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PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM BIOLOGIA

CELULAR E MOLECULAR (CINCIAS BIOLGICAS)

ANATOMIA, HISTOLOGIA, HISTOQUMICA E ULTRAESTRUTURA DAS GLNDULAS SALIVARES


CEFLICAS DE ABELHAS EUSSOCIAIS
(HYMENOPTERA, APIDAE)

SILVANA BEANI POIANI

Dissertao
apresentada
ao
Instituto de Biocincias do Cmpus
de
Rio
Claro,
Universidade
Estadual Paulista, como parte dos
requisitos para obteno do ttulo
de Meste em Cincias Biolgicas Biologia Celular e Molecular.

Agosto - 2007

ii

ANATOMIA, HISTOLOGIA, HISTOQUMICA E ULTRAESTRUTURA DAS GLNDULAS SALIVARES


CEFLICAS DE ABELHAS EUSSOCIAIS
(HYMENOPTERA, APIDAE)

SILVANA BEANI POIANI

Orientadora: Carminda da Cruz Landim

Dissertao
apresentada
ao
Instituto de Biocincias do Cmpus
de
Rio
Claro,
Universidade
Estadual Paulista, como parte dos
requisitos para obteno do ttulo
de Meste em Cincias Biolgicas Biologia Celular e Molecular.

Agosto - 2007

iii

A toda minha famlia:


Pais, irms, avs, tios e primos
Dedico.

iv

AGRADECIMENTOS

Agradeo a Deus por me guiar e pela famlia que me deu. Aos meus pais
Osvaldo e Adlia e irms Cludia e Mrcia pelo amor, apoio e unio. minha
orientadora Carminda da Cruz Landim pela oportunidade de trabalharmos juntas mais
uma vez, pela seriedade profissional e por compartilhar seus conhecimentos, guiandome pelo caminho da pesquisa cientfica.
Agradeo aos tcnicos dos laboratrios de Histologia (Grson), de Microscopia
Eletrnica (Mnika e Antnio) e, especialmente ao Srgio do Biotrio por valiosas
informaes. Aos amigos de orientao Vagner, Thasa, Luciana, Fernanda e Bruno.
Aos amigos da minha turma de Biologia que tornam a vida em Rio Claro mais
prazerosa, especialmente ao Pablo pelas ajudas com computador e discusses
produtivas, ao Fbio (Morcego) que me auxiliou nas anlises estatsticas e ao Eduardo
por estar presente nos momentos-chave, sempre me apoiando.
Agradeo aos amigos de So Paulo (Deivis, Fernando, Luciana, Samantha e
Lorena) pelo apoio e amizade verdadeira.
Agradeo s amigas do peito Mirella, Juliana e Cintia pela convivncia divertida
e companheirismo e CAPES pelo suporte financeiro para a realizao deste trabalho.

NDICE

Pgina

INTRODUO GERAL..................................................................................................4
OBJETIVOS GERAIS....................................................................................................10
CAPTULO 1 - Anatomia e Morfometria das Glndulas Salivares Ceflicas de Apis
mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae) em Fmeas e Machos com
Diferentes Idades.............................................................................................................13
RESUMO.............................................................................................................13
ABSTRACT.........................................................................................................14
1. INTRODUO...................................................................................................15
2.

MATERIAL E MTODOS.................................................................................16
2.1. Material.........................................................................................................16
2.2. Mtodos.........................................................................................................17
2.2.1. Anatomia e Morfometria..............................................................17
2.2.2. Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)..............................18

3.

RESULTADOS...................................................................................................18
3.1. Anatomia......................................................................................................18
3.1.1. Microscopia de Luz (ML)............................................................18
3.1.2. Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)..............................20
3.2. Morfometria..................................................................................................21
3.2.1. Apis mellifera...............................................................................21
3.2.2. Scaptotrigona postica...................................................................21

4.

FIGURAS E TABELAS......................................................................................22

5.

DISCUSSO.......................................................................................................31
5.1. Anatomia......................................................................................................31
5.2. Morfometria..................................................................................................34

6.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS................................................................37

CAPTULO 2 - Histologia e Histoqumica das Glndulas Salivares da Cabea de Duas


Espcies de Abelhas Eussociais, Apis mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera,
Apidae)............................................................................................................................42

RESUMO.............................................................................................................42
ABSTRACT.........................................................................................................43
1. INTRODUO...................................................................................................44
2. MATERIAL E MTODOS.................................................................................45
2.1. Material.........................................................................................................45
2.2. Mtodos........................................................................................................45
2.2.1. Histologia (HE)............................................................................45
2.2.2. Histoqumica................................................................................46
2.2.2.1. Identificao de Protenas Pelo Mtodo de Colorao por
Azul de Bromofenol (PEARSE, 1960)............................................................................46
2.2.2.2. Identificao de lipdios Pelo Mtodo de Colorao por
Sudan Black e Azul do Nilo............................................................................................47
3. RESULTADOS...................................................................................................47
3.1. Histologia......................................................................................................47
3.1.1. Apis mellifera...............................................................................47
3.1.2. Scaptotrigona postica...................................................................48
3.2. Histoqumica.................................................................................................49
3.2.1. Identificao de Protenas Pelo Mtodo de Colorao por Azul de
Bromofenol (PEARSE, 1960).........................................................................................49
3.2.2. Identificao de Lipdios Pelos Corantes Sudan Black e Azul do
Nilo..................................................................................................................................49
4. FIGURAS............................................................................................................51
5. DISCUSSO.......................................................................................................58
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS................................................................68
CAPTULO 3 - Ultra-Estrutura das Glndulas Salivares Ceflicas de Operrias e
Rainhas de Apis mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae) em
Diferentes Fases da Vida.................................................................................................77
RESUMO.............................................................................................................77
ABSTRACT.........................................................................................................78

1. INTRODUO...................................................................................................78
2. MATERIAL E MTODOS.................................................................................80
2.1. Material.........................................................................................................80
2.2. Mtodos........................................................................................................80
3. RESULTADOS...................................................................................................81
3.1. Ductos e Bolsa Salivar..................................................................................81
3.2. Poro Secretora...........................................................................................82
3.2.1. Apis mellifera...............................................................................82
3.2.1.1. Caractersticas Comuns...................................................83
3.2.1.2. Caractersticas Particulares.............................................83
3.2.2. Scaptotrigona postica...................................................................84
4. FIGURAS............................................................................................................86
5. DISCUSSO.......................................................................................................97
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS..............................................................104
DISCUSSO E CONCLUSES FINAIS....................................................................110
PERSPECTIVAS FUTURAS.......................................................................................116
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS..........................................................................117

INTRODUO GERAL

As diferentes espcies de abelhas variam em tamanho, forma e hbitos. Contudo, a


grande maioria tem como fonte de energia o nctar ou leo e, de protena, o plen
(MICHENER, 1974). Existem trs espcies comprovadamente carnvoras (ROUBIK,
1992) e outras ainda so cleptobiticas, vivem s custas do roubo do nctar e plen
colhidos pelas espcies que visitam as flores. As abelhas que tm hbitos sociais mais
avanados pertencem subfamlia Apinae e, dentro da tribo Apini, as subtribos Apina,
Meliponina e Bombini so as que esto em um estgio social mais avanado e so as
chamadas abelhas eussociais (SILVEIRA et al., 2002). As caractersticas que definem
as abelhas eussociais so: a sobreposio de geraes, o cuidado com a prole e a diviso
do trabalho reprodutivo entre as fmeas. A grande maioria dos outros grupos de abelhas
tem hbitos solitrios ou so sociais primitivos (ROUBIK, 1992; WINSTON, 1987).
Apini a tribo da qual fazem parte as espcies do gnero Apis. A subtribo
Meliponina composta pelas abelhas cujo ferro atrofiado, entre as quais esto as
abelhas indgenas brasileiras sem ferro, tal como Scaptotrigona postica (SILVEIRA et
al., 2002).
As colnias das abelhas eussociais so formadas por trs tipos de indivduos
adultos: rainha, operrias e machos. Conforme a espcie tambm podem estar presentes
rainhas virgens. Alm dos adultos, tambm est presente a cria em vrias fases do
desenvolvimento.
As rainhas e as operrias constituem castas do sexo feminino, responsveis por
diferentes funes na colnia. As rainhas fecundadas so as principais responsveis pela

postura de ovos fecundados ou no, os quais do origem, respectivamente, s operrias


e aos machos, mantendo a populao das colnias. As operrias so responsveis pela
construo, abastecimento e manuteno da colnia, alm de dispensarem cuidados
cria e aos adultos, especialmente rainha.
O trabalho realizado pelas operrias obedece a uma seqncia determinada de
acordo com a idade (polietismo etrio), maturidade fisiolgica do indivduo e
necessidades da colnia. Tarefas realizadas dentro do ninho incluem o cuidado com a
cria, limpeza, construo e manipulao de alimento e, fora da colnia, coleta de
alimento, gua e resina. H tambm uma fase de guarda antes da fase de campeira
(FREE, 1980).
Os machos s esto presentes na colnia nas ocasies favorveis para reproduo,
so responsveis pela fecundao da rainha e, em Apis mellifera, pouca ou nenhuma
tarefa desempenham alm desta. Ao contrrio dos zanges de A. mellifera, os machos
dos meliponneos se alimentam nas flores, trabalham com o cerume (resina misturada
com cera), desidratam nctar, incubam clulas de cria, defendem o ninho e seguem
pistas de odor (IMPERATRIZ-FONSECA, 1973; KERR, 1951, 1990). Nogueira-Neto
(1997) de opinio que tais tarefas desempenhadas pelos machos devem ser eventuais,
j que no substituem as das operrias nas colnias.
As abelhas eussociais apresentam uma variedade de glndulas excrinas
distribudas por todo o corpo, cujos produtos so usados no desempenho de suas tarefas.
A cera na construo dos ninhos, a gelia real na alimentao da cria, feromnios no
controle da atividade de outros indivduos da mesma ou de outras colnias, defesa e
comunicao e tambm em processos fisiolgicos prprios como digesto e lubrificao
dos apndices articulados.
Todos insetos apresentam glndulas ligadas aos apndices bucais, as quais recebem
denominaes de acordo com o apndice a que esto conectadas. Nas abelhas adultas,
as principais destas glndulas esto ligadas ao lbio (glndulas labiais), s mandbulas
(glndulas mandibulares) e ao assoalho da cavidade bucal (glndulas hipofarngeas).
Todas estas glndulas fazem parte de um sistema designado sistema salivar, apesar de
apresentarem funes diversificadas, muitas vezes com pequena ou nenhuma relao
com a ingesto ou digesto de alimento.

Nas abelhas adultas, as glndulas labiais descarregam sua secreo no premento da


glossa estando, portanto, em condio de misturar seus produtos ao alimento ingerido.
Seja por este motivo, ou porque so homlogas das glndulas salivares dos outros
insetos, ou ainda porque se originam das glndulas salivares larvais, elas so
consideradas as glndulas salivares propriamente ditas (CRUZ-LANDIM, 1967; SILVA
DE MORAES, 2002; SNODGRASS, 1956).
Em todos os insetos, um par de glndulas salivares est localizado no trax e seus
ductos penetram na cabea onde se unem em um nico ducto excretor comum que se
abre entre a base da hipofaringe e o premento do lbio. A funo dessas glndulas
muito variada dependendo da dieta do inseto, de modo que impossvel atribuir-lhe
nome funcional consistente, mas, embriologicamente, so glndulas labiais porque se
desenvolvem como invaginaes ectodrmicas do segmento labial da cabea (CRUZLANDIM; MELLO, 1967; SNODGRASS, 1956).
Nas abelhas eussociais da subfamlia Apinae, pertencentes s subtribos Euglossina,
Bombina, Meliponina e Apina, as glndulas labiais ou salivares dos adultos so
formadas por um par de glndulas localizado no trax, como nos demais insetos, e por
um par localizado na cabea, sendo denominadas de glndulas salivares (ou labiais) da
cabea. Estas glndulas ceflicas no esto presentes em outros himenpteros, nem em
outros insetos e, por isso, constituem uma caracterstica especial destas tribos, no
sendo encontradas, plenamente desenvolvidas, nas outras abelhas (CRUZ-LANDIM,
1967, 2000; SILVA DE MORAES, 2002).
Parece que ao longo da filogenia, h grande variao morfolgica da glndula
salivar ceflica entre as abelhas. De um modo geral, parece ocorrer um aumento no grau
de desenvolvimento dessa glndula em espcies com maior grau de sociabilidade. Nas
abelhas em que as glndulas salivares ceflicas no esto presentes, o ducto excretor
comum das glndulas salivares torcicas, no interior da cabea, apresenta-se como uma
fita oca, reforada por tendeas. Em algumas espcies de abelhas pertencentes s
famlias Halictidae, Megachilidae e Anthophorini, o mesmo ducto apresenta expanses
laterais foliceas que podem ser interpretadas como prenncios da glndula salivar
ceflica. No se sabe se essas expanses so funcionais. Nos Anthophorini, tais
prenncios aparecem como expanses unilaterais, digitiformes. J em Halictidae e
Megachilidae as expanses so bilaterais com forma folicea conectadas ao ducto

excretor comum das glndulas torcicas por canais cilndricos (CRUZ-LANDIM,


1967).
O par da glndula salivar presente na cabea formado durante a pupao, por
evaginaes do epitlio do ducto excretor comum da glndula salivar larval, que
atravessa a cabea (CRUZ-LANDIM; MELLO, 1967). Nos Meliponina e Bombina, na
juno dos ductos das glndulas salivares torcicas com os ductos da poro glandular
ceflica permanece uma dilatao, denominada bolsa salivar ou reservatrio, o qual no
est presente nos Apina e Euglossina (CRUZ-LANDIM, 1967). Contudo, Salles e CruzLandim (1998) no identificaram bolsa salivar em Camargoia nordestina, um
meliponneo, e sim estruturas globulares recobrindo a juno dos ductos.
Apesar de terem a mesma origem e desembocadura comum, os pares de glndulas
torcicos e ceflicos so distintos morfolgica e funcionalmente. As glndulas salivares
torcicas so formadas por unidades secretoras tubulares enquanto a poro ceflica
formada por unidades secretoras alveolares. Cada conjunto lateral de unidades
secretoras considerado uma glndula, portanto, as glndulas salivares da cabea so
estruturas pares (CRUZ-LANDIM, 1967).
De acordo com a terminologia dada s clulas glandulares dos insetos, com relao
ao modo pelo qual a clula secreta seus produtos (NOIROT; QUENNEDEY, 1974,
1991), os alvolos das glndulas salivares ceflicas so constitudos por clulas
glandulares da classe I as quais esto organizadas de modo a formar um rgo interno
no corpo da abelha (CRUZ-LANDIM, 2002). Nesta classe de clulas glandulares, cada
clula alveolar est envolvida no processo de produo e descarga da secreo e
diretamente recoberta pela cutcula.
A secreo das glndulas salivares do trax aquosa e segundo Delage-Darchen et
al. (1979), Simpson (1960) e Simpson et al. (1968) contm enzimas digestivas,
enquanto a secreo das glndulas salivares da cabea tem aspecto oleoso. Segundo
Simpson (1960), essa secreo oleosa serve para lubrificar as peas bucais. Foi tambm
sugerida a funo de amolecer a cera durante sua manipulao na construo do ninho
(HESELHAUS, 1922), a qual foi posta em dvida por Simpson (1960) j que nem todas
as abelhas que apresentam a glndula salivar ceflica desenvolvida trabalham com a
cera.

Engels et al. (1997) demonstraram a presena de pelo menos 68 diferentes


substncias volteis pertencentes a 5 grupos qumicos com potencial para
desempenharem papel feromonal em extratos da cabea de rainhas de Scaptotrigona
postica sem, contudo, determinarem onde eram produzidas. Porm, levando em
considerao a natureza dos compostos, apenas as glndulas hipofarngeas poderiam ser
excludas da funo de produzir tais compostos.
Entre as glndulas da cabea, as mandibulares tm sido apontadas como as mais
provveis fontes de feromnios. Contudo, Jarau et al. (2004) e Schorkopf et al. (2007)
demonstraram, atravs de bioensaios, que as glndulas salivares da cabea de operrias
campeiras de, respectivamente, Trigona recursa e T. spinipes (Subtribo Meliponina)
produzem componentes volteis que esto relacionados comunicao por trilhas de
cheiro.
As substncias produzidas pelas glndulas excrinas nas abelhas so em sua
maioria feromnios usados para comunicao e reconhecimento da posio social de
cada indivduo e para inter-relacionamentos dos mais diferentes tipos, necessrios na
comunidade. Assim, o ciclo funcional das glndulas determina a funo do indivduo na
sociedade ou vice-versa (CRUZ-LANDIM, 1994).
Como j mencionado anteriormente, as abelhas passam por fases da vida em que
desempenham tarefas diferentes. Silva de Moraes (1978) verificou que desde o incio da
diferenciao das clulas das glndulas salivares da cabea, seus ncleos se apresentam
poliplides, mas que o grau de ploidia atingido por eles mais baixo que aquele
alcanado pelos ncleos das torcicas, o que desde logo evidencia diferenas de funo,
principalmente quanto intensidade de sntese protica. Cruz-Landim e Akahira (1966)
constataram que as glndulas salivares torcicas e ceflicas nas operrias das espcies
sociais apresentam um nico ciclo secretor durante a vida adulta, o qual est
correlacionado diviso de trabalho, desenvolvendo-se em um certo perodo da vida e
regredindo posteriormente. Dias (1992) estudando o processo de desenvolvimento e de
regresso das glndulas salivares da cabea e alguns aspectos morfo-funcionais de
operrias de S. postica, observou um desenvolvimento progressivo dessas glndulas,
desde a emergncia da operria at ao fim da vida. Esta verificao est de acordo com
o observado nas glndulas salivares ceflicas de Camargoia nordestina, um
meliponneo, por Salles e Cruz-Landim (1998).

As glndulas das abelhas ocorrem de maneira bastante diferente entre machos e


fmeas, sendo mais abundantes nas fmeas (CRUZ-LANDIM, 1994). A presena e o
grau de desenvolvimento das glndulas salivares, tanto do trax quanto da cabea,
diferem entre os dois sexos intra e inter-especificamente. Operrias e rainhas de A.
mellifera apresentam ambos pares de glndulas, mas nos machos as da cabea so
vestigiais (GRAF, 1968; SIMPSON, 1962).
J em Bombus, o grau de desenvolvimento varia entre os sexos nas diferentes
espcies. Machos de Bombus pomorum (RIBBANDS, 1953), B. atratus e B. morio
(LAUER, 1992) possuem a glndula salivar da cabea mais desenvolvida que nas
fmeas de sua espcie, porm em B. campestris (RIBBANDS, 1953) e B.
(Rhodobombus) mesomelas (TERZO et al., 2005) elas so rudimentares nos machos e,
nesta ltima espcie, grandes nas rainhas e operrias. Alguns machos de mamangavas
usam a secreo de suas glndulas salivares ceflicas para marcar com cheiro rotas de
vo e atrair rainhas virgens (BERGMAN; BERGSTRM, 1997; KULLENBERG et al.,
1973), entretanto em B. mesomelas esta funo no encontra paralelo e a secreo
corresponde aos hidrocarbonetos cuticulares.
Variaes morfolgicas ocorrem tambm entre os meliponneos. Em alguns
Meliponina esta glndula nas operrias to desenvolvida que ramos alcanam o trax
(CAVASIN-OLIVEIRA, 1995; CRUZ-LANDIM, 1967; SILVA DE MORAES, 1978).
Portanto, apesar da morfologia, ocorrncia e aspectos morfo-funcionais das
glndulas salivares da cabea virem sendo estudados desde h bastante tempo, pouco se
sabe sobre seu ciclo secretor, diferenas entre rainhas, operrias e machos de espcies
eussociais e sua funo ainda no se encontra completamente esclarecida. Neste sentido,
um estudo da morfologia geral e da ultra-estrutura celular da glndula salivar ceflica
foi proposto para compreender melhor a biologia celular, o ciclo funcional e o papel
desta glndula em espcies sociais, Apis mellifera e Scaptotrigona postica, comparando
seu desenvolvimento em indivduos de ambas as castas femininas e entre os sexos, com
diferentes idades.

