Potencial de gua de coco e leite de soja para

usar-se como meios de armazenamento para preservar o viabilidade das

clulas do ligamento periodontal: uma estudo in vitro

Resumo - Objetivo: No h consenso quanto capacidade de coco gua e

leite de soja para manter a viabilidade das clulas a longo prazo. Este
estudo investigou a capacidade de gua de coco com pH ajustado e o leite
de soja para manter a viabilidade das clulas do ligamento periodontal ao
longo de um curto e um perodo mais longo e comparou essas habilidades
com as de outras solues. Mtodos: Dog premolares foram extrados,
secou-se durante 30 minutos, e armazenados na seguinte media por 50 min
ou 24 h: leite integral longa vida de prateleira (SWM), longa prazo de
validade de leite desnatado (SSM), soluo salina equilibrada de Hank
(HBSS), soja leite (SM), e gua de coco com pH ajustado (CW). O positivo e
dois grupos de controlo negativo correspondeu 0-min, 30 min (de curto
prazo), e 24 h (de longo prazo) vezes seca, respectivamente. A viabilidade
celular foi analisada por tripano de excluso de azul. Os dados foram
analisados utilizando o Kruskal Wallis, com ps-anlise utilizando o mtodo
de Dunn. Resultados: No
experincia de curta durao, o SSM resultou em viabilidade celular
significativamente menor
de SM e CW. Aos 24 h, SM e CW resultou em maior viabilidade do que
HBSS e MES e no desempenho comparvel com o controlo positivo
grupo. A viabilidade celular diminuiu ao longo do tempo, exceto em SM e
CW. concluses:
O leite de soja e gua de coco com pH ajustado mostrou resultados
promissores
como solues de armazenamento para dentes avulsionados, preservando a
viabilidade por at
24 h.

O tratamento ideal para um dente que sofreu avulso a sua imediata

reimplante na tomada, o que significativamente
melhora o prognstico (1, 2). Infelizmente, imediato
reposicionamento de dente no sempre possvel

(2, 3). Consequentemente, o reimplante atrasada comumente

observado (1). Na prtica clnica, o reimplante adiada
de seca dentes no apresentam a mesma clnica
tratamento e prognstico como o reimplante adiada
de dentes estavam em solues de armazenamento (2, 4, 5). a
sobrevivncia
taxa de dentes avulsionados seguintes reimplante afetado
pela durao do perodo extra-alveolar ea
natureza das condies de armazenamento (6, 7).
A capacidade do meio de armazenamento para manter periodontal
a viabilidade celular do ligamento pode ser ainda mais
importante para reimplante dentrio do que o perodo extra-oral
(8, 9). Um meio de armazenamento adequado para dentes avulsed
tem um baixo teor de bactrias, a osmolaridade fisiolgica, uma
pH neutro, e nutrientes essenciais (3). vrios estudos
tm sido realizados para determinar as solues de armazenamento
que permitem a manuteno da viabilidade celular durante o maior
perodo de tempo (10-12). O leite bovino com diferentes
A quantidade de gordura e Soluo Salina Equilibrada de Hank (HBSS)
tem sido recomendado nas diretrizes traumatologia dental
para o armazenamento de dente (2, 5). Leite possuem uma ampla aceitao
como um meio de armazenamento, devido ao seu baixo bacteriana
contedo, pH e osmolaridade adequada, a presena de
nutrientes como vitaminas, carboidratos e fatores de crescimento
(3, 12). Mais recentemente, outras substncias, como o gua de coco (10,
11) e leite de soja (13), tm mostrado
resultados promissores. O leite de soja (SM) tem muitos nutrientes
que pode manter a viabilidade celular (13). A gua de coco
o endosperma do coco lquida, que fornece

