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Dissertao
apresentada
ao
Instituto de Biocincias do Cmpus
de
Rio
Claro,
Universidade
Estadual Paulista, como parte dos
requisitos para obteno do ttulo
de Meste em Cincias Biolgicas Biologia Celular e Molecular.
Agosto - 2007
ii
Dissertao
apresentada
ao
Instituto de Biocincias do Cmpus
de
Rio
Claro,
Universidade
Estadual Paulista, como parte dos
requisitos para obteno do ttulo
de Meste em Cincias Biolgicas Biologia Celular e Molecular.
Agosto - 2007
iii
iv
AGRADECIMENTOS
Agradeo a Deus por me guiar e pela famlia que me deu. Aos meus pais
Osvaldo e Adlia e irms Cludia e Mrcia pelo amor, apoio e unio. minha
orientadora Carminda da Cruz Landim pela oportunidade de trabalharmos juntas mais
uma vez, pela seriedade profissional e por compartilhar seus conhecimentos, guiandome pelo caminho da pesquisa cientfica.
Agradeo aos tcnicos dos laboratrios de Histologia (Grson), de Microscopia
Eletrnica (Mnika e Antnio) e, especialmente ao Srgio do Biotrio por valiosas
informaes. Aos amigos de orientao Vagner, Thasa, Luciana, Fernanda e Bruno.
Aos amigos da minha turma de Biologia que tornam a vida em Rio Claro mais
prazerosa, especialmente ao Pablo pelas ajudas com computador e discusses
produtivas, ao Fbio (Morcego) que me auxiliou nas anlises estatsticas e ao Eduardo
por estar presente nos momentos-chave, sempre me apoiando.
Agradeo aos amigos de So Paulo (Deivis, Fernando, Luciana, Samantha e
Lorena) pelo apoio e amizade verdadeira.
Agradeo s amigas do peito Mirella, Juliana e Cintia pela convivncia divertida
e companheirismo e CAPES pelo suporte financeiro para a realizao deste trabalho.
NDICE
Pgina
INTRODUO GERAL..................................................................................................4
OBJETIVOS GERAIS....................................................................................................10
CAPTULO 1 - Anatomia e Morfometria das Glndulas Salivares Ceflicas de Apis
mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae) em Fmeas e Machos com
Diferentes Idades.............................................................................................................13
RESUMO.............................................................................................................13
ABSTRACT.........................................................................................................14
1. INTRODUO...................................................................................................15
2.
MATERIAL E MTODOS.................................................................................16
2.1. Material.........................................................................................................16
2.2. Mtodos.........................................................................................................17
2.2.1. Anatomia e Morfometria..............................................................17
2.2.2. Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)..............................18
3.
RESULTADOS...................................................................................................18
3.1. Anatomia......................................................................................................18
3.1.1. Microscopia de Luz (ML)............................................................18
3.1.2. Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)..............................20
3.2. Morfometria..................................................................................................21
3.2.1. Apis mellifera...............................................................................21
3.2.2. Scaptotrigona postica...................................................................21
4.
FIGURAS E TABELAS......................................................................................22
5.
DISCUSSO.......................................................................................................31
5.1. Anatomia......................................................................................................31
5.2. Morfometria..................................................................................................34
6.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS................................................................37
RESUMO.............................................................................................................42
ABSTRACT.........................................................................................................43
1. INTRODUO...................................................................................................44
2. MATERIAL E MTODOS.................................................................................45
2.1. Material.........................................................................................................45
2.2. Mtodos........................................................................................................45
2.2.1. Histologia (HE)............................................................................45
2.2.2. Histoqumica................................................................................46
2.2.2.1. Identificao de Protenas Pelo Mtodo de Colorao por
Azul de Bromofenol (PEARSE, 1960)............................................................................46
2.2.2.2. Identificao de lipdios Pelo Mtodo de Colorao por
Sudan Black e Azul do Nilo............................................................................................47
3. RESULTADOS...................................................................................................47
3.1. Histologia......................................................................................................47
3.1.1. Apis mellifera...............................................................................47
3.1.2. Scaptotrigona postica...................................................................48
3.2. Histoqumica.................................................................................................49
3.2.1. Identificao de Protenas Pelo Mtodo de Colorao por Azul de
Bromofenol (PEARSE, 1960).........................................................................................49
3.2.2. Identificao de Lipdios Pelos Corantes Sudan Black e Azul do
Nilo..................................................................................................................................49
4. FIGURAS............................................................................................................51
5. DISCUSSO.......................................................................................................58
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS................................................................68
CAPTULO 3 - Ultra-Estrutura das Glndulas Salivares Ceflicas de Operrias e
Rainhas de Apis mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae) em
Diferentes Fases da Vida.................................................................................................77