10

OBJETIVOS GERAIS

Em vista do exposto, os objetivos deste trabalho so:


1. Atravs da anatomia e morfometria, caracterizar as glndulas salivares ceflicas
nas espcies Apis mellifera e Scaptotrigona postica, comparando seu desenvolvimento
entre as idades dentro de cada casta e sexo;
2. Estudar as glndulas salivares da cabea nos nveis histolgico, histoqumico e
ultra-estrutural em operrias, rainhas e machos das espcies acima mencionadas, em
vrias fases da vida;
3. Comparar a morfologia das glndulas com a finalidade de detectar diferenas
passveis de serem correlacionadas funo secretora, nesses indivduos.

A apresentao dos resultados foi organizada em 3 artigos aqui denominados


captulos:

Captulo 1 Anatomia e Morfometria das Glndulas Salivares Ceflicas


de Apis mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae) em
Fmeas e Machos com Diferentes Idades.

11

Captulo 2 Histologia e Histoqumica das Glndulas Salivares da


Cabea de Duas Espcies de Abelhas Eussociais, Apis mellifera e
Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae).
Captulo 3 Ultra-Estrutura das Glndulas Salivares Ceflicas de
Operrias

Rainhas

de Apis mellifera

e Scaptotrigona

(Hymenoptera, Apidae) em Diferentes Fases da Vida.

postica

13

Anatomia e Morfometria das Glndulas Salivares Ceflicas de Apis mellifera e


Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae) em Fmeas e Machos com Diferentes
Idades.
Silvana Beani Poiani, Carminda da Cruz-Landim1

Departamento de Biologia, Instituto de Biocincias de Rio Claro (UNESP/RC),


Av. 24A, no.1515, Bela Vista, CEP 13506-900, Rio Claro, So Paulo, Brasil

RESUMO: Os insetos apresentam glndulas associadas aos apndices bucais, dos quais
recebem suas denominaes e constituem um sistema designado sistema salivar. As
glndulas labiais ou salivares fazem parte desse sistema e so estruturas pares
localizadas no trax dos insetos adultos. Nas abelhas da subfamlia Apinae, um par de
glndulas salivares tambm se desenvolve na cabea. Deste modo, as glndulas
salivares ceflicas constituem uma caracterstica exclusiva de algumas espcies de
abelhas. Estudou-se a anatomia, atravs de microscopia de luz e eletrnica de varredura,
e o grau de desenvolvimento da glndula salivar ceflica, atravs de morfometria, em
operrias, rainhas e machos, em diferentes idades, das espcies Apis mellifera e
Scaptotrigona postica. Os resultados mostram que as glndulas salivares ceflicas
encontram-se igualmente desenvolvidas nas fmeas de Apis mellifera e Scaptotrigona
postica e tambm nos machos maduros sexualmente desta ltima espcie. J nos
machos maduros de A. mellifera so vestigiais. Ocorre variao da morfologia dos
alvolos secretores e ductos conforme a espcie. Em ambas espcies, o
desenvolvimento da glndula progressivo, atingindo grau mximo nas operrias
campeiras e nas rainhas em postura. Nos machos de A. mellifera ocorre o inverso, a
glndula degenera com o passar da idade. Machos de S. postica apresentam
desenvolvimento glandular semelhante ao das operrias de sua espcie. A microscopia
eletrnica de varredura revelou que fmeas jovens apresentam alvolos e ductos
colapsados enquanto as mais velhas apresentam alvolos trgidos e, em A. mellifera,
ductos robustos. Em A. mellifera existem pontuaes na superfcie dos alvolos e
ductos, j perceptveis nas glndulas das operrias nutridoras e bem evidentes nas das
campeiras e rainhas em postura, tais estruturas correspondem a aberturas dos espaos

14

intercelulares. Anlises estatsticas confirmaram que h diferena significativa (p0,05)


na rea alveolar das glndulas nas diferentes fases da vida das operrias das duas
espcies e entre rainhas virgens e em postura de S. postica.

PALAVRAS-CHAVE: abelha, glndula labial, operria, rainha, microscopia eletrnica


de varredura

ABSTRACT: Insects present exocrine glands attached to mouthparts which take their
names and form a system designated salivary system. Adult insects labial or salivary
glands take part in this system and are structures paired located at torax. Apinae
subfamily bees have a pair salivary glands develop in head constituting exclusive
feature of some bees species. This work studied the anatomy of cephalic salivary glands
by ligth and varredure eletron microscopy, and development degree by morphometric
analises, in workers, queens and males of Apis mellifera and Scaptotrigona postica in
various ages. The results show the cephalic salivary glands are equally developed in
females of Apis mellifera, and females and sexually mature males of Scaptotrigona
postica. Mature males of A. mellifera exhibit vestigial glands. The head salivary glands
consist of alveolar secretory units and ducts. The morphology of alveoli and ducts vary
according to the species. In both species, the development of the gland is progressive,
reaching its maximum level in foragers and egg-laying queens. In A. mellifera males,
the inverse occurs, the gland degenerates as aging progresses. Gland development in S.
postica males is similar to that of workers of its species. Scanning electron microscopy
revealed collapsed alveoli and ducts in young females, while older ones exhibit turgid
alveoli and, in A. mellifera, robust ducts. In the latter, a punctured surface in alveoli and
ducts can be observed in glands of nurse bees, and better conspicuous in foragers and
egg-laying queens. These structures correspond to openings of intercellular spaces.
Statistical analysis confirmed significant differences (p0.05) in the area of alveoli of
glands of workers in different life stages of both species and between S. postica virgin
and egg-laying queens.

KEYWORDS: bee, labial gland, worker, queen, scanning eletron microscopy

15

1. INTRODUO

Todos os insetos so dotados de um sistema salivar composto por pares de


glndulas, os quais esto conectados aos apndices bucais. Em abelhas adultas, as
principais glndulas so as labiais, mandibulares e hipofarngeas que, apesar de
constiturem o sistema salivar, apresentam funes variadas de modo que nem sempre
esto relacionadas com a ingesto ou digesto de alimento.
As glndulas labiais tambm so designadas como glndulas salivares
propriamente ditas, seja porque descarregam sua secreo na base da lngua, condio
esta que permite a mistura imediata da secreo com o alimento ingerido, ou porque so
homlogas das glndulas salivares dos demais insetos, ou ainda porque originam-se das
glndulas salivares larvais (CRUZ-LANDIM, 1967; SILVA DE MORAES, 2002;
SNODGRASS, 1956).
Em todos os insetos, as glndulas salivares dos adultos esto localizadas no
trax. Porm, uma caracterstica que distingue algumas espcies de abelhas dos demais
insetos a presena de um par de glndulas salivares tambm na cabea. A glndula
salivar ceflica s encontrada plenamente desenvolvida em algumas espcies de
abelhas da subfamlia Apinae (CRUZ-LANDIM, 1967).
A glndula salivar ceflica forma-se durante a pupao, por evaginaes do
epitlio do ducto excretor comum, remanescente da glndula salivar larval, no interior
da cabea (CRUZ-LANDIM; MELLO, 1967). Nos Meliponina e Bombina, existe uma
dilatao no local de convergncia dos ductos das glndulas salivares torcicas com os
das ceflicas, que chamada de bolsa salivar ou reservatrio.
As glndulas salivares torcicas e ceflicas tm origem ectodrmica e
desembocadura comum, porm diferem quanto funo. Estudos feitos por DelageDarchen et al. (1979), Simpson (1960) e Simpson et al. (1968) verificaram que a
secreo da glndula salivar torcica aquosa e contm enzimas digestivas, enquanto a
secreo da poro ceflica da glndula tem aspecto oleoso.
As glndulas das abelhas ocorrem de modo diferente nos machos e nas fmeas,
sendo mais abundantes nas fmeas. As operrias realizam tarefas na colnia,
obedecendo a uma seqncia de acordo com a idade, estado fisiolgico ou necessidades
da colnia, e essas mudanas de fases da vida esto correlacionadas ao desenvolvimento

16

e regresso das glndulas excrinas espalhadas pelo corpo da abelha (CRUZ-LANDIM,


1994). Observaes feitas por Heselhaus (1922), Inglesent (1940) e Simpson (1960,
1961, 1963) apontam que, em A. mellifera, na fase de campeira da operria que a
glndula salivar ceflica atinge maior grau de desenvolvimento. Anos mais tarde
Katzav-Gozansky et al. (2001) comprovaram tal observao atravs de anlises
estatsticas mas, abordaram apenas em operrias.
Rainhas so responsveis pela oviposio e integrao dos membros da colnia e
os machos tm a funo de fecundar a rainha e, nos meliponneos, podem
eventualmente desempenhar algumas outras tarefas (NOGUEIRA-NETO, 1997).
O presente trabalho tem por finalidade abordar caractersticas morfo-anatmicas
e morfomtricas das glndulas salivares ceflicas, relacionando o desenvolvimento da
glndula com as diferentes fases da vida de operrias, rainhas e machos de duas
espcies de abelhas eussociais, Apis mellifera Linnaeus (1758) e Scaptotrigona postica
Latreille (1807).

2. MATERIAL E MTODOS

2.1. Material

Operrias, rainhas e machos de Apis mellifera e Scaptotrigona postica foram


coletados no apirio e meliponrio mantidos pelo Instituto de Biocincias da
Universidade Estadual Paulista (UNESP), em Rio Claro, SP.
Para ambas espcies, as operrias recm-emergidas foram capturadas ao
emergirem da clula de cria, as nutridoras enquanto aprovisionavam as clulas de cria e
as campeiras ao voltarem da coleta para as colnias. Rainhas virgens de A. mellifera
foram criadas em laboratrio enquanto as de S. postica e as rainhas em postura de
ambas espcies foram retiradas de colnias fortes. Machos recm-emergidos de A.
mellifera coletados no interior da colnia e os maduros sexualmente nos agregados de
machos, prximos s colnias. Os indivduos recm-emergidos de S. postica foram
analisados sob estereomicroscpio e separados em fmeas (operrias recm-emergidas)
e machos jovens, conforme presena ou ausncia de corbcula.

17

2.2. Mtodos

2.2.1. Anatomia e Morfometria


As reas (m2) dos alvolos das glndulas salivares ceflicas foram medidas em
operrias em diferentes fases da vida (recm-emergidas, nutridoras e campeiras), e em
rainhas (virgens e em postura) de ambas espcies, S. postica e A. mellifera. Machos no
foram analisados devido dificuldade de encontrar a glndula, j que nem sempre foi
possvel observ-la, ou porque encontrava-se envolvida pelo corpo gorduroso, no
sendo possvel distinguir os alvolos.
As glndulas foram dissecadas em soluo fisiolgica para inseto tamponada
(NaCl Na2HPO4 KH2PO4), colocadas em lminas, fixadas em Bouin aquoso e levadas
ao microscpio de luz. As reas alveolares foram medidas usando um sistema de
tratamento e captura de imagem (Leica Qwin 550 Servers Image and Peripheral
Server Software). As imagens capturadas serviram tambm para a anlise anatmica das
glndulas.
Para operrias, foram capturados 10 indivduos em cada fase da vida, ou seja, 10
recm-emergidas, 10 nutridoras e 10 campeiras. Cada indivduo forneceu um par de
glndulas salivares ceflicas. Foram tomadas, aleatoriamente, as medidas da rea de 10
alvolos de cada glndula de cada indivduo. Ou seja, para cada idade obteve-se 100
medidas alveolares.
Quanto s rainhas, ocorreu uma variao na quantidade de medidas feitas devido
disponibilidade desses indivduos nas colnias, porm, como feito com as operrias,
foram medidas, aleatoriamente, as reas de 10 alvolos de cada glndula de cada
indivduo. Para S. postica foram usadas 4 rainhas virgens (40 medidas) e 5 fecundadas
(50 medidas), e em A. mellifera 10 rainhas virgens (100 medidas) e 1 fecundada (10
medidas).
Para as anlises estatsticas, as medidas alveolares foram transformadas em log e
os resduos apresentaram normalidade e distribuio homognea. O teste estatstico
paramtrico aplicado foi a anlise de varincia - ANOVA, com o qual se avaliou a
ocorrncia de diferenas significativas (p 0.05), ou no, entre os grupos. Nos casos em

18

que houve diferena significativa, aplicou-se o teste Tukey para verificar entre quais
grupos tal diferena ocorreu.

2.2.2. Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)

As glndulas salivares da cabea de 5 operrias em cada fase da vida (recmemergida, nutridora e campeira) e 4 rainhas virgens e 2 em postura de A. mellifera e S.
postica,

foram dissecadas e fixadas em Karnovisky (paraformaldedo 2% e

glutaraldedo 2,5% em tampo cacodilato de sdio 0,1M, pH 7,4), durante 1 hora, em


seguida, lavadas em gua destilada, desidratadas com etanol 70%, 90%, 95% e 3 banhos
de lcool 100%, 10 minutos cada banho. A seguir, levadas ao Critical Point Drying
para a retirada do lquido, coladas em suporte de alumnio, metalizadas com ouro e
examinadas ao microscpio eletrnico de varredura.

3. RESULTADOS

3.1. Anatomia

3.1.1. Microscopia de Luz (ML)

A glndula salivar ceflica, tanto de A. mellifera quanto de S. postica, formada


por dois ramos laterais independentes, os quais esto localizados um de cada lado da
cabea, apresentando-se como estrutura par. Cada glndula formada por conjuntos de
unidades secretoras alveolares e, sendo uma glndula excrina, por ductos. Os alvolos
so constitudos por um epitlio secretor recoberto na face luminal por cutcula. Dos
alvolos partem ductos que, progressivamente, unem-se at formarem ductos nicos de
cada uma das glndulas ceflicas que, com os ductos das glndulas salivares do trax,
do origem ao ducto excretor final, o qual se abre no premento da glossa.
Cada glndula salivar ceflica de S. postica divide-se em um ramo supracerebral, o qual contm maior quantidade de alvolos, e um ramo sub-cerebral, o qual
contm menor quantidade de alvolos (Figura 1), porm, na figura, torna-se difcil

19

apontar cada uma dessas regies devido ao emaranhado formado pelos ductos e
alvolos. Os alvolos so esfricos ou ovais e os ductos assumem distribuio esparsada
em ambos os ramos. Os ductos que partem dos alvolos so pouco calibrosos.
As operrias recm-emergidas de S. postica possuem alvolos glandulares
murchos (Figura 2), enquanto que operrias campeiras e rainhas em postura os possuem
trgidos (Figura 1). Operrias nutridoras e rainhas virgens apresentam desenvolvimento
glandular intermedirio entre os indivduos jovens e velhos, ou seja, alguns alvolos j
encontram-se cheios de secreo (Figura 3).
Em A. mellifera os alvolos so predominantemente piriformes e formam uma
massa mais uniforme e compacta (Figura 4, 5 e 6), a qual se apia na parede lteroposterior da cabea e se divide em ramos sub e supra-cerebrais. Os ductos apresentamse mais calibrosos quando comparados com os da glndula salivar ceflica de S. postica.
Tal como para S. postica, operrias recm-emergidas de A. mellifera possuem
alvolos colapsados (Figura 4) que tornam-se progressivamente mais trgidos conforme
os indivduos envelhecem, atingindo grau mximo de desenvolvimento nas operrias
campeiras e rainhas em postura (6) e situao intermediria em nutridoras e rainhas
virgens (Figura 5).
Igualmente para ambas espcies, em cada glndula, os ductos que partem dos
alvolos so chamados de coletores e unem-se para formarem os ductos condutores.
Cada glndula possui 2 ductos condutores, um da poro supra-cerebral e outro da
poro sub-cerebral. Estes, ento, se fusionam e formam o ducto excretor da glndula.
Os ductos excretores, por sua vez, unem-se na regio mediana central da cabea aos
ductos excretores das glndulas torcicas para formarem a bolsa salivar da qual parte o
canal excretor final das glndulas torcicas e ceflicas, no caso de S. postica, ou com o
canal excretor comum das glndulas torcicas, no caso de A. mellifera. O canal excretor
final cilndrico, com aspecto mais calibroso em A. mellifera, e fino em S. postica.
Ento, em S. postica, no local de convergncia dos ductos excretores torcicos e
ceflicos, existe uma dilatao, denominada bolsa salivar ou reservatrio, da qual parte
o canal excretor final (Figura 1). Em A. mellifera, os ductos excretores da glndula
salivar torcica unem-se ainda no trax, de modo que formado um canal excretor
comum da poro glandular torcica. Este canal penetra na cabea atravs do formen
occipital e, ento, une-se aos ductos excretores de cada glndula salivar ceflica para

20

formar o canal excretor final. Neste caso, no se observa uma dilatao no local de
convergncia dos ductos.
Comparando-se as espcies, estas diferem ainda pela quantidade de alvolos, ou
seja, grau de desenvolvimento. Mesmo levando em conta a diferena de tamanho dos
indivduos das espcies estudadas, a glndula mais desenvolvida em A. mellifera. No
mais, o padro anatmico geral das glndulas das duas espcies bastante semelhante.
Machos recm-emergidos de S. postica no foram analisados, porm os maduros
possuem glndula desenvolvida como nas fmeas de sua espcie (Figura 7).
Convm observar que a glndula, em machos recm-emergidos de A. mellifera
(Figura 8), envolvida por clulas do corpo gorduroso e nos maduros, alm disso,
sofreu regresso, de modo que na disseco possvel visualizar apenas os ductos que a
formavam.

3.1.2. Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)

A anlise ao MEV confirmou o observado ao microscpio de luz, que em ambas


as espcies, nas operrias recm-emergidas, os alvolos e ductos esto colapsados
(Figuras 9 e 13). Geralmente nas operrias nutridoras e rainhas virgens, a maioria dos
alvolos encontram-se colapsados, embora alguns j assumam aspecto trgido (Figura
10), enquanto que indivduos mais velhos, como as operrias campeiras e rainhas em
postura, apresentam alvolos completamente trgidos (Figuras 11, 14 e 15) e, no caso
de A. mellifera, ductos robustos (Figura 12).
Em A. mellifera o formato dos alvolos varia podendo ser alongado,
arredondado ou piriforme (Figura 11). Nas operrias recm-emergidas, os limites
celulares na superfcie dos alvolos e ductos so bem marcados (Figura 9). J em
operrias nutridoras, campeiras e rainhas virgens e em postura no so perceptveis
(Figuras 10 e 11). Ainda, em relao A. mellifera, com exceo das operrias recmemergidas, a superfcie dos alvolos e ductos apresenta pontuaes externas,
semelhantes a poros (Figuras 10, 11 e 12).
As pores secretoras da glndula em S. postica so predominantemente
arredondadas (Figuras 13, 14), mas em rainha em postura predominam alvolos
alongados (Figura 15). No se observa a superfcie dos alvolos e ductos marcada pelos

21

poros, mas a superfcie alveolar em rainha em postura apresenta contornos celulares. Os


ductos so cilndricos e finos (Figuras 13, 14 e 15). Os alvolos so bem supridos por
traqueolas (Figuras 13, 14 e 15).

3.2. Morfometria

3.2.1. Apis mellifera

Tratando-se de operrias, os resultados dos testes estatsticos mostram que no


s h diferena significativa dentro da casta (p=0,001), mas tambm dentro de cada
grupo etrio (p=0,002) (Tabela 1). Atravs do teste Tukey verificou-se que os grupos
que diferem entre si so das operrias nutridoras e das campeiras (p=0,0007) (Tabela 2).
As abelhas recm-emergidas apresentam valor mdio da rea alveolar entre as
nutridoras e campeiras, no diferindo destes grupos. A Figura 16 mostra os grficos
representativos das mdias alveolares em cada grupo etrio das operrias.
Em relao s rainhas virgens e em postura no houve diferena significativa
entre os grupos (p=0,623) (Tabela 3 e Figura 17).

3.2.2. Scaptotrigona postica

No caso das operrias de S. postica, assim como o observado em operrias de A.


mellifera, existe diferena significativa entre as idades (p=0,000) e dentro de cada idade
(p=0,000) (Tabela 4). A tabela 5 mostra que, pelos resultados do teste Tukey, as
diferenas nas mdias das reas alveolares ocorrem entre todos os grupos (p=.000022).
A mdia da rea dos alvolos tende a aumentar conforme o indivduo envelhece, sendo
encontrados, ento, valores baixos para recm-emergidas e os valores maiores para as
campeiras, como mostra o grfico da Figura 18.
Entre as rainhas tambm constatou-se diferena significativa entre virgens e em
postura (p=0,000) (Tabela 6), sendo que rainhas virgens apresentam reas alveolares
menores que as em postura (Figura 19).