substncias nutritivas, tais como acares, protenas, vitaminas,

e minerais (14). Essas caractersticas podem explicar a sua
capacidade de preservar as clulas (10, 11, 15). Apesar das qualidades
de gua de coco (CW), a sua utilizao como um meio de armazenamento
para os dentes avulsionado limitado pelo seu pH de 4,7 (12). ele
sabido que as influncias de pH baixos a viabilidade celular (16, 17),
especialmente durante longos perodos.
Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar
o uso de CW, com o pH ajustado para 7,0 e SM
como mdia de armazenamento para o dente avulsionado. SM e pHadjusted
CW foram comparadas com leite de vaca e
HBSS ao longo de perodos de armazenamento de curto e longo. era
a hiptese de que (I) pH ajustado CW e SM faria
apresentam melhor desempenho na manuteno da viabilidade celular
no curto e longo prazo do que comumente utilizados
mdia de armazenamento, tais como leite desnatado longa vida de
prateleira
(SSM), leite longa vida de prateleira (SWM) e HBSS;
(II) CW de pH ajustado e SM so capazes de manter o
clulas viveis no curto e longo prazo em um nvel
semelhante ao obtido imediatamente aps dente
avulso.
Material e mtodos
Este estudo foi aprovado pelo comit de tica animal
(protocolo 203/11; Universidade Federal de Uberl ^ Andia,
Uberl ^ Andia, MG, Brasil). Cinqenta e dois pr-molares de 12
ces da raa Beagle adultos, com idade de 18 meses, foram
seleccionado. Os animais foram anestesiados por injeco intravenosa
injeo de maleato de acepromazina a 0,2 mg kg

? 1 de
peso corporal (Acepran 0,2%;? Laborat orio Univet SA,
S ~ ao Paulo, SP, Brasil) com tiopental sdico a 5 mg
kg
? 1 de peso corporal (Tionembutal 2,5%; Abbott
Orios Laborat? Do Brasil Ltda., S ~ ao Paulo, SP, Brasil).
Os pr-molares inferiores foram extrados como
atraumaticamente possvel usando uma pina peditricos
(Golgran Ind. Com. De Instrumentos Odontol? Ogicos
Ltda, S ~ ao Paulo, SP, Brasil), com vestbulo-lingual suave
deslocaes aps luxao lateral primria. Os dentes foram
seccionados na regio da furca utilizando pontas diamantadas
(sem 2200;. KG Sorensen, Barueri, SP, Brasil). a 104
metades pr-molares foram divididos aleatoriamente em 13 grupos
(n = 8): 1 grupo controle positivo, 2 controle negativo
grupos e 10 grupos de mdia de armazenamento experimentais. para
o grupo controle positivo, os dentes foram nem seca
nem armazenada em qualquer soluo, mas foram avaliados
imediatamente.
Para os grupos de controlo negativo, os dentes foram
secas no banco durante um gaze (Cremer, Blumenau,
SC, Brasil) por 30 min. Os outros dentes foram autorizados a
bancada-seco durante 30 minutos e, em seguida, foram divididos
aleatoriamente
em 10 grupos experimentais correspondentes para armazenamento
em cinco diferentes meios de comunicao por 2 perodos de tempo
diferentes. a 5
meios de armazenamento foram CW (Ducoco, Linhares, ES, Brasil)
com o pH ajustado para 7 utilizando trietanolamina
(Pharma Nostra, S ~ ao Paulo, SP, Brasil); HBSS

(Cultilab, S ~ ao Paulo, SP, Brasil); SWM (Italac Integral;