RESUMO.............................................................................................................77
ABSTRACT.........................................................................................................78
1. INTRODUO...................................................................................................78
2. MATERIAL E MTODOS.................................................................................80
2.1. Material.........................................................................................................80
2.2. Mtodos........................................................................................................80
3. RESULTADOS...................................................................................................81
3.1. Ductos e Bolsa Salivar..................................................................................81
3.2. Poro Secretora...........................................................................................82
3.2.1. Apis mellifera...............................................................................82
3.2.1.1. Caractersticas Comuns...................................................83
3.2.1.2. Caractersticas Particulares.............................................83
3.2.2. Scaptotrigona postica...................................................................84
4. FIGURAS............................................................................................................86
5. DISCUSSO.......................................................................................................97
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS..............................................................104
DISCUSSO E CONCLUSES FINAIS....................................................................110
PERSPECTIVAS FUTURAS.......................................................................................116
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS..........................................................................117
INTRODUO GERAL
10
OBJETIVOS GERAIS
11
Rainhas
de Apis mellifera
e Scaptotrigona
postica
13
RESUMO: Os insetos apresentam glndulas associadas aos apndices bucais, dos quais
recebem suas denominaes e constituem um sistema designado sistema salivar. As
glndulas labiais ou salivares fazem parte desse sistema e so estruturas pares
localizadas no trax dos insetos adultos. Nas abelhas da subfamlia Apinae, um par de
glndulas salivares tambm se desenvolve na cabea. Deste modo, as glndulas
salivares ceflicas constituem uma caracterstica exclusiva de algumas espcies de
abelhas. Estudou-se a anatomia, atravs de microscopia de luz e eletrnica de varredura,
e o grau de desenvolvimento da glndula salivar ceflica, atravs de morfometria, em
operrias, rainhas e machos, em diferentes idades, das espcies Apis mellifera e
Scaptotrigona postica. Os resultados mostram que as glndulas salivares ceflicas
encontram-se igualmente desenvolvidas nas fmeas de Apis mellifera e Scaptotrigona
postica e tambm nos machos maduros sexualmente desta ltima espcie. J nos
machos maduros de A. mellifera so vestigiais. Ocorre variao da morfologia dos
alvolos secretores e ductos conforme a espcie. Em ambas espcies, o
desenvolvimento da glndula progressivo, atingindo grau mximo nas operrias
campeiras e nas rainhas em postura. Nos machos de A. mellifera ocorre o inverso, a
glndula degenera com o passar da idade. Machos de S. postica apresentam
desenvolvimento glandular semelhante ao das operrias de sua espcie. A microscopia
eletrnica de varredura revelou que fmeas jovens apresentam alvolos e ductos
colapsados enquanto as mais velhas apresentam alvolos trgidos e, em A. mellifera,
ductos robustos. Em A. mellifera existem pontuaes na superfcie dos alvolos e
ductos, j perceptveis nas glndulas das operrias nutridoras e bem evidentes nas das
campeiras e rainhas em postura, tais estruturas correspondem a aberturas dos espaos
14
ABSTRACT: Insects present exocrine glands attached to mouthparts which take their
names and form a system designated salivary system. Adult insects labial or salivary
glands take part in this system and are structures paired located at torax. Apinae
subfamily bees have a pair salivary glands develop in head constituting exclusive
feature of some bees species. This work studied the anatomy of cephalic salivary glands
by ligth and varredure eletron microscopy, and development degree by morphometric
analises, in workers, queens and males of Apis mellifera and Scaptotrigona postica in
various ages. The results show the cephalic salivary glands are equally developed in
females of Apis mellifera, and females and sexually mature males of Scaptotrigona
postica. Mature males of A. mellifera exhibit vestigial glands. The head salivary glands
consist of alveolar secretory units and ducts. The morphology of alveoli and ducts vary
according to the species. In both species, the development of the gland is progressive,
reaching its maximum level in foragers and egg-laying queens. In A. mellifera males,
the inverse occurs, the gland degenerates as aging progresses. Gland development in S.
postica males is similar to that of workers of its species. Scanning electron microscopy
revealed collapsed alveoli and ducts in young females, while older ones exhibit turgid
alveoli and, in A. mellifera, robust ducts. In the latter, a punctured surface in alveoli and
ducts can be observed in glands of nurse bees, and better conspicuous in foragers and
egg-laying queens. These structures correspond to openings of intercellular spaces.
Statistical analysis confirmed significant differences (p0.05) in the area of alveoli of
glands of workers in different life stages of both species and between S. postica virgin
and egg-laying queens.
15
1. INTRODUO
16
2. MATERIAL E MTODOS
2.1. Material
17
2.2. Mtodos
18
que houve diferena significativa, aplicou-se o teste Tukey para verificar entre quais
grupos tal diferena ocorreu.
As glndulas salivares da cabea de 5 operrias em cada fase da vida (recmemergida, nutridora e campeira) e 4 rainhas virgens e 2 em postura de A. mellifera e S.
postica,
3. RESULTADOS
3.1. Anatomia
19
apontar cada uma dessas regies devido ao emaranhado formado pelos ductos e
alvolos. Os alvolos so esfricos ou ovais e os ductos assumem distribuio esparsada
em ambos os ramos. Os ductos que partem dos alvolos so pouco calibrosos.
As operrias recm-emergidas de S. postica possuem alvolos glandulares
murchos (Figura 2), enquanto que operrias campeiras e rainhas em postura os possuem
trgidos (Figura 1). Operrias nutridoras e rainhas virgens apresentam desenvolvimento
glandular intermedirio entre os indivduos jovens e velhos, ou seja, alguns alvolos j
encontram-se cheios de secreo (Figura 3).
Em A. mellifera os alvolos so predominantemente piriformes e formam uma
massa mais uniforme e compacta (Figura 4, 5 e 6), a qual se apia na parede lteroposterior da cabea e se divide em ramos sub e supra-cerebrais. Os ductos apresentamse mais calibrosos quando comparados com os da glndula salivar ceflica de S. postica.