22

_______________Figuras e Tabelas

23

Figuras 1 a 8 - Aspecto anatmico das glndulas salivares ceflicas em Scaptotrigona


postica e Apis mellifera. 1 Aspecto geral da glndula em operria campeira de S.
postica mostrando os ductos (du) finos nesta espcie, alvolos (a) trgidos e bolsa
salivar (bs) na sua juno com os ductos torcicos (dt) e ducto excretor final (def). 2 e 4
- Nas operrias recm-emergidas de S. postica (2) e A. mellifera (4), os alvolos (a)
apresentam-se colapsados e, em A. mellifera, os ductos (du) so robustos e achatados. 3
e 5 Operrias nutridoras e rainhas virgens apresentam grau de desenvolvimento
glandular semelhante, com alguns alvolos (a) j contendo secreo, em S. postica (3) e
A. mellifera (5). 6 Nas rainhas em postura de A. melliferaa glndula atinge grau
mximo de desenvolvimento, com alvolos (a) trgidos contendo secreo de aspecto
oleoso. 7 Macho maduro de S. postica apresenta glndula to desenvolvida quanto as
operrias da mesma espcie. 8 Machos recm-emergidos de A. mellifera possuem a
glndula envolvida por clulas do corpo gorduroso (cg), de modo que apenas os ductos
so visveis.

Figuras 9 a 15 - Micrografias eletrnicas de varredura. 9 - Operria recm-emergida de


A. mellifera. Alvolos (a) e ductos (du) achatados. Os limites celulares so bem visveis
na superfcie dos alvolos e ductos. 10 - Operrias nutridoras e rainhas virgens de A.
mellifera. Parte dos alvolos encontra-se trgido. 11- Alvolos (a) trgidos alongados,
arredondados ou piriformes em operrias campeiras e rainhas em postura de A.
mellifera. Com exceo das operrias recm-emergidas, todas as outras fmeas de A.
mellifera apresentam a superfcie dos alvolos (10 e 11) e ductos (12) marcada por
pontuaes (setas) que correspondem a aberturas intercelulares. 13 e 14 - Operrias de
S. postica, recm-emergida (13) e campeira (14). Alvolos (a) arredondados, trgidos
nas campeiras e ductos (du) cilndricos, achatados nas recm-emergidas. 15 Rainha
em postura de S. postica. Os alvolos (a) so mais alongados que nas operrias da
mesma espcie e as superfcies so marcadas pelos contornos celulares. tr = traqueolas.

24

bs

a
du

def

du

dt

du
a
100m

40m

20 m

a
20 m

a
a

a
du

20 m

du

du

a a du

du

20 m

20 m

du

cg

a
du

20 m

10

20 m

11

40m

12

a
du
40 m

13

15

14
a

20 m

40 m

tr

tr
du

a
tr

tr
du
40 m

20 m

40 m

25

Tabela 1 Resultado da anlise de varincia (ANOVA), em operrias de Apis


mellifera, com valor de p significativo entre as idades e entre as glndulas em
cada idade (p0,05).
Fonte

Soma de
quadrados

G.L.*

Mdia
quadrtica

Razo F

ID$

2.125

1.062

7.402

0.001

GL(I
D$)

7.905

27

0.293

2.040

0.002

Erro

38.753

270

0.144

Tabela 2- Teste Tukey em operrias de Apis mellifera, mostrando que os grupos


que diferem entre si (p0,05) so o das operrias nutridoras e campeiras.
Operrias

Recm-emergidas
(1)
9.873780

Recm-emergidas
(1)
Nutridoras
(2)

.296688

Campeiras
(3)

.076601

Nutridoras (2)
9.790370

Campeiras (3)
9.995360

.296688

.076601
.000759

.000759

26
Figura 16 Grfico das mdias alveolares em diferentes fases da vida de operrias de Apis mellifera.

10.5

rea alveolar um (Log)

10.3

10.1

9.9

9.7

9.5

9.3

Recm-emergida

Nutridora
Operrias

Campeira

27

Tabela 3 - Anlise de varincia (ANOVA) das reas alveolares das glndulas salivares
ceflicas de rainhas virgens e em postura de Apis mellifera. No houve diferena
significativa (p>0,05) entre os grupos.
Fonte

Soma de
quadrados

G.L.*

Mdia
quadrtica

Razo-F

ID$

0.031

0.031

0.244

0.623

Erro

13.718

108

0.127

*G.L. = Graus de liberdade

Figura 17- Grfico das mdias alveolares em diferentes fases da vida de rainhas
de Apis mellifera.

28

Tabela 4 Diferena significativa (p0,05) dada pela anlise de varincia (ANOVA)


das reas alveolares das glndulas salivares ceflicas de operrias de Scaptotrigona
postica, tanto entre as idades quanto entre as glndulas em cada idade.
Fonte

Soma dos
quadrados

G.L.*

Mdia
quadrtica

Razo-F

ID$

60.424

30.212

404.780

0.000

GL(I
D$)

14.827

27

0.549

7.357

0.000

Erro

20.152

270

0.075

*G.L. = Graus de liberdade

Tabela 5 O teste Tukey em operrias de Scaptotrigona postica revelou que


todos os grupos diferem entre si.
Operrias

Recm-emergida
(1)
7.364160

Recm-emergida
{1}
Nutridora {2}

.000022

Campeira {3}

.000022

Nutridora (2)
8.044490

Campeira (3)
8.452050

.000022

.000022
.000022

.000022

29
Figura 18 - Grfico das mdias alveolares em diferentes fases da vida de operrias de Scaptotrigona
postica.

9.2

rea Alveolar um (Log)

8.8

8.4

8.0

7.6

7.2

6.8

Recm-emergida

Nutridora
Operrias

Campeira

30

Tabela 6 - Anlise de varincia (ANOVA) das reas alveolares das glndulas


salivares ceflicas de rainhas de Scaptotrigona postica. H diferena significativa
(p<0,05) entre rainhas virgens e em postura.
Fonte

Soma dos
quadrados

G.L.*

Mdia
quadrtica

Razo-F

ID$

44.121

44.121

546.624

0.000

GL(I
D$)

1.091

0.156

1.932

0.075

Error

6.538

81

0.081

*G.L. = Graus de liberdade.

Figura 19 - Grfico das mdias alveolares em diferentes fases da vida de


rainhas de Scaptotrigona postica.

31

5. DISCUSSO

As abelhas passam por fases da vida em que desempenham tarefas diferentes e,


nas operrias das espcies eussociais, a diviso de trabalho est parte ou totalmente
relacionada ao ciclo funcional de glndulas excrinas (CRUZ-LANDIM, 1994).
Nas abelhas das espcies A. mellifera e S. postica, as glndulas salivares
ceflicas so igualmente desenvolvidas em operrias e rainhas. Nos machos
sexualmente maduros de S. postica as glndulas salivares ceflicas so to
desenvolvidas quanto nas fmeas, no entanto, so reduzidas nos machos maduros de A.
mellifera, o que pode ser relacionado com as tarefas desempenhadas por estas classes de
indivduos na comunidade.

5.1. Anatomia

A localizao, o arranjo e a forma dos alvolos variam entre as espcies


estudadas. Estas observaes concordam com estudo feito por Cruz-Landim (1967) em
que as caractersticas descritas para A. mellifera so semelhantes s observadas em
Bombus, Euplusia e Euglossa, mas diferem dos Meliponina.
Em S. postica foi encontrada bolsa salivar no local de convergncia dos ductos
provenientes das glndulas salivares torcicas e ceflicas. A presena de bolsa salivar
foi verificada tambm em Euplusia violacens, Euglossa cordata, Eulaema nigrita e
algumas espcies de Bombina e outros Meliponina (CRUZ-LANDIM, 1967), porm
no foi atribudo a ela significado funcional. A autora sugere tratar-se de uma estrutura
residual proveniente do canal excretor final que achatado em espcies de abelhas
solitrias que no tem a glndula ceflica, sendo, portanto, a sua ausncia em A.
mellifera um carter apomrfico. Os resultados aqui apresentados concordam com a
sugesto de Cruz-Landim (1967). A secreo acumula-se progressivamente na luz dos
alvolos no parecendo ser necessria a bolsa salivar para seu armazenamento.
As tendeas da cutcula que reveste os ductos de ambas as espcies conferem
rigidez e previnem o colapso dos mesmos. Estudo detalhado do canal salivar em
abelhas (GRAF, 1968) revelou nos Meliponina a parte do canal salivar que forma a
bolsa salivar, bem como parte dos ductos excretores torcicos que precedem a sua

32

fuso, perde a regularidade da estrutura cuticular com reforos em espiral e reorganizase novamente no canal excretor final, que vai para o premento, e nos ductos condutores
das glndulas salivares da cabea. No presente estudo verificou-se que em A. mellifera
no h desaparecimento da espiral cuticular que se apresenta com regularidade.
Em operrias de alguns Meliponina, a glndula salivar ceflica to
desenvolvida que ramos alcanam o trax e se entremeiam aos alvolos da poro
torcica, da qual diferem nitidamente, j que a poro secretora torcica tubular e a
ceflica formada por alvolos arredondados (CAVASIN-OLIVEIRA, 1995; CRUZLANDIM, 1967; GRAF, 1968; SILVA DE MORAES, 1978). Esta condio no
encontra paralelo no presente estudo, onde verifica-se que a poro secretora da
glndula em S. postica e A. mellifera limita-se cabea.
As glndulas de ambas espcies diferem quanto morfologia dos alvolos e
ductos. Em A. mellifera os alvolos so predominantemente piriformes e esto
arranjados de modo a formarem uma massa uniforme e compacta, e os ductos so
robustos. J em S. postica os alvolos so esfricos ou ovais e os ductos so finos e
assumem distribuio esparsada. Apesar das diferenas anatmicas, a atividade
glandular semelhante entre as operrias e rainhas das duas espcies e machos de S.
postica, nos quais a secreo se acumula nos alvolos conforme os indivduos
envelhecem, diferindo apenas em relao aos machos de A. mellifera, nos quais a
glndula sofre regresso.
Machos recm-emergidos de A. mellifera apresentam a glndula salivar ceflica
envolvida pelo corpo gorduroso e, medida que envelhecem, a visualizao dos ductos
e unidades secretoras torna-se mais difcil e, s vezes, no so encontrados, indicando
regresso. Os zanges de A. mellifera so designados para uma nica e importante
funo, a fecundao da rainha. Desde que o zango no realiza trabalhos na colnia e
alimentado pelas operrias, as estruturas relacionadas s tarefas, nos machos, so
reduzidas ou ausentes (WINSTON, 1987), como parece ser o caso da glndula salivar
ceflica. Interessante ressaltar que machos de S. postica apresentam atividade glandular
semelhante a das operrias de sua espcie e, segundo Nogueira-Neto (1997),
eventualmente desempenham tarefas na colnia. O mesmo raciocnio pode ser usado
para explicar a regresso da glndula nos machos de A. mellifera, os quais no realizam
nenhuma atividade na colnia e no se alimentam mais depois que a abandonam. Os

33

machos de Bombus pomorum (RIBBANDS, 1953), B. atratus e B. morio (LAUER,


1992) possuem a glndula salivar da cabea desenvolvida, porm em grau maior que
das fmeas de sua espcie. Machos de B. pratorum e B. lapidarius marcam territrio e
atraem fmeas com a secreo da glndula salivar ceflica (BERGMAN;
BERGSTRM, 1997).
A anlise por varredura permite maior detalhamento da anatomia dessas
glndulas. Uma caracterstica presente apenas em A. mellifera, mais especificamente
nas operrias nutridoras e campeiras e rainhas virgens e em postura, a superfcie
alveolar e dos ductos cheia de pontuaes ou poros que parecem adentrar alvolos e
ductos. Estas estruturas correspondem a aberturas dos espaos intercelulares na regio
basal, como pde ser observado ao microscpio de luz (Captulo 2) e eletrnico de
transmisso (Captulo 3), e que no exame com MEV assemelham-se a poros na
superfcie dos alvolos e ductos. Estas estruturas so perceptveis quando os alvolos
esto trgidos, condio encontrada nas operrias campeiras e rainhas em postura, mas
j observveis em operrias nutridoras e rainhas virgens. Alm disso, tais aberturas
foram confirmadas com o auxlio da anlise ao microscpio eletrnico de transmisso
(Captulo 3). A abertura dos espaos intercelulares para o meio externo indica funo de
absoro de substncias atravs dessas aberturas. A sua presena a partir da fase de
nutridora com intensificao na de campeira indica aumento desse tipo de atividade
glandular. Em alguns insetos, especialmente em Colembola, as glndulas salivares
torcicas apresentam caractersticas semelhantes e tm papel excretor (CHAPMAN,
1998). A absoro de material da hemolinfa atravs de espaos intercelulares abertos
parece indicar que tambm nas abelhas possam exercer essa funo.
O aspecto dos alvolos das operrias tanto ao ML como ao MEV mostra que
estes se apresentam mais trgidos nas operrias campeiras e rainhas em postura
significando que contm maior quantidade de secreo, embora nas operrias nutridoras
e nas rainhas virgens boa parte dos alvolos j se apresentarem trgidos. A maior
turgidez dos alvolos nos indivduos mais velhos deve-se ao acmulo de secreo no
seu interior. Como nestas glndulas o aumento do tamanho dos alvolos contnuo
desde a emergncia alcanando o mximo nas campeiras, isto parece indicar que a
secreo pouco utilizada nas tarefas intra-coloniais. Esta ltima hiptese, pelo menos

34

para S. postica, parece pouco provvel porque as clulas glandulares se achatam


medida que o alvolo se enche de secreo (Captulos 2 e 3).
Estudo de Blochtein (2006) com Plebeia emerina revelou que ao MEV, a
glndula salivar ceflica em operrias de meia vida (nutridoras) formada por alvolos
arredondados, assim como observado em S. postica. J nas operrias campeiras de P.
emerina, os alvolos so achatados lateralmente. Ou seja, nesta espcie, a glndula
salivar ceflica atinge desenvolvimento mximo em operrias de meia vida, diferente do
observado nas espcies aqui estudadas. A funo sugerida para P. emerina
(BLOCHTEIN, 2006) a de que a secreo produzida seja misturada s pelotas de
prpolis espalhadas pela colnia, como forma de defesa contra invasores. A secreo
amoleceria a prpolis tornando-a viscosa, acabando os invasores por ficarem presos a
ela. Uma vez que a glndula est mais desenvolvida nas operrias mais velhas, em S.
postica e A. mellifera, provvel que a secreo produzida auxilie principalmente nas
tarefas de coleta de resinas e no tanto nas atividades dentro do ninho, mostrando que a
secreo glandular pode ter funo diferente em diferentes espcies, mais uma vez
apoiando a conhecida plasticidade funcional das glndulas das abelhas.

5.2. Morfometria

Apesar de alguns estudos sobre as glndulas salivares ceflicas de abelhas


abordarem o grau de desenvolvimento das mesmas, comparando-o entre os indivduos
em diferentes fases da vida, poucos esto baseados em testes estatsticos, gerando
interpretaes subjetivas. Deste modo, a morfometria permitiu comparaes com base
estatstica entre os indivduos exercendo diferentes tarefas na colnia.
Quanto s operrias de A. mellifera, estudos tm revelado que as glndulas
salivares ceflicas atingem desenvolvimento mximo na faixa de 17 a 41 dias de idade,
fase de transio para tarefas de campo (17 dias) ou em que essas tarefas j esto
completamente estabelecidas (41 dias) (HESELHAUS, 1922; INGLESENT, 1940;
SIMPSON 1960, 1961, 1963). Apesar destes autores no se basearem em testes
estatsticos para essa afirmao, dados posteriores neles apoiados (KATZAVGOZANSKY et al., 2001) esto de acordo com os primeiros autores, mostrando que as

35

operrias campeiras de A. mellifera contm significativamente mais secreo que as


nutridoras, o que relacionaram com o comportamento da abelha e no com sua idade.
O aumento de tamanho dos alvolos das glndulas salivares ceflicas em
operrias de S. postica e A. mellifera seguem aproximadamente o mesmo padro:
progressivo durante a fase adulta e mximo quando a abelha exerce a funo de
campeira. Porm, as diferenas no tamanho alveolar entre as operrias com diferentes
idades de S. postica, parecem ser mais marcantes que em A. mellifera (Tabela 5, figura
7) j que todos os grupos diferiram entre si (recm-emergidas, nutridoras e campeiras).
Os resultados das anlises estatsticas no presente estudo, em operrias de A. mellifera,
esto de acordo com as observaes feitas por Katzav-Gozansky et al. (2001), embora,
como mostrado na tabela 2 e figura 16 a mdia da rea alveolar das recm-emergidas
seja ligeiramente menor em relao s campeiras, no apresentando diferena
significativa.
Uma primeira informao sobre a funo dessas glndulas nas operrias de A.
mellifera e S. postica pode ser extrada de sua simples presena e grau de
desenvolvimento. A variao do tamanho dos alvolos da glndula reflete a quantidade
de secreo produzida e, pode-se supor que, entre as operrias, a fase campeira a que
requer maior quantidade de secreo. A secreo requerida nas campeiras as quais
exercem funes de coleta, ou seja, a substncia produzida por estas glndulas pode
auxiliar de alguma forma as atividades de coleta, seja no manuseio de compostos
coletados, seja na identificao do indivduo ao chegar colnia, ou at mesmo no
informar a fonte de alimento s companheiras, como proposto por Jarau et al. (2004) e
Schorkopf et al. (2007) para, respectivamente, Trigona recursa e T. spinipes, ou at
como proposto por Simpson (1960) lubrificao das peas bucais e, como em outras
abelhas (BERTSCH et al., 2005) contribuio para a composio das substncias de
superfcie que identificam os indivduos.
As glndulas de rainhas virgens e em postura de S. postica tambm diferem
significativamente, apresentando-se maiores nas ltimas. No h estudos anteriores
feitos a respeito da glndula salivar ceflica de rainhas de S. postica. Ao contrrio das
operrias, a funo das rainhas est confinada oviposio de modo que no saem da
colnia, a no ser para acasalamento e enxameao. Supe-se, ento, que a glndula
salivar ceflica desempenhe funo diferente a das operrias. Alm disso, a glndula

36

salivar da cabea atinge mximo desenvolvimento em rainhas em postura, podendo


estar relacionada com a produo de feromnio, j que a histoqumica (Captulo 2)
revelou que a secreo de natureza lipdica.
Rainhas de A. mellifera no apresentaram diferenas significativas quanto ao
tamanho alveolar. Os resultados obtidos na anatomia e histologia (Captulo 2) mostram
que os alvolos das glndulas nas rainhas virgens so muito semelhantes aos das
operrias nutridoras, ou seja, j apresentam alguma secreo na luz de alguns alvolos,
o que evidencia um certo grau de atividade glandular e o motivo para no ter sido
constatada diferena significativa entre os dois grupos de rainhas. Entretanto, deve ser
levado em conta que a similaridade no tamanho dos alvolos da glndula, entre os dois
grupos de rainhas, pode estar relacionado ao nmero de medidas feitas nos dois grupos,
o qual foi bem maior nas virgens, ou seja, o nmero amostral no foi suficiente para
detectar disparidade entre os dois grupos analisados.
Sabe-se que o produto das glndulas mandibulares das rainhas de A. mellifera
(substncia de rainha) atrai operrias e promove a integrao das duas castas (BUTLER,
1957; BUTLER; SIMPSON, 1958; RIBBANDS, 1953), alm de atrair machos para o
acasalamento, agiria na formao de enxame na diviso de colnia e inibio do
desenvolvimento ovariano das operrias e do comportamento de criao de novas
rainhas. Porm, quando a glndula mandibular removida de rainhas em postura, estas
perdem 85% de sua atratividade para as operrias (GARY, 1963), mesmo assim
conseguem manter uma corte normal (VELTHUIS; VAN-ES, 1964). Este fato pode
estar relacionado presena de outras fontes adicionais de substncia de rainha que
Velthuis (1967, 1970) sugeriu estarem no abdmen da rainha de A. mellifera. Os
resultados obtidos no presente trabalho permitem sugerir que a glndula salivar ceflica
possa ser uma dessas fontes adicionais de feromnios que, em ao sinergstica com
os feromnios da glndula mandibular atue na integrao das castas. A secreo da
glndula salivar ceflica descarregada na base da lngua pode ser disseminada entre as
operrias atravs da trofalaxia.