? Italac, Corumb IBA, GO, Brasil); SSM (Italac
Desnatado; Italac); e SM (Sollys Original;? Nestl e, Araras,
SP, Brasil). Os dois perodos de armazenamento foram 50 min
e 24 h. As amostras foram mantidas em um refrigerador a 4 C.
Cada dente, aps secagem e de imerso, foi lavada
trs vezes em 0,1 M de soluo salina tamponada com fosfato (PBS),
e incubadas durante 30 min em 2 ml contendo tubos cnicos
500 ll de 0,2 mg ml
? 1 de colagenase CLS II
(Cooper Biomedical, Malvern, PA, EUA) e um 2.4 mg
ml
? Uma soluo de dispase grau II (Gibco, Taastrup,
Dinamarca) em PBS. Aps a incubao, 20 ll de fetal
de soro de bovino (FBS) foi adicionado a cada tubo para
inactivao do enzima. Todos os tubos foram depois centrifugados
durante 5 min a 110 g. O sobrenadante foi removido, o
pelete foi re-suspenso, e as clulas foram coradas com
0,4% de azul de tripano para avaliar a viabilidade. Uma alquota de
10 ll, a suspenso de clulas foi colocada em um hemocitmetro
para determinar os nmeros de viveis e no viveis
clulas sob um microscpio de luz em 209 ampliao
e a percentagem de clulas viveis foi calculada. para
cada dente, duas contagens independentes foram realizados pela
um nico calibrado, examinador, cego, num total de 16
contagens por grupo. As porcentagens de viabilidade
As clulas obtidas a partir de cada uma das clulas para cada grupo de
contagem
a 50 min e 24 h foram analisadas para o normal

distribuio.
Na anlise inicial, o objetivo foi determinar a
influncia dos dois fatores envolvidos neste estudo:
os meios de armazenamento e perodo de avaliao Por isso,
os dados foram analisados com um 2-way ANOVA (5 9 2)
eo Tukey Honestamente diferena significativa (HSD)
teste. Na segunda anlise, foram analisados os dados
com um ANOVA e o teste de Dunnett foi usado para
avaliar as diferenas na viabilidade celular entre o
grupos de controle positivo e negativo e os 10 experimental
grupos. Para todos os testes, os grupos foram considerados
significativamente diferentes a a = 0,05.
resultados
As mdias e desvios-padro do nmero de
clulas viveis para os 5 solues experimentais
e os dois perodos analisados so mostrados na fig. 1.
o perodo inicial, o leite desnatado longa vida de prateleira resultou
em uma percentagem significativamente inferior de clulas viveis que
o leite de soja e gua de coco com pH ajustado. No
houve diferena significativa entre o leite de soja, pHadjusted
gua de coco, HBSS e toda a longo prazo de validade
leite. Para o perodo de 24 h, o leite de soja resultou numa
significativamente maior percentagem de clulas viveis do que
HBSS, longa vida de prateleira de leite integral e longa vida de prateleira
leite desnatado. A gua de coco com pH ajustado teve um desempenho
semelhante do leite integral longa vida de prateleira,
e ambas as solues resultou em percentagens significativamente mais
elevadas
clulas viveis de que o leite desnatado prazo de validade e

HBSS. Em relao ao perodo de avaliao, os efeitos

de leite de soja e gua de coco com pH ajustado no foram
influenciadas pelo tempo de armazenamento; em contraste, os dentes
armazenada
em HBSS, longa vida de prateleira de leite integral e longa vida de prateleira
leite desnatado apresentaram redues significativas na viabilidade celular
aps 24 h (. Fig 1).

Figo. 1. mdias e desvios padro para a porcentagem de clulas viveis e categoria estatstica
determinada pelo teste de Tukey (a = 0,05). SWM, longa vida de prateleira de leite integral; SSM, leite
desnatado longa vida de prateleira; SM, leite de soja; CW, gua de coco (pH ajustado); HBSS, soluo
salina balanceada de Hank.