Tal como para S. postica, operrias recm-emergidas de A. mellifera possuem
alvolos colapsados (Figura 4) que tornam-se progressivamente mais trgidos conforme
os indivduos envelhecem, atingindo grau mximo de desenvolvimento nas operrias
campeiras e rainhas em postura (6) e situao intermediria em nutridoras e rainhas
virgens (Figura 5).
Igualmente para ambas espcies, em cada glndula, os ductos que partem dos
alvolos so chamados de coletores e unem-se para formarem os ductos condutores.
Cada glndula possui 2 ductos condutores, um da poro supra-cerebral e outro da
poro sub-cerebral. Estes, ento, se fusionam e formam o ducto excretor da glndula.
Os ductos excretores, por sua vez, unem-se na regio mediana central da cabea aos
ductos excretores das glndulas torcicas para formarem a bolsa salivar da qual parte o
canal excretor final das glndulas torcicas e ceflicas, no caso de S. postica, ou com o
canal excretor comum das glndulas torcicas, no caso de A. mellifera. O canal excretor
final cilndrico, com aspecto mais calibroso em A. mellifera, e fino em S. postica.
Ento, em S. postica, no local de convergncia dos ductos excretores torcicos e
ceflicos, existe uma dilatao, denominada bolsa salivar ou reservatrio, da qual parte
o canal excretor final (Figura 1). Em A. mellifera, os ductos excretores da glndula
salivar torcica unem-se ainda no trax, de modo que formado um canal excretor
comum da poro glandular torcica. Este canal penetra na cabea atravs do formen
occipital e, ento, une-se aos ductos excretores de cada glndula salivar ceflica para
20
formar o canal excretor final. Neste caso, no se observa uma dilatao no local de
convergncia dos ductos.
Comparando-se as espcies, estas diferem ainda pela quantidade de alvolos, ou
seja, grau de desenvolvimento. Mesmo levando em conta a diferena de tamanho dos
indivduos das espcies estudadas, a glndula mais desenvolvida em A. mellifera. No
mais, o padro anatmico geral das glndulas das duas espcies bastante semelhante.
Machos recm-emergidos de S. postica no foram analisados, porm os maduros
possuem glndula desenvolvida como nas fmeas de sua espcie (Figura 7).
Convm observar que a glndula, em machos recm-emergidos de A. mellifera
(Figura 8), envolvida por clulas do corpo gorduroso e nos maduros, alm disso,
sofreu regresso, de modo que na disseco possvel visualizar apenas os ductos que a
formavam.
21
3.2. Morfometria
22
_______________Figuras e Tabelas
23
24
bs
a
du
def
du
dt
du
a
100m
40m
20 m
a
20 m
a
a
a
du
20 m
du
du
a a du
du
20 m
20 m
du
cg
a
du
20 m
10
20 m
11
40m
12
a
du
40 m
13
15
14
a
20 m
40 m
tr
tr
du
a
tr
tr
du
40 m
20 m
40 m
25
Soma de
quadrados
G.L.*
Mdia
quadrtica
Razo F
ID$
2.125
1.062
7.402
0.001
GL(I
D$)
7.905
27
0.293
2.040
0.002
Erro
38.753
270
0.144
Recm-emergidas
(1)
9.873780
Recm-emergidas
(1)
Nutridoras
(2)
.296688
Campeiras
(3)
.076601
Nutridoras (2)
9.790370
Campeiras (3)
9.995360
.296688
.076601
.000759
.000759
26
Figura 16 Grfico das mdias alveolares em diferentes fases da vida de operrias de Apis mellifera.
10.5
10.3
10.1
9.9
9.7
9.5
9.3
Recm-emergida
Nutridora
Operrias
Campeira
27
Tabela 3 - Anlise de varincia (ANOVA) das reas alveolares das glndulas salivares
ceflicas de rainhas virgens e em postura de Apis mellifera. No houve diferena
significativa (p>0,05) entre os grupos.
Fonte
Soma de
quadrados
G.L.*
Mdia
quadrtica
Razo-F
ID$
0.031
0.031
0.244
0.623
Erro
13.718
108
0.127
Figura 17- Grfico das mdias alveolares em diferentes fases da vida de rainhas
de Apis mellifera.
28
Soma dos
quadrados
G.L.*
Mdia
quadrtica
Razo-F
ID$
60.424
30.212
404.780
0.000
GL(I
D$)
14.827
27
0.549
7.357
0.000
Erro
20.152
270
0.075
Recm-emergida
(1)
7.364160
Recm-emergida
{1}
Nutridora {2}
.000022
Campeira {3}
.000022
Nutridora (2)
8.044490
Campeira (3)
8.452050
.000022
.000022
.000022
.000022
29
Figura 18 - Grfico das mdias alveolares em diferentes fases da vida de operrias de Scaptotrigona
postica.
9.2
8.8
8.4
8.0
7.6
7.2
6.8
Recm-emergida
Nutridora
Operrias
Campeira
30
Soma dos
quadrados
G.L.*
Mdia
quadrtica
Razo-F
ID$
44.121
44.121
546.624
0.000
GL(I
D$)
1.091
0.156
1.932
0.075
Error
6.538
81
0.081
31
5. DISCUSSO
5.1. Anatomia
32
fuso, perde a regularidade da estrutura cuticular com reforos em espiral e reorganizase novamente no canal excretor final, que vai para o premento, e nos ductos condutores
das glndulas salivares da cabea. No presente estudo verificou-se que em A. mellifera
no h desaparecimento da espiral cuticular que se apresenta com regularidade.