37

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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42

Histologia e Histoqumica das Glndulas Salivares da Cabea de Duas Espcies de


Abelhas Eussociais, Apis mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae).
Silvana Beani Poiani, Carminda da Cruz-Landim1

Departamento de Biologia, Instituto de Biocincias de Rio Claro (UNESP/RC),


Av. 24A, no.1515, Bela Vista, CEP 13506-900, Rio Claro, So Paulo, Brasil

RESUMO: As abelhas eussociais apresentam uma variedade de glndulas excrinas


distribudas por todo o corpo, cujos produtos so usados no desempenho de suas tarefas.
Em todos os insetos, pares de glndulas esto associados s peas bucais e, nas abelhas,
as principais destas glndulas esto ligadas ao lbio (glndulas labiais ou salivares), s
mandbulas (glndulas mandibulares) e ao assoalho da cavidade bucal (glndulas
hipofarngeas). O par de glndulas labiais ou salivares dos insetos adultos localiza-se no
trax, porm ramos ceflicos se desenvolvem em algumas espcies de abelhas,
formando as glndulas salivares ceflicas, as quais so plenamente desenvolvidas em
algumas espcies da subfamlia Apinae. O presente trabalho estudou a histologia e a
histoqumica das glndulas salivares ceflicas de fmeas e machos, em diferentes
idades, de Apis mellifera e Scaptotrigona postica. Os resultados mostram que a
histologia das glndulas salivares ceflicas difere entre as espcies. Enquanto as clulas
alveolares e dos ductos so predominantemente cbicas nas operrias e rainhas de A.
mellifera, em S. postica passam de cbicas a escamosas conforme a operria envelhece,
e os ductos, nesta espcie, so invariavelmente constitudos por clulas escamosas.
Machos recm-emergidos de A. mellifera apresentam a glndula com grau de
desenvolvimento semelhante ao das operrias recm-emergidas de sua espcie, porm
conforme atingem a maturidade sexual, ocorre regresso glandular de modo que nem
sempre foi possvel encontr-la. Por outro lado, machos velhos de S. postica so
dotados de glndulas to desenvolvidas quanto as fmeas de sua espcie. A
histoqumica no revelou incluses proticas, porm indicou que a secreo das
glndulas de operrias e rainhas de ambas espcies composta por lipdios neutros. A
secreo se acumula progressivamente na luz dos alvolos de modo que operrias
campeiras e rainhas em postura possuem alvolos mais trgidos que os indivduos mais

43

jovens. A partir dos resultados obtidos, algumas funes puderam ser sugeridas, tais
como: tratando-se de operrias, reconhecimento do indivduo ao voltar da coleta para a
colnia e auxiliar a coleta e manipulao de resinas vegetais (ambas espcies) e leos
florais (S. postica), marcao de trilha de cheiro (S. postica); nas rainhas, funo
feromonal de integrao dos membros da colnia (ambas espcies); e nos machos de S.
postica, atrao da fmea.

PALAVRAS-CHAVE: abelha, glndula labial, morfologia, lipdio, feromnio

ABSTRACT: Eusocial bees present a variety exocrine glands disperse on body whose
products are used in tasks performance. Pairs of glands are attached at mouthparts in
whole insects and, in bees, main glands are attached to labium (labial or salivary
glands), mandibules (mandibular glands) and floor mouth cavity (hiphofaringeal
glands). Adult insects labial or salivary pair glands are located in torax. However
cephalic branchs develop in some bees species, composing the cephalic salivary glands
which are completely develop in some species of Apinae subfamily. The present work
studied the histology and histochemic of females and males cephalic salivary glands of
Apis mellifera and Scaptotrigona postica in different ages. The histology results showed
cephalic salivary glands differs between species. While cells of alveoli and ducts are
primarily cuboidal in workers and queens of A. mellifera, in workers of S. postica, cells
undergo of cuboidal to squamous with age and ducts invariably consist of squamous
cells. Newly emerged males of A. mellifera exhibit glands in developmental stages
similar to that of newly emerged workers of their species. However, as males become
sexually mature, the gland degenerates difficulting its localization. Nevertheless, old
males of S. postica present glands as developed as those of females of their species.
Histochemical techniques demonstrate no protein inclusions and indicated the secretion
of glands of workers and queens of both species were neutral lipids. The secretion
gradually accumulates in the lumen of alveoli, and as a result, foragers and egg-laying
queens exhibit more turgid alveoli that younger individuals. Our findings suggest some
possible roles for the gland: in workers, recognition of nestmates upon returning to the
colony from the filed and to aid collection and manipulation of resins (both species) and
floral oils (S. postica), scent marking (S. postica); in queens, pheromonal role in

44

integrating all members of the colony (both species); and in males of S. postica, female
attraction.

KEYWORDS: bee, labial gland, morphology, lipid, pheromone

1. INTRODUO

As glndulas salivares dos insetos adultos so estruturas pares localizadas no


trax, constitudas por unidades secretoras e ductos. Existe um ducto excretor comum
que recebe a secreo das duas glndulas que formam o par e penetra na cabea do
inseto, atravs do formen occipital, e se abre na base da lngua onde descarrega a
secreo produzida por estas glndulas (CRUZ-LANDIM, 1967; SNODGRASS, 1956).
Exclusivamente em algumas espcies de abelhas, alm do par de glndulas
salivares do trax, existe um par tambm na cabea. A glndula salivar ceflica formase durante a pupao, por evaginaes do ducto excretor das glndulas salivares larvais
(CRUZ-LANDIM; MELLO, 1967; SNODGRASS, 1956). Entretanto,

as

glndulas

salivares da cabea apresentam graus de desenvolvimento diferentes na filogenia das


abelhas e apenas em algumas abelhas da subfamlia Apinae estas glndulas esto
plenamente desenvolvidas (CRUZ-LANDIM, 1967, 2000; SILVA DE MORAES,
2002).
Apesar das glndulas salivares torcicas e ceflicas terem origem (ectodrmica)
e desembocadura comum, a morfologia e funo so diferentes. De acordo com DelageDarchen et al. (1979), Simpson (1960) e Simpson et al. (1968) a secreo da glndula
salivar torcica aquosa e contm enzimas digestivas, enquanto a poro ceflica da
glndula produz secreo de aspecto oleoso para a qual foram apontadas algumas
funes, tais como auxlio na manipulao de cera (HESELHAUS, 1922), lubrificao
das peas bucais (SIMPSON, 1960) e marcao de trilha de cheiro (JARAU et al.,
2004). Ainda, nos Bombina e Meliponina, existe uma bolsa salivar ou reservatrio no
local de unio dos ductos excretores torricos com os ceflicos, de onde, ento, parte o
ducto excretor final (CRUZ-LANDIM, 1967).
Entre as abelhas, as fmeas so dotadas de maior quantidade de glndulas que os
machos e geralmente so mais desenvolvidas nas primeiras. As glndulas salivares

45

ceflicas atingem diferentes nveis de desenvolvimento nos sexos e nas espcies de


abelhas. Em A. mellifera, as operrias e rainhas as possuem mais desenvolvidas que nos
machos, nos quais a glndula vestigial ou ausente (GRAF, 1968; SIMPSON, 1962).
Porm, em algumas espcies de Bombus, os machos as possuem bem desenvolvidas
(BERGMAN; BERGSTRM, 1997; KULLENBERG et al., 1973; LAUER, 1992).
Poucos estudos foram conduzidos para determinar a morfologia e funo das
glndulas salivares ceflicas, alm do que, nem sempre abordaram as mudanas que
ocorrem no desenvolvimento da glndula com o passar da idade, tanto nas operrias e
rainhas como nos machos. Deste modo, este trabalho tem por finalidade analisar
conjuntamente a histologia e histoqumica das glndulas salivares ceflicas de fmeas e
machos exercendo diferentes tarefas na colnia, nas espcies Apis mellifera e
Scaptotrigona postica, a fim de contribuir para elucidar a funo das glndulas nestas
espcies.

2. MATERIAL E MTODOS

2.1. Material

As abelhas das espcies Apis mellifera e Scaptotrigona postica utilizadas neste


trabalho foram coletadas no apirio e meliponrio do Instituto de Biocincias,
Universidade Estadual Paulista (UNESP), Campus de Rio Claro, SP.
Operrias foram retiradas das colnias exercendo funes caractersticas das
etapas da diviso de trabalho: recm-emergidas, nutridoras e campeiras. Rainhas
virgens, quando no presentes na colnia, foram criadas em laboratrio e rainhas em
postura retiradas de colnias fortes. Machos recm-emergidos de A. mellifera foram
coletados dentro da colnia e os sexualmente maduros foram capturados nos agregados
de machos, prximos s colnias, geralmente pousados em galhos de arbustos.

2.2. Mtodos

2.2.1. Histologia (HE)

46

Para microscopia de luz, foram utilizadas as glndulas salivares ceflicas de 13


operrias recm-emergidas, 13 nutridoras e 13 campeiras, 7 rainhas virgens e 3 em
postura, 7 machos recm-emergidos e 7 maduros sexualmente de A. mellifera; 15
operrias recm-emergidas, 15 nutridoras e 15 campeiras, 5 rainhas virgens e 2 em
postura.
As glndulas salivares da cabea foram dissecadas em soluo fisiolgica para
inseto tamponada e fixadas em Bouin aquoso por 2 horas. Em seguida, passaram por
banhos sucessivos de lcool 70%, 80%, 90% e 95%, durante 15 minutos cada banho
para desidratao, aps o que foram embebidas em resina Leica por 24h. A incluso foi
feita na mesma resina acrescida de catalisador. Aps a polimerizao da resina, os
blocos foram seccionados com 4 a 6m de espessura, postos em lminas e corados com
hematoxilina e eosina. As lminas foram montadas com lamnula e blsamo e seguiram
para anlise ao microscpio de luz.

2.2.2. Histoqumica

2.2.2.1. Identificao de Protenas pelo Mtodo de Colorao por Azul de


Bromofenol (PEARSE, 1960).

Este mtodo de colorao presta-se para detectar a presena e o teor aproximado


de protenas presentes nas clulas e na secreo celular. Dependendo do teor protico,
as clulas e a secreo so coradas com diferentes tonalidades de azul. O azul de
bromofenol evidencia as protenas, corando-as de azul intenso.
As glndulas salivares ceflicas, para esta anlise histoqumica, passaram pelo
mesmo procedimento e etapas da preparao histolgica (HE), at os cortes serem
postos nas lminas. As lminas foram colocadas no azul de bromofenol a temperatura
ambiente, por 2h. Aps esse perodo, foram lavadas com gua corrente por 5 minutos e
passadas rapidamente por cido actico 0,5%, para remoo do corante no fixado s
protenas. Em seguida, foram lavadas com gua destilada, passadas por lcool butlico
tercirio, secas e montadas em blsamo. A passagem pelo lcool butlico tercirio pode
no ser feita, pois foi observado que este descola ou enruga os cortes nas lminas.

47

2.2.2.2. Identificao de lipdios Pelo Mtodo de Colorao por Sudan Black e


Azul do Nilo

O Sudan Black cora quaisquer substncias de natureza lipdica em negro ou


cinza esverdeado. J o sulfato de Azul do Nilo uma mistura que contm 3
componentes com cores diferentes, as quais se dissolvem diferentemente nos lipdios
conforme a composio destes. Deste modo, os lipdios neutros coram-se pelo
componente rosa, enquanto os lipdios cidos e alguns outros componentes celulares
no lipdicos coram-se pelo azul (MELLO; VIDAL, 1980).
Para cada corante, foram utilizadas as glndulas de 5 operrias recm-emergidas,
5 nutridoras e 5 campeiras de S. postica e A. mellifera, 2 rainhas virgens e 1 em postura
de S. postica e 3 rainhas virgens e 1 em postura de A. mellifera.
A colorao das lminas foi feita em preparaes totais. As glndulas de
operrias e rainhas de ambas espcies foram dissecadas em soluo fisiolgica para
inseto e colocadas sob lmina contendo poly-lisina, uma tentativa para imobiliz-las, j
que ao colocar fixador as glndulas tendiam a emaranhar-se, dificultando a anlise das
amostras. Logo aps esticadas na lmina com o auxlio da poly-lisina, as glndulas
foram fixadas em Formol Ca 1% e coradas com os corantes para lipdios. As lminas
foram montadas em gelatina glicerinada.

3. RESULTADOS

Algumas caractersticas histolgicas so compartilhadas entre os indivduos das


duas espcies estudadas. As glndulas salivares ceflicas so de origem ectodmica e,
por isso, apresentam a luz dos alvolos e dos ductos revestida por cutcula. Nos ductos,
a cutcula apresenta tendeas que so reforos em espiral, semelhantes aos das traquias.

3.1. Histologia

3.1.1. Apis mellifera

48

As glndulas salivares ceflicas de operrias recm-emergidas so constitudas


por alvolos e ductos com luz estreita. Nos alvolos e ductos, as clulas so
predominantemente cbicas, o ncleo ocupa grande poro do citoplasma e apresenta
nuclolos bem evidentes, os quais so mais numerosos nos alvolos que nos ductos
(Figura 1).
O citoplasma das clulas alveolares e dos ductos cora-se fracamente pela eosina.
possvel identificar regies mais claras entre as clulas provavelmente refletindo a
presena de espaos intercelulares abertos.
Em operrias nutridoras e rainhas virgens, tal como nas operrias recmemergidas, as clulas dos alvolos e dos ductos so cbicas, os ncleos ocupam o centro
celular e os nuclolos ocorrem em grande quantidade. Porm, alguns alvolos
apresentam luz um pouco mais ampla que a encontrada nas operrias recm-emergidas
(Figura 2).
Em operrias campeiras e rainhas em postura a luz dos alvolos e ductos
ampla. As clulas so cbicas e os ncleos, em alguns casos, apresentam nuclolo. No
citoplasma das clulas, como j mencionado anteriormente, existem regies mais claras
pouco coradas pela eosina (Figura 3), semelhantes a vacolos, melhor visualizados com
a tcnica histoqumica de colorao com azul de bromofenol (Figura 4).
Em machos, pode-se observar a reduo da glndula conforme o indivduo
amadurece sexualmente. Machos recm-emergidos apresentam a glndula formada por
ductos e alvolos com luz estreita (Figura 5), muito semelhante glndula das operrias
recm-emergidas. As clulas alveolares so cbicas, ncleo central e nuclolo. O
citoplasma pouco acidfilo. J em machos maduros sexualmente, a glndula encontrase bem reduzida, envolvida por clulas do corpo gorduroso (Figura 6). Os alvolos so
de difcil visualizao, podendo ser confundidos com os ductos, pois aparecem
colapsados. As clulas que formam os alvolos e ductos so escamosas. Algumas
clulas alveolares e dos ductos ainda apresentam nuclolos nos ncleos, mas
predominam ncleos de colorao homognea. O citoplasma dessas clulas pouco se
cora pela hematoxilina e eosina.

3.1.2. Scaptotrigona postica

49

As clulas alveolares em operrias recm-emergidas so achatadas ou cbicas.


Os ncleos so homogneos e grandes, ocupando praticamente toda a clula. O
citoplasma apresenta-se claro quando corado com hematoxilina e eosina (Figura 7).
Nas operrias nutridoras e rainhas virgens os alvolos so formados por clulas
cbicas, quando h pouca ou nenhuma secreo (Figura 8). O citoplasma apresenta-se
um pouco mais corado em relao ao das operrias recm-emergidas. Os ncleos so
basais e contm nuclolos.
Em operrias campeiras e rainhas em postura as clulas alveolares so
predominantemente escamosas, com ncleos homogneos basais e citoplasma
perinuclear pouco corado pela hematoxilina e eosina. J na regio apical, o citoplasma
aparece acidfilo (Figura 9).
Os ductos so formados por clulas escamosas, ncleos pequenos e s vezes com
nuclolos. Observa-se, ainda, reforos em espiral na cutcula (Figuras 8 e 9). A bolsa
salivar formada por clulas de achatadas a cbicas, cujos citoplasmas coram-se
fortemente pela eosina. Os ncleos contm nuclolos (Figuras 9 e 10).

3.2. Histoqumica

3.2.1. Identificao de Protenas Pelo Mtodo de Colorao por Azul de


Bromofenol (PEARSE, 1960).

A tcnica de azul de bromofenol s foi feita nas fmeas das duas espcies e no
revelou a presena de incluses proticas nas clulas corando apenas o citoplasma de
maneira homognea.
Em A. mellifera, tornou mais evidente, em operrias e rainhas, as regies
intercelulares abertas observadas com a colorao por HE (Figura 2 e 4). Em alguns
casos, os citoplasmas das clulas alveolares so semelhantes aos das clulas do corpo
gorduroso (Figura 2).
Em S. postica, as clulas da bolsa so cbicas e reagem positivamente ao azul de
bromofenol (Figura 10).

3.2.2. Identificao de Lipdios Pelos Corantes Sudan Black e Azul do Nilo

50

As coloraes com Sudan Black e Azul do Nilo, em operrias e rainhas em


diferentes idades, tanto em S. postica como A. mellifera, permitiram verificar que em
indivduos jovens, que so as operrias recm-emergidas, a glndula salivar ceflica
cora-se de azul pelo Azul do Nilo (Figura 11) e de negro pelo Sudan Black (Figura 14).
No entanto, os alvolos contm pouca ou nenhuma secreo na luz, de modo que se
apresentam com esta geralmente colapsada. Pouca secreo em rosa pode ser observada
em S. postica, atravs da colorao pelo Azul do Nilo (Figura 11). Nas glndulas das
operrias recm-emergidas de A. mellifera possvel distinguir os limites celulares com
o Sudan Black (Figura 14).
Operrias nutridoras e rainhas virgens apresentam condies intermedirias em
relao aos indivduos jovens e velhos, ou seja, grande parte das clulas alveolares
acumula secreo e alguns alvolos esto trgidos, com a secreo em rosa dada pelo
Azul do Nilo (Figuras 12 e 15).
Operrias campeiras e rainhas em postura apresentam alvolos trgidos, cheios
de secreo lipdica evidenciada em negro pelo Sudan Black (Figura 13) e
rosa/avermelhado pelo Azul do Nilo (Figura 16). No caso da colorao pelo Azul do
Nilo, o limite das clulas aparece azul escuro e o citoplasma vermelho e na poro
central da clula, uma regio no corada, revela a posio do ncleo.

51

_______________________Figuras

52

Figuras 1 a 6 Glndulas salivares ceflicas de operrias, rainhas e machos de Apis


mellifera. 1 (HE) - Operria recm-emergida. Luz (l) dos alvolos (a) e ductos (du)
estreita; ncleos (n) centrais com nuclolo. Espaos intercelulares aparecendo como
regies esbranquiadas entre as clulas (setas). Ducto com tendeas na cutcula (c) que
reveste a luz. 2 (Azul de Bromofenol) Glndula de operria nutridora, semelhante
histologicamente de rainha virgem. Alvolos (a) com luz (l) pouco mais ampla que a
de operrias recm-emergidas. Notar o citoplasma com vacuolizaes (setas),
semelhantes s da clula gordurosa (cg). Apenas a cromatina que uma nucleoprotena
se corou bem. 3 (HE) e 4 (Azul de Bromofenol) Glndula de operria campeira (3) e
rainha em postura (4). Clulas cbicas com ncleos (n) contendo nuclolos. Na figura 3
as clulas alveolares e ductais apresentam o citoplasma pouco corado por HE. Notar a
luz (l) mais ampla dos alvolos em ambas figuras. A colorao com azul de bromofenol
evidencia regies intercelulares e citoplasmticas pouco corveis (setas). 5 e 6
Glndulas de macho recm-emergido (5) e maduro sexualmente (6). Notar na figura 5
que a glndula histologicamente semelhante das fmeas jovens da mesma espcie.
Alvolo (a) e ductos (du) com luz (l) estreita, clulas cbicas, citoplasma pouco
acidfilo e ncleos (seta) com regies de cromatina condensada. Na figura 6, a poro
secretora da glndula (ps) encontra-se degenerada, as clulas com ncleos (seta)
picnticos e envolvida por clulas do corpo gorduroso (cg). he= hemcitos.