O 1-way ANOVA demonstrou diferenas significativas entre os grupos

experimentais e os grupos de controle para o perodo inicial (Tabela 1). O
teste de Dunnett mostraram que o grupo de controlo positivo tinha a
viabilidade celular significativamente superior do grupo de controlo
negativo inicial e o leite desnatado a longo prazo de validade. O 1-way
ANOVA mostrou que houve diferenas significativas entre os grupos
experimentais e os grupos de controle tambm para o perodo de 24 h
(Tabela 2). O leite de soja e de coco de gua com pH ajustado resultou em
viabilidade celular semelhante ao do grupo de controlo positivo. Os 24 h de
leite longa vida de prateleira desnatado, leite integral longa vida de
prateleira, HBSS e grupos de controlo negativo tinha viabilidade celular
significativamente mais baixos do que o grupo controle positivo. A 24 h
grupo controle negativo no apresentou viabilidade celular.

Tabela 1 Mdias e desvios-padro (DP) da porcentagem de clulas viveis para o controle e

os grupos experimentais para o perodo inicial, com valores de P calculados pelo teste de
Dunnett

Tabela 2 Mdias e desvios-padro (DP) da porcentagem de clulas viveis para os grupos

controle e experimentais para o perodo de 24 h, com valores de P calculados pelo teste de
Dunnett

Discusso

Nossa primeira hiptese testada foi parcialmente aceito, porque o leite de

coco gua com pH ajustado e soja apresentaram desempenhos semelhantes
no perodo inicial e resultou em significativamente maior viabilidade celular
em 24 h perodo de leite desnatado longa vida de prateleira, o leite longa

vida de prateleira, e HBSS. Nossa segunda hiptese testada foi aceita

porque o leite com pH ajustado gua de coco e soja resultou na viabilidade
celular semelhante ao nvel obtido imediatamente aps a avulso dentria,
representado neste estudo pelo grupo de controle positivo. O deslocamento
completo de um dente a partir da sua alvolo interrompe o fornecimento
vascular (13). A sobrevivncia de clulas do ligamento periodontal na
superfcie da raiz aps uma avulso dependente de um fornecimento de
nutrientes dos meios de armazenamento (18), que pode ser influenciado por
o tempo de armazenagem (3).

O uso de dentes extrados para simular avulso tem sido recomendado em

estudos anteriores (10). Numa tentativa de imitar o cenrio tpico, durante o
qual os dentes pode permanecer seco antes de ser colocado num meio de
armazenamento, os dentes foram secas durante 30 minutos (19, 20). Em
termos de tempo de armazenamento, 50 min e 24 h foram escolhidos para
representar duas situaes extremas, de curto e de armazenamento de
longo prazo. No perodo inicial, todos os meios de armazenamento testados
tinham habilidades semelhantes para manter a viabilidade celular. Esta
semelhana pode ser atribudo utilizao do prprio sistema de
homeostase da clula para manter a fisiologia normal (21). Durante este
perodo, os nutrientes presentes no meio de armazenamento pode no ser
necessria para a manuteno da viabilidade celular. Aps 2 h em condies
de extra-orais, as clulas esgotar seus metabolitos armazenados, exigindo
um fornecimento de nutrientes essenciais para preservar a viabilidade (8).
O bom desempenho da CW e SM em 24 h pode ser atribudo osmolaridade
desses meios de comunicao e da composio; estes meios contm glicose
e sais vitais em concentraes consideradas adequadas para manter o
metabolismo celular durante longos perodos de tempo fora da cavidade
oral. CW amplamente aceito como um fluido de hidratao capaz de repor
os eletrlitos perdida do corpo durante o exerccio fsico e diarria. CW rica
em aminocidos essenciais, tais como a lisina e cistena; acares
primrias; e eletrlitos, principalmente potssio, clcio, e magnsio (1012,15, 17). Coco fruta produzida em mais do que 93 pases em todo o
texto (11), o que faz com que CW facilmente disponvel para muitas
populaes. No entanto, tem CW um pH cido, o que pode comprometer a
sua capacidade para preservar a viabilidade celular (17). O ajuste do pH da
CW para 7,0 foi essencial para alcanar o bom desempenho no presente
estudo. Recentemente, o leite de soja foi proposto para ser um meio eficaz
para o armazenamento de dentes avulsionado (13), e esta hiptese foi
confirmada pelos resultados presentes. A melhoria da viabilidade das
clulas armazenadas em SM com 24 horas pode resultar a partir de
constituintes nutricionais, tais como hidratos de carbono; acares;
protenas; gorduras; clcio; e vitaminas A, C, D, e E, e do pH fisiolgico.
Esses componentes podem ajudar a nutrir as clulas e manter a sua
viabilidade. SM um dos alimentos de soja mais popular no Leste e Sudeste