Em operrias de alguns Meliponina, a glndula salivar ceflica to
desenvolvida que ramos alcanam o trax e se entremeiam aos alvolos da poro
torcica, da qual diferem nitidamente, j que a poro secretora torcica tubular e a
ceflica formada por alvolos arredondados (CAVASIN-OLIVEIRA, 1995; CRUZLANDIM, 1967; GRAF, 1968; SILVA DE MORAES, 1978). Esta condio no
encontra paralelo no presente estudo, onde verifica-se que a poro secretora da
glndula em S. postica e A. mellifera limita-se cabea.
As glndulas de ambas espcies diferem quanto morfologia dos alvolos e
ductos. Em A. mellifera os alvolos so predominantemente piriformes e esto
arranjados de modo a formarem uma massa uniforme e compacta, e os ductos so
robustos. J em S. postica os alvolos so esfricos ou ovais e os ductos so finos e
assumem distribuio esparsada. Apesar das diferenas anatmicas, a atividade
glandular semelhante entre as operrias e rainhas das duas espcies e machos de S.
postica, nos quais a secreo se acumula nos alvolos conforme os indivduos
envelhecem, diferindo apenas em relao aos machos de A. mellifera, nos quais a
glndula sofre regresso.
Machos recm-emergidos de A. mellifera apresentam a glndula salivar ceflica
envolvida pelo corpo gorduroso e, medida que envelhecem, a visualizao dos ductos
e unidades secretoras torna-se mais difcil e, s vezes, no so encontrados, indicando
regresso. Os zanges de A. mellifera so designados para uma nica e importante
funo, a fecundao da rainha. Desde que o zango no realiza trabalhos na colnia e
alimentado pelas operrias, as estruturas relacionadas s tarefas, nos machos, so
reduzidas ou ausentes (WINSTON, 1987), como parece ser o caso da glndula salivar
ceflica. Interessante ressaltar que machos de S. postica apresentam atividade glandular
semelhante a das operrias de sua espcie e, segundo Nogueira-Neto (1997),
eventualmente desempenham tarefas na colnia. O mesmo raciocnio pode ser usado
para explicar a regresso da glndula nos machos de A. mellifera, os quais no realizam
nenhuma atividade na colnia e no se alimentam mais depois que a abandonam. Os
33
34
5.2. Morfometria
35
36
37
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
BERGMAN, P.; BERGSTRM, G. Scent marking, scent origin, and species specificity
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WINSTON, M.L. The Biology of the Honey Bee. London: Harvard University Press.
1987. 281p.
42
43
jovens. A partir dos resultados obtidos, algumas funes puderam ser sugeridas, tais
como: tratando-se de operrias, reconhecimento do indivduo ao voltar da coleta para a
colnia e auxiliar a coleta e manipulao de resinas vegetais (ambas espcies) e leos
florais (S. postica), marcao de trilha de cheiro (S. postica); nas rainhas, funo
feromonal de integrao dos membros da colnia (ambas espcies); e nos machos de S.
postica, atrao da fmea.
ABSTRACT: Eusocial bees present a variety exocrine glands disperse on body whose
products are used in tasks performance. Pairs of glands are attached at mouthparts in
whole insects and, in bees, main glands are attached to labium (labial or salivary
glands), mandibules (mandibular glands) and floor mouth cavity (hiphofaringeal
glands). Adult insects labial or salivary pair glands are located in torax. However
cephalic branchs develop in some bees species, composing the cephalic salivary glands
which are completely develop in some species of Apinae subfamily. The present work
studied the histology and histochemic of females and males cephalic salivary glands of
Apis mellifera and Scaptotrigona postica in different ages. The histology results showed
cephalic salivary glands differs between species. While cells of alveoli and ducts are
primarily cuboidal in workers and queens of A. mellifera, in workers of S. postica, cells
undergo of cuboidal to squamous with age and ducts invariably consist of squamous
cells. Newly emerged males of A. mellifera exhibit glands in developmental stages
similar to that of newly emerged workers of their species. However, as males become
sexually mature, the gland degenerates difficulting its localization. Nevertheless, old
males of S. postica present glands as developed as those of females of their species.
Histochemical techniques demonstrate no protein inclusions and indicated the secretion
of glands of workers and queens of both species were neutral lipids. The secretion
gradually accumulates in the lumen of alveoli, and as a result, foragers and egg-laying
queens exhibit more turgid alveoli that younger individuals. Our findings suggest some
possible roles for the gland: in workers, recognition of nestmates upon returning to the
colony from the filed and to aid collection and manipulation of resins (both species) and
floral oils (S. postica), scent marking (S. postica); in queens, pheromonal role in
44
integrating all members of the colony (both species); and in males of S. postica, female
attraction.
1. INTRODUO
as
glndulas
45
2. MATERIAL E MTODOS
2.1. Material
2.2. Mtodos
46
2.2.2. Histoqumica
47
3. RESULTADOS
3.1. Histologia
48
49
3.2. Histoqumica
A tcnica de azul de bromofenol s foi feita nas fmeas das duas espcies e no
revelou a presena de incluses proticas nas clulas corando apenas o citoplasma de
maneira homognea.