53

54

Figuras 7 a 12 Glndulas salivares ceflicas de Scaptotrigona postica. 7 (HE) Operria recm-emergida. Clulas alveolares (a) pouco coradas, com ncleos (setas)
homogneos ocupando quase todo o citoplasma. 8 (HE) - Operria nutridora e rainha
virgem. Alvolos (a) pouco corados em relao s clulas da glndula hipofarngea (hg).
Ncleos (seta) com regies de cromatina condensada. Ductos (du) formados por clulas
escamosas e com espiralizaes no cutcula. 9 (HE) Operria campeira. Clulas
alveolares (a) com ncleos basais (seta) homogneos. Citoplasma basal pouco corado e
apical acidfilo. As clulas da bolsa salivar (bs) so acidfilas e ncleos pequenos e
homogneos. 10 (Azul de Bromofenol) Operria nutridora. A bolsa salivar (bs) reage
positivamente ao corante, enquanto as clulas alveolares (a) e seus ncleos (setas)
coram-se fracamente. 11 e 12 (Montagem Total - Azul do Nilo) Operria recmemergida (11) e nutridora e rainha virgem (12). Notar que os alvolos (a) coram-se
inespecificamente, mas a pouca secreo presente (Figura 11, seta), em operria recmemergida, em rosa. Na figura 12, detalhe de um alvolo (a) contendo secreo corada
em rosa. cg = corpo gorduroso; du = ducto; l = luz.

55

56

Figura 13 Glndula salivar ceflica de operria campeira, semelhante da rainha em


postura, de Scaptotrigona postica. Colorao com Sudan Black, evidenciando luz dos
alvolos (a) cheia de secreo lipdica, em negro. du = ductos.

Figuras 14 a 16 Glndulas salivares ceflicas de Apis mellifera. 14 - Colorao com


Sudan Black. Alvolo (a) da glndula de operria recm-emergida, com a superfcie
marcada pelos contornos celulares, sem secreo na luz. Constituintes celulares
lipdicos corados de preto. 15 - Colorao com Azul do Nilo. Glndula de rainha
virgem, semelhante das operrias nutridoras. Secreo em rosa no interior dos
alvolos (a) e ductos (du) e o epitlio em azul. 16 - Colorao com Azul do Nilo.
Alvolos (a) das glndulas de operrias campeiras, semelhantes aos de rainhas em
postura, contendo secreo em vermelho escuro. Regio intercelular e ducto (du) azul
escuro. Ncleo (seta) no corado na regio central da clula.

57

58

5. DISCUSSO

As anlises histolgicas mostram que, de um modo geral, h uma uniformidade


quanto ao formato cbico das clulas alveolares inter e intra-especificamente. Nas
abelhas da espcie S. postica, a variao que ocorre na forma das clulas, passando de
cbicas nas operrias recm-emergidas e nutridoras escamosas nas campeiras, deve-se
ao estiramento do epitlio que forma a parede dos alvolos pelo acmulo de secreo na
luz. Nos machos de A. mellifera tambm ocorre mudana no formato celular dos
alvolos e ductos, passando de cbicas nos mais jovens escamosas nos mais velhos,
mas neste caso como a luz dos alvolos apresenta-se colapsada e os ncleos picnticos,
a mudana de forma deve-se degenerao celular. Parece, no entanto, que a forma
achatada das clulas ocorre nas glndulas de indivduos que esto no final do ciclo
funcional, isto , nos quais a atividade glandular baixa, como o caso das operrias
campeiras de S. postica, ou ento, em glndulas que esto regredindo, como no caso dos
machos maduros de A. mellifera. Salles e Cruz-Landim (1998) observaram na glndula
salivar ceflica de Camargoia nordestina alteraes morfolgicas semelhantes,
apresentando clulas alveolares cbicas e colunares em operrias jovens e escamosas
nas velhas.
O fato da quantidade de secreo acumulada na luz dos alvolos aumentar com o
tempo mostra que esta s comea a ser utilizada a partir de certa fase da vida, que nas
operrias coincide com a passagem para atividades fora do ninho e nas rainhas para o
perodo de oviposio.
No caso dos ductos, as clulas destes variam conforme a espcie. Operrias e
rainhas de todas as idades de S. postica apresentam o mesmo tipo celular, escamoso,
formando os ductos, enquanto em A. mellifera as clulas so cbicas nas operrias,
rainhas e machos recm-emergidos. Machos velhos de A. mellifera possuem clulas
escamosas formando os ductos da glndula salivar ceflica.
As clulas alveolares das operrias de S. postica passam por modificaes mais
marcantes que as clulas das operrias de A. mellifera conforme envelhecem. Operrias
recm-emergidas apresentam ncleo homogneo e ocupando quase todo citoplasma.
Esta uma caracterstica tpica de clulas que esto em processo de diferenciao,
portanto, ainda no produzem secreo ou a produzem em pequena quantidade.

59

As clulas alveolares nas operrias de S. postica variam no que diz respeito


posio do ncleo e colorao do citoplasma. Nas abelhas jovens o citoplasma cora-se
fracamente pela eosina e, conforme o indivduo envelhece, nas campeiras, a colorao
fraca d lugar a um citoplasma praticamente sem cor na regio basal, onde tambm
passa a se localizar o ncleo, e a regio apical da clula encontra-se corada de rosa pela
eosina.
De acordo com Cruz-Landim (1967) existem dois tipos de alvolos nas
glndulas salivares ceflicas de S. postica. Um tipo formado por clulas com grandes
ncleos basais e citoplasma basfilo, enquanto o outro formado por clulas mais
eosinoflicas, sendo que para este ltimo, o aspecto geral das clulas indica que a
secreo glandular armazenada dentro da clula em vacolos que se fusionam
progressivamente at provocarem o arrebentamento da membrana celular apical
sugerindo tratar-se de uma glndula apcrina. Os diferentes tipos de alvolos
encontrados por Cruz-Landim (1967) parecem corresponder ao encontrado no presente
estudo, porm, no se tratando de alvolos diferentes e sim estgios diferentes, j que o
estudo citado no retratou se os indivduos pertenciam a diferentes fases da vida. Os
alvolos com citoplasma basfilo, observados por Cruz-Landim (1967) correspondem
aos alvolos das glndulas das operrias nutridoras e aqueles alvolos cuja regio apical
das clulas eosinoflica, correspondem aos das campeiras.
A bolsa salivar encontrada apenas em S. postica formada por clulas
escamosas a cbicas. So clulas diferentes das que compem os ductos e os alvolos
por apresentarem ncleos com nuclolos evidentes, citoplasma acidfilo. A funo da
bolsa salivar desconhecida e Cruz-Landim (1967) de opinio que essa estrutura seja
residual j que o canal excretor final, do qual proveniente, encontra-se achatado em
espcies de abelhas solitrias que no possuem a glndula.
Segundo Blochtein (2006) a glndula salivar da cabea de Plebeia emerina
apresenta ciclo de desenvolvimento diferente do aqui apresentado para S. postica e A.
mellifera. Em P. emerina, a glndula formada por alvolos com amplo lmem em
operrias de meia vida, enquanto nas operrias campeiras reduzido. Na meia idade, a
operria executa a tarefa de macerar pelotes de prpolis espalhados pela colnia, com as
mandbulas. Blochtein (2006) sugere que a secreo dessa glndula seja misturada com
a prpolis durante a macerao, para manuteno do estado viscoso da mesma. A

60

macerao de pelotes de prpolis no est includa ou no foi observada entre as tarefas


realizadas pelas operrias de S. postica e A. mellifera. Porm, considera-se a
possibilidade de emprego desta secreo nas atividades de coleta e transporte da
prpolis para a colnia, mesmo porque na fase de campeira que a glndula atinge o
mximo de desenvolvimento.
As glndulas salivares ceflicas so muito reduzidas nos machos sexualmente
maduros de A. mellifera. Os machos recm-emergidos possuem glndula com grau de
desenvolvimento semelhante ao das operrias recm-emergidas, apesar de j
apresentarem corpo gorduroso ao redor dos alvolos e ductos. Entretanto, conforme os
machos envelhecem, a glndula constituda apenas por uma srie de ductos
ramificados, quase que totalmente envolvidos por clulas do corpo gorduroso e, de
acordo com Kratky (1931) poucos lobos secretores ocorrem entre as clulas gordurosas.
No presente estudo, verificou-se que machos maduros de S. postica desenvolvem sua
glndula, assim como as fmeas de sua espcie e no se observa o acmulo de clulas
do corpo gorduroso ao seu redor.
A maior parte das interaes sociais ocorre entre operrias e rainhas, sendo os
machos pouco interativos dentro da colnia em A. mellifera (FREE, 1980). Entre as
fmeas h uma diviso do trabalho reprodutivo que desempenhado pela rainha e as
operrias executam tarefas de manuteno da colnia. Para estas situaes
comportamentais e fisiologicamente diferentes, a distribuio das glndulas excrinas
torna-se um fator de caracterizao desses estados. Assim, no total, as rainhas tm maior
nmero de glndulas excrinas que as operrias e os machos menos que as fmeas.
Considera-se que os indivduos mais ativos nas interaes sociais, ou mais dominantes
na hierarquia social, tm glndulas mais diversificadas e em maior nmero. Assim, o
macho que um indivduo com tarefas limitadas na colnia e com interaes sociais
restritas o menos provido de glndulas (CRUZ-LANDIM, 2000).
As glndulas salivares ceflicas de ambas espcies conforme esperado em vista
do aspecto da secreo, no mostraram material diferenciado corado pelo azul de
bromofenol, porm as clulas da bolsa salivar da glndula de S. postica revelaram alta
positividade a esse corante, mas a reao pode dever-se ao fato de serem clulas
indiferenciadas. Porm so necessrios estudos mais detalhados para uma afirmao
conclusiva.

61

O mtodo de colorao mais simples para lipdios faz uso de corantes


denominados Sudan (Sudan III, Sudan Black, etc). Este mtodo se baseia na
propriedade que os Sudan apresentam de se dissolverem no material lipdico. O Sudan
Black cora quaisquer substncias de natureza lipdica, em negro. O Azul do Nilo, de
maneira inespecfica, cora o citoplasma em azul. No entanto, o sulfato de azul do Nilo
uma mistura que contm 3 componentes com cores diferentes e que se dissolvem
diferentemente nos lipdios conforme a composio destes. Assim, os lipdios neutros
dissolvem um componente rosa e adquirem essa cor, enquanto os lipdios cidos e
alguns outros componentes celulares no lipdicos coram-se de azul (MELLO; VIDAL,
1980).
Desta maneira, o uso dos dois corantes ao mesmo tempo permitiu confirmar a
natureza lipdica da secreo e mostrar que se trata de lipdios neutros, graas a
colorao pelo Azul do Nilo. Abelhas fmeas velhas contm em suas glndulas
salivares ceflicas muito mais leo que as jovens, fato evidenciado pelo acmulo
progressivo da substncia lipdica, primeiro intracelularmente e depois na luz dos
alvolos.
Os lipdios neutros so os lipdios mais simples, chamados tambm de
triacilgliceris. Estes compostos so derivados de cidos graxos os quais derivam dos
hidrocarbonetos (LEHNINGER et al., 2000). Alguns feromnios como os que
constituem a chamada substncia de rainha em A. mellifera so compostos por cidos
graxos

(BARBIER;

LEDERER,

1960;

CALLOW;

JOHNSTON,

1960).

Hidrocarbonetos so componentes freqentes na secreo das glndulas das abelhas,


como a de Dufour em operrias de Melipona bicolor (ABDALLA et al., 2004) e A.
mellifera (KATZAV-GOZANSKY et al., 1997), e na cutcula, onde alguns exercem a
funo de finger prints (BLOMQUIST et al., 1998), alm de serem tambm
encontrados na hemolinfa. Desta forma, os espaos intercelulares observados, abertos
para o fluido corporal nos cortes histolgicos, podem significar vias de absoro desses
compostos pelas glndulas para processamento ou excreo.
Em relao s possveis funes da glndula nas operrias, Heselhaus (1922)
sugeriu a de amolecer a cera durante sua manipulao na construo do ninho, mas
Simpson (1960) colocou em dvida tal funo j que secreo com a mesma
consistncia encontrada nas mesmas glndulas de abelhas que no produzem cera e

62

lhe atribuiu a funo de lubrificao das peas bucais. Segundo Cruz-Landim (1994), a
ocorrncia das glndulas excrinas nos insetos determinada geneticamente e, em
muitos casos, a sua morfologia e funo podem ser consideradas como um carter
sexual secundrio ou, por analogia, como um carter casta secundrio. No entanto, essas
glndulas so muito plsticas, podendo ter a mesma origem, mas funes inteiramente
diferentes, ao longo da escala evolutiva, ou at ao longo da vida do indivduo, no s
quando se olha para os insetos em geral, mas quando se leva em conta apenas as
abelhas. A plasticidade das glndulas, seja de espcie para espcie, casta para casta,
indivduo para indivduo, implica imediatamente em plasticidade de comportamento
(CRUZ-LANDIM, 1994). Deste modo no descartamos a possibilidade da funo da
glndula salivar ceflica em operrias de A. mellifera e S. postica estar relacionada com
o manuseio da cera apenas porque algumas espcies de abelhas no a produzem ou
porque as rainhas no trabalham com ela, haja vista, novamente, a provvel funo em
P. emerina (BLOCHTEIN, 2006).
Alm disso, outras substncias podem ser mais facilmente manipuladas pelas
abelhas com auxlio dessa secreo. As abelhas forrageiras normalmente procuram por
produtos das plantas tais como ltex, prpolis (resinas), madeira podre, casca de
rvores, sumo de frutos, sementes, folhas, tricomas, fragrncias, plen, nctar, esporos,
entre outros (ARMBRUSTER; WEBSTER, 1979). A prpolis a resina das plantas,
coletada pelas abelhas para uso no ninho como vedao de frestas e na construo
(SCHMIDT, 1997). As resinas quando secretadas so lquidas, mas ento endurecem.
Elas so coletadas pelas abelhas enquanto esto maleveis/flexveis ou ainda na forma
lquida (ARMBRUSTER; WEBSTER, 1979; GHISALBERTI, 1979). Estes compostos
so pobremente solveis em gua (ROUBIK, 1992; SCHMIDT, 1997) e segundo
Blochtein (2006) a resina coletada pelas abelhas um composto solvel em leo e,
portanto, a secreo lipdica da glndula salivar ceflica de A. mellifera e S. postica
pode auxiliar na coleta e manipulao da mesma.
As resinas secretadas pelos ramos das plantas e as resinas florais por semanas
no endurecem e podem, deste modo, ser coletadas pelas abelhas, bem como reusadas
dentro do ninho, por vrias vezes (ROUBIK, 1992). As resinas florais encontram-se
normalmente na forma de leos e so secretados por pequenas estruturas glandulares
chamadas olaiforos, visitadas, at onde se sabe, exclusivamente por abelhas

63

(BUCHMANN, 1987; VOGEL, 1969, 1974). No se sabe se abelhas adultas ingerem o


leo, mas os lipdios florais so usados como material de construo do ninho e so
aprovisionados nas clulas de cria de larvas em alguns Anthophorini (NEFF;
SIMPSON, 1981) e Melittidae (CANE et al., 1983; MICHENER, 1981; VOGEL;
MICHENER, 1985). Observaes nos neotrpicos indicam que leos so coletados por
abelhas indgenas sem ferro, apesar destes no terem estruturas especializadas para a
sua coleta. So certamente coletoras de leo Tetragona dorsalis, Trigona spinipes, T.
pallens e T. cilipes (STEINER, 1985). Provavelmente esses leos no so ingeridos,
mas usados para a construo do ninho. possvel que as operrias de S. postica
coletem leos florais que auxiliem na construo do ninho, como nos meliponneos
mencionados anteriormente, usando para tanto, a secreo da glndula salivar ceflica
na qual o leo floral solvel, permitindo o transporte deste para a colnia, apesar de
ainda ser desconhecida a estrutura relacionada ao transporte deste leo. Whitten et al.
(1989) verificaram que em machos de Eulaema cingulata (Apinae, Euglossina) a
secreo lipdica da glndula salivar ceflica mistura s fragrncias florais e o
composto formado capturado pelas cerdas tarsais e transferido para os rgos tibiais
posteriores. A secreo serve como um solvente apolar e aumenta a eficincia da coleta
de fragrncias.
Operrias de A. mellifera e Scaptotrigona bipunctata discriminam os membros
de sua colnia dos de outras colnias da mesma espcie, devido, pelo menos
parcialmente, aos hidrocarbonetos cuticulares (JUNGNICKEL et al., 2004; MORITZ;
HILLESHEIM, 1990; PAGE et al., 1991). Operrias recm-emergidas de A. mellifera,
quando introduzidas em outra colnia, no so rejeitadas, enquanto operrias de meia
vida e campeiras sim (informao verbal). Arnold et al. (1996) verificaram que os
hidrocarbonetos detectados nas glndulas salivares ceflicas de A. mellifera tambm
esto presentes sobre a epicutcula, assim como aqueles presentes na secreo da
glndula de Dufour (OLDHAM et al., 1994) em Bombus. Este fato levanta a
possibilidade de contato entre as duas partes do corpo. Sabendo-se que a superfcie
externa do corpo sofre desgastes durante o vo (MORGAN, 2006), a secreo lipdica
da glndula salivar ceflica liberada na base da lngua pode ser espalhada na superfcie
corporal com o auxlio das pernas, promovendo a manuteno da identidade da abelha
quando esta volta para a colnia. A secreo, ento, pode exercer papel no

64

reconhecimento do indivduo quando este volta da coleta para a colnia. Em algumas


espcies de formigas a glndula ps-farngea serve como um reservatrio de
hidrocarbonetos que provm de fontes internas e de trocas com as companheiras do
ninho (LAHAV et al., 1999; SOROKER; HEFETZ, 2000; SOROKER et al, 1994).
Foi verificado em machos de Bombus (Rhodobombus) mesomelas (TREZO et
al., 2005) que a glndula salivar ceflica encontra-se regredida, porm a pouca secreo
contida nos alvolos corresponde aos hidrocarbonetos cuticulares da superfcie do
corpo. Arnold et al. (1996), em A. mellifera, tambm identificou mesma composio
hidrocarbnica na secreo e na epicutcula. Uma das funes da glndula aqui sugerida
para operrias pode ser tambm suposta para os machos de A. mellifera. Se a funo da
secreo est relacionada ao reconhecimento da operria quando esta volta da coleta
para a colnia, o macho maduro no precisaria da glndula to desenvolvida, j que
quando sai da colnia para acasalamento, no volta. Sendo assim, pode ser que a
secreo da glndula de machos de A. mellifera contenha os hidrocarbonetos presentes
na cutcula e atue como reconhecimento do indivduo, enquanto este no sai para o
acasalamento.
Apesar de machos de S. postica tambm no voltarem colnia quando saem
para acasalamento, mas apresentarem glndula desenvolvida, pode indicar mais um
exemplo de plasticidade funcional. Machos de mamangavas usam a secreo de suas
glndulas salivares ceflicas para marcar com cheiro rotas de vo e atrair rainhas
virgens (BERGMAN; BERGSTRM, 1997; KULLENBERG et al., 1973). O
acasalamento dos meliponneos ocorre no solo enquanto de A. mellifera durante o vo.
Pode ser que os machos dos meliponneos, ao contrrio dos de A. mellifera, sejam os
que atraem as rainhas. Alm disso, os machos de meliponneos realizam tarefas, mesmo
que eventuais (NOGUEIRA-NETO, 1997), podendo empregar a secreo da glndula
para uma dessas funes.
De acordo com Ribbands (1953) h grande variao no desenvolvimento das
glndulas salivares ceflicas no gnero Bombus. Em Bombus campestris elas so
rudimentares nos machos e grandes nas rainhas e operrias e em B. pomorum so muito
maiores nos machos que nas fmeas. Machos de B. atratus e B. morio (LAUER, 1992)
tambm as possuem mais desenvolvidas que nas fmeas.

65

O principal meio de comunicao qumica dentro do ninho so os feromnios.