da sia, e seu consumo em todo o mundo est aumentando. Porque a

acessibilidade um factor a considerar na escolha de uma soluo de
armazenamento, os resultados favorveis encontrados para SM so
promissores.

Os meios de armazenamento tradicionais avaliadas no foram capazes de

manter o nvel inicial da viabilidade celular durante o perodo de longa
durao. Apesar de as recomendaes clnicas para usar como uma soluo
de HBSS armazenado para dentes avulsionado (2, 5), no existe um
consenso quanto sua capacidade para preservar as clulas para um longo
perodo de tempo (3, 12, 21). Neste estudo, foi utilizado HBSS cerca de 3
meses depois da sua aquisio. O tempo decorrido aps a preparao pode
ter influenciado negativamente os resultados (3, 12). Armazenamento HBSS
pode causar alteraes nas concentraes de seus componentes, tornando
esta soluo incapaz de nutrir adequadamente as clulas por mais de 6 h
(3). A viabilidade reduzida das clulas armazenadas em conjunto e de leite
desnatado durante 24 horas pode ser atribuda s alteraes nas
caractersticas do leite ao longo do tempo, que mudam o nvel de
desempenho observado inicialmente. Postula-se que o pH no leite decresce
ao longo do tempo, criando um ambiente inadequado para a sobrevivncia
da clula (21).
As performances similares de SM e CW em comparao com o controle
positivo indica um forte indcio de que ambos os meios de fornecer
nutrientes essenciais que permitem que o metabolismo das clulas para
permanecer intacta. O armazenamento a seco dos dentes durante 30 min
antes da imerso no meio de armazenamento muito provavelmente no
causar dano celular extensa, o que efectivamente permitiu-nos avaliar a
capacidade das solues para manter a viabilidade das clulas do ligamento
periodontal.
O projeto do presente estudo apresenta algumas limitaes. A avaliao dos
dois perodos extremos no determinar o momento em que comea a
reduo na viabilidade ofeach soluo, isto , o limite de tempo da eficcia
de cada soluo. O mtodo utilizado para avaliar a viabilidade determina se
as clulas so viveis ou no, mas a sade das clulas viveis no pode ser
determinada usando esta tcnica (7, 17). Mais estudos so necessrios o
uso de outros modelos de cultura celular e ensaios de metabolismo com o
objetivo de avaliar a eficcia da SM e CW. Reimplante estudos tambm deve
ser realizada.
Os presentes resultados demonstram que CW e SM podem ser utilizados
como meios de armazenamento para os dentes avulsed por at 24 horas.
Estes meios de preservar a viabilidade das clulas em nveis comparveis
aos do reimplante imediato (controlo positivo), que considerada a melhor
opo de tratamento para um dente permanente avulsionado. Este fato
extremamente relevante na prtica clnica porque a presena de leses

extensas com risco de vida, fraturas dos maxilares e danos complexo para o
site destinatrio poderia atrasar o reimplante, comprometendo o
prognstico. O ajustamento do pH da gua de coco deve ser realizado a
uma escala industrial para permitir que a populao de ter acesso a este
meio de armazenamento.
Concluses
O leite de soja e gua de coco com pH ajustado mostrou resultados
promissores como solues de armazenamento para dentes avulsionados,
preservando a viabilidade por at 24 h.
Agradecimentos
Este estudo foi financiado pela FAPEMIG Apoio Pesquisa, Fundao do
Estado de Minas Gerais e pela CAPES.