Em A. mellifera, tornou mais evidente, em operrias e rainhas, as regies
intercelulares abertas observadas com a colorao por HE (Figura 2 e 4). Em alguns
casos, os citoplasmas das clulas alveolares so semelhantes aos das clulas do corpo
gorduroso (Figura 2).
Em S. postica, as clulas da bolsa so cbicas e reagem positivamente ao azul de
bromofenol (Figura 10).
50
51
_______________________Figuras
52
53
54
Figuras 7 a 12 Glndulas salivares ceflicas de Scaptotrigona postica. 7 (HE) Operria recm-emergida. Clulas alveolares (a) pouco coradas, com ncleos (setas)
homogneos ocupando quase todo o citoplasma. 8 (HE) - Operria nutridora e rainha
virgem. Alvolos (a) pouco corados em relao s clulas da glndula hipofarngea (hg).
Ncleos (seta) com regies de cromatina condensada. Ductos (du) formados por clulas
escamosas e com espiralizaes no cutcula. 9 (HE) Operria campeira. Clulas
alveolares (a) com ncleos basais (seta) homogneos. Citoplasma basal pouco corado e
apical acidfilo. As clulas da bolsa salivar (bs) so acidfilas e ncleos pequenos e
homogneos. 10 (Azul de Bromofenol) Operria nutridora. A bolsa salivar (bs) reage
positivamente ao corante, enquanto as clulas alveolares (a) e seus ncleos (setas)
coram-se fracamente. 11 e 12 (Montagem Total - Azul do Nilo) Operria recmemergida (11) e nutridora e rainha virgem (12). Notar que os alvolos (a) coram-se
inespecificamente, mas a pouca secreo presente (Figura 11, seta), em operria recmemergida, em rosa. Na figura 12, detalhe de um alvolo (a) contendo secreo corada
em rosa. cg = corpo gorduroso; du = ducto; l = luz.
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56
57
58
5. DISCUSSO
59
60
61
(BARBIER;
LEDERER,
1960;
CALLOW;
JOHNSTON,
1960).
62
lhe atribuiu a funo de lubrificao das peas bucais. Segundo Cruz-Landim (1994), a
ocorrncia das glndulas excrinas nos insetos determinada geneticamente e, em
muitos casos, a sua morfologia e funo podem ser consideradas como um carter
sexual secundrio ou, por analogia, como um carter casta secundrio. No entanto, essas
glndulas so muito plsticas, podendo ter a mesma origem, mas funes inteiramente
diferentes, ao longo da escala evolutiva, ou at ao longo da vida do indivduo, no s
quando se olha para os insetos em geral, mas quando se leva em conta apenas as
abelhas. A plasticidade das glndulas, seja de espcie para espcie, casta para casta,
indivduo para indivduo, implica imediatamente em plasticidade de comportamento
(CRUZ-LANDIM, 1994). Deste modo no descartamos a possibilidade da funo da
glndula salivar ceflica em operrias de A. mellifera e S. postica estar relacionada com
o manuseio da cera apenas porque algumas espcies de abelhas no a produzem ou
porque as rainhas no trabalham com ela, haja vista, novamente, a provvel funo em
P. emerina (BLOCHTEIN, 2006).
Alm disso, outras substncias podem ser mais facilmente manipuladas pelas
abelhas com auxlio dessa secreo. As abelhas forrageiras normalmente procuram por
produtos das plantas tais como ltex, prpolis (resinas), madeira podre, casca de
rvores, sumo de frutos, sementes, folhas, tricomas, fragrncias, plen, nctar, esporos,
entre outros (ARMBRUSTER; WEBSTER, 1979). A prpolis a resina das plantas,
coletada pelas abelhas para uso no ninho como vedao de frestas e na construo
(SCHMIDT, 1997). As resinas quando secretadas so lquidas, mas ento endurecem.
Elas so coletadas pelas abelhas enquanto esto maleveis/flexveis ou ainda na forma
lquida (ARMBRUSTER; WEBSTER, 1979; GHISALBERTI, 1979). Estes compostos
so pobremente solveis em gua (ROUBIK, 1992; SCHMIDT, 1997) e segundo
Blochtein (2006) a resina coletada pelas abelhas um composto solvel em leo e,
portanto, a secreo lipdica da glndula salivar ceflica de A. mellifera e S. postica
pode auxiliar na coleta e manipulao da mesma.
As resinas secretadas pelos ramos das plantas e as resinas florais por semanas
no endurecem e podem, deste modo, ser coletadas pelas abelhas, bem como reusadas
dentro do ninho, por vrias vezes (ROUBIK, 1992). As resinas florais encontram-se
normalmente na forma de leos e so secretados por pequenas estruturas glandulares
chamadas olaiforos, visitadas, at onde se sabe, exclusivamente por abelhas
63
64
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6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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77
78
PALAVRAS-CHAVE:
abelha,
glndula
labial,
mitocndria,
hidrocarbonetos,
feromnio.