Estes so substncias qumicas produzidas e descarregadas externamente por um
indivduo e produzem respostas comportamentais e fisiolgicas especficas em outros
indivduos da mesma espcie. H 3 modos pelos quais os feromnios poderiam ser
transferidos entre as abelhas: pelo ar, por contato fsico e trofalaxis (FREE, 1980).
De acordo com Korst e Velthuis (1982), menos de 5% das interaes entre as
operrias atravs da trofalaxis resultam na transferncia de alimento. Supe-se que a
maioria dos contatos por trofalaxis tenha o propsito de comunicao. A operria obtm
todo seu alimento diretamente de outras abelhas durante seus dois primeiros dias de
vida e no se serve nas clulas de armazenamento de alimento da colnia at que tenha
cerca de 3 dias de idade. Embora at mesmo abelhas muito jovens possam dar alimento,
em geral, at que as abelhas tenham 2 semanas (meia vida) de idade elas recebem
alimento mais freqentemente do que do, embora, depois, tenda a ocorrer o contrrio.
Alm do mais, em geral, os indivduos recebem alimento de abelhas que so mais
velhas que aquelas a quem do alimento e, medida que as operrias se tornam mais
velhas, as idades mdias das abelhas que elas alimentam e por quem so alimentadas
tambm aumentam. Como resultado, h uma tendncia de o alimento passar rpida e
amplamente atravs de uma colnia, a partir das abelhas mais velhas, que so as
coletoras, para as abelhas que esto alimentando a cria, produzindo cera ou desidratando
nctar para produzir mel (FREE, 1980). J que a glndula salivar ceflica se abre na
base da lngua e supondo que a secreo lipdica esteja relacionada com a identificao
dos membros da colnia, a trofalaxis torna a integrao e reconhecimento interindividual possvel atravs dessa via em S. postica e A. mellifera. Em Bombus
cryptarum e B. magnus a secreo da glndula salivar ceflica composta por
hidrocarbonetos e usada como sinal de reconhecimento das espcies (BERTSCH et
al., 2005).
Todas as abelhas adultas de uma colnia possuem o mesmo odor da colnia, que
diferente do de qualquer outra. Parece que esse odor no herdado, mas sim adquirido
do meio ambiente. As ceras cuticulares da superfcie do corpo das abelhas absorvem os
odores da fonte de alimento (FREE, 1980). Fragrncias associadas ao nctar e abertura
das flores so atrativas para as abelhas forrageiras. Uma frao dos compostos volteis
que constituem o odor floral pode ser suficiente para permitir que as abelhas aprendam e

66

discriminem entre as vrias espcies de flores (MASSON, 1982; PHAM-DELEGUE et


al., 1986). As fragrncias so produzidas em tecidos secretores especializados, os
osmforos, localizados sobre a superfcie das flores (FAHN, 1979; VOGEL, 1963), mas
os odores tambm podem ser liberados por outras partes da cutcula floral (WILLIAMS,
1982). As fragrncias florais podem conter mais de cem compostos incluindo
hidrocarbonetos (PAHN-DELEGUE et al., 1986; WILLIAMS; WHITTEN, 1983). Se o
leo produzido pela glndula salivar ceflica espalhado na superfcie do corpo da
abelha e se os hidrocarbonetos dessa secreo apresentam capacidade de absorver as
fragrncias florais, que so tambm compostos hidrocarbnicos, pode-se supor que a
glndula tenha funo na identidade do odor da colnia, proveniente da fonte alimentar.
As abelhas indgenas adotam diversos sistemas de recrutamento de
companheiras para o local da fonte de alimento, mas que no geral so pouco
compreendidos (ESCH, 1967; LINDAUER; KERR, 1960). Em muitos gneros de
abelhas indgenas, as recrutas seguem diretamente as forrageiras e/ou seguem trilhas de
cheiro postas pelas forrageiras (KERR, 1969, 1994). No caso de S. postica as recrutas
tanto seguem trilha de cheiro, como tambm uma guia (LINDAUER; KERR, 1960).
Apesar das glndulas mandibulares serem apontadas como as glndulas da cabea mais
provveis como fontes de feromnios, Jarau et al. (2004) e Schorkopf et al. (2007)
demonstraram que, respectivamente, em Trigona recursa e T. spinipes, os feromnios
usados para comunicao da fonte de alimento por trilha de cheiro, entre as operrias
campeiras, so provenientes das glndulas salivares ceflicas, as quais so bem
desenvolvidas nesta fase da vida. Embora em S. postica seja sugerido que a trilha de
cheiro produzida com secreo da glndula mandibular (LINDAUER; KERR, 1960),
possvel que a secreo da salivar ceflica tambm esteja envolvida na comunicao
da fonte de alimento por trilha de cheiro, porm estudos detalhados juntamente com
bioensaios devero ser conduzidos para esclarecer e concluir tal suposio.
Verificou-se, portanto, que as fmeas das espcies A. mellifera e S. postica
apresentam algumas caractersticas particulares quando se tratou da histologia, porm
so histoquimicamente semelhantes e o desenvolvimento da glndula segue o mesmo
padro, atingindo grau mximo quando velhas. J nos machos, a glndula regride em A.
mellifera enquanto em S. postica permanece funcional conforme o indivduo envelhece.
No entanto, nem todas as funes sugeridas se aplicam s duas espcies. Para operrias,

67

as funes de auxiliar a coleta e manipulao de resina, e de reconhecimento do


indivduo ao voltar da coleta para a colnia foram sugeridas para ambas espcies; coleta
de leos florais e marcao de trilha de cheiro apenas para S. postica; nas rainhas,
funo feromonal de integrao dos membros da colnia para ambas espcies; e nos
machos de S. postica, atrao da fmea.

68

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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77

Ultra-Estrutura das Glndulas Salivares Ceflicas de Operrias e Rainhas de Apis


mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae) em Diferentes Fases da
Vida.
Silvana Beani Poiani, Carminda da Cruz-Landim1

Departamento de Biologia, Instituto de Biocincias de Rio Claro (UNESP/RC),


Av. 24A, no.1515, Bela Vista, CEP 13506-900, Rio Claro, So Paulo, Brasil

RESUMO: Todos os insetos adultos apresentam um par de glndulas salivares


localizado no trax. Exclusivamente em algumas espcies de abelhas, um par de
glndulas salivares tambm se desenvolve na cabea, recebendo o nome de glndulas
salivares ceflicas. Existe, ainda, uma dilatao no local de convergncia dos ductos
provenientes da poro glandular torcica e ceflica denominada bolsa salivar,
encontrada nos Bombina e Meliponina. Foram estudadas as glndulas salivares ceflicas
de operrias e rainhas em diferentes fases da vida de Apis mellifera e Scaptotrigona
postica, atravs de tcnicas rotineiras de microscopia eletrnica de transmisso (MET).
A MET revelou que as clulas que compem os ductos e a bolsa salivar apresentam
invaginaes da membrana plasmtica basal que chegam a alcanar a regio apical e
contm material eletron-denso, de mesma densidade eletrnica da lmina basal e de
algumas regies da cutcula. Os espaos intercelulares tambm contm material,
sugerindo seu transporte a partir da hemolinfa diretamente para a luz do ducto. As
clulas dos alvolos so ricas em retculo endoplasmtico liso, mitocndrias, Golgi e
vesculas contendo material lamelar, tpico de incluses lipdicas. Em S. postica as
clulas contm grande quantidade de polirribossomos e tornam-se escamosas conforme
os indivduos envelhecem, o que no ocorre em A. mellifera, onde permanecem cbicas.
As mitocndrias passam por alteraes caracterizadas por desestruturao da membrana
interna e perda de eletron-densidade da matriz. As mitocndrias encontram-se
associadas s vesculas de secreo e, quando apresentam sua membrana interna
fragmentada podem tornar-se depsitos de compostos lipdicos. A possvel funo da
secreo discutida, tanto para as operrias como para as rainhas, em face das

78

mudanas na apresentao das glndulas nestas castas e de acordo com as tarefas


desempenhadas na colnia.

PALAVRAS-CHAVE:

abelha,

glndula

labial,

mitocndria,

hidrocarbonetos,

feromnio.

ABSTRACT: Adult insects have a pair of salivary glands located in torax. Exclusively
some bees species present a pair of salivary glands develop in head, denominated
cephalic salivary glands. As exocrine glands, these structures consist of secretory units
and ducts. Furthermore, there is a salivary pouch where ducts from the thoracic and
cephalic salivary glands converge in Bombina and Meliponina. The cephalic salivary
glands of workers and queens in different life stages of Apis mellifera and
Scaptotrigona postica were examined using routine techniques for transmission electron
microscopy (TEM). The TEM showed ducts and salivary pouch cells present
invaginations of the basal plasma membrane reach the apical region and contain
electron-dense materials, with the same electron density of the basal lamina and some
regions of the cuticle. The intercellular spaces also contain materials of similar electrondensity, suggesting they are being absorbed from the hemolymph directly into the gland
lumen. Alveolar cells are rich in smooth endoplasmic reticulum, mitochondria, Golgi,
and vesicles containing lamellar material, typical of lipid inclusions. In S. postica, cells
contain large quantities of polyribosomes and become squamous with age, which does
not occur in A. mellifera, whose cells remain cuboidal. Mitochondria undergo changes
characterized by collapse of the internal membrane and decreased electron density of
the matrix. This organelle is associated with secretion vesicles and when its internal
membrane was fragmented may become a lipid deposit. A possible role of the secretion
is discussed for workers as well as queens, taking into account the changes in gland
characteristics in these castes and their function in the colony.

KEYWORDS: bee, labial gland, mitochondria, hidrocarbon, pheromone

1. INTRODUO

79

As principais glndulas que constituem o sistema salivar dos insetos so as


mandibulares, as hipofarngeas e as labiais. Todas estas glndulas esto conectadas aos
apndices bucais dos quais recebem suas denominaes. No entanto, as funes dessas
glndulas so variadas, no necessariamente relacionadas com a ingesto e digesto de
alimentos.
A secreo das glndulas labiais eliminada na base da lngua, podendo entrar
em contato com o alimento a ser ingerido. Alm disso, as glndulas labiais so
homlogas das glndulas salivares dos outros insetos e derivam das glndulas salivares
larvais. Deste modo, foi a elas atribuda a denominao de glndulas salivares
propriamente ditas.
As glndulas salivares dos insetos adultos so estruturas pares localizadas no
trax e, exclusivamente em algumas abelhas da subfamlia Apinae, existe tambm um
par ceflico plenamente funcional (CRUZ-LANDIM, 1967).
As glndulas salivares ceflicas so formadas durante a pupao, por
evaginaes do ducto excretor das glndulas salivares larvais.

O par ceflico

constitudo por unidades secretoras alveolares (CRUZ-LANDIM, 1967) e ductos que


partem dos alvolos e se unem progressivamente at formarem o ducto excretor de cada
glndula. Este ltimo fusiona-se com o ducto excretor comum das glndulas salivares
torcicas e d origem ao ducto excretor final, o qual desemboca na base da lngua.
Nos Bombina e Meliponina, no local de unio dos ductos das glndulas salivares
torcicas e ceflicas existe uma dilatao chamada de bolsa salivar ou reservatrio.
Neste caso, o ducto excretor final parte da bolsa (CRUZ-LANDIM, 1967; GRAF,
1968).
As glndulas salivares torcicas e ceflicas, apesar de terem a mesma origem,
diferem quanto morfologia de suas pores secretoras e aspecto da secreo. A
secreo da poro glandular torcica aquosa e contm enzimas relacionadas
digesto (DELAGE-DARCHEN et al., 1979; SIMPSON, 1960; SIMPSON et al., 1968).
Em contra partida, a salivar ceflica produz secreo oleosa e segundo Heselhaus
(1922) a funo seria de amolecer a cera durante sua manipulao na construo do
ninho. Simpson (1960) refutou a sugesto de Heselhaus alegando que nem todas as
abelhas que apresentam a glndula salivar ceflica desenvolvida trabalham com a cera e
atribuiu a funo de lubrificao das peas bucais. Jarau et al. (2004) e Schorcopf et al.

80

(2007) demonstraram, respectivamente, em Trigona recursa e T. spinipes, que a


secreo da salivar ceflica est relacionada comunicao da fonte de alimento por
trilha de cheiro.
A maioria dos estudos realizados com as glndulas salivares da cabea visou
identificar a composio qumica da secreo da glndula. Muitos trabalhos nesse
mbito foram conduzidos em espcies de Bombus, principalmente nos machos. A ultraestrutura da glndula, no entanto, no tem sido abordada pelos pesquisadores. Sendo
assim, pretendeu-se estudar as glndulas salivares ceflicas de operrias e rainhas de
Apis mellifera e Scaptotrigona postica, a fim de acompanhar o desenvolvimento
glandular e detectar diferenas ultra-estruturais passveis de serem correlacionadas
funo secretora.

2. MATERIAL E MTODOS

2.1. Material

Neste estudo foram utilizadas operrias e rainhas em diferentes fases da vida das
espcies eussociais Apis mellifera e Scaptotrigona postica. Operrias jovens (recmemergidas), de meia idade (nutridoras) e velhas (campeiras) foram coletadas
desempenhando essas etapas da diviso de trabalho, enquanto as rainhas foram
coletadas da colnia ou, quando se tratou de rainhas virgens de A. mellifera, algumas
foram criadas artificialmente.

2.2. Mtodos

Foram utilizadas 15 operrias recm-emergidas, 15 nutridoras e 15 campeiras,


15 rainhas virgens e 2 em postura de A. mellifera; 20 operrias recm-emergidas, 20
nutridoras, 20 campeiras e 1 rainha em postura de S. postica.
As glndulas salivares da cabea foram dissecadas e fixadas em glutaraldedo
2,5% em tampo cacodilato de sdio 0,1M, pH 7,4, durante 2 horas e lavadas 2 vezes no
mesmo tampo mencionado acima. Seguiu-se com a ps-fixao em tetrxido de smio

81

a 0,5% contendo ferrocianeto de potssio 0,8% dissolvidos em tampo cacodilato de


sdio 0,1M, pH 7,4 durante 1 hora no escuro. Em seguida, foram lavadas com a mesma
soluo tampo por 2 vezes, 15 minutos cada e deixadas por 3 horas em soluo aquosa
de cido tnico a 2%. As glndulas foram lavadas com etanol 10% por 15 minutos,
deixadas em acetato de uranila a 1% em etanol a 10% no escuro por 2 horas,
desidratadas em concentraes crescentes de acetona, 50%, 70%, 90%, 95% e 100%, 5
minutos cada, sendo o ltimo banho repetido 3 vezes.
A embebio foi feita deixando as glndulas durante 1 hora em cada uma das
seguintes misturas de acetona e resina de incluso, 1:1, 1:3 e resina pura. Depois, as
glndulas foram colocadas na resina Epon Araldite com o catalisador de polimerizao
por 1 hora e includas nesta mesma resina em frmas as quais seguiram para estufa a 60
por 24 horas.
Os blocos foram previamente seccionados em cortes grossos e estes colocados
em lminas histolgicas e corados com azul de metileno para verificao da qualidade
da fixao e escolha do local de observao. Cortes ultra-finos foram postos em telinhas
de cobre e contrastados primeiramente com acetato de uranila por 45 minutos e depois
com citrato de chumbo por 10 minutos.

3. RESULTADOS

3.1. Ductos e Bolsa Salivar

Tanto os ductos que constituem as glndulas salivares ceflicas de A. mellifera e


S. postica, quanto a bolsa salivar presente apenas em S. postica so formados por
clulas ultra-estruturalmente semelhantes.
Tanto a bolsa salivar como os ductos das glndulas salivares ceflicas de A.
mellifera so constitudos por uma camada de clulas de altura mdia, as quais possuem
ncleos arredondados ou irregulares, geralmente com um nuclolo bem evidente. A
superfcie apical das clulas recoberta por uma cutcula com a superfcie luminal
irregular, ondulada (Figura 1). Corte transversal do ducto da glndula em S. postica
mostra que as clulas so achatadas com o ncleo bem alongado ocupando quase todo o
citoplasma, esto presentes algumas mitocndrias e retculo endoplasmtico liso. A

82

cutcula que reveste o ducto espessa e a secreo fica a ela aderida, ocupando grande
poro do lmen (Figura 2). J a luz da bolsa salivar de S. postica e dos ductos de A.
mellifera so revestidas por uma cutcula pouco espessa, de mdia densidade eletrnica,
mas que contm regies eletron-densas correspondentes a espessamentos (Figura 1).
A membrana plasmtica apical apresenta muitas invaginaes, muitas vezes
formando projees semelhantes a microvilosidades irregulares, projetando-se para um
espao subcuticular. Na base dessas invaginaes notam-se muitas vesculas claras,
resultantes de endocitose (Figuras 3 e 4). A membrana plasmtica basal apresenta
muitas invaginaes dilatadas na base e que s vezes formam alas e so preenchidas
por material com a mesma eletron-densidade da lmina basal. Os espaos intercelulares
so ligeiramente alargados e preenchidos pelo mesmo material eletron-denso,
semelhante lmina basal (Figuras 1, 3 e 4), a qual muito espessa. Estas invaginaes
nas suas extremidades do origem a pequenas vesculas com o mesmo contedo eletrondenso. A membrana plasmtica intercelular muito sinuosa, principalmente nos dois
teros apicais, onde o espao intercelular estreito e quase no contm material eletrondenso (Figura 4).
O citoplasma das clulas da bolsa salivar e dos ductos contm retculo
endoplasmtico liso, mas pobre em organelas. As mitocndrias distribuem-se por todo
citoplasma, mas so encontradas principalmente acompanhando as reentrncias
formadas pelas invaginaes da membrana plasmtica basal. Possuem formatos
irregulares e tamanhos variados, algumas com cristas desorganizadas (Figura 4).

3.2. Poro Secretora

3.2.1. Apis mellifera

A ultra-estrutura das glndulas salivares ceflicas de operrias e rainhas de A.


mellifera mostrou que estes indivduos compartilham, de um modo geral, caractersticas
semelhantes quanto estrutura celular com algumas particularidades relacionadas com a
idade da abelha.
Deste modo, as caractersticas em comum de operrias e rainhas esto descritas
primeiramente e, em seguida, as particularidades de cada casta e idade.

83

3.2.1.1. Caractersticas Comuns

A superfcie apical das clulas secretoras coberta por uma cutcula pouco
espessa, indicando que esta pouco especializada (Figuras 5 e 12).
Invaginaes da membrana plasmtica basal adentram o citoplasma formando
canais estreitos os quais contm material com mesma densidade eletrnica da lmina
basal, a qual aqui fina, e formam alas que parecem, no corte, envolver pores do
citoplasma (Figuras 6 e 7). Os espaos intercelulares so abertos basalmente e
preenchidos pelo mesmo material eletron-denso da lmina basal. Traqueolas penetram
pelas invaginaes da membrana plasmtica at certa profundidade do citoplasma
(Figura 6).
O retculo endoplasmtico liso (REL) bem desenvolvido nestas clulas
glandulares e pode apresentar-se sob a forma de tbulos ou de pequenas vesculas.
comum encontrar vesculas achatadas do REL acompanhando as membranas de
separao das clulas, as quais tambm contm material eletron-denso. Nesta regio o
REL forma-se por fragmentao das invaginaes da membrana plasmtica basal, as
quais constituem um verdadeiro labirinto basal (Figura 7).
O retculo endoplasmtico rugoso (RER) pouco desenvolvido, porm o
aparelho de Golgi comum e aparece como pequenos agrupamentos de lamelas
dilatadas eletron-transparentes que lhe do aspecto vesicular (Figuras 6 e 8). Esto
presentes vrios destes agrupamentos por clula (Figura 8).
As mitocndrias tm localizao preferencial basal, so alongadas, com matriz
eletron-densa e cristas paralelas ao comprimento (Figura 6). As clulas glandulares
apresentam ncleo grande ocupando a regio central da clula. O ncleo pode
apresentar mais de um nuclolo, sendo que, em alguns casos, possvel identificar as
regies fibrilar e granular que o compe (Figura 5). A regio fibrilar ocupa a poro
central do nuclolo enquanto a granular distribui-se ao redor da fibrilar. Regies de
eucromatina entremeiam os nuclolos.

