de que a replicao est
concluda.

Carlos Capela
2.TRANSCRIO DO DNA
A concentrao de RNA celular est relacionada com a maior actividade metablica
do tecido em causa.
Os RNAs existem nas clulas exclusivamente como subprodutos directos dos genes.
Eles so sempre sintetizados por cpia de regies especficas e bem delimitadas do
DNA, que constitui o genoma de cada espcie, obedecendo a sua sntese ao princpio da
complementaridade de bases.
Este fenmeno, em que a informao contida em segmentos do DNA genmico
transferida para molculas da mesma natureza, que reflectem a prpria sequncia
nucleotdica dos genes designa-se por Transcrio. Este consiste essencialmente na
polimerizao orientada e sequencial dos percursores de RNA que so os nuclesidos
trifosfato de ribose.
A sequncia de ribonucletidos numa molcula de RNA complementar
sequncia de desoxirribonucletidos de uma das cadeias da molcula de DNA. A cadeia
que transcrita para a molcula de RNA denominada cadeia molde de DNA ou
cadeia -. A outra cadeia frequentemente referida como cadeia codificadora ou cadeia
+. Ela assim chamada porque apenas difere do RNA na medida em que neste a timina
substituda pelo uracilo.
A transcrio dos genes processa-se sob a aco de enzimas designadas por RNA
polimerases, dependentes do DNA, que catalisam a condensao orientada e sequencial
dos ribonucletidos por cpia da cadeia molde de DNA, baseada na complementaridade
estrutural das bases. A reaco ocorre entre o grupo 3 OH do resduo de ribose do 1
nuclesido trifosfato percursor e o grupo 5 fosfato do nuclesido trifosfato seguinte,
com a formao de uma ligao fosfodister, resultando no crescimento da cadeia de
RNA no sentido 53.
Existe uma grande diversidade de RNA polimerases, como as RNA polimerases I,
II e III, que so responsveis pela sntese dos rRNA, mRNA e tRNA, respectivamente.
Existem alguns vrus que podem fazer uma sntese em direco contrria
transcrio, ou seja, formar DNA a partir de RNA do hospedeiro. Este processo,
catalisado pela enzima transcriptase inversa designado por transcrio inversa.
Na transcrio existem 3 etapas distintas: iniciao, elongao e terminao.
Carlos Capela
2.a. Iniciao

A copia de cada gene iniciada pela RNA polimerase ao nvel do 1 nucletido que
ir ser copiado em RNA. designado por Nucletido
+1
(Nt
+1
).
A transcrio inicia-se em regies do DNA designadas promotores que so
reconhecidas pela RNA polimerase tendo esta enzima um papel fundamental no
desenvolvimento e abertura da cadeia de DNA. Estas regies promotoras tm
particularidades estruturais, verificando-se que, na maior parte dos casos, a mesma
sequncia de nucletidos est presente nos diversos genes sequncias de consenso.
Existem ainda factores de transcrio, nomeadamente o factor , que se liga s
regies promotoras e estimulam a ligao da RNA polimerase ao local promotor.
A iniciao da transcrio d-se efectivamente quando os dois primeiros
ribonuclesidos trifosfatados so posicionados e condensados entre si, sob a aco da
RNA polimerase.

2.b. Elongao

Esta etapa consiste na polimerizao sequencial de resduos ribonucletidos
ordenados segundo a sequncia de DNA molde, por complementaridade de bases. O
superenrolamento do DNA induzido pela abertura localizada resultante da RNA
polimerase resolvido, durante a elongao, atravs da aco de Topoisomerases.

2.c. Terminao

A terminao da sntese da molcula de RNA determinado por uma sequncia da
molcula de DNA, um sinal que reconhecido por uma protena de terminao, o
factor . Aps a terminao da sntese da molcula de RNA, a enzima separa-se da
cadeia molde.

Carlos Capela

2.d. Maturao do
m
RNA

A cadeia de RNA mensageiro neo-
sintetizada no pode ser considerada como
definitiva para a sntese de protenas
designando-se nesta fase de RNA pr-
mensageiro. Neste existem 2 tipos de
sequncias nucleotdicas:
Exes codificam aminocidos;
Intres intercalados entre os exes,
sem significado proteico.
Por um mecanismo designado por
splicing, realizado por uma grande complexo,
o spliceossoma, os intres so removidos por
aco das maturases, seguida da reparao
dos cortes pelas ligases.
As etapas de processamento do mRNA envolvem adio de um cap extremidade
5 e a poliadenilao da extremidade 3. Aps estas transformaes o mRNA
considerado maturo e pronto para a traduo.
RNA Polimerase
Hlice de DNA Promotor
Stop Sequncia
Iniciao
Terminao
Elongao
Adio de um cap
PoliAdenilao
RNA Splicing
RNA Mensageiro
maturado
exes
intres
spliceossomas
cauda poliA
Carlos Capela
3.TRADUO A SNTESE DE PROTENAS

3.a. Introduo

A biossntese de protenas tambm chamada traduo, uma vez que envolve a
traduo bioqumica da informao de uma linguagem de 4 letras e estrutura dos cidos
nucleicos numa linguagem de 20 letras e estrutura das protenas.
Em suma, a biossntese proteica resultado do processo de traduo da informao
contida no material gentico da clula; as protenas so, portanto, a expresso da
informao gentica.
O processo de traduo requer um Cdigo Gentico, atravs do qual a informao
contida numa sequncia de nucletidos de um cido nucleico expressa na forma de
uma sequncia especfica de aminocidos de um peptdo.
Uma alterao na sequncia original de nucletidos leva a uma alterao na
sequncia de aminocidos, potencialmente causando uma doena as vezes letal no
organismo.