ABSTRACT: Adult insects have a pair of salivary glands located in torax. Exclusively
some bees species present a pair of salivary glands develop in head, denominated
cephalic salivary glands. As exocrine glands, these structures consist of secretory units
and ducts. Furthermore, there is a salivary pouch where ducts from the thoracic and
cephalic salivary glands converge in Bombina and Meliponina. The cephalic salivary
glands of workers and queens in different life stages of Apis mellifera and
Scaptotrigona postica were examined using routine techniques for transmission electron
microscopy (TEM). The TEM showed ducts and salivary pouch cells present
invaginations of the basal plasma membrane reach the apical region and contain
electron-dense materials, with the same electron density of the basal lamina and some
regions of the cuticle. The intercellular spaces also contain materials of similar electrondensity, suggesting they are being absorbed from the hemolymph directly into the gland
lumen. Alveolar cells are rich in smooth endoplasmic reticulum, mitochondria, Golgi,
and vesicles containing lamellar material, typical of lipid inclusions. In S. postica, cells
contain large quantities of polyribosomes and become squamous with age, which does
not occur in A. mellifera, whose cells remain cuboidal. Mitochondria undergo changes
characterized by collapse of the internal membrane and decreased electron density of
the matrix. This organelle is associated with secretion vesicles and when its internal
membrane was fragmented may become a lipid deposit. A possible role of the secretion
is discussed for workers as well as queens, taking into account the changes in gland
characteristics in these castes and their function in the colony.
1. INTRODUO
79
O par ceflico
80
2. MATERIAL E MTODOS
2.1. Material
Neste estudo foram utilizadas operrias e rainhas em diferentes fases da vida das
espcies eussociais Apis mellifera e Scaptotrigona postica. Operrias jovens (recmemergidas), de meia idade (nutridoras) e velhas (campeiras) foram coletadas
desempenhando essas etapas da diviso de trabalho, enquanto as rainhas foram
coletadas da colnia ou, quando se tratou de rainhas virgens de A. mellifera, algumas
foram criadas artificialmente.
2.2. Mtodos
81
3. RESULTADOS
82
cutcula que reveste o ducto espessa e a secreo fica a ela aderida, ocupando grande
poro do lmen (Figura 2). J a luz da bolsa salivar de S. postica e dos ductos de A.
mellifera so revestidas por uma cutcula pouco espessa, de mdia densidade eletrnica,
mas que contm regies eletron-densas correspondentes a espessamentos (Figura 1).
A membrana plasmtica apical apresenta muitas invaginaes, muitas vezes
formando projees semelhantes a microvilosidades irregulares, projetando-se para um
espao subcuticular. Na base dessas invaginaes notam-se muitas vesculas claras,
resultantes de endocitose (Figuras 3 e 4). A membrana plasmtica basal apresenta
muitas invaginaes dilatadas na base e que s vezes formam alas e so preenchidas
por material com a mesma eletron-densidade da lmina basal. Os espaos intercelulares
so ligeiramente alargados e preenchidos pelo mesmo material eletron-denso,
semelhante lmina basal (Figuras 1, 3 e 4), a qual muito espessa. Estas invaginaes
nas suas extremidades do origem a pequenas vesculas com o mesmo contedo eletrondenso. A membrana plasmtica intercelular muito sinuosa, principalmente nos dois
teros apicais, onde o espao intercelular estreito e quase no contm material eletrondenso (Figura 4).
O citoplasma das clulas da bolsa salivar e dos ductos contm retculo
endoplasmtico liso, mas pobre em organelas. As mitocndrias distribuem-se por todo
citoplasma, mas so encontradas principalmente acompanhando as reentrncias
formadas pelas invaginaes da membrana plasmtica basal. Possuem formatos
irregulares e tamanhos variados, algumas com cristas desorganizadas (Figura 4).
83
A superfcie apical das clulas secretoras coberta por uma cutcula pouco
espessa, indicando que esta pouco especializada (Figuras 5 e 12).
Invaginaes da membrana plasmtica basal adentram o citoplasma formando
canais estreitos os quais contm material com mesma densidade eletrnica da lmina
basal, a qual aqui fina, e formam alas que parecem, no corte, envolver pores do
citoplasma (Figuras 6 e 7). Os espaos intercelulares so abertos basalmente e
preenchidos pelo mesmo material eletron-denso da lmina basal. Traqueolas penetram
pelas invaginaes da membrana plasmtica at certa profundidade do citoplasma
(Figura 6).
O retculo endoplasmtico liso (REL) bem desenvolvido nestas clulas
glandulares e pode apresentar-se sob a forma de tbulos ou de pequenas vesculas.
comum encontrar vesculas achatadas do REL acompanhando as membranas de
separao das clulas, as quais tambm contm material eletron-denso. Nesta regio o
REL forma-se por fragmentao das invaginaes da membrana plasmtica basal, as
quais constituem um verdadeiro labirinto basal (Figura 7).
O retculo endoplasmtico rugoso (RER) pouco desenvolvido, porm o
aparelho de Golgi comum e aparece como pequenos agrupamentos de lamelas
dilatadas eletron-transparentes que lhe do aspecto vesicular (Figuras 6 e 8). Esto
presentes vrios destes agrupamentos por clula (Figura 8).
As mitocndrias tm localizao preferencial basal, so alongadas, com matriz
eletron-densa e cristas paralelas ao comprimento (Figura 6). As clulas glandulares
apresentam ncleo grande ocupando a regio central da clula. O ncleo pode
apresentar mais de um nuclolo, sendo que, em alguns casos, possvel identificar as
regies fibrilar e granular que o compe (Figura 5). A regio fibrilar ocupa a poro
central do nuclolo enquanto a granular distribui-se ao redor da fibrilar. Regies de
eucromatina entremeiam os nuclolos.