3.2.1.2. Caractersticas Particulares

84

As clulas glandulares so achatadas ou cbicas em operrias recm-emergidas e


o citoplasma preenchido por mitocndrias com matriz eletron-densa de formatos
variados. Em operrias nutridoras, campeiras e rainhas tanto virgens quanto em postura,
as clulas glandulares so cbicas. As mitocndrias so abundantes, distribuem-se por
todo citoplasma e variam no tamanho e eletron-densidade da matriz (Figuras 5, 6 e 9).
Mitocndrias com matriz de baixa densidade eletrnica geralmente apresentam cristas
desorganizadas. Neste caso material de baixa eletron-densidade parece acumular-se no
espao intermembranoso das mitocndrias (Figuras 8, 10 e 11).
Vesculas eletron-transparentes so freqentes em operrias campeiras e rainhas
em postura. Em alguns casos parecem ser formadas pela prpria desestruturao das
mitocndrias (Figuras 10 e 11) e em outros casos as vesculas aparecem em associao
com mitocndrias e contm em seu interior estruturas membranosas (Figura 10). As
vesculas originadas de mitocndrias so reconhecidas por apresentarem alm de
estruturas lamelares, restos de cristas (Figura 11). Algumas, ainda, apresentam s um
contorno eletron-denso, o qual corresponde a uma unidade de membrana. As vesculas
so encontradas por todo citoplasma.
Nas operrias campeiras e rainhas em postura algumas vesculas de baixa
densidade eletrnica encontram-se fundidas membrana plasmtica apical em vias de
liberao do contedo para a luz alveolar. Alguma secreo sobre a cutcula pode ser
observada na Figura 12.
Rainhas virgens contm em algumas clulas alveolares grandes mitocndrias
arredondadas, com mdia densidade eletrnica e poucas cristas (Figura 13).

3.2.2. Scaptotrigona postica

Nos alvolos das glndulas salivares da cabea de operrias recm-emergidas as


clulas so cbicas e seus ncleos redondos localizam-se na sua poro central (Figura
14). Da mesma forma que em A. mellifera a luz do alvolo revestida por cutcula, mas
esta bem mais fina. A lmina basal bem delgada, de mdia densidade eletrnica. A
membrana plasmtica basal no forma invaginaes de maneira que no est presente
um labirinto basal. No citoplasma alm do retculo endoplasmtico liso esto presentes
numerosos agrupamentos ribossmicos, mitocndrias e depsitos de secreo (Figura

85

14). As mitocndrias apresentam cristas desfeitas e matriz eletron-transparente. A


secreo apresenta-se sob a forma de dois tipos de grnulos, um com contedo
homogneo de eletron-densidade mdia, e outro, maior contendo numerosas vesculas
pequenas (Figura 15).
As mitocndrias de mdia densidade eletrnica so predominates e distribuemse por todo citoplasma (Figura 14). Algumas com baixa densidade eletrnica e formato
irregular associam-se com grnulos que tambm apresentam baixa eletron-densidade.
Tais mitocndrias apresentam-se de tal forma alteradas que sua identificao s
possvel graas s cristas restantes na matriz.
As operrias nutridoras apresentam os alvolos da glndula salivar ceflica um
pouco maiores que os das operrias recm-emergidas, de modo que alguns j contm
alguma secreo enquanto outros ainda permanecem vazios. Nestes ltimos, as clulas
so cbicas e ultra-estruturalmente semelhantes s clulas alveolares das operrias
recm-emergidas (Figura 14).
Nos alvolos cheios de secreo de operrias nutridoras (Figura 16), as clulas
so semelhantes s das glndulas das operrias campeiras (Figura 17), ou seja, muito
achatadas devido presso feita pela secreo na luz. Tais clulas possuem no
citoplasma poucas mitocndrias e muitos ribossomos livres. Porm, nas operrias
nutridoras encontram-se com maior freqncia incluses eletron-transparentes contendo
estruturas membranosas no interior. Os ncleos so arredondados ou alongados
ocupando quase todo citoplasma. Tanto a cutcula que reveste o alvolo quanto a lmina
basal so pouco desenvolvidas. Na operria nutridora podem, ainda, ser observadas
evidncias de eliminao de secreo (Figura 16).
As clulas alveolares de rainhas em postura so cbicas com ncleo
arredondado, e de certa forma ultra-estruturalmente diferentes das operrias. O retculo
endoplasmtico liso formado por canais finos parece em certas regies dilatar-se
formando espaos irregulares preenchidos por material floculento (Figura 18). comum
encontrar mitocndrias alteradas com baixa densidade eletrnica e restos de cristas e
grnulos contendo material homogneo, de mdia eletron-densidade (Figura 19).
Grandes vacolos armazenam material formando massas eletron-densas de aspecto
acicular (Figura 20).

86

_______________________Figuras

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Figuras 1 e 2 Ductos da glndula salivar ceflica de Apis mellifera e Scaptotrigona


postica. 1- Corte longitudinal do ducto da glndula de A. mellifera. Notar as clulas de
altura mdia, limitadas na luz por uma cutcula (c) fina e providas de espessa lmina
basal (lb) que penetra pelas invaginaes (setas) da membrana plasmtica. As regies
eletron-densas na cutcula (ec) correspondem a espessamentos. 2 Corte transversal do
ducto da glndula de S. postica, vendo-se ausncia de lmina basal espessa, cutcula (c)
luminal espessa e secreo (s) na luz. Clula achatada e ncleo (n) alongado ocupando
boa poro do citoplasma. l = luz; m = mitocndria; mi = membrana intercelular muito
sinuosa.

Figuras 3 e 4 Bolsa salivar de Scaptotrigona postica. 3 A espessa lmina basal (lb)


penetra por invaginaes (i) da membrana plasmtica basal, na extremidade das quais se
formam vesculas (v) endocticas. Notar a membrana intercelular (mi) muito sinuosa e o
espao intercelular preenchido com material eletron-denso at sua metade (seta). 4
Detalhe da regio apical da clula da bolsa salivar, vendo-se a formao de espao
subcuticular (es). Mitocndrias (m) encontram-se principalmente na regio apical e
acompanhando a membrana intercelular (mi), algumas com cristas desorganizadas
(seta). c = cutcula; ec = espessamentos da cutcula; l = luz; n = ncleo; nu = nuclolo.

88

89

Figuras 5 a 8 Poro secretora da glndula salivar ceflica de Apis mellifera. 5 Aspecto geral da clula secretora, mostrando cutcula (c) apical pouco especializada,
mitocndrias (m), retculo endoplasmtico liso (rel) e grande ncleo (n) com cromatina
dispersa e nuclolos (nu) ativos, com regio granular perifrica (rg) e fibrilar central
(rf). 6 Poro basal de clula secretora da glndula, vendo-se a lmina basal (lb)
eletron-densa penetrando atravs de invaginaes (i) da membrana plasmtica, dos
contatos celulares (mi) e das invaginaes que levam as traqueolas (tr). Notar a
presena de Golgi (G), mitocndrias (m) alongadas com cristas longitudinais e retculo
endoplasmtico liso (seta). 7 Labirinto basal formado por invaginaes da membrana
plasmtica (i). Notar o retculo endoplasmtico liso (seta) e a produo de vesculas (v)
endocticas que acompanham a membrana intercelular (mi). 8 Alteraes
mitocondriais associadas produo de secreo. Observa-se a diminuio da
quantidade de cristas e dilatao do espao intermembranoso (setas). Notar a presena
de vrios complexos de Golgi (G) vesiculares. lb = lmina basal; m = mitocndria; tr =
traqueola.

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Figuras 9 a 12 Poro secretora das glndulas salivares ceflicas de Apis mellifera. 9 Clula secretora da glndula de operria campeira mostrando associao de
mitocndrias (m) e retculo endoplasmtico liso (rel) bem como grnulos (gr). 10 e 11
Modificaes das mitocndrias relacionadas produo da secreo. Notar em 10 a
associao de mitocndrias (m) com vesculas contendo material membranoso (vm) e
em 11 a aparente acumulao de secreo no interior de mitocndrias (setas). 12
Eliminao de secreo atravs da cutcula (c), no interior da qual forma bolhas (setas) e
seu acmulo (s) na luz (l). Notar invaginaes da membrana plasmtica apical (ia) e
acmulo preferencial de mitocndrias (m) nesta regio. m = mitocndria; n = ncleo; tr
= traqueola; ve = vesculas com contorno eletron-denso.

92

93

Figura 13 Clula da glndula salivar ceflica de rainha virgem de Apis mellifera


mostrando grandes mitocndrias (m) com poucas cristas aparentemente em processo de
acmulo de lipdios. Notar na luz do alvolo a secreo (s) muito eletron-densa.

Figuras 14 a 16 Poro secretora da glndula salivar ceflica de Scaptotrigona


postica. 14 - Aspecto geral das clulas secretoras das glndulas de operrias recmemergidas. Notar os agrupamentos de ribossomos (r), o ncleo (n) com grande nuclolo
(nu), cutcula (c), revestindo a luz (l) do alvolo a qual contm secreo (s). 15
Glndula de operria recm-emergida. Secreo presente em espaos dilatados do
retculo (setas) e sob a forma grnulos (gr1) homogneos e contendo pequenas vesculas
(gr2). 16 - Nas operrias nutridoras as clulas glandulares encontram-se muito achatadas
e a luz dos alvolos cheia de secreo (s). Vacolos (va) claros logo abaixo da cutcula
(c) podem significar eliminao da secreo. lb = lmina basal delgada; m =
mitocndria; n = ncleo; r = ribossomos; tr = traqueola; seta = vescula com material
membranoso.

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Figuras 17 a 20 Poro secretora da glndula salivar ceflica de Scaptotrigona


postica. 17 Nas operrias campeiras as clulas glandulares so muito achatadas e a luz
dos alvolos cheia de secreo (s). As clulas das campeiras s apresentam maior
espessura na regio do ncleo (n) e parecem completamente inativas. 18, 19 e 20
Diversos aspectos das clulas glandulares de rainhas em postura de S. postica. Notar em
18 a dilatao do retculo endoplasmtico liso (rel) com acmulo de material floculento
no interior (setas) e em 19 a transformao de mitocndrias por perda das cristas e da
densidade da matriz (setas). Observar em 20 enormes depsitos de material acicular
(ma) em vacolos citoplasmticos. lb = lmina basal; m = mitocndria; n = ncleo; vm
= vescula com estrutura membranosa.

96

97

5. DISCUSSO

A constituio celular dos ductos de A. mellifera e S. postica e da bolsa salivar


nesta ltima espcie s diferem por serem, no caso dos ductos de S. postica, as clulas
invariavelmente escamosas.
O citoplasma das clulas ductais e da bolsa salivar pobre em organelas e, em
vista disso, no parece tratar-se de clulas com funo secretora como tambm
observado por Silva de Moraes e Cruz-Landim (1975) em clulas do ducto da glndula
salivar de larvas de abelhas. Porm, o material de eletron-densidade igual ao encontrado
no interior das invaginaes da membrana plasmtica basal, na lmina basal e nos
espaos intercelulares sugere que substncias esto sendo captadas da hemolinfa e
transportadas para a luz dos ductos e da bolsa salivar.
A absoro de material da hemolinfa pelas invaginaes basais da membrana
plasmtica e pelos espaos intercelulares das clulas dos ductos das glndulas salivares
larvais de Calliphora sugerida por Oschman e Berride (1970) e confirmada por
Meirelles et al. (2001) mostra que possvel que o mesmo ocorra com as clulas dos
ductos e bolsa salivar das glndulas salivares ceflicas de A. mellifera e S. postica.
Segundo Meirelles et al. (2001) os materiais absorvidos so de natureza lipdica, o que
confirmado pela alta eletron-densidade, e usados na constituio, pelo menos
parcialmente, da epicutcula que reveste os ductos. No entanto, comum que as
glndulas tenham tambm papel excretor, o que no est descartado, neste caso. Por
outro lado, na regio apical forma-se um espao subcuticular e vesculas eletrontransparentes aparecem associadas a invaginaes da membrana plasmtica apical. Tais
estruturas so indicativas da reabsoro de material a partir da luz (CRUZ-LANDIM,
1994). Assim, por um lado as clulas dos ductos podem absorver material de natureza
lipdica da hemolinfa e elimin-lo para a luz do ducto e reabsorver material no lipdico,
na regio apical, provavelmente solutos presentes na secreo da glndula salivar do
trax, e devolv-los hemolinfa. Esta ltima funo tambm comum para a bolsa
salivar.
Do ponto de vista morfolgico, as clulas secretoras das glndulas de A.
mellifera e S. postica podem ser enquadradas como clulas da classe I segundo
classificao de Noirot e Quennedey (1974, 1991), na qual apenas uma clula est

98

envolvida na produo e descarga da secreo atravs de um canal-poro na cutcula.


No foram observados canais-poro por onde pudesse ser liberada a secreo, mas a
cutcula apresenta-se pouco espessa e no esclerotizada de modo que provavelmente
porosa. Cruz-Landim (1994) verificou que a cutcula do intestino posterior de Melipona
quadrifasciata anthidioides tambm no apresenta canais-poro e mesmo assim ocorrem
trocas e absoro atravs dela. Alis, a estrutura da regio apical das clulas da bolsa
salivar semelhante da poro inicial do leo das abelhas, mais uma vez reforando a
possibilidade de a ocorrer reabsoro de material a partir da luz do ducto.
A maior parte das clulas glandulares possui no interior do ncleo no mnimo
um nuclolo. Ao microscpio eletrnico tornou-se possvel a distino de 2
componentes caractersticos da maior parte dos nuclolos: a zona granular e a zona
fibrilar. A zona granular ocupa freqentemente a regio perifrica do nuclolo enquanto
a fibrilar encontrada na regio central (DE ROBERTS; HIB, 2001). Esta caracterstica
tpica de nuclolos bem ativos na produo de RNAs, no entanto, a presena de
ribossomos no especialmente grande.
Extensas invaginaes da membrana plasmtica basal ocorrem nas clulas
secretoras em todas as fases de operrias e rainhas de A. mellifera. Os canais formados
por essas invaginaes contm material eletron-denso, como o observado tambm na
lmina basal, e so acompanhados pelas cisternas do REL e por mitocndrias. A
associao do REL e a proximidade das mitocndrias com as invaginaes evidenciam
que substncias esto sendo captadas ativamente da hemolinfa e usadas na sntese da
secreo glandular ou transportadas para a luz, tendo as mitocndrias como
fornecedoras de energia para esse transporte. O REL est envolvido na sntese de
lipdios, carboidratos e esterides, entre outras substncias no proticas (KING; AKAI,
1982), o que justifica seu grande desenvolvimento nestas clulas. Em concordncia com
a anlise histoqumica (Captulo 2), os resultados ultra-estruturais aqui descritos
oferecem a base morfolgica que confirma a natureza no protica da secreo.
O citoplasma das clulas glandulares que produzem feromnios geralmente
caracterizado pela presena de complexo de Golgi bem desenvolvido e REL, alm da
ocorrncia de muitas mitocndrias e vrias incluses, a maioria com corpos lamelares,
correspondendo secreo lipdica (BILLEN, 1991; BILLEN; MORGAN, 1998;
NOIROT; QUENNEDEY, 1974). Tais caractersticas tambm encontradas em A.

99

mellifera indicam que a secreo lipdica possa ter papel feromonal. A grande
quantidade de invaginaes da membrana plasmtica basal acompanhada pelo REL e
mitocndrias, e vacolos lipdicos basais nas fmeas de A. mellifera indicam transporte
de lipdios da hemolinfa para o interior da clula. Os lipdios que passam pelo interior
da clula podem ser modificados e adquirirem composio diferente daquela de quando
presentes na hemolinfa. No entanto, a existncia de espaos intercelulares abertos e de
material eletron-denso no seu interior, parecem indicar a possibilidade de pelo menos
parte dos lipdios da secreo dessas glndulas ter origem exgena e ser absorvida
diretamente da hemolinfa, conforme verificado nas glndulas de Dufour de rainhas de
Bombus terrestris (ABDALLA et al., 1999a,b; HEFETZ et al., 1996) e A. mellifera
(KATZAV-GOZANSKY et al., 2000)
As mitocndrias passam por alteraes relacionadas ao estgio em que se
encontram as clulas secretoras, o qual muda com a idade dos indivduos. Operrias
jovens de A. mellifera contm nas clulas secretoras muitas mitocndrias alongadas
eletron-densas, enquanto nas demais operrias e rainhas estas organelas aparecem,
predominantemente, com mdia ou baixa densidade eletrnica e, no raro, com cristas
fragmentadas. De acordo com Billen (1991) as glndulas que produzem lipdios nos
insetos so ricas em mitocndrias alongadas, cristas fragmentadas e baixa densidade
eletrnica da matriz. H muito se sabe que as mitocndrias esto envolvidas na
produo

de compostos

lipdicos.

Na

membrana externa

esto

localizadas

principalmente as enzimas que intervm no metabolismo desses compostos


(JUNQUEIRA; CARNEIRO, 2000). Por isso, comum encontrar mitocndrias
associadas s vesculas contendo estruturas membranosas, tpicas de secreo lipdica.
O complexo da cido graxo sintase, responsvel pela sntese de lipdios, encontrado
exclusivamente no citossol. Essa localizao segrega os processos sintticos das reaes
degradativas, muitas das quais ocorrem na matriz mitocondrial (LEHNINGER et al.,
2000).
A membrana externa da mitocndria tem estrutura porosa, facilmente permevel
a pequenas molculas e ons, enquanto a membrana interna tem estrutura contnua e
impermevel maioria das molculas pequenas e ons, incluindo prtons H+
(JUNQUEIRA; CARNEIRO, 2000; LEHNINGER et al., 2000). Observou-se neste
estudo que muitas das mitocndrias de baixa densidade eletrnica esto associadas s

100

vesculas que, em muitos casos, parecem mitocndrias acumulando secreo. Portanto,


a partir das informaes mencionadas acima, pode-se sugerir duas vias para a origem
dos compostos lipdios intramitocondriais. Uma primeira via seria dada pela
fragmentao da membrana interna das mitocndrias velhas, deixando de constituir uma
barreira para a entrada de molculas lipdicas produzidas no citossol. As mitocndrias
ento, j com a funo respiratria comprometida pela perda da membrana interna,
passam a ser um local de deposio de compostos lipdicos e no uma franca produtora
destes em sua matriz. Os cidos graxos penetram nas mitocndrias, onde so
degradados por uma srie de enzimas especficas dando origem a precursores que vo
entrar no ciclo de Krebs (DE ROBERTS; HIB, 2001). Porm, se a capacidade oxidativa
da mitocndria encontra-se comprometida pela desestruturao da membrana interna, os
cidos graxos podem comear a se acumular na matriz e enzimas responsveis pela
sntese de lipdios podem entrar livremente pela membrana externa e dar origem
produo de lipdios, constituindo esta a segunda via de origem das secrees lipdicas.
A associao entre mitocndria e a origem das incluses lipdicas nos insetos foi
primeiro sugerida por Ranade (1933), o qual props que os lipdios presentes no vitelo
dos ovos em Periplaneta americana eram originados de mitocndrias transformadas.
Boissin (1970) descreveu a presena de mitocndrias sem cristas e com gotculas
lipdicas aderidas a elas em pseudoescorpies Hysterochelifer meridianus. Ratcliffe e
King (1969) relataram a transformao da mitocndria em lisossomos secundrios ou
vacolos autofgicos antes de se transformarem em gotculas lipdicas e Caetano et al.
(2002) mostraram os passos desta transformao em clulas da glndula ps-farngea de
Dinoponera australis, denominando tais estruturas de mitocndrias derivadas. Em A.
mellifera e S. postica no foram verificadas tais estruturas intermedirias, como
vacolos autofgicos ou lisossomos secundrios, nas alteraes que ocorrem com as
mitocndrias que passam a acumular produtos lipdicos.
Em A. mellifera conforme o indivduo envelhece, maior quantidade de vesculas
encontrada no citoplasma das clulas. As vesculas ocupam, ento, grande poro do
citoplasma, principalmente a apical, at fusionarem-se com a cutcula e liberarem sua
secreo na luz dos alvolos.
Assim como ocorre nas glndulas salivares ceflicas das fmeas de A. mellifera,
nas operrias de S. postica algumas mudanas foram observadas com o passar da idade.