Carlos Capela
3.b. O cdigo gentico

O cdigo gentico dos seres vivos, hoje conhecido, funciona como uma linguagem
baseada em 4 letras ou bases de nucletidos , que forma palavras de trs letras
que, dependendo da maneira como so agrupadas, formam as sentenas ou
peptdos.
Estas palavras de 3 letras so denominadas Codes, e so possveis 64 codes
diferentes.
Os codes so expressos na linguagem do mRNA, sempre no sentido 53, e cada
codo pode ser traduzido num aminocido especfico.
3 Codes sinalizam o trmino da sequncia polipeptdica, e so designados por
codes de terminao: UGA, AUG e UAA
O codo AUG codifica a Metionina e, a iniciao de uma cadeia polipeptdica,
sendo designado por codo de iniciao.
Podem ocorrer mutaes pontuais, em consequncia da alterao de uma das bases
de um codo, que podem levar a:
Mutao silenciosa Quando o codo alterado codifica o mesmo aminocido;
Mutao em missense Quando o codo alterado codifica um aminocido
diferente;
Mutao em nonsense Quando o codo alterado sinaliza o termino da
cadeia

3.b.i. CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO
Especificidade Um codo especfico codifica sempre o mesmo aminocido
Universalidade O cdigo gentico vlido para qualquer ser vivo, ou seja um
dado mRNA de uma espcie ao ser traduzido em clulas de outra espcie, iria
originar sempre a mesma protena. Contudo encontram-se na mitocndria
alguns codes que codificam aminocidos diferentes, quando comparados com
o cdigo gentico mitocondrial, devendo por esta razo dizer-se que o cdigo
gentico citoplasmtico universal.
Redundncia Um mesmo aminocido pode ter mais de um codo que o
codifica. Contudo um codo codifica sempre o mesmo aminocido, pelo que se
diz que o cdigo gentico no ambguo.
Carlos Capela
Linearidade A leitura do cdigo gentico feita sem sobreposies ou
pausas; se 1 ou 2 nucletidos so delectados, a leitura torna-se completamente
diferente a partir do ponto da deleo. Esta mutao denomina-se frameshift,
ou mutao localizada.

Carlos Capela
3.c. Componentes necessrios traduo

So vrios, entre eles:

3.c.i. OS AMINOCIDOS:
Devem estar presentes todos os 20 aminocidos proteicos comuns no momento da
sntese, inclusive os essenciais.

3.c.ii. O RNA DE TRANSFERNCIA:
So as molculas bilingues do processo, e esto ligadas de forma especfica aos
aminocidos nas suas extremidades 3.
Possuem o anticodo ou a sequncia de bases complementar e anti-paralela ao
codo do mRNA.
Cada aminocido pode ser transportado por mais de uma molcula de tRNA.
So em nmero de cerca de 50 tRNA no ser humano, para 64 codes diferentes.
A hiptese wobble, ou de oscilao, tenta explicar como um tRNA pode
reconhecer mais que um codo; nesta hiptese, o emparelhamento da primeira base do
anticodo (5) no necessariamente feita do modo tradicional. Assim, nesta posio, a
G pode emparelhar com a C ou U, e o U com a A ou G, por exemplo.

3.c.iii. O RNA MENSAGEIRO:
Produzido a partir de um molde de DNA no ncleo da clula, vai ao citosol para ser
traduzido numa sequncia polipeptdica
Traz a sequncia de codes que define o nmero e o posicionamento dos
aminocidos da cadeia polipeptdica
Cada molcula de mRNA corresponde quase sempre a uma cadeia polipeptdica
(monocistrnicos).

3.c.iv. RIBOSSOMAS:
So organitos formados por uma complexa associao entre protenas e RNA
Ribossmico, localizados no citosol na forma livre ou associados ao retculo
endoplasmtico, quando sintetizam protenas que sero exportadas da clula.
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So formados por 2 subunidades, uma maior e outra menor, cujas caractersticas so
expressas em termos de coeficientes de sedimentao, ou S (de Svedberg).
O ribossoma eucariota formado por uma subunidade 60S e outra 40S; o
procariota, por uma subunidade 50S e outra 30S.