84
85
86
_______________________Figuras
87
88
89
Figuras 5 a 8 Poro secretora da glndula salivar ceflica de Apis mellifera. 5 Aspecto geral da clula secretora, mostrando cutcula (c) apical pouco especializada,
mitocndrias (m), retculo endoplasmtico liso (rel) e grande ncleo (n) com cromatina
dispersa e nuclolos (nu) ativos, com regio granular perifrica (rg) e fibrilar central
(rf). 6 Poro basal de clula secretora da glndula, vendo-se a lmina basal (lb)
eletron-densa penetrando atravs de invaginaes (i) da membrana plasmtica, dos
contatos celulares (mi) e das invaginaes que levam as traqueolas (tr). Notar a
presena de Golgi (G), mitocndrias (m) alongadas com cristas longitudinais e retculo
endoplasmtico liso (seta). 7 Labirinto basal formado por invaginaes da membrana
plasmtica (i). Notar o retculo endoplasmtico liso (seta) e a produo de vesculas (v)
endocticas que acompanham a membrana intercelular (mi). 8 Alteraes
mitocondriais associadas produo de secreo. Observa-se a diminuio da
quantidade de cristas e dilatao do espao intermembranoso (setas). Notar a presena
de vrios complexos de Golgi (G) vesiculares. lb = lmina basal; m = mitocndria; tr =
traqueola.
90
91
Figuras 9 a 12 Poro secretora das glndulas salivares ceflicas de Apis mellifera. 9 Clula secretora da glndula de operria campeira mostrando associao de
mitocndrias (m) e retculo endoplasmtico liso (rel) bem como grnulos (gr). 10 e 11
Modificaes das mitocndrias relacionadas produo da secreo. Notar em 10 a
associao de mitocndrias (m) com vesculas contendo material membranoso (vm) e
em 11 a aparente acumulao de secreo no interior de mitocndrias (setas). 12
Eliminao de secreo atravs da cutcula (c), no interior da qual forma bolhas (setas) e
seu acmulo (s) na luz (l). Notar invaginaes da membrana plasmtica apical (ia) e
acmulo preferencial de mitocndrias (m) nesta regio. m = mitocndria; n = ncleo; tr
= traqueola; ve = vesculas com contorno eletron-denso.
92
93
94
95
96
97
5. DISCUSSO
98
99
mellifera indicam que a secreo lipdica possa ter papel feromonal. A grande
quantidade de invaginaes da membrana plasmtica basal acompanhada pelo REL e
mitocndrias, e vacolos lipdicos basais nas fmeas de A. mellifera indicam transporte
de lipdios da hemolinfa para o interior da clula. Os lipdios que passam pelo interior
da clula podem ser modificados e adquirirem composio diferente daquela de quando
presentes na hemolinfa. No entanto, a existncia de espaos intercelulares abertos e de
material eletron-denso no seu interior, parecem indicar a possibilidade de pelo menos
parte dos lipdios da secreo dessas glndulas ter origem exgena e ser absorvida
diretamente da hemolinfa, conforme verificado nas glndulas de Dufour de rainhas de
Bombus terrestris (ABDALLA et al., 1999a,b; HEFETZ et al., 1996) e A. mellifera
(KATZAV-GOZANSKY et al., 2000)
As mitocndrias passam por alteraes relacionadas ao estgio em que se
encontram as clulas secretoras, o qual muda com a idade dos indivduos. Operrias
jovens de A. mellifera contm nas clulas secretoras muitas mitocndrias alongadas
eletron-densas, enquanto nas demais operrias e rainhas estas organelas aparecem,
predominantemente, com mdia ou baixa densidade eletrnica e, no raro, com cristas
fragmentadas. De acordo com Billen (1991) as glndulas que produzem lipdios nos
insetos so ricas em mitocndrias alongadas, cristas fragmentadas e baixa densidade
eletrnica da matriz. H muito se sabe que as mitocndrias esto envolvidas na
produo
de compostos
lipdicos.
Na
membrana externa
esto
localizadas
100
101
102
103
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110
111
Nas rainhas:
Nos machos:
112
113
encontrada nas glndulas mandibulares. Deste modo, a secreo da salivar ceflica tanto
pode exercer funo isolada na produo de trilha de cheiro ou seria um feromnio coadjutor com o da glndula mandibular.
Nas rainhas a funo feromonal sugerida a de integrao dos membros da
colnia e, em A. mellifera, em ao sinergstica com a secreo da glndula mandibular.
Machos de A. mellifera possuem a glndula to desenvolvida quanto as fmeas de sua
espcie enquanto jovens, porm ocorre regresso conforme envelhecem. Como houve
dificuldade no estudo das glndulas dos machos, pouco h para dizer, mas a sua
regresso nos machos adultos de A. mellifera encontra paralelo em Bombus
(Rhodobombus) mesomelas (TERZO et al., 2005) e poderia dever-se ao fato dos
indivduos fora da colnia no precisarem mais se identificar com a colnia de origem.