101

No s a luz torna-se mais ampla, mas as clulas alveolares sofrem alteraes


morfolgicas, passando de cbicas a escamosas, devido ao enchimento dos alvolos
com secreo. Contudo, algumas caractersticas das clulas secretoras das glndulas em
S. postica as diferenciam de A. mellifera tais como: a grande quantidade de ribossomos,
principalmente nas clulas cbicas de operrias recm-emergidas e nutridoras.
Os polirribossomos esto envolvidos na sntese de protenas intracelulares, isto
, enzimas relacionadas sntese de lipdios e protenas estruturais importantes para a
manuteno celular ou de enzimas que atuam nos processos de secreo (ALBERTS et
al., 2004), esta pode ser sua funo neste caso. A poro secretora da glndula de S.
postica difere de A. mellifera tambm pela ausncia de lmina basal eletron-densa e de
invaginaes da membrana plasmtica basal, alm da morfologia da secreo.
Nas fmeas de S. postica, grnulos e vesculas, algumas com estruturas
membranosas, comeam a se acumular no citoplasma logo nos indivduos jovens e, nos
mais velhos, encontram-se na regio apical em vias de liberao. As vesculas contm
secreo lipdica, evidenciada pelo aspecto homogneo, amorfo, ou pelas estruturas
lamelares tpicas de secreo lipdica, assim como em A. mellifera. Diferentemente de
A. mellifera que parece ter produo contnua de secreo, em S. postica a produo
desta parece ocorrer somente nas operrias jovens e a partir da fase de nutridora a
glndula praticamente apenas armazena a secreo produzida na fase anterior. Ainda,
nas rainhas em postura de S. postica, grandes vacolos acumulam material eletrondenso, sugerindo a fuso de vrios vacolos at a liberao da secreo na luz dos
alvolos.
Vesculas com estruturas membranosas, mitocndrias polifrmicas, retculo
endoplasmtico liso e Golgi, indicam alta atividade metablica de lipdios, tais como os
hidrocarbonetos (CAETANO et al., 2002; LAHAV et al., 1999; NAARMANN, 1963) e
ocorrem tambm nas glndulas mandibulares de vrias espcies de abelhas (COSTALEONARDO, 1981; CRUZ-LANDIM; CAMARGO, 1970; GRACIOLLI-VITTI;
ABDALLA, 2006; GRACIOLLI et al., 2004), glndula de Dufour de vespas, abelhas e
formigas (ABDALLA; CRUZ-LANDIM, 2001). Glndulas de cera tambm so ultraestruturalmente semelhantes, porm Golgi ausente (GUERINO; PAES DE
OLIVEIRA, 2002). Deste modo, conclui-se que a ultra-estrutura das glndulas salivares

102

ceflicas de A. mellifera e S. postica tpica de clulas secretoras de substncias de


natureza lipdica.
A utilizao da secreo destas glndulas pelas abelhas no est esclarecida e
provavelmente varia com a espcie e at com a funo da abelha.
A composio qumica da secreo das glndulas salivares ceflicas j foi
estudada em Apis mellifera (ARNOLD; DELAGE-DARCHEN, 1978), Apotrigona
nebulata (DELAGE-DARCHEN et al., 1979), Melipona beecheii (DELAGEDARCHEN; DARCHEN, 1982) e Scaptotrigona mexicana (DELAGE-DARCHEN et
al., 1982), contudo no foram sugeridas funes para essa glndula nestas espcies. Na
abelha Chalicodoma sicola, uma abelha solitria, a secreo da glndula salivar ceflica
composta por hidrocarbonetos que so usados para impermeabilizar as clulas de cria,
as quais so feitas de barro (KRONENBERG; HEFETZ, 1984).
Em Bombus (Rhodobombus) mesomelas a glndula reduzida e a pouca
secreo, quando presente, no inclui os compostos volteis presentes em muitas outras
espcies de mamangavas estudadas. A secreo corresponde aos hidrocarbonetos
cuticulares que so encontrados em todas as espcies de mamangavas (TERZO et al.,
2005). De acordo com Arnold et al. (1996) os hidrocarbonetos presentes na glndula
salivar ceflica de A. mellifera tambm so encontrados sobre a epicutcula que recobre
o corpo desta espcie, indicando a possibilidade da secreo ser espalhada pelo corpo.
Sendo assim, a secreo poderia ter funo no reconhecimento do indivduo, o qual
espalharia a secreo pelo corpo, com o auxlio das pernas, ou ainda, a passaria para as
companheiras da colnia atravs da trofalaxis j que a glndula se abre na base da
lngua, tornando a integrao e reconhecimento interindividual possvel atravs dessa
via. Em Bombus cryptarum e Bombus magnus a secreo da glndula composta por
hidrocarbonetos e especfica, atuando como sinal de reconhecimento entre as espcies
(BERTSCH et al., 2005), o que poderia acontecer tambm em S. postica e A. mellifera.
A secreo pode ainda ser usada como auxiliar nas tarefas de coleta exercidas pelas
campeiras, desde que foi verificado maior acmulo de secreo na glndula nesta fase
da operria. Funo desse tipo foi atribuda secreo de glndula de Plebeia emerina
por Blochtein (2006), especificamente no manuseio de prpolis pelas operrias de meia
vida.

103

O seu uso como feromnio de comunicao de localizao de fonte de alimento


tambm possvel e foi verificada para Trigona recursa por Jarau et al. (2004) e para T.
spinipes por Schorkopf et al. (2007).
As rainhas so responsveis pela manuteno da populao atravs da
oviposio e integrao dos membros da colnia atravs de feromnios, dos quais os
produzidos pelas glndulas mandibulares so os mais importantes. possvel que a
secreo produzida pelas glndulas salivares ceflicas atue na integrao dos membros
da colnia conjuntamente com a secreo liberada pelas glndulas mandibulares, j que
Velthuis e Van-Es (1964) constataram que mesmo com a ausncia da glndula
mandibular a rainha continua atrativa para as operrias. A secreo poderia ser
transmitida por trofalaxis desde que a secreo liberada na base da glossa, ou
espalhada pelo corpo, como sugerido atrs, passando a fazer parte dos feromnios de
reconhecimento na superfcie do corpo.
Concluindo, a secreo da glndula de natureza lipdica, embora as espcies e
possivelmente no caso das operrias tem a funo de feromnio relacionado com as
tarefas desempenhadas pelas operrias fora da colnia, j que na fase de campeira que
a glndula encontra-se com mais secreo e, nas rainhas, relacionado interao com os
indivduos da colnia.

104

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110

DISCUSSO E CONCLUSES FINAIS

Os estudos j feitos sobre as glndulas salivares ceflicas das abelhas nem


sempre abordaram ou correlacionaram a maneira como estas se apresentam nos
diferentes indivduos que compem a colnia (operrias, rainhas e machos) com os
estados fisiolgicos dessas classes de indivduos, no permitindo o acompanhamento e a
comparao da presena e grau de desenvolvimento da glndula entre eles, nas
diferentes fases da sua vida ou nas diferentes funes que esto desempenando. Deste
modo, foi proposto um estudo que pudesse contribuir para o conhecimento do ciclo
secretor da glndula nas duas espcies, abordando machos e fmeas com idades
distintas.
As possveis funes das glndulas salivares ceflicas em fmeas e machos de Apis
mellifera e Scaptotrigona postica foram sugeridas com base no s nos resultados
morfo-anatmicos, histoqumicos e ultra-estruturais abordados neste estudo, mas
tambm nos dados comportamentais e fisiolgicos encontrados na literatura, que
caracterizam cada indivduo e fase da vida, em cada uma das espcies.
Com base nesses parmetros as funes possveis, seriam:

Nas rainhas de ambas espcies:

- auxlio na coleta de resinas e no manuseio da cera (BLOCHETEIN, 2006;


HESELHAUS, 1922);
- lubrificao das peas bucais (SIMPSON, 1960);
- reconhecimento da operria ao voltar da coleta para a colnia (POIANI)
- odor da colnia (POIANI);

111

- apenas em S. postica, comunicao da fonte de alimento por trilha de cheiro (JARAU


et al., 2004; SCHORKOPF et al., 2007) junto com a secreo da glndula mandibular; e
auxiliar na coleta de leos florais (POIANI).

Nas rainhas:

- feromnio de integrao com os membros da colnia, sendo que, no caso de A.


mellifera, atuaria em conjunto com a secreo da glndula mandibular (POIANI).

Nos machos:

- de S. postica: atrao da fmea para acasalamento; em tarefas desempenhadas


eventualmente; e reconhecimento do indivduo enquanto no sai para acasalar
(POIANI);
- de A. mellifera, reconhecimento do indivduo enquanto produz secreo na glndula
(POIANI).
Algumas funes j foram sugeridas para a glndula salivar ceflica nas
diferentes espcies de abelhas. Heselhaus (1922) foi quem primeiro sugeriu para a
glndula a funo de amolecer a cera durante sua manipulao na construo do ninho.
Posteriormente, Simpson (1960) questionou tal funo sugerida por Heselhaus alegando
que nem todas as abelhas que apresentam a glndula desenvolvida trabalham com a cera
e atribuiu-lhe a funo de lubrificao das peas bucais. A plasticidade funcional
observada em outras glndulas excrinas das abelhas permite inferir que, no porque
algumas abelhas no trabalham com a cera que a funo no esteja relacionada a este
comportamento nas que trabalham, ou seja, concorda-se que a funo sugerida por
Heselhaus. Concorda-se tambm, de certa forma, com a funo de lubrificao das
peas bucais, porm, esta seria uma funo secundria da glndula. Constitui mais um
exemplo de plasticidade funcional, o observado por Kronenberg e Hefetz (1984) para a
glndula salivar ceflica em Chalicodoma sicola, um Megachilidae, na qual a secreo
usada para impermeabilizar clulas de cria construdas de barro.
Nas operrias, a glndula pode auxiliar diretamente nas atividades de coleta, as
quais incluem a manipulao de compostos resinosos. Meliponneos pertencentes a
mesma subtribo da S. postica foram observados coletando leos florais (STEINER,
1985). Entretanto pouco se sabe para quais finalidades so coletados e o modo como so
transportados para a colnia. Alguns estudos citam os rgos tibiais como os
responsveis pelo transporte de leos florais para a colnia por abelhas Euglossini

112

(CRUZ-LANDIM et al., 1965; VOGEL, 1966a,b) e Centridini (CRUZ-LANDIM;


FRANCO, 2000). Entretanto, estudo feito com Eulaema singulata (WHITTEN et al.,
1989), um Euglossina, relatou a coleta de fragrncias florais, as quais contm
compostos hidrocarbnicos e, portanto, lipossolveis, com o auxlio da secreo da
glndula salivar ceflica e o transporte para a colnia pelos rgos tibiais. Sendo assim,
S. postica pode ser uma espcie coletora de leos florais, assim como outros
Meliponina, fazendo uso da secreo da glndula na coleta destes compostos.
Sabe-se que as abelhas adultas de uma colnia possuem o mesmo odor da
colnia, adquirido do meio ambiente, o qual diferente do de qualquer outra colnia da
mesma espcie e que as ceras cuticulares da superfcie do corpo das abelhas tm a
capacidade de absorver os odores da fonte de alimento (FREE, 1980). As fragrncias
florais (odores) podem conter mais de cem compostos incluindo hidrocarbonetos
(PAHN-DELEGUE et al., 1986; WILLIAMS; WHITTEN, 1983). Se o leo produzido
pela glndula salivar ceflica espalhado na superfcie do corpo da abelha e se os
hidrocarbonetos dessa secreo apresentam capacidade de absorver as fragrncias
florais, que so tambm compostos hidrocarbnicos, pode-se supor que a glndula tenha
funo na aquisio da identidade ou do odor da colnia, proveniente da fonte
alimentar.
A secreo lipdica, ainda, pode exercer funo de feromnio individual de
superfcie nos dois sexos e espcies. A funo de reconhecimento da operria ao voltar
da coleta para a colnia foi sugerida com base em estudos prvios, os quais verificaram
que os hidrocarbonetos presentes na cutcula tambm so encontrados na secreo das
glndulas salivares ceflicas de algumas espcies de abelhas (ARNOLD et al., 1996;
BERTSCH et al., 2005; TERZO et al., 2005).
Em S. postica outra funo feromonal possvel a marcao de trilha de cheiro
como uma forma de comunicar s companheiras da colnia o local de alimento, funo
esta descoberta primeiramente por Jarau et al. (2004) para Trigona recursa e
recentemente por Schorkopf et al. (2007) para T. spinipes, ambas espcies de
meliponneos, desde que o recrutamento para a fonte de alimento entre as espcies de
meliponneos necessita de uma operria guia e/ou trilha de cheiro. No caso de S. postica
Lindauer e Kerr (1960) acreditam que o feromnio provm das glndulas mandibulares,
porm no determinaram quimicamente a secreo depositada no substrato e a

113

encontrada nas glndulas mandibulares. Deste modo, a secreo da salivar ceflica tanto
pode exercer funo isolada na produo de trilha de cheiro ou seria um feromnio coadjutor com o da glndula mandibular.
Nas rainhas a funo feromonal sugerida a de integrao dos membros da
colnia e, em A. mellifera, em ao sinergstica com a secreo da glndula mandibular.
Machos de A. mellifera possuem a glndula to desenvolvida quanto as fmeas de sua
espcie enquanto jovens, porm ocorre regresso conforme envelhecem. Como houve
dificuldade no estudo das glndulas dos machos, pouco h para dizer, mas a sua
regresso nos machos adultos de A. mellifera encontra paralelo em Bombus
(Rhodobombus) mesomelas (TERZO et al., 2005) e poderia dever-se ao fato dos
indivduos fora da colnia no precisarem mais se identificar com a colnia de origem.
Machos de S. postica tambm no retornam colnia depois de maduros, porm sabe-se
que, mesmo que eventualmente, desempenham tarefas na colnia, enquanto nela se
encontram, podendo empregar a secreo em algumas dessas tarefas, o que justificaria a
permanncia da glndula. Alm disso, machos de vrias espcies de Bombus, os quais
tambm apresentam glndula salivar ceflica desenvolvida, usam a secreo para
atrao da fmea (GREN et al., 1979; BERGMAN; BERGSTRM, 1997;
KULLENBERG et al., 1973) e, desde que o sistema de acasalamento nos meliponneos
difere do de A. mellifera, possvel que nos machos de S. postica a secreo esteja
relacionada com a atrao da rainha para acasalamento.
A possibilidade da secreo da glndula nos machos servir em A. mellifera para
seu reconhecimento encontra suporte no fato de que conforme os machos vo
envelhecendo, as operrias deixam de aliment-los e comeam a expuls-los da colnia
(FREE, 1980). Talvez eles deixem de ser reconhecidos pelas operrias, j que produzem
pouca ou nenhuma secreo ceflica, j que a glndula degenera. s vezes, quando
estes no abandonam a colnia as operrias chegam mat-los. No entanto, sabe-se que
as operrias os mantm na colnia caso estejam precisando de rainha fecundada, ou
seja, quando conveniente para a sobrevivncia da colnia, seno os expulsam (FREE,
1980). Por outro lado, tambm, pode ser que as operrias os expulsem porque, quando
elas deixam de aliment-los, eles passam a se alimentar nos potes de mel, ou seja, no
contribuem trabalhando e ainda desfalcam o suprimento alimentar. Portanto preciso

114

que se diga que outros fatores, que no a falta de reconhecimento podem causar sua
expulso.
A glndula salivar ceflica apresenta o mesmo padro anatmico e igualmente
desenvolvida nas fmeas das duas espcies estudadas, A. mellifera e S. postica, e nos
machos desta ltima, e desenvolve-se progressivamente com o passar da idade dos
indivduos, mas algumas diferenas podem ser apontadas:
- Nas operrias de A. mellifera a glndula parece ser funcional durante toda a
vida, enquanto em S. postica as clulas das operrias nutridoras e campeiras so to
achatadas e pobres de organelas que podem ser consideradas inativas. No entanto, em
ambos os casos os alvolos das campeiras apresentam-se cheios com secreo. Portanto,
enquanto em A. mellifera existe a possibilidade de que mesmo que parte da secreo
seja eliminada, os alvolos possam reabastecer-se, em S. postica parece que toda
secreo armazenada at a fase de nutridora e no eliminada at a fase de campeira.
- A passagem das clulas da forma cbica para achatada ocorre tambm nos
machos maduros de A. mellifera nos quais a glndula degenera corroborando que esta
morfologia celular incompatvel com a funo secretora.
- Em ambas as espcies a secreo produzida pelos alvolos de natureza
lipdica.
- Em A. mellifera espaos intercelulares observados ao microscpio de luz
tornam-se evidentes ao microscpio eletrnico de varredura, onde aparecem como poros
na superfcie dos alvolos e ductos, e ao de transmisso correspondem ao alargamento
dos espaos intercelulares na poro basal. Estas aberturas j observadas em outros
tipos de glndulas que tm secreo de natureza lipdica indicam a possibilidade de
absoro de parte do material que compe o produto glandular diretamente da
hemolinfa. Fenmeno desse tipo foi observado na glndula de Dufour (ABDALLA;
CRUZ-LANDIM, 2001, 2005), de cera (GUERINO; CRUZ-LANDIM, 2003) e nos
dutos da glndula salivar (MEIRELLES et al., 2001).
- A anlise ultra-estrutural revelou aparato sinttico tpico de clula produtora de
lipdios, portanto mostrando tratar-se realmente de uma estrutura glandular e no apenas
excretora como seria o caso se todos os lipdios deixassem de ser processados e fossem
eliminados como encontrados na hemolinfa. A ultra-estrutura confirma a passagem de
material eletron-denso pelos espaos intercelulares, mas tambm sua entrada nas clulas

115

secretoras atravs de invaginaes da membrana plasmtica basal, mostrando que


substncias absorvidas da hemolinfa so tambm usadas como precursores da secreo.
- As clulas que constituem os ductos e bolsa salivar so ultra-estruturalmente
semelhantes e no condizem com clulas com funo secretora, mas apresentam a
capacidade de capturar e transportar material da hemolinfa para a luz, talvez para
constituio da cutcula, conforme j verificado por Meirelles et al. (2001) ou como
produtos a serem excretados.
- Embora em todos os casos a secreo tenha aspecto lipdico, a ultra-estrutura
celular diversa em ambas as espcies no que se refere origem e aspecto da secreo
no interior da clula. Nas fmeas de S. postica, as clulas secretoras apresentam
depsitos semelhantes a grnulos, enquanto em A. mellifera so mais comuns incluses
eletron-transparentes contendo estruturas lamelares associadas s mitocndrias. Alm
disso, a presena de aberturas nos espaos intercelulares das clulas secretoras de A.
mellifera evidencia origem parcialmente exgena da secreo, atravs da captura de
material da hemolinfa, o que no encontra similaridade em S. postica. Particularmente
em rainhas de A. mellifera, so encontrados grandes vacolos armazenando secreo,
provavelmente originados da fuso de vacolos menores. Estas diferenas e outras j
apontadas com respeito a colorao, ciclo secretor, presena da glndula nos machos
apontam para a possibilidade de composio diferente da secreo e de funes tambm
diferentes nas espcies estudadas. Por exemplo, em S. postica a secreo da glndula
mandibular, que tambm tem aspecto lipdico, contm acetonas e aldedos na
composio (BLUM, 1970). Portanto, apesar do aspecto da secreo ser semelhante em
ambas espcies, possvel que a morfologia celular diferente em S. postica, seja devida
sntese de compostos diferentes dos de A. mellifera.

116

PERSPECTIVAS FUTURAS

Apesar da glndula salivar ceflica das abelhas j vir sendo estudada h algum
tempo, a sua funo permanece pouco conhecida nas diferentes classes de indivduos
que compem a colnia e entre as vrias espcies.
Do ponto de vista da atividade secretora das clulas, anlises citoqumicas
durante o ciclo celular e a determinao da composio da secreo ao longo da vida de
operrias, rainhas e machos podero elucidar com maior clareza a origem e natureza dos
compostos presentes na secreo e apontar para suas possveis funes durante a vida
desses indivduos.
Uma ateno maior deve ser dada aos machos e rainhas de ambas as espcies
para tentar desvendar o comportamento da glndula nesses indivduos e suas possveis
funes este aspecto apresenta relevncia frente a plasticidade secretora j demonstrada
para outras glndulas excrinas das abelhas.
A maioria das funes aqui sugeridas para a glndula ceflica em S. postica e A.
mellifera necessitam comprovao atravs de determinao da composio qumica da
secreo, estudos comportamentais e bioensaios. Anlises qumicas dos hidrocarbonetos
de superfcie so necessrias para dar suporte sugesto de que a secreo possa ser
espalhada pelo corpo e venha a servir para reconhecimento, individual, colonial ou
ambos.

117

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