Compem um ribossoma:
rRNA 3 molculas no procariota, 4 molculas no eucariota.
Protenas ribossmicas Desempenham vrias funes na traduo.
Stio A e P So locais de ligao para as molculas de tRNA, e estendem-
se por ambas as subunidades:
o Os stios A e P cobrem juntos dois codes vizinhos;
o Na traduo, o stio A de aminoacil ocupado pelo Aminoacil-tRNA
correspondente ao codo posicionado, e especifica o prximo
aminocido a ser adicionado cadeia peptdica em formao;
o O stio P de peptidil ocupado pelo Peptidil-tRNA, ligado cadeia
peptdica que est sendo sintetizada.

Carlos Capela
3.c.v. FACTORES PROTEICOS:
So factores de iniciao, elongao e libertao da cadeia polipeptdica que est
sendo sintetizada.

3.c.vi. FONTES DE ENERGIA
A adio de cada aminocido cadeia polipeptdica que est sendo sintetizada
utiliza 2 molculas de ATP e 2 de GTP como fonte de energia.
Outras molculas de ATP e GTP so necessrias nos processos de iniciao e
libertao da cadeia sintetizada.

Carlos Capela
3.d. Etapas da Biossntese Proteica:

3.d.i. ACTIVAO DOS AMINOCIDOS:
Refere-se ligao dos aminocidos ao(s) seu(s) tRNA especfico(s).
Esta ligao catalisada pelas Aminoacil-tRNA Sintetases, enzimas que
reconhecem os aminocidos e os seus tRNA especficos com grande especificidade.
A reaco ocorre em 2 etapas, e dependente de energia. Na primeira etapa, o
aminocido liga-se ao AMP, obtido a partir da hidrlise do ATP, com libertao de PPi.
Na segunda etapa, o AA-AMP liga-se extremidade 3 do tRNA, libertando o AMP e
energia.

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3.d.ii. INICIAO DA CADEIA:
Depende da presena da subunidade ribossomal 40S, do mRNA, do tRNA com o
anticodo de iniciao AUG (metionina), e de uma srie de protenas denominadas
factores de iniciao, ou eIF, no mnimo, em nmero de 9, nos eucariotas.
Etapas:
a) O eIF-2 liga-se especificamente com uma molcula de GTP e com o Met-
tRNAi;
b) A subunidade ribossomal 40S liga-se ao eIF-3, que a separa e a mantm
separada da subunidade 60S, que por sua vez se liga ao eIF-6, com o mesmo
propsito;
c) O complexo formado em (a) liga-se ao complexo 40S formado em (b), com a
ajuda de vrios outros factores de iniciao, e este novo complexo associa-se ao
mRNA complexo de pr-iniciao;
d) A associao do complexo de pr-iniciao com o factor de iniciao eIF-5 e
com a subunidade 60S do ribossoma d origem ao complexo de iniciao
propriamente dito. O GTP hidrolisado e os outros factores de iniciao so
libertados;
e) O complexo de iniciao , portanto, formado por um ribossoma 80S associado
aos eIF-5 e eIF-4, ao mRNA correctamente posicionado, e ao tRNA de
iniciao tambm posicionado no stio P, com o stio A vazio.

3.d.iii. ELONGAO DA CADEIA:
Depende dos factores de elongao e do complexo de iniciao
Etapas:
a) O Factor de Elongao eEF-1 dirige a seleco do tRNA correcto para o
posicionamento no local A do complexo de iniciao. Este posicionamento
depende ainda da hidrlise de 1 GTP, e ocorre com posterior libertao do eEF-
1;
b) H a formao da ligao peptdica entre os 2 aminocidos adjacentes;
c) A enzima peptidiltransferase, componente da subunidade ribossmica 60S, faz
a transferncia da metionina inicial do stio P para o aminocido do stio A,
formando um dipeptidil-tRNA;
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d) O ribossoma move-se s custas do GTP na direco 53 uma distncia de
3 nucletidos, com a ajuda do eEF-2, ou translocase, posicionando o pptido no
stio P e libertando o stio A para o posicionamento de um novo aminocido;
e) O tRNA livre libertado, e o processo repete-se at a traduo completa do
mRNA.

3.d.iv. TERMINAO DA CADEIA POLIPEPTDICA:
O aparecimento de um codo de terminao UAG, UGA ou UAA determina a
ligao de um Factor de Libertao, ou eRF, associado ao GTP.
Este factor de libertao determina a quebra da ligao entre o ltimo AA e seu
tRNA.
A dissociao do eRF do ribossoma depende da hidrlise do GTP.

Ribossoma
unidade pequena (40S)
Ribossoma
unidade grande (60S)
Aminocido
tRNA iniciador
Iniciao
Terminao
Elongao
Polipptido
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3.d.v. MODIFICAES PS-TRANSLACIONAIS
Vrias modificaes podem ser impostas cadeia polipeptdica aps a sua
biossntese. As principais modificaes so:
Reduo do Tamanho: Converso de protenas inactivas e zimognios nas suas
formas activas, por remoo de sequncias de aminocidos catalisadas por
endoproteases especficas.
Alteraes Covalentes: Fosforilao, glicosilao, hidroxilao, etc.
Algumas protenas so ainda endereadas a organelos.

Polipptidos
Polissoma
Ribossomas

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