Machos de S. postica tambm no retornam colnia depois de maduros, porm sabe-se
que, mesmo que eventualmente, desempenham tarefas na colnia, enquanto nela se
encontram, podendo empregar a secreo em algumas dessas tarefas, o que justificaria a
permanncia da glndula. Alm disso, machos de vrias espcies de Bombus, os quais
tambm apresentam glndula salivar ceflica desenvolvida, usam a secreo para
atrao da fmea (GREN et al., 1979; BERGMAN; BERGSTRM, 1997;
KULLENBERG et al., 1973) e, desde que o sistema de acasalamento nos meliponneos
difere do de A. mellifera, possvel que nos machos de S. postica a secreo esteja
relacionada com a atrao da rainha para acasalamento.
A possibilidade da secreo da glndula nos machos servir em A. mellifera para
seu reconhecimento encontra suporte no fato de que conforme os machos vo
envelhecendo, as operrias deixam de aliment-los e comeam a expuls-los da colnia
(FREE, 1980). Talvez eles deixem de ser reconhecidos pelas operrias, j que produzem
pouca ou nenhuma secreo ceflica, j que a glndula degenera. s vezes, quando
estes no abandonam a colnia as operrias chegam mat-los. No entanto, sabe-se que
as operrias os mantm na colnia caso estejam precisando de rainha fecundada, ou
seja, quando conveniente para a sobrevivncia da colnia, seno os expulsam (FREE,
1980). Por outro lado, tambm, pode ser que as operrias os expulsem porque, quando
elas deixam de aliment-los, eles passam a se alimentar nos potes de mel, ou seja, no
contribuem trabalhando e ainda desfalcam o suprimento alimentar. Portanto preciso
114
que se diga que outros fatores, que no a falta de reconhecimento podem causar sua
expulso.
A glndula salivar ceflica apresenta o mesmo padro anatmico e igualmente
desenvolvida nas fmeas das duas espcies estudadas, A. mellifera e S. postica, e nos
machos desta ltima, e desenvolve-se progressivamente com o passar da idade dos
indivduos, mas algumas diferenas podem ser apontadas:
- Nas operrias de A. mellifera a glndula parece ser funcional durante toda a
vida, enquanto em S. postica as clulas das operrias nutridoras e campeiras so to
achatadas e pobres de organelas que podem ser consideradas inativas. No entanto, em
ambos os casos os alvolos das campeiras apresentam-se cheios com secreo. Portanto,
enquanto em A. mellifera existe a possibilidade de que mesmo que parte da secreo
seja eliminada, os alvolos possam reabastecer-se, em S. postica parece que toda
secreo armazenada at a fase de nutridora e no eliminada at a fase de campeira.
- A passagem das clulas da forma cbica para achatada ocorre tambm nos
machos maduros de A. mellifera nos quais a glndula degenera corroborando que esta
morfologia celular incompatvel com a funo secretora.
- Em ambas as espcies a secreo produzida pelos alvolos de natureza
lipdica.
- Em A. mellifera espaos intercelulares observados ao microscpio de luz
tornam-se evidentes ao microscpio eletrnico de varredura, onde aparecem como poros
na superfcie dos alvolos e ductos, e ao de transmisso correspondem ao alargamento
dos espaos intercelulares na poro basal. Estas aberturas j observadas em outros
tipos de glndulas que tm secreo de natureza lipdica indicam a possibilidade de
absoro de parte do material que compe o produto glandular diretamente da
hemolinfa. Fenmeno desse tipo foi observado na glndula de Dufour (ABDALLA;
CRUZ-LANDIM, 2001, 2005), de cera (GUERINO; CRUZ-LANDIM, 2003) e nos
dutos da glndula salivar (MEIRELLES et al., 2001).
- A anlise ultra-estrutural revelou aparato sinttico tpico de clula produtora de
lipdios, portanto mostrando tratar-se realmente de uma estrutura glandular e no apenas
excretora como seria o caso se todos os lipdios deixassem de ser processados e fossem
eliminados como encontrados na hemolinfa. A ultra-estrutura confirma a passagem de
material eletron-denso pelos espaos intercelulares, mas tambm sua entrada nas clulas
115
116
PERSPECTIVAS FUTURAS
Apesar da glndula salivar ceflica das abelhas j vir sendo estudada h algum
tempo, a sua funo permanece pouco conhecida nas diferentes classes de indivduos
que compem a colnia e entre as vrias espcies.
Do ponto de vista da atividade secretora das clulas, anlises citoqumicas
durante o ciclo celular e a determinao da composio da secreo ao longo da vida de
operrias, rainhas e machos podero elucidar com maior clareza a origem e natureza dos
compostos presentes na secreo e apontar para suas possveis funes durante a vida
desses indivduos.
Uma ateno maior deve ser dada aos machos e rainhas de ambas as espcies
para tentar desvendar o comportamento da glndula nesses indivduos e suas possveis
funes este aspecto apresenta relevncia frente a plasticidade secretora j demonstrada
para outras glndulas excrinas das abelhas.
A maioria das funes aqui sugeridas para a glndula ceflica em S. postica e A.
mellifera necessitam comprovao atravs de determinao da composio qumica da
secreo, estudos comportamentais e bioensaios. Anlises qumicas dos hidrocarbonetos
de superfcie so necessrias para dar suporte sugesto de que a secreo possa ser
espalhada pelo corpo e venha a servir para reconhecimento, individual, colonial ou
ambos.
117
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