Aula Prtica

Mtodos Instrumentais de Anlises

Professora:
Alunos:

Manaus/Amazonas.
Setembro/2014

INTRODUO
A espectrofotometria o mtodo de anlise ptico mais usado nas
investigaes biolgicas e fsico-qumicas. O espectrofotmetro um
instrumento que permite comparar a radiao absorvida ou transmitida por uma
soluo que contm uma quantidade desconhecida de soluto, e uma
quantidade conhecida da mesma substncia. Todas as substncias podem
absorver energia radiante, mesmo o vidro que parece completamente
transparente absorve comprimentos de ondas que pertencem ao espectro
visvel.
A espectrofotometria um mtodo analtico que baseia-se na interao
(absoro ou emisso) da matria com a energia radiante, ou seja, radiao
eletromagntica quando os eltrons se movimentam entre nveis energticos. A
absoro da radiao luminosa acontece nos comprimentos de onda entre o
ultravioleta e o infravermelho no espectro da radiao eletromagntica.
Um espectrofotmetro um aparelho que faz passar um feixe de luz
monocromtica atravs de uma soluo, e mede a quantidade de luz que foi
absorvida e a luz transmitida por essa soluo. Usando um prisma, o aparelho
separa a luz em feixes com diferentes comprimentos de onda. O
espectrofotmetro permite saber que quantidade de luz absorvida a cada
comprimento
de
onda.
As substncias tm diferentes padres de absoro, a espectrofotometria
permite identificar substncias com base no espectro da substancia. Permite
tambm quantific-las, uma vez que a quantidade de luz absorvida est
relacionada com a concentrao da substncia.

OBJETIVO
A aula prtica teve como principal objetivo demonstrar o uso do equipamento e
anlise do espectrofotmetro e o preparo das solues padro e a soluo
denominada como branco, ambas realizadas em laboratrio da aula do
presente estudo, e as comparaes de nanmetro com o comprimento de
onda.

METODOLOGIA
Os materiais utilizados foram: gua destilada, reagente de biureto, protenas
totais, duas cubetas, papel para limpeza de cubetas, amostras de solues de
cores diferentes e espectrofotmetro.
O procedimento realizado na aula foi fazer um tubo chamado de branco
contendo 1,5 mL de gua destilada e mais 2,5 mL de reagente de biureto.

Outro tubo denominado de padro contendo 0,5 mL de padro de protenas

totais mais 1 mL de gua destilada e mais 2,5 mL de reagente de biureto.
Aps observar uma mudana na colorao, os tubos foram agitados e
incubados, aps 15 minutos a 35C. Aps retirar da incubao a colorao o
tubo branco para o tubo padro foi bem visvel, aps essa etapa foi levado ao
espectrofotmetro e lido a absorbncia dos tubos, teste de comprimento de
onda, usando o branco em todas as medies.

RESULTADOS
Aps conhecer o espectrofotmetro e as solues preparadas, foi realizada a
limpeza das cubetas e colocado em duas outras cubetas os reagentes e
iniciado a leitura colocando o branco em todas as medies. As medies feitas
foram em nanmetros: 400, 450, 500 e 600, e comparado ao comprimento de
onda analisado pelo espectrofotmetro. Como ser demonstrado no grfico a
seguir:

comp. de onda

1.5

1.0

0.5

0.0
350

400

450

500

550

600

650

nm

CONCLUSO
O trabalho tornou possvel um maior aprendizado do funcionamento do
espectrofotmetro, alm da preparao de solues para leitura a partir de uma
soluo padro, e a soluo branca que lido a cada medio para no alterar
o resultado analisado, como tambm a diluio em nanmetros para se tornar
possvel a leitura no aparelho.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
SECA, Ana. Espectrofotometria. Disponvel em: <http://www.uac.pt>. Acesso
em: 23 Setembro. 2014.
EWING, Galen Wood. Mtodos Instrumentais de anlise qumica. So Paulo:
Editora Edgard Blucher, v.1, 